Modello di iniezione guancia per la misurazione simultanea del dolore e dei comportamenti correlati all'itch

I nostri dati indicano che gli algogeni riducono i comportamenti graffiatori, ma l'effetto della capsaicina sui comportamenti graffiatori rimane poco chiaro. Pertanto è importante una misurazione simultanea di ogni quantità di dolore. Il metodo tradizionale fornisce informazioni solo per prurito o sensazioni di dolore, ma il modello di iniezione delle guance fornisce informazioni per prurito e dolore, separatamente e contemporaneamente.

L'iniezione di guance può essere difficile all'inizio, poiché ci vuole pratica per discriminare i comportamenti di graffio, pulizia e toelettatura. La dimostrazione video dell'iniezione e l'analisi comportamentale possono essere utili per padroneggiare le tecniche. Per un esperimento di iniezione delle guance, il giorno prima della valutazione, radere la pelliccia sulla guancia di ogni mouse con le tosatrici per capelli e montare una videocamera con una frequenza fotogrammi da 30 a 60 fotogrammi al secondo su un treppiede, in un ambiente di temperatura, umidità e controllo del suono.

Posizionare quattro gabbie sotto la telecamera nell'orientamento indicato e posizionare gli schermi tra ogni gabbia per evitare che i topi si vedano. Un giorno dopo la rasatura, posizionare un mouse in ogni gabbia di registrazione per un'ora per acclimatare gli animali alle condizioni di registrazione. Se deve essere utilizzato un trattamento topico, applicarlo in questo momento.

Mentre gli animali si acclimatano, caricare la sostanza in esame di interesse in una siringa da 0,5 millilitri dotata di un ago per topo calibro 29 o 30. Alla fine del periodo di acclimatazione, avviare la registrazione video prima dell'iniezione. Quindi iniettare una soluzione da 10 microliter della sostanza in esame intradermally nella guancia rasata dell'animale sveglio.

Quindi riportare i topi iniettati nelle rispettive gabbie e continuare la registrazione video per 30 minuti. Alla fine dell'esperimento, caricare il video in un programma software di editing video adatto. Conta ogni volta che un topo solleva una gamba posteriore verso la guancia e graffia più volte in uno o pochi secondi prima di mettere giù la gamba come un graffio.

I topi usano una singola zampe anteriori per la pulizia, ed entrambe le zampe anteriori per la toelettatura, ma solo i comportamenti di pulizia vengono conteggiati come comportamenti correlati al dolore. Per un esperimento di iniezione del collo, un giorno prima dell'esperimento, radere la pelliccia sulla nuca di ogni topo con tosaerba. Un giorno dopo la rasatura, acclimatare i topi nelle gabbie di registrazione per un'ora prima di iniettare 10 microlitri della sostanza in esame di interesse commerciale nel collo rasato, in condizioni di veglia.

Riportare gli animali iniettati nelle loro gabbie di registrazione e registrare i comportamenti del mouse per 30 minuti. Quindi conta gli attacchi graffiante sul collo e qualsiasi comportamento di pulizia del viso come appena dimostrato. Nel modello di iniezione del collo, l'istamina induce forti comportamenti graffiante, mentre il veicolo induce lievi graffi.

Nel modello di iniezione delle guance, la capsaicina non induce comportamenti graffiante, ma induce comportamenti di pulizia, che si pensa siano correlati al dolore. Dopo l'iniezione nella guancia, l'istamina induce principalmente comportamenti graffiante con comportamenti di pulizia deboli. L'applicazione di un reagente anti-istamina inibisce i graffi, suggerendo che i comportamenti graffiante indotti dall'istamina sono causati dalla reazione dell'istamina sui recettori dell'istamina.

In questo esperimento, l'applicazione di un mediatore prurito ha indotto graffi, ma non cancellando i comportamenti, indicando che il mediatore testato agisce come pruritogeno, ma non un algogeno nei topi, simile ai suoi effetti nell'uomo. Questo metodo consente di distinguere facilmente e chiaramente le sensazioni di prurito e dolore con una sola procedura. Un'analisi dettagliata del comportamento può essere eseguita concentrandosi sul prurito o sulla sensazione di dolore.

I comportamenti prurito e dolore accordano risposte diverse. Anche queste tecniche non sono difficili. La procedura di iniezione e osservazione delle guance può lasciare che vari dei nostri coetanei di formazione padroneggiano.

Apprezziamo l'introduzione del modello di iniezione delle guance del professor LaMotte alla Yale University.