שימוש במיקרו-איניג'קציה כדי להעביר מבני דנ"א לתוך סטרונגילואידים מאפשר לנו ליצור נוקאאוטים ומהונדסים, שניתן להשתמש בהם כדי לחקור כיצד התולעים האלה מתפתחות, לנווט בסביבתן ולהטפיל פונדקאים. עד כה, זוהי הטכניקה המוצלחת היחידה ליצירת נוקאאוטים ומהונדסים בטפילים אלה. יום אחד לפני המיקרו-איניג'קציה, מוסיפים 180 מיקרוליטרים של תמיסת האגרוז על החלקת כיסוי באמצעות פיפטת פסטר מזכוכית, ואז מיד מפילים החלקת כיסוי שנייה למעלה כדי לשטח את האגרוז לתוך כרית דקה.
לאחר 5 עד 10 שניות, הסירו את החלקת הכיסוי העליונה על ידי החלקת השניים זה מזה וקבעו באיזו שקופית נמצאת כרית האגר, והניחו אותה עם הפנים כלפי מעלה. לאחר מכן, בחר חתיכת זכוכית זעירה מתוך החלקת כיסוי שבורה, ובאמצעות מלקחיים, לחץ אותה בעדינות לתוך האגר ליד הקצה העליון של הפד. ביום המיקרו-זירה, תרפדו את מחזיק ה-Baermann, שהוא מסננת העשויה משתי טבעות פלסטיק עם שתי שכבות של רשת ניילון צמודה ביניהן עם שלוש פיסות חופפות של רקמת מעבדה.
לאחר מכן מוסיפים את תערובת הצואה-פחם למחזיק בארמן. לאחר מכן מניחים את מחזיק ה-Baermann עם תערובת הצואה-פחם במשפך, מקפלים את פיסות הרקמות סביב תערובת הצואה-פחם, ומוסיפים מספיק מים כדי להטביע את רוב פחם הצואה. לאחר מכן, הוסיפו את המשפך למכסה צלחת פטרי מפלסטיק בקוטר 15 ס"מ כדי להכיל את הריח ולתייג את המשפך לפי הצורך.
לאחר שעה עד שעתיים, החזיקו צינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר מתחת לצינורות הגומי בתחתית המשפך ופתחו בזהירות את המהדקים בתחתית כדי לחלק 30 עד 40 מיליליטר מים המכילים תולעים לתוך צינור 50 מיליליטר. ולאחר מכן. להעביר 15 מיליליטר של מי בארמן המכילים את התולעים לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. סובבו את הצינור, הסירו עד 13 מיליליטרים של ה-supernatant, והשליכו אותו למיכל פסולת נוזלית עם יוד כדי להרוג תולעים.
לאחר איסוף כל התולעים, בדוק את כדור התולעים בתחתית הצינור. אם אין תולעים גלויות, המתן שעה עד שעתיים ואז אסוף תולעים נוספות ממנגנון בארמן. מעבירים את התולעים במים מעטים ככל האפשר לצלחת בינונית של 2% צמיחת נמטודה של שישה סנטימטרים עם מדשאה של E.coli HB101 ומשתמשים בצלחת זו כצלחת המקור למיקרו-אינטגיה.
מתחת למיקרוסקופ הניתוח, כסו את שברי הזכוכית על כיסוי כרית המיקרו-זירה החלקה בשמן הלוקרבון באמצעות פיק תולעי פלטינה סטנדרטי. לאחר מכן, הניחו את החלקת כיסוי כרית המיקרו-איניג'קציה על היקף המיקרו-איניג'קציה ואתרו את שברי הזכוכית המכוסים בשמן. יישמו את רסיס הזכוכית כך שקצה יהיה מאונך לכיוון המחט כדי לשמש כמשטח המשמש לשבירת המחט.
לאחר מכן, באמצעות מיקרוסקופ ניתוח, ודא כי המחט אין בועות או פסולת בפיר מחודד, ולאחר מכן לאבטח את המחט 1 עד 1.5 ס"מ לתוך מחזיק בלחץ. מקם את קצה המחט במרכז שדה הראייה של המיקרוסקופ לפי העין ותחת הגדלה נמוכה, מקם את קצה המחט בשדה הראייה בניצב לצד רסיס הזכוכית. לאחר מכן, עברו להגדלה גבוהה יותר ויישרו את קצה המחט עם קצה הזכוכית, ליד, אך לא נגעו בה.
לאחר מכן, כדי לשבור את קצה המחט ולאפשר זרימת נוזלים, הקש בעדינות על המחט בצד פיסת הזכוכית תוך הפעלת לחץ רציף מהגז. ברגע שהנוזל מתחיל לזרום, בדקו את צורת הקצה וודאו שהוא חד עם נוזל זורם בקלות. כאשר הנוזל זורם היטב מהמחט, הזיזו את שקופית המיקרו-אינטגיה להיקף הניתוח והוסיפו אחד לשני מיקרוליטרים של שמן הלוקרבון על כרית האגר למיקום התולעים.
