Name: murine salivary functional assessment via pilocarpine stimulation following fractionated radiation
Uploaded: 2018-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation at JoVE.com

מחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי מחקר ואסטתיים (NIDCR) את נבחרת המכון של שיניים ו של המכון הלאומי לסרטן (NCI) של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R56 DE025098, UG3 DE027695 ו F30 CA206296. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים. עבודה זו נתמכה גם על ידי 1206219 DMR של ה-NSF וחדשנות IADR את פרס טיפול אוראלי (2016).
ברצוננו להודות מרוימה ערי ד ר אנדרו Hollomon לסיוע שלהם עם אוסף רוק. ברצוננו להודות וונג פיי-לון לסיוע שלו עם ניתוח בלוטת. ברצוננו להודות אינגלס מתיו על עזרתו איור הכנה. ברצוננו להודות ד ר איליין Smolock, אמילי וו על קריאה ביקורתית של כתב היד הזה.

כל ויוו ההליכים המתוארים להלן אושרו על ידי ועדת האוניברסיטה חיה משאבים ב אוניברסיטת רוצ'סטר, רוצ'סטר. NY.
1. הכנה
<ol><li>באמצעות איזון האנליטי, שוקלים 20 מ"ג פילוקרפין. להמיס ב 2 מ ל תמיסת סטרילית צינור microcentrifuge. הערה: כי פילוקרפין רגיש אור ולא מאבד את הפעילות לאורך זמן, פתרון זה צריך להיות מוכן ביום ההזרקה, מוגן מפני אור עד מנוהל.</li>
	<li>באמצעות איזון האנליטי, שוקל ולזהות כל אוסף צינורות, נימים זכוכית. המספר של אוסף צינורות, נימים זכוכית צריך להתאים את מספר עכברים.</li>
</ol>2-מיכשור וציוד
<ol><li>שוקלים C57/BL6 עכברים באמצעות איזון האנליטי.</li>
	<li>באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, עזים ומתנגד עכברים עם פתרון סטרילי מלוחים intraperitoneally מוזרק של 100 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 10 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים. המשך לשלב הבא כאשר העכבר אינו מגיב לגירויים (דהיינו היעדר רפלקס הנסיגה פדלים), אשר בדרך כלל מתרחשת בתוך 5-10 דקות לאחר ההזרקה.</li>
	<li>לאחר dispensing חומר סיכה על המוליך שקצהו כותנה, בעדינות להחיל על העיניים, מקם את העכבר במצב פרקדן על הבמה. החיה anesthetized חייב להישמר על משטח חם. הערה: כל הפעולות מבוצעות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>אבטח את האף הגפיים, זנב אל הבמה באמצעות הדבקה.</li>
	<li>נקי, להרטיב את הצוואר עם המחיקה אלכוהול. הערה: זה יעזור למנוע חדירה החתכים הבאים פרווה.</li>
	<li>מרימה את העור בצוואר קו האמצע הגחון עם מלקחיים, לעשות חתך קטן, שטחי באמצעות מספריים ויבתר. להנחות את המספריים לתוך הפתח ופתח לאט את להבי subcutaneously כדי להפריד בין רקמות מטוסים.</li>
	<li>יש לשמור על עור הרים, לחתוך בזהירות כדי 1 ס מ מתחת בפה.</li>
	<li>להזמין שני חתכים לרוחב-ההיבט נחות מעולה של החתך הראשון. באמצעות מלקחיים, בעדינות משקפים משם את העור כדי לאפשר גישה למבנים הראש והצוואר.</li>
	<li>באמצעות המיקרוסקופ ויבתר בהגדלה X 8, להמחיש את בלוטות submandibular (קו האמצע: איור 1).</li>
	<li>בעזרת מלקחיים בסדר, הרם בעדינות את בלוטות לחשוף את השרירים infrahyoid (רצועה) ארבעה המכסים את קנה הנשימה. הימנע קריעה או לשבש את להערכת שמסביב או צינורות excretory.</li>
	<li>אם אוסף רוק מכל עכבר אחד או יותר, חזור על השלבים 2.1-2.10 עם העכבר כל לפני שתמשיך. הערה: הליך זה שניתן לבצע בביטחה על עד 5 עכברים בו-זמנית.</li>
	<li>במספריים ויבתר קטן, להסיר את החלק המדיאלי של השרירים רצועה בעודם שוהים קרוב קו האמצע ככל האפשר. חותכים רק ככל הדרוש להמחיש את קנה הנשימה ולשמור רצועה השרירים מהדרך במהלך ההליך. הימנע חותך כל ספינות בקרבת מקום, כי אם יש דלדול אחסון משני דימום משמעותי, פילוקרפין לא יהיה יעיל וגורם הפרשת.</li>
	<li>משקפים את השרירים רצועה מן קנה הנשימה.</li>
	<li>דמיינו את הקול, קנה הנשימה, בלוטת התריס. ודא קנה הנשימה ברור עודפי רקמת.</li>
	<li>לבצע חתך אופקי לקנה נחות/אחוריים בלוטת התריס באמצעות מספריים ויבתר קטנות. ודא דרכי הנשימה פטנטים וברור של נוזל.</li>
</ol>3. רוק אוסף
<ol><li>הוצא את הקלטת ליד הפה ואת הזווית לנתיחה הבמה כלפי מטה (45°, cranially) כדי לסייע עם זרימת הרוק.</li>
	<li>באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, לבצע הזרקה בקרום הבטן של 10 µL/g הגוף משקל פילוקרפין עבור מנה סך של 100 מ"ג/ק"ג.</li>
	<li>להפעיל טיימר. אם מינון עכברים מרובים, להפחית זמן חפיפה ובמהירות ועל ידי יש לי עוזר בו-זמנית להזריק העכברים הנותרים.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים רגילה, פתח את הפה לגישה צינור קפילרי.</li>
	<li>פעם חרוז של רוק נצפית בפה, מקום לסוף הפרוקסימלית צינור קפילרי לתוך הנוזל, בקצה הדיסטלי להציב לתוך צינור איסוף ממוקם מתחת לזירה ויבתר (שני צינורות מראש שקל). הערה: בעכברים הנשי C57/BL6 6-10 שבועות של גיל, ריור ברוטו מתרחשת בתוך 2 דקות של הזרקת פילוקרפין.</li>
	<li>אם רוק בניין בפה, אך לא זורם דרך הצינור, reattempt הצעד הקודם. ודא כי הצינור אינם ממוקמים ישירות נגד משטח הרירית, אשר יכול לחסום את הים.</li>
	<li>לאסוף את הרוק עבור סכום כולל של 12 דקות בעקבות גירוי פילוקרפין. להבטיח פיונית יישאר נקי. הערה: נפח מוגבר, הפרשות (הרוק, בדרכי השתן, צואה) תקינים בתקופה זו.</li>
