הקמת מעגל באתרו של איברי הבטן התחתונה וגפיים האחוריות בעכברים

פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לענות על שאלות על אספקת תרופות ואינטראקציות חיסוניות בתוך האיברים הכלולים במעגל שלנו. טכניקה זו מאפשרת חליטה של איברים שאינם ניתנים לתיעוב על ידי שיטות מסורתיות לשעבר vivo, תוך הימנעות איברי האישור העיקריים. לפני תחילת הניתוח, להגדיר אמבט מים במחזור וכל הרכיבים ז'קט מים, ל 37 מעלות צלזיוס.

ודא כי הצינורות מנוקים, ולהשתמש במלכודת בועה בתוך תא לח כמו המאגר perfusate להגביל את נפח perfusate. כדי לבצע את הליך הצנתור, לאשר חוסר תגובה רפלקס הדוושה, בנורה הרדמה זכר בן שמונה עד 10 שבועות לראות עכבר. ולמקם את העכבר בתקרת supine על לוח קלקר, עם הראש בשעה שש.

לשתק את גפי החיות עם סרט הדבקה, ולנגב את הבטן עם אלכוהול איזורופיל. בצע חתך בצורת T בבטן, באמצעות קרישת אלקטרו כדי לעצור כל דימום סביב קצה החתך. לדחוף את הבטן, jejunum ואת המעי הגס לצד ימין של הבטן, כדי לחשוף את האב העורקים הבטן, vena קאווה ואת העורקים איליוואלומבר נפוץ וורידים.

תחת מיקרוסקופ ניתוח, לאתר ולצרף את העורקים השחלות iliolumbar וורידים עם תפרים משי 4-O. לולאה שני תפרים משי 4-O מתחת לאאורטה הבטן וקנה קאווה נחות על סנטימטר אחד מעל העורק איליאק ווריד, אחד מילימטר זה מזה. ואז לעשות בהנהון רופף בתפר הקרוב ביותר לכלי איליאק.

השתמש במחזיק מחט כדי ליישר אופקית למתוח הן את vena cava נחות ואת ביתן הבטן. בנוסף, שמירה על כלי הדם מתוחים, להשתמש קטטר IV מגן מכונף 24 מד כדי לנקב את אב העורקים הבטן. ברגע שהמחט חודרת כמילימטר אחד לתוך הכלי, לדכא את הכפתור כדי לחזור בו קרן המחט, ולהכניס את הקטטר כחמישה מילימטרים לתוך הכלי.

הכנס קטטר חמישה מילימטרים לתוך ונה קאווה נחות, באותו אופן. ולקשור את שני התפרים סביב כלי הקטטר. לאחר מכן להחיל דבק מיידי כדי לשתק את קטטרים על זקפה ספין א, ולהחליף את איברי הבטן.

כדי להקים את מערכת החיסון, מניחים את העכבר על כרית סיליקון בתא לח ז'קט מים, ולשתק את כנפי הקטטר אל הפנקס עם מחטים 19-מד. ממלאים את מפרצון הקטטר העורקי, עם חיץ זלוק מחומם מראש. השתמש בממטרים המוסטטיים, ומחבר בורג-on כדי לחבר את מפרץ הקטטר לצנרת, ולשתק את צינורות חלחלת הפנימית עם סרט הדבקה.

התאימו את קצב הזרימה הפריסטואלי ל-0.6 מיליליטר לדקה, והמשיכו את זרימת הזליפה פתוחה במשך חמש עד עשר דקות, כדי לשטוף את הדם החוצה דרך הקטטר הווריד. כמה קרישי דם יהיו נוכחים קטטר שקע, לשטוף את הקרישים עם חיץ perfusate, ולהשתמש בורג על המחבר כדי לצרף לקצה של קטטר ורידים צינורות השקע כדי לסגור את המעגל. לאחר מכן מכסים את התא לח עם מכסה מחומם מראש עד שעתיים של תדלוק, מעת לעת לבדוק את רמת perfusate.

כאן, תמונות קונפוקל לאחר קיפוב עם פתרון צלצול המכיל Hoechst 33342 ו DyLight-649 lectin, מוצגים. השריר, מח העצם, האשכים, שלפוחית השתן, הערמונית ועור כף הרגל מדגימים בדרך כלל כתם גרעיני וסקולרי יעיל. המטוקסילין וכתם אאוסין של רקמות אלה לאחר שלוש שעות של תדלוק תרמי תקין, מגלה שטיפה מוצלחת של האיברים, ללא פגיעה לכאורה ברקמה.

מודל זה יכול לשמש להבנת מסלולי ספיגת סמים, בסביבה הפיזיולוגית הלא רלוונטית. לדוגמה, כדי להבין את התפקיד של רכיבי סרום בהצטברות סמים. אנחנו משתמשים במערכת, כדי להבין את המנגנון של הצטברות ליפוזום בעור.