המחברים רוצה להודות בנימין J Weigler, D.V.M., Ph.d., מנדוויל וולט, D.V.M. (חיה משאבים & הקמפוס השתתפות וטרינר, אוניברסיטת נבאדה, רינו) עבור שירותיהם בעלי חיים מצוינת בתנאי העכברים, כמו גם לעצתם על ניתוחים.

להלן כללי התנהגות אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ו להשתמש הוועדה (IACUC)-המשאבים בעלי חיים אוניברסיטת נבאדה-רינו (אולטימה), תואם כל המוסדיים הנחיות אתיות לגבי מחקר בבעלי החיים.
1. בעלי חיים.
<ol><li>להשיג עכברים C57BL/6 בוגרת (4-6 שבועות) במשקל בין 20-30 g. House המושבה של עכברי מעבדה במתקן בעלי חיים מרוכזת בשעה אולטימה משאבים בעלי חיים.</li>
</ol>2. ניתוח חסימה חלקית
הערה: הניתוחים מתבצעים בחדר המוקדש ניתוחים. כל מכשירי ניתוח הן בלוק לפני הניתוח. השמלות כירורגי סטרילי וכפפות לענידה על ידי כל אנשי הצוות בחדר ניתוח בכל עת.
<ol><li>הכנה העכבר כירורגי<ol>
<li>בדוק את מערכת משלוח הרדמה כדי להבטיח אספקת החמצן, איזופלוריין היא נאותה בהליך. הפעל את אספקת החמצן. להפעיל את זרימה הגז להתאים אותו ל 500-1000 מ ל לדקה במקום החיה בבית הבליעה אינדוקציה, חותם העליון.</li>
		<li>הפעל את מכשיר אידוי איזופלוריין 5%-ל, ונטר החיה עד שיהפוך שכיבה. לעבור את מערכת משלוח הרדמה קונוס האף.</li>
		<li>ריקון התא אינדוקציה של דלק משקעי עם חמצן, ולאחר מכן לבטל את הקו לשכת הגיוס תוך שמירה על קו חרוט האף פתוח.</li>
		<li>להסיר את החיה מן החדר ומניחים בזהירות משחה אופטלמולוגיות על העיניים של החיה.</li>
		<li>למקם את האף חרוט על משטח חם preheated כאשר הגז ממשיך לזרום.</li>
		<li>לשנות את זרימת חמצן 100-200 מ לדקה, עם 2-3% איזופלוריין. אם בעל החיים מתחיל לזוז, gentlyrestrain החיה עם אצטרובל האף על עד מורדם לחלוטין שוב.</li>
		<li>פקח על הנשימה ועל בתגובה לגירוי במהלך ההליך ולהתאים את אחוז איזופלוריין (2-5%) לפי הצורך. רמת ההרדמה בעלי חיים מנוטרת על ידי חוסר של הבוהן קמצוץ רפלקס לפני הניתוח מתבצע.</li>
		<li>להזריק תרופות הכאב (הבופרנורפין, µg/1g של משקל הגוף) intraperitoneally מן האתר החתך.</li>
		<li>להחיל קרם להסרת שיער על הבטן בעזרת ספוגית כותנה נקי. תן את קרם לשבת למשך 3-5 דקות על העכבר, ואז להסיר את שיער באמצעות מטליות גזה וכותנה. חזור על שלב זה עד כל השיער הוסר מן הבטן של העכבר.</li>
		<li>לנקות את העור עם אתנול 70% באמצעות מטליות גזה וכותנה. החל swabsticks או povidone יוד פתרון כדי לנקות את הבטן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ניתוח חסימה חלקית<ol>