	<li>אם עכברים יש מדוכא רוק פונקציה (למשל., עקב פציעה או התערבות), להעביר את הנוזלים הנותרים מן הפה אל הצינור אוסף באמצעות micropipette P200. אם איסוף של עכברים מרובים, ודא כי טיפים משתנים.</li>
	<li>להקליט את המשקל של רוק שנאספו פלוס צינורות 12 דקות לאחר ההזרקה פילוקרפין.</li>
</ol>4. בלוטת לנתיחה
<ol><li>המתת חסד עכברים מאת CO2 המתת חסד (כפי שמתואר ההנחיות AVMA המתת חסד של בעלי חיים: 2013 מהדורה) ואחריו ניקור חזה, דואגת לשמר את המבנים של הראש והצוואר. מסיבה זו, להימנע נקע בצוואר הרחם כשיטה של המתת חסד.</li>
	<li>הנח את העכבר במצב פרקדן על הבמה. מיקום מחדש של בלוטות באתר המקורי מעל קנה הנשימה (איור 1).</li>
	<li>באמצעות מיקרוסקופ ויבתר תחת הגדלה X 8, להמחיש את בלוטות העיקריים: PG, SMG, סיג. כדי להבחין בין הבלוטות בזמן, לזהות כי פ ג הוא מפוזר, משקר לרוחב SMG, סיג. הערה: אם לנתח את PG, זה צריך להיעשות קודם כי זה לפחות מוגדר וכנראה להיקרע.</li>
	<li>לתפוס את הזנב של PG עם מלקחיים, משיכתו הרחק מבנים המשמשים כבסיס, ולהחיל בעדינות את המתח לפני חיתוך ראש PG עם לנתח מספריים.</li>
	<li>הפרה הקפסולה המקיפים את SMGs באמצעות מלקחיים. הפרד בעדינות את SMG ימינה ושמאלה.</li>
	<li>חינם ההיבט הגבי SMG מרקמות nonglandular מודבקת באמצעות מלקחיים.</li>
	<li>הסר את SMG הצוואר על ידי ציור צינור של וורטון מתוח עם מלקחיים, לחתוך את צינור עם לנתח מספריים.</li>
	<li>בעדינות להפריד את סיג SMG באמצעות מלקחיים. הערה: סיג הוא בהיבט superolateral של SMG.</li>
	<li>באמצעות איזון אנליטית, להקליט SMG משקולות.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bradley, P., O'Hara, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+salivary+glands.">Diseases of the salivary glands.</a> Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).</li><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+enhancement+therapies.">Salivary enhancement therapies.</a> Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).</li><li>Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+mechanism+of+salivary+gland+radiosensitivity.">On the mechanism of salivary gland radiosensitivity.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).</li><li>Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parotid+and+submandibular/sublingual+salivary+flow+during+high+dose+radiotherapy.">Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).</li><li>Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+gland+homeostasis+is+maintained+through+acinar+cell+self-duplication.">Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication.</a> Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).</li><li>Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+Glands:+Stem+Cells,+Self-duplication,+or+Both?.">Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both?.</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).</li><li>Ono, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+effects+of+cevimeline+and+pilocarpine+on+salivary+mechanisms,+cardiovascular+response+and+thirst+sensation+in+rats.">Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats.</a> Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).</li><li>Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+salivary+gland+function+by+autonomic+nerves.">Regulation of salivary gland function by autonomic nerves.</a> Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).</li><li>Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+agonistic+effects+of+pilocarpine+on+Ca(2+)+responses+and+salivary+secretion+in+the+submandibular+glands+of+live+animals.">Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals.</a> Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).</li><li>Urita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebamipide+and+mosapride+enhance+pilocarpine-induced+salivation.">Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation.</a> North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).</li><li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo.">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li><li>Kondo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+differences+in+the+acinar+cells+of+the+murine+major+salivary+glands.">Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).</li><li>Evans, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+impairment+of+salivation+in+Na+/K+/2Cl-+cotransporter+(NKCC1)-deficient+mice.">Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice.</a> Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).