עם מחקרים הולכים וגוברים הנוגעים לרכיבים הפיטוכימיים לגישות לסינון תרופות להכנת פתרון פיטוכימי להערכת ההשפעות האופטימליות, נתתי תשומת לב ליתרונות של פרוטוקול זה כפעולה פשוטה ועלות נמוכה. פרוטוקול זה יועיל לחוקרים העוסקים בבדיקת תרופות של פרמקולוגיה. אנו מציעים להתחיל עם כמות קטנה של תרכובת פיטוכימית לניסויים ראשוניים, בהתחשב בעלות הצריכה.
שנית, מומלץ להשתמש במזרק אינסולין על מזרק רגיל להכין תמיסת נרינגנין של שני מיליגרם למיליליטר באתנול, לשקול 3.52 מיליגרם של אבקת נרינגנין ולהוסיף אותה לצינור של שני מיליליטר. סובבו במהירות את הצינור כדי ליישב את האבקה בתחתית הצינור. לאחר מכן, להוסיף 8.8 microliters של 100% אתנול לצינור כדי להכין פתרון 0.5%.
לאחר מכן להוסיף 79.2 microliters של 100% אתנול לצינור כדי להכין פתרון 5%. לאחר מכן, להוסיף 1.672 מיליליטר של 0.9% מלח פיזיולוגי לצינור המכיל את הפתרון 5%. זה יפיק תחליב.
ואז צנטריפוגה סירבה לצינור לבדוק אם הנרינגנין מומס לחלוטין בתמיסה. משקעים לבנים של נרינגנין לא מפוענח עשויים להופיע בתמיסה. לאחר מכן, כדי להכין תמיסת נרינגנין של שני מיליגרם למיליליטר ב- DMSO, שקלו 3.95 מיליגרם של אבקת נרינגנין והוסיפו אותה לצינור של שני מיליליטר.
לאחר סיבוב מהיר, הוסף 9.8 מיליליטר של DMSO לצינור כדי להכין 8.5% פתרון. לאחר מכן הוסף 88.2 מיקרוליטר של DMSO לצינור כדי להכין פתרון של 5%. לאחר מכן, להוסיף 1.877 מיליליטר של 0.9% מלוחים לתמיסה.
התוצאה תהיה תחליב. צנטריפוגה הפתרון כדי לבדוק אם naringenin הוא מומס לחלוטין. משקעים לבנים יש naringenin undissolved עשוי להופיע בפתרון.
לאחר מכן, כדי להכין תמיסת נרינגנין של שני מיליגרם למיליליטר בטווין 80 וב- DMSO, שקלו 6.69 מיליגרם של אבקת נרינגנין והוסיפו אותה לצינור של חמישה מיליליטר. סובב במהירות את הצינור, והוסף 117.7 מיקרוליטר של DMSO כדי להכין פתרון של 3.5%. לאחר מכן הוסיפו 117.7 מיקרוליטרים של Tween 80 לתמיסה כדי להשיג ריכוז של 3.5% Tween 80 ו-3.5% DMSO.
לאט לאט להוסיף את הפתרון הזה עוד חמישה מיליליטר צינור המכיל 3109.6 microliters של 0.9% מלוחים ולנער היטב כדי לקבל תמיסת naringenin ברור. לאחר שעתיים, הפתרון יישאר ברור ללא משקעים נראים לעין. כדי לתת את תמיסת הנרינגנין, הרם עכבר שחור בן חמישה שבועות C57 שישה זכרים בבסיס זנבו והנח אותו על משטח מוצק הממקם את זנבו לאחור בעדינות.
לאחר מכן, תפסו את קשקוש הצוואר מאחורי האוזניים עם האגודל השמאלי והאצבע המורה והניחו את הזנב בין האצבע הקטנה לאצבע הטבעת. שמור את העכבר במצב שכיבה כשהקצה האחורי שלו מוגבה מעט. כדי להזריק את תמיסת naringenin, לתפוס את העור על הגב של העכבר, כך העור הבטן מתוח.