<li>לעטוף באתר כירורגית באמצעות נייר סטרילי 25 x 50 ס מ 2.5 x 2.5 ס"מ פותח באמצע לאזור הניתוח. אבטח את הכיסוי ותאבטחי לבעל-החיים על-ידי הצבת רצועות סטרילי-גבולות פתיחה של העור.</li>
		<li>עושים ~3.0 ס מ בטן חתך longitudinally באמצעות אזמל להב מס 15, המבטיח כי רק את העור הוא חרות והימנעות לחתוך השכבה musculoperitoneal בשלב זה.</li>
		<li>בעזרת מלקחיים ומספריים כירורגי, הפרד בזהירות את העור מהשכבה musculoperitoneal מבלי לגרום כל חתך על שכבת musculoperitoneal. לאחר השכבות הופרדו במידה מספקת (כ 1 ס"מ על 4 ס"מ), לזהות את לינאה אלבה על שכבת musculoperitoneal ו לחתוך ~ 2 ס מ לאורך linea alba לחשוף את חלל בקרום הבטן בעזרת מיקרו-מלקחיים ומספריים.</li>
		<li>בזהירות לאתר ולזהות את המעי האטום. לאט ובעדינות להסיר את המעי האטום חלל בקרום הבטן עם מיקרו-מלקחיים, מביא את המעי הגס הפרוקסימלית ואת מעי עם המעי בחוץ על גבי הכיסוי ותאבטחי סטרילי. מיד להרטיב את רקמת המעי עם גזה ספוגים מלוחים סטרילית 0.9% ולשמור על רקמות חשופות לחלח בכל עת בזמן שהם מחוץ חלל הבטן.</li>
		<li>לאתר ולזהות את מצע המעי בין מעי הגס הפרוקסימלית. לעשות חתך (~ 1 ס מ) מקבילים, מתחת, מעי, מצע המעי ולהימנע חיתוך להערכת כלשהו.</li>
		<li>לקחת טבעת סיליקון בלוק (6 מ מ אורך, קוטר חיצוני 4 מ מ, קוטר פנימי 3.5 מ מ). חותכים longitudinally כדי לפתוח את הצנרת ולפתוח את הטבעת עם מיקרו-מלקחיים.</li>
		<li>הכנס קצה אחד של הטבעת נפתח דרך החתך הרקמה מצע המעי. להחזיר את הטבעת לצורת טבעת הושלמה על ידי הבאת קצה אחד עם השני, עם מעי מוקף את הטבעת.</li>
		<li>להבטיח טבעת סיליקון לחלוטין המקיפה מעי, לסגור את הטבעת בתפר ומניחים בזהירות את המעיים בחזרה בחלל בקרום הבטן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ניתוח סגירת מעגל<ol>
<li>ביצוע פשוט בתפר רצוף על השכבה musculoperitoneal לאורך linea alba לסגור את musculoperitoneal פצע בתפר שנספג. עם השלמת התפר, לנקות את מדממת עם גזה ספוגים מלוחים סטרילית 0.9%.</li>
		<li>לחלוטין לסגור את הפצע, בתפר ניילון נפרדים, לבצע בתפר רצוף פשוטה על העור.</li>
		<li>לאחר שני תפרים הושלמו, לנקות את הפצע עם swabstick החדש או povidone יוד.</li>
		<li>Intraperitoneally מזריקים אנטיביוטיקה (גנטמיצין, μL 150 לכל העכבר מבוסס על 20-30 גרם משקל).</li>
		<li>לאחר השלמת הליך, כבה את מכשיר אידוי איזופלוריין ולאפשר את החיה לנשום רק זורם חמצן עד מתחילים צובר התודעה.</li>
		<li>לאחר החיה ער, למקם את החיה אזור שחזור נפרדת עם תמיכה תרמי עד החלים לחלוטין.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. פעולה-מאוחרת התבוננות.