</li><li>Delanian, S., Lefaix, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+radiation-induced+fibroatrophic+process:+therapeutic+perspective+via+the+antioxidant+pathway.">The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway.</a> Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).</li><li>Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+xerostomia:+pathophysiology,+clinical+course+and+supportive+treatment.">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment.</a> Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).</li><li>Lin, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+short-term+&#947;-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device.">Measuring short-term &#947;-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li><li>Montenegro, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+differences+between+humans+and+rodents+in+the+ability+to+concentrate+salivary+nitrate:+Implications+for+translational+research.">Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research.</a> Redox biology. 10, 206-210 (2016).</li><li>Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+and+Functional+Changes+of+Salivary+Gland+Dysfunction+After+Radioactive+Iodine+Ablation+in+a+Murine+Model.">Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model.</a> Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).</li><li>Imamura, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+pilocarpine-induced+saliva+secretion+by+adrenergic+agonists+in+ICR+mice.">Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).</li><li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+Secretion+of+Saliva+in+Transgenic+Mice+Lacking+Aquaporin-5+Water+Channels.">Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels.</a> Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).</li><li>Parkes, M. W., Parks, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supersensitivity+of+salivation+in+response+to+pilocarpine+after+withdrawal+of+chronically+administered+hyoscine+in+the+mouse.">Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).</li><li>Nishiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Up-Regulated+PAR-2-Mediated+Salivary+Secretion+in+Mice+Deficient+in+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Subtypes.">Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516 (2007).</li><li>Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotype+analysis+of+aquaporin-8+null+mice.">Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).</li><li>Kamiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-Ray-Induced+Damage+to+the+Submandibular+Salivary+Glands+in+Mice:+An+Analysis+of+Strain-Specific+Responses.">X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses.</a> BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).</li><li>Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+and+Comparison+of+Salivary+Calcium,+Phosphorous,+Alkaline+Phosphatase+and+pH+Levels+in+Periodontal+Health+and+Disease:+A+Cross-sectional+Biochemical+Study.">Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study.</a> Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).</li><li>Droebner, K., Sandner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+the+salivary+secretion+assay+in+F508del+mice--the+murine+equivalent+of+the+human+sweat+test.">Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).</li><li>Lamy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+mouse+whole+saliva+soluble+proteome+induced+by+tannin-enriched+diet.">Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet.</a> Proteome Science. 8 (1), 65 (2010).</li><li>Mahomed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+mucin+immunohistochemistry+in+salivary+gland+tumors+and+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma.">Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).</li><li>Kohlgraf, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+SPLUNC1+in+saliva+with+an+xMAP+particle-based+antibody+capture+and+detection+immunoassay.">Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay.</a> Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).</li><li>Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+ex+vivo+expansion+and+post-irradiation+regenerative+potential+of+juvenile+and+aged+salivary+gland+stem+cells.">Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2015).</li><li>Lombaert, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands.">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> PLoS One. 3 (4), e2063 (2008).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