לאחר מכן דחפו את המחט לרביע הימני התחתון או השמאלי של הבטן בזווית של 10 מעלות. כדי למנוע פגיעה בשלפוחית השתן, בכבד או באיברים פנימיים אחרים. הפעל את המחט תת עורית בכיוון גולגולתי במשך שלושה עד חמישה מילימטרים, ולאחר מכן הכנס אותו בזווית של 45 מעלות לתוך חלל הבטן.
ברגע שהמחט עוברת דרך דופן הבטן, לאט לאט לדחוף את הפתרון. לאחר ההזרקה, משך באיטיות את המחט החוצה, סובב אותה מעט כדי למנוע דליפה. כדי לבצע בדיקת גלוקוז בדם, פתח את רצועות הבדיקה וסמן את התאריך.
בצע נקב קטן על וריד הזנב לרוחב עם דקירת מחט 25 מד לסחוט טיפת דם. לאחר ניגוב טיפת הדם בנייר טישו, סחטו טיפת דם נוספת ואספו אותה בקצה רצועת הבדיקה. קרא והקלט את התוצאה המוצגת על מד הסוכר.
משקל הגוף של עכברי סוכרת עתירי שומן שניזונו מסטרפטוזוטוצין ירד בהשוואה לזה של עכברי קבוצת הביקורת אפס עד שמונה שבועות לאחר טיפול בסטרפטוזוטוצין. בשבוע הרביעי, הירידה במשקל של עכברים שטופלו בנרינגנין הייתה משמעותית בהשוואה לעכברים שלא טופלו. רמת הגלוקוז בדם בעכברים הסוכרתיים עלתה באופן דרמטי תוך חודש לאחר השראת סטרפטוזוטוצין.
לאחר חודשיים, הוא ירד אוטומטית לרמה שנצפתה לפני חודשיים. לעומת זאת, הטיפול בנרינגנין הוריד את רמות הגלוקוז בדם ב-51.8% בחודש אחד וב-34.8% בחודשיים בהשוואה ל-STZ. בהשוואה לקבוצת הביקורת, העכברים הסוכרתיים הנגרמים על ידי סטרפטוזוטוצין הציגו אובדן עצם כפי שצוין על ידי ירידה בנפח העצם לפי נפח הרקמה ומספר הטרבקולה.
בינתיים, הטיפול בנרינגנין הציל משמעותית את אובדן העצם. פעילות אוסטאוקלסט שהוכחה על ידי מספר אוסטאוקלסטים לכל אזור עצם טרבקולרית הייתה מוגברת בעכברים סוכרתיים, אם כי לא נצפתה מובהקות סטטיסטית בין מודלי הבקרה לבין מודלי המחלה. מכתים TRAP של עצם טרבקולרית ואוסטאוקלסטים של שליטה ועכברים הנגרמים על ידי סטרפטוזוטוצין מוצגים כאן.
הטיפול בנרינגנין הפחית באופן משמעותי את פעילות האוסטאוקלסט. אצל בעלי החיים הסוכרתיים, הטלופפטיד C-terminal של קולגן מסוג 1 הועלה ב-68.09% והפרופפטיד N-terminal של פרו-קולגן מסוג 1 הועלה ב-204.88% מה שמצביע על עלייה דרמטית בשיעור ספיגת העצם. עם זאת, הטיפול בנרינגנין ירד באופן משמעותי בשני האינדיקטורים של קצב ספיגת העצם.
כך שזה מאתגר לפטפט מינון מדויק. חיתוך הקצה הופך את הפיפטינג לקל ומדויק יותר. לחלופין, ניתן להמיר את הנפח הנדרש למסה, אשר יכולה להיות מאוחרת יותר בקלות.
זמן הצום של כל בעלי החיים לפני כל ניסוי גלוקוז בשלפוחית השתן חייב להישאר הדבר במהלך הניסוי כולו.