<ol><li>לאחר סיום הניתוח, להעביר את החיות אינקובטור בחדר התאוששות שבו הטמפרטורה והלחות מוסדר. מעקב החיות במשככי כל 15 דקות עבור השעה הראשונה ואז כל 30 דקות במשך השעה השנייה בזמן בעלי החיים בחממה.</li>
	<li>ברגע התצפית שנקבעו תושלם, להעביר את החיות לכלוב נפרדים משלהם, לפקח עליהם מדי יום סימנים קליניים של כאב18, וכדי להבטיח כי הפצע כירורגי הוא מחלים כראוי ללא כל סימנים של סיבוכים ( התבקעות) הנוכחי.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Millat, B., Guillon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiopathology+and+principles+of+intensive+care+in+intestinal+obstructions.">Physiopathology and principles of intensive care in intestinal obstructions.</a> Rev Prat. 43, 667-672 (1993).</li><li>Tonelli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+developments+in+Crohn's+disease:+solution+of+doctrinal+mysteries+and+reinstatement+as+a+surgically+treatable+disease.+1.+The+process+is+not+a+form+of+enteritis+but+lymphedema+contaminated+by+intestinal+contents.">New developments in Crohn's disease: solution of doctrinal mysteries and reinstatement as a surgically treatable disease. 1. The process is not a form of enteritis but lymphedema contaminated by intestinal contents.</a> Chir Ital. 52, 109-121 (2000).</li><li>Limsrivilai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analytic+Bayesian+model+for+differentiating+intestinal+tuberculosis+from+Crohn's+disease.">Meta-analytic Bayesian model for differentiating intestinal tuberculosis from Crohn's disease.</a> Am J Gastroenterol. 112, 415-427 (2017).</li><li>Dvorak, D., Adamova, Z., Bar, T., Slovacek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internal+hernia+as+a+cause+of+small+bowel+obstruction.">Internal hernia as a cause of small bowel obstruction.</a> Rozhl Chir. 96, 34-36 (2017).</li><li>Massani, M., Capovilla, G., Ruffolo, C., Bassi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+stromal+tumour+(GIST)+presenting+as+a+strangulated+inguinal+hernia+with+small+bowel+obstruction.">Gastrointestinal stromal tumour (GIST) presenting as a strangulated inguinal hernia with small bowel obstruction.</a> BMJ Case Rep. , (2007).</li><li>Chen, J., Chen, H., Sanders, M., Perrino, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+SRF/CArG-dependent+gene+transcription+during+chronic+partial+obstruction+of+murine+small+intestine.">Regulation of SRF/CArG-dependent gene transcription during chronic partial obstruction of murine small intestine.</a> Neurogastroenterol Motil. 20, 829-842 (2008).</li><li>Chang, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+interstitial+cells+of+Cajal+and+development+of+electrical+dysfunction+in+murine+small+bowel+obstruction.">Loss of interstitial cells of Cajal and development of electrical dysfunction in murine small bowel obstruction.</a> J Physiol. 536 (Pt 2), 555-568 (2001).</li><li>Liu, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage+dependent+potassium+channel+remodeling+in+murine+intestinal+smooth+muscle+hypertrophy+induced+by+partial+obstruction.">Voltage dependent potassium channel remodeling in murine intestinal smooth muscle hypertrophy induced by partial obstruction.</a> PLoS One. 9 (2), e86109 (2014).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+hydrogen+sulfide+biosynthesis+accompanies+murine+interstitial+cells+of+Cajal+dysfunction+in+partial+ileal+obstruction.">Down-regulation of hydrogen sulfide biosynthesis accompanies murine interstitial cells of Cajal dysfunction in partial ileal obstruction.</a> PLoS One. 7, e48249 (2012).</li><li>Yang, J., Zhao, J., Chen, P., Nakaguchi, T., Grundy, D., Gregersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interdependency+between+mechanical+parameters+and+afferent+nerve+discharge+in+hypertrophic+intestine+of+rats.">Interdependency between mechanical parameters and afferent nerve discharge in hypertrophic intestine of rats.</a> Am J Physiol-Gastr L. 310, G376-G386 (2016).</li><li>Zhao, J., Liao, D., Yang, J., Gregersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+remodeling+of+obstructed+guinea+pig+jejunum.">Biomechanical remodeling of obstructed guinea pig jejunum.</a> J Biomech. 43, 1322-1329 (2010).</li><li>Bowen, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duodenal+Brunner's+glade+adenoma+causing+chronic+small+intestinal+obstruction+in+a+dog.">Duodenal Brunner's glade adenoma causing chronic small intestinal obstruction in a dog.</a> J Small Anim Pract. 53, 136-139 (2012).