אנו מציגים שיטה שקודמים להעריך תפקוד בלוטת הרוק, אשר יכול להיות מיושם ללמוד פציעה בלוטת ו הרפוי. את הנהלים שלנו כולל מיכשור וציוד, אוסף רוק ו בלוטת לנתיחה, שלכל אחד מהם יש יישומים ניסיוני יכול לתמוך לימוד משולב של בלוטת הרוק הביולוגיה. לדוגמה, מיכשור וציוד מאתר שימש לניהול כללי דרכי הנשימה ?...

הפרעות בלוטת הרוק כוללים תסמונות של dysregulated או הפרשת לקוי מוביל עודף (sialorrhea) או underproduction (xerostomia ו- hyposalivation) של רוק1. בשני המקרים, יש אינטרס לשפר את ההבנה שלנו של בלוטת הרוק ביולוגיה לעבר היעד הסופי של התפתחות טיפולית2.
בלוטות הרוק הן איברים מאוד רגיש, פגעו לעיתים קרובות במהלך הקרנות סרטן הראש והצוואר, המוביל הקבוע יובש בפה (xerostomia)3,4. בניגוד לרקמות אחרות רגיש, עם זאת, שיעור תחלופה בלוטת הרוק הוא יחסית נמוך, המנגנון של אובדן הפרשה ממעטים להבין5,6. בהגדרה פגיעה ייחודי, התחדשות רקמות אסטרטגיות המכון להגנת דורשים הערכה תפקודית הרוק. השפעול, אוסף רוק מאתר הוא כלי יקר במיוחד בהערכת התגובה בלוטת קרינה וגם סוכני טיפולית.
כאן, אנו מציגים את שיטת ביצוע וכימות הפרשת רוק מגורה באמצעות פילוקרפין, אגוניסט מוסקריניים חזק7. פילוקרפין מגרה את מערכת העצבים האוטונומית לזירוז בלוטת הפרשה8,9. כדי להשלים את המבחן הזה כראוי, מיכשור וציוד נדרש כדי להבטיח כי העכבר שומרת על דרכי הנשימה פטנטים לאורך כל ההליך, וכדי להפחית את הסיכונים של חנק השאיפה של חלל הפה10. הפרשות במאגר.
זהו הליך מסוף, שהגיעה לשיאה להסרת בלוטות הרוק הגדולות שלושה: את parotid (עמוד), submandibular (SMG) ו את sublingual (. סיג). ללימודים פונקציונלי, בלוטת משקולות נרשמים, משמשים לעתים קרובות כדי לנרמל רוק למדידה11,12,13. המידע הזה חשוב במיוחד במחקרים קרינה, שבתוכה בלוטת ניוון נמצא14,התוצאה הצפויה15
יש השתנות בספרות לגבי איך ממריצים הפרשת רוק מבוצעת ודיווח16. לדוגמה, פילוקרפין מנות בתוך ספרות span לפחות שלושה סדרי גודל17,18,19,20,21,22,23. כאן, אנו מציגים פרוטוקול פילוקרפין במינון גבוה ממוטבת עם כוונה הפארמצבטית משופרת שיטת הביצוע, כמו גם מתן פלטפורמה מודולרית של טכניקות (מיכשור וציוד, אוסף רוק ו ניתוח בלוטת) כי ניתן להתאים כמו הצורך.
בנוסף פרוטוקול הדגמה, אנו כוללים נציג נתונים פונקציונלי של זרימת הרוק-2 שבועות לאחר fractionated קרינה (4 מנות של 6.85 Gy) לאזור SMG.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpine</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-9</td><td>Spring Scissors for Tracheostomy</td></tr><tr><td>Sterile Saline Solution</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>Saline</td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td><td>Curved Forceps</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>Straight Forceps</td></tr><tr><td>Standard Pattern Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>Blunt Forceps</td></tr><tr><td>Fine Scissors- Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Dissection Scissors</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillary tubes</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 Antibody</td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistical Software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>Applicator for eye ointment</td></tr><tr><td>0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2&quot;</td><td>BD</td><td>7629</td><td>Syringe for intraperitoneal injection</td></tr></tbody></table>

murine salivary functional assessment via pilocarpine stimulation following fractionated radiation