העבר 20 עד 30 סטרונגילואידים בוגרים צעירים לצלחת בינונית של צמיחת נמטודה של 2% ללא חיידקים למשך חמש דקות לפחות כדי להסיר עודפי חיידקים על פני השטח ולבחור תולעים בודדות למיקרו-איניג'קציה. מוסיפים עוד תולעים לצלחת לפי הצורך בזמן ההזרקה. בעזרת כמות קטנה של שמן הלוקרבון על קטיף תולעים, בחרו מהצלחת נקבה בוגרת צעירה עם ביצה אחת עד ארבע ביצים בגונד שלה ללא חיידקים והעבירו את התולעת לטיפה זעירה של שמן על כרית האגר.
באמצעות בחירת התולעת, מקם בעדינות את התולעת כך שהיא לא תהיה מפותלת והגונדה תהיה גלויה וקלה לגישה. לאחר מכן, מקם את התולעת בשדה הראייה של מיקרו-איניג'קציה, וודא שהגונאד נמצא באותו צד של המחט וממוקם כך שהמחט תיצור קשר עם הגונד בזווית קלה. לאחר מכן, הביאו את קצה המחט לצד התולעת באותו מישור מוקד.
לאחר מכן, כשהוא מכוון לזרוע הגונד הסמוכה לאמצע התולעת, מכניסים בעדינות את המחט לתוך הגונד באמצעות מיקרו-אינדקטור. מיד להפעיל לחץ על המחט כדי למלא בעדינות את כל זרוע gonad עם תמיסת DNA. לאחר הזרקת מספיק נוזלים, יש להסיר את המחט ולראות כי הפצע נסגר.
חזור על ההליך עם הזרוע השנייה של הגונד, אם הוא גלוי. לאחר השלמת ההזרקה, ודא במהירות כי המחט אינה סתומה על ידי הפעלת לחץ עם קצה המחט על כרית האגר, ולאחר מכן העבר את המגלשה עם התולעת המוזרקת למיקרוסקופ הניתוח. כדי לשחזר את התולעת המוזרקת, הניחו תחילה כמה טיפות של מלוחים מואצים בתולעת על התולעת כדי להציף אותה מעל כרית האגר.
לאחר מכן אספו כמות קטנה של חיידקים על קטיף תולעים ונגעו בתולעת עם החיידקים הדבקים כדי להסיר אותה מהנוזל. מעבירים בעדינות את התולעת לצלחת ההתאוששות. לניסויים התנהגותיים, העבר 20 עד 30 זחלים לצלחת בינונית של צמיחת נמטודה של 2% עם מדשאת חיידקים HB101 עבה, ותחת מיקרוסקופ ניתוח פלואורסצנטי, זהה את הזחלים המבטאים את הטרנסג'ין המעניין.
לאחר מכן, באמצעות קטיף תולעים, בחרו את הזחלים המהונדסים והניחו אותם בכוס שעונים קטנה עם מלחים עם תילועים. לצורך מיקרוסקופיה, באמצעות סכין גילוח, הצמידו רשת לתחתית הפלסטיק של צלחת כימוטקסיס באורך 10 ס"מ כדי לעקוב בקלות אחר מיקומן של התולעים על הצלחת. לאחר מכן, הוסיפו שלושה מיקרוליטרים של זחלים במי מלח עם חיץ תולעת לריבוע ברשת, וממלאים כמה ריבועים לפי הצורך.
לאחר מכן מוסיפים טיפות של 15 עד 20 מיקרוליטר של 1% ניקוטין במים לטיפות התולעת. לאחר ארבע דקות, כאשר התולעים משותקות, יש לסנן אותן באמצעות מיקרוסקופ ניתוח פלואורסצנטי. זחלי סטרקולריס סטרקולריס סטרקולריס מהונדסים מהונדסים עם תבנית ביטוי לא שלמה ומלאה של מעשה-2 mRFPmars מוצגים כאן.
הביטוי המטושטש בשריר דופן הגוף נפוץ יותר כאשר הטרנסגן אינו משולב בגנום. לעומת זאת, ביטוי עקבי בכל שריר דופן הגוף מצביע לעתים קרובות על כך שהטרנסגן השתלב בגנום. שלב המפתח הוא מיקום המחט באותו מישור של מיקוד כמו הגונד כדי להבטיח שהדנ"א מוזרק לגונד וישולב בביצים המתפתחות.
התפתחותה של טכניקה זו אפשרה לחקור את תפקוד הגנים בנמטודות טפיליות, המספקת תובנות חדשות על מנגנונים של טפילות ואינטראקציות בין פונדקאי לטפילים.