</li><li>Bettini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophy+of+intestinal+smooth+muscle+in+cats.">Hypertrophy of intestinal smooth muscle in cats.</a> Res Vet Sci. 75, 43-53 (2003).</li><li>Macdonald, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+phenotypic+plasticity+in+mechanical+obstruction+of+the+small+intestine.">Smooth muscle phenotypic plasticity in mechanical obstruction of the small intestine.</a> J Neurogastroenterol Motil. 20, 737-740 (2008).</li><li>Ha, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+of+PDGFR&#945;++Cells+identifies+T-types+Ca2++channel+CACNA1G+as+a+new+pathological+marker+for+PDGFR&#945;++cell+hyperplasia.">Transcriptome analysis of PDGFR&#945;+ Cells identifies T-types Ca2+ channel CACNA1G as a new pathological marker for PDGFR&#945;+ cell hyperplasia.</a> PLoS One. 12, e0182265 (2017).</li><li>Park, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+response+factor+is+essential+for+prenatal+gastrointestinal+smooth+muscle+development+and+maintenance+of+differentiated+phenotype.">Serum response factor is essential for prenatal gastrointestinal smooth muscle development and maintenance of differentiated phenotype.</a> J Neurogastroenterol Motil. 21, 589-602 (2015).</li><li>Spencer, N. J., Sanders, K. M., Smith, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migrating+motor+complexes+do+not+require+electrical+slow+waves+in+the+mouse+small+intestine.">Migrating motor complexes do not require electrical slow waves in the mouse small intestine.</a> J Physiol. 553, 881-893 (2003).</li><li>Langford, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coding+of+facial+expressions+of+pain+in+the+laboratory+mouse.">Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse.</a> Nat Methods. 7, 447-449 (2010).</li><li>Terez, S. D., Notari, L., Sun, R., Zhao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+smooth+muscle+responses+to+inflammation.">Mechanisms of smooth muscle responses to inflammation.</a> Neurogastroenterol Motil. 24, 802-811 (2012).</li><li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+hyperplasia/hypertrophy+is+the+most+prominent+histological+change+in+Crohn's+fibrostenosing+bowel+strictures:+A+semiquantitative+analysis+by+using+a+novel+histological+grading+scheme.">Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme.</a> J Crohns Colitis. 11, 92-104 (2017).</li><li>Huizinga, J. D., Chen, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interstitial+Cells+of+Cajal:+Update+on+Basic+and+Clinical+Science.">Interstitial Cells of Cajal: Update on Basic and Clinical Science.</a> Curr Gastroenterol Rep. 16, 363 (2014).</li><li>Jirkof, P., Touvieille, A., Cinelli, P., Arras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Buprenorphine+for+pain+relief+in+mice:+repeated+injections+vs+sustained-release+depot+formulation.">Buprenorphine for pain relief in mice: repeated injections vs sustained-release depot formulation.</a> Lab Animal. 49, 177-187 (2015).</li><li>Spencer, N. J., Dinning, P. J., Brookes, S. J., Costa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+mechanisms+underlying+colonic+motor+patterns.">Insights into the mechanisms underlying colonic motor patterns.</a> J Physiol. 594, 4099-4116 (2016).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

להדגים כי עכברים שקיבלו את הניתוח פו מעיים בעקביות ובאופן reproducibly לפתח שריר חלק המעי יתר, אשר מחקה חסימת מעיים אנושיים. חסימת מעיים ניתוחים פותחו עבור בעלי חיים שונים, כולל עכברים7, חולדות10, שרקנים11,12 ו חתולים כלבים13. הדגם העכ?...

חסימות מעיים הם סתימה חלקית או מלאה במעי קטן או גדול אשר מונע מזון מעוכל, נוזלים וגז עוברים דרך המעיים של1. בשל החסימה, החסימה גורם לדפנות כדי להפוך לעבות, שצמצם את לומן2. חסימת מעיים יכולה להתרחש כתוצאה ניתוחי בטן או אגן לגרום היווצרות רקמת אדהזיה בטן או מהפרעות במערכת העיכול כגון מחלות מעי דלקתיות (מחלת קרוהן), דיברטיקוליטיס, בקע, התפתלות המעים, stricture, התפשלות מעיים, עצירות, פקק צואה, חסם מעיים מדומה, סרטן וגידולים3,4,5. חסימות מעיים במקרים אלה לעיתים קרובות להוביל היפרטרופיה של tunica muscularis של המעי6.
פו של לומן המניע distention מעיים, ומגביר את עובי שכבת השריר החלק סביב החסם בתגובה צורך להמשיך הפריסטלטיקה פונקציונלי7,8,9,10, 11,12,13. מודלים חייתיים של פו מעיים פותחו כדי ללמוד היפרטרופיה של השריר החלק עכברים7, חולדות10, שרקנים11, כלבים12ו חתולים13 המתפתחים באופן עקבי היפרטרופיה דומה בתוך שכבות שריר המעי.
דגם העכבר של פו מעיים היא הדרך הכי חסכוניות כדי ליצור וללמוד חסימות