Hyposalivation הוא ציין כלל התגובה אוטואימונית של תסמונת סיוגרן או הקרנות הבאה, לפגיעה בלוטות הרוק הגדולות. במקרים אלה, נותרו שאלות לגבי המחלה פתוגנזה והתערבויות יעיל. שיטת אופטימיזציה המאפשר הערכה תפקודית של בלוטות הרוק לא יסולא בפז עבור חוקרים בלוטה אקסוקרינית ביולוגיה, תפקוד, הרפוי. כאן, אנו מציגים גישה צעד אחר צעד כדי ביצוע פילוקרפין המרצת הפרשת הרוק, כולל מיכשור וציוד את הקרע של שלוש הגדולות מאתר בלוטות הרוק. אנחנו גם פירוט המתאימה מאתר הראש והצוואר האנטומיה גישה במהלך הטכניקות הללו. גישה זו היא מדרגית, המאפשרות מספר עכברים יעובדו בעת ובעונה אחת, ובכך שיפור היעילות של תהליך עבודה. אנו שואפים לשפר את הפארמצבטית בשיטות אלה, שלכל אחד מהם יש נוספת יישומים בתוך השדה. בנוסף אוסף רוק, נדון מדדי לכימות, נורמליזציה קיבולת תפקודית של רקמות אלה. נציג נתונים כלולים מ בבלוטות submandibular עם תפקוד בלוטת הרוק מדוכא 2 שבועות בעקבות קרינה fractionated (4 מנות של 6.85 Gy).

אחרי ביצוע במינון גבוה פילוקרפין גירוי אוסף רוק, זה חשוב לשמור על האוויר כדי למנוע שאיפה או חנק מן הפרשות בחלל הפה. תיאור סכמטי של מיכשור וציוד מסופק (איור 1). בעקבות החתך בקנה הנשימה, פיונית חייבת להישאר ברורה של רקמות ונוזלים.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-pa...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation at JoVE.com

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה

אנו מציגים גישה מפורטת לביצוע אוסף רוק, כולל מיכשור וציוד מאתר את ניתוקה של שלושה בלוטות הרוק הגדולות.

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

murine-salivary-functional-assessment-via-pilocarpine-stimulation

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

11.1K Views.  University of Rochester. אנו מציגים גישה מפורטת לביצוע אוסף רוק, כולל מיכשור וציוד מאתר את ניתוקה של שלושה בלוטות הרוק הגדולות.

Video: Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their head and neck regions for cancer treatment. Both groups of patients experience symptoms such as xerostomia (dry mouth), dysphagia 
(impaired chewing and swallowing), severe dental caries, altered taste, oro-pharyngeal infections (candidiasis), mucositis, pain and discomfort.
One innovative approach of regenerative medicine for the treatment of salivary gland hypo-function is speculated in RS Redman, E Mezey 
et al. 2009: stem cells can be directly deposited by cannulation into the gland as a potent method in reviving the functions of the impaired organ. Presumably, 
the migrated foreign stem cells will differentiate into glandular cells to function as part of the host salivary gland. Also, this cannulation technique is an 
expedient and effective delivery method for clinical gene transfer application.
Here we illustrate the steps involved in performing the cannulation procedure on the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct 
(Fig 1). C3H mice (Charles River, Montreal, QC, Canada) are used for this experiment, which have been kept under clean conventional conditions at 
the McGill University animal resource center. All experiments have been approved by the University Animal Care Committee and were in accordance with the 
guidelines of the Canadian Council on Animal Care.
For this experiment, a trypan blue solution is infused into the gland through the opening of the Wharton's duct using a 
insulin syringe with a 29-gauge needle encased inside a polyethylene tube. Subsequently, the mouse is dissected to show that the infusions migrated 
into the gland successfully.

A protocol for the cannulation of the mouse submandibular salivary gland via the Wharton's duct is described. For this experiment, the trypan blue solution is used as a dyer to demonstrate how this technique effectively delivers infusions into the targeted gland, and to suggest the reliability of this new approach as a potential clinical drug/cell therapy for the regeneration of salivary glands.

Cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר Submandibular Duct של וורטון

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their ...

Quantifying Cognitive Decrements Caused by Cranial Radiotherapy

With the exception of survival, cognitive impairment stemming from the clinical management of cancer is a major factor dictating therapeutic outcome. For many patients afflicted with CNS and non-CNS malignancies, radiotherapy and chemotherapy offer the best options for disease control. These treatments however come at a cost, and nearly all cancer survivors (~11 million in the US alone as of 2006) incur some risk for developing cognitive dysfunction, with the most severe cases found in patients subjected to cranial radiotherapy (~200,000/yr) for the control of primary and metastatic brain tumors1. Particularly problematic are pediatric cases, whose long-term survival plagued with marked cognitive decrements results in significant socioeconomic burdens2. To date, there are still no satisfactory solutions to this significant clinical problem.
We have addressed this serious health concern using transplanted stem cells to combat radiation-induced cognitive decline in athymic rats subjected to cranial irradiation3. Details of the stereotaxic irradiation and the in vitro culturing and transplantation of human neural stem cells (hNSCs) can be found in our companion paper (Acharya et al., JoVE reference). Following irradiation and transplantation surgery, rats are then assessed for changes in cognition, grafted cell survival and expression of differentiation-specific markers 1 and 4-months after irradiation. To critically evaluate the success or failure of any potential intervention designed to ameliorate radiation-induced cognitive sequelae, a rigorous series of quantitative cognitive tasks must be performed. To accomplish this, we subject our animals to a suite of cognitive testing paradigms including novel place recognition, water maze, elevated plus maze and fear conditioning, in order to quantify hippocampal and non-hippocampal learning and memory. We have demonstrated the utility of these tests for quantifying specific types of cognitive decrements in irradiated animals, and used them to show that animals engrafted with hNSCs exhibit significant improvements in cognitive function3.
The cognitive benefits derived from engrafted human stem cells suggest that similar strategies may one day provide much needed clinical recourse to cancer survivors suffering from impaired cognition. Accordingly, we have provided written and visual documentation of the critical steps used in our cognitive testing paradigms to facilitate the translation of our promising results into the clinic.

Cognitive impairment resulting from the radiotherapeutic management of brain tumors represents a clinically intractable condition that adversely impacts quality of life. The capability to critically evaluate potential interventions for ameliorating radiation-induced cognitive decrements ultimately depends on the capability to undertake rigorous quantitative assessments of cognition.

כימות decrements קוגניטיבי נגרמת על ידי הקרנות גולגולתי

With the exception of survival, cognitive impairment stemming from the clinical management of cancer is a major factor dictating therapeutic outcome. For ...

Functional Interrogation of Adult Hypothalamic Neurogenesis with Focal Radiological Inhibition

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral delivery or transgenic animals have potential confounds that make interpretation of results from these studies difficult. New radiological tools are emerging, however, that allow one to noninvasively investigate the function of select groups of adult-born neurons through accurate and precise anatomical targeting in small animals. Focal ionizing radiation inhibits the birth and differentiation of new neurons, and allows targeting of specific neural progenitor regions. In order to illuminate the potential functional role that adult hypothalamic neurogenesis plays in the regulation of physiological processes, we developed a noninvasive focal irradiation technique to selectively inhibit the birth of adult-born neurons in the hypothalamic median eminence. We describe a method for Computer tomography-guided focal irradiation (CFIR) delivery to enable precise and accurate anatomical targeting in small animals. CFIR uses three-dimensional volumetric image guidance for localization and targeting of the radiation dose, minimizes radiation exposure to nontargeted brain regions, and allows for conformal dose distribution with sharp beam boundaries. This protocol allows one to ask questions regarding the function of adult-born neurons, but also opens areas to questions in areas of radiobiology, tumor biology, and immunology. These radiological tools will facilitate the translation of discoveries at the bench to the bedside.

The function of adult-born mammalian neurons remains an active area of investigation. Ionizing radiation inhibits the birth of new neurons. Using computer tomography-guided focal irradiation (CFIR), three-dimensional anatomical targeting of specific neural progenitor populations can now be used to assess the functional role of adult neurogenesis.

חקירה תפקודית של מבוגרים ההיפותלמוס Neurogenesis עם הפוקוס ברדיולוגית עיכוב

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral ...

Neuroscience

Assessment of Memory Function in Pilocarpine-induced Epileptic Mice

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal model of epilepsy, we generated pilocarpine-treated chronic epileptic mice. We present a protocol for three different behavioral tests using these epileptic mice: novel object location (NL), novel object recognition (NO), and pattern separation (PS) tests to evaluate learning and memory for places, objects, and contexts, respectively. We explain how to set the behavioral apparatus and provide experimental procedures for the NL, NO, and PS tests following an open field test that measures the animals&#8217; basal locomotor activities. We also describe the technical advantages of the NL, NO, and PS tests with respect to other behavioral tests for assessing memory function in epileptic mice. Finally, we discuss possible causes and solutions for epileptic mice failing to make 30 s of good contact with the objects during the familiarization sessions, which is a critical step for successful memory tests. Thus, this protocol provides detailed information about how to assess epilepsy-associated memory impairments using mice. The NL, NO, and PS tests are simple, efficient assays that are appropriate for the evaluation of different kinds of memory in epileptic mice.

This article presents experimental procedures for assessing memory impairments in pilocarpine-induced epileptic mice. This protocol can be used to study the pathophysiologic mechanisms of epilepsy-associated cognitive decline, which is one of the most common comorbidities in epilepsy.

הערכה של תפקוד הזיכרון בפילסוקרפיין-עכברים מבוססי אפילפסיה

Cognitive impairment is one of the most common comorbidities in temporal lobe epilepsy. To recapitulate epilepsy-associated cognitive decline in an animal ...

Behavior

Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models

This study adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating translational dysphagia research. Successful outcomes are dependent upon three critical components: test chambers that permit self-feeding while standing unrestrained in a confined space, recipes that mask the aversive taste/odor of commercially-available oral contrast agents, and a step-by-step test protocol that permits quantification of swallow physiology. Elimination of one or more of these components will have a detrimental impact on the study results. Moreover, the energy level capability of the fluoroscopy system will determine which swallow parameters can be investigated. Most research centers have high energy fluoroscopes designed for use with people and larger animals, which results in exceptionally poor image quality when testing mice and other small rodents. Despite this limitation, we have identified seven VFSS parameters that are consistently quantifiable in mice when using a high energy fluoroscope in combination with the new murine VFSS protocol. We recently obtained a low energy fluoroscopy system with exceptionally high imaging resolution and magnification capabilities that was designed for use with mice and other small rodents. Preliminary work using this new system, in combination with the new murine VFSS protocol, has identified 13 swallow parameters that are consistently quantifiable in mice, which is nearly double the number obtained using conventional (i.e., high energy) fluoroscopes. Identification of additional swallow parameters is expected as we optimize the capabilities of this new system. Results thus far demonstrate the utility of using a low energy fluoroscopy system to detect and quantify subtle changes in swallow physiology that may otherwise be overlooked when using high energy fluoroscopes to investigate murine disease models.

This study successfully adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating translational dysphagia research.

התאמת שיטות סנונית Videofluoroscopic אדם מחקר כדי לזהות ולאפיין בליעה במודלי Murine מחלות

This study adapted human videofluoroscopic swallowing study (VFSS) methods for use with murine disease models for the purpose of facilitating ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of saliva into the oral cavity. Serous and mucous acinar cells are the protein and mucous producing factories of the gland respectively, and represent the origin of saliva production. Once synthesised, the various enzymatic and other proteinaceous components of saliva are secreted through a series of ductal cells bearing epithelial-type morphology, until the eventual expulsion of the saliva through one major duct into the cavity of the mouth. The composition of saliva is also modified by the ductal cells during this process.
In the manifestation of diseases such as Sj&ouml;gren's syndrome, and in some clinical situations such as radiotherapy treatment for head and neck cancers, saliva production by the glands is dramatically reduced 1,2. The resulting xerostomia, a subjective feeling of dry mouth, affects not only the ability of the patient to swallow and speak, but also encourages the development of dental caries and can be socially debilitating for the sufferer.
The restoration of saliva production in the above-mentioned clinical conditions therefore represents an unmet clinical need, and as such several studies have demonstrated the regenerative capacity of the salivary glands 3-5. Further to the isolation of stem cell-like populations of cells from various tissues within the mouse and human bodies 6-8, we have shown using the described method that stem cells isolated from mouse salivary glands can be used to rescue saliva production in irradiated salivary glands 9,10. This discovery paves the way for the development of stem cell-based therapies for the treatment of xerostomic conditions in humans, and also for the exploration of the salivary gland as a microenvironment containing cells with multipotent self-renewing capabilities.

An optimized protocol for the isolation of stem cells from the mouse salivary gland is described. The method employs enzymatic and mechanical digestion, and permits isolation of salispheres containing cells with characteristics of stem cells.

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Biology

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally delivering bioactive compounds to the salivary glands, greater tissue concentrations can be safely achieved versus systemic administration. Furthermore, off target tissue effects from extra-glandular accumulation of material can be dramatically reduced. In this regard, retroductal injection is a widely used method for investigating both salivary gland biology and pathophysiology. Retroductal administration of growth factors, primary cells, adenoviral vectors, and small molecule drugs has been shown to support gland function in the setting of injury. We have previously shown the efficacy of a retroductally injected nanoparticle-siRNA strategy to maintain gland function following irradiation. Here, a highly effective and reproducible method to administer nanomaterials to the murine submandibular gland through Wharton's duct is detailed (Figure 1). We describe accessing the oral cavity and outline the steps necessary to cannulate Wharton's duct, with further observations serving as quality checks throughout the procedure.

Local drug delivery to the submandibular glands is of interest in understanding salivary gland biology and for the development of novel therapeutics. We present an updated and detailed retroductal injection protocol, designed to improve delivery accuracy and experimental reproducibility. The application presented herein is the delivery of polymeric nanoparticles.

ננו-חלקיק Retroductal הזרקה אל בלוטת Submandibular מאתר

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

Bioengineering

Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. Irreparable cell damage results in a chronic loss of salivary function that impairs basic oral activities, and increases the risk of oral infections and dental caries. Salivary hypofunction and its complications gravely impact a patient's comfort. Current symptomatic management of the condition is ineffective, and newer therapies to assuage the condition are needed. 
Salivary glands are exocrine glands, which expel their secretions into the mouth via excretory ducts. Cannulation of these ducts provides direct access to the glands. Retroductal delivery of a contrast agent to major salivary glands is a routine out-patient procedure for diagnostic imaging. Using a similar procedure, localized treatment of the glands is feasible. However, performing this technique in preclinical studies with small animals poses unique challenges. In this study we describe the technique of retroductal administration in rat submandibular glands, a procedure that was refined in Dr. Bruce Baum's laboratory (NIH)1, and lay out a procedure for local gland irradiation.

Salivary gland hypofunction, a major adverse effect of head and neck radiotherapy diminishes a patient's quality of life. The demonstration of efficacy of new therapies in animal models is a prerequisite before clinical transition. This protocol describes retroductal administration and local irradiation of rat submandibular glands.

Retroductal submandibular בלוטת החדרה ונקודות מופרדות הקרנה במודל עכברים של הרוק hypofunction

Normal tissues that lie within the portals of radiation are inadvertently damaged. Salivary glands are often injured during head and neck radiotherapy. ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced saliva production. Similarly, saliva production is severely compromised in patients receiving radiation treatment for head and neck cancers. Rodent models, developed to mimic these clinical conditions, facilitate an understanding of the disease pathogenesis and allow for the development of new therapeutic strategies. Therefore, the ability to accurately, reproducibly, and repeatedly measure salivary gland function in animal models is critical. Building on procedures previously described in the literature, a method was developed that meets these criteria and was used to evaluate salivary gland function in mice. An additional advantage of this new method is that it is easily mastered, and has little inter-operator variation. Salivary gland function is evaluated as the amount (weight or volume) or rate (mL/min) of saliva produced in response to pilocarpine stimulation. The collected saliva is a good source for the analyses of protein content, immunoglobulin concentrations, and other biomolecules.

Salivary gland hypofunction is a frequent consequence of autoimmune disease and radiation therapy. Reproducible evaluation of salivary gland function in mouse models of these diseases is a technical challenge. Here, a simple method for accurate and reproducible measurement of saliva production in mice is described.

שיטת המדידה של תפקוד בלוטת הרוק בעכברים

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Immunology and Infection

Radiation Treatment of Organotypic Cultures from Submandibular and Parotid Salivary Glands Models Key In Vivo Characteristics

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with radiotherapy. Experimental approaches to understanding mechanisms of salivary gland dysfunction and restoration have focused on in vivo models, which are handicapped by an inability to systematically screen therapeutic candidates and efficiencies in transfection capability to manipulate specific genes. The purpose of this salivary gland organotypic culture protocol is to evaluate maximal time of culture viability and characterize cellular changes following ex vivo radiation treatment. We utilized immunofluorescent staining and confocal microscopy to determine when specific cell populations and markers are present during a 30-day culture period. In addition, cellular markers previously reported in in vivo radiation models are evaluated in cultures that are irradiated ex vivo. Moving forward, this method is an attractive platform for rapid ex vivo assessment of murine and human salivary gland tissue responses to therapeutic agents that improve salivary function.

Using three-dimensional organotypic cultures to visualize morphology and functional markers of salivary glands may provide novel insights into the mechanisms of tissue damage following radiation. Described here is a protocol to section, culture, irradiate, stain, and image 50&#8211;90 &#956;m thick salivary gland sections prior to and following exposure to ionizing radiation.

הטיפול בקרינה של תרבויות אורגנוטימית מתוך הלסת התחתונה ובלוטות הרוק פרודה מודלים מפתח Vivo מאפיינים

Hyposalivation and xerostomia create chronic oral complications that decrease the quality of life in head and neck cancer patients who are treated with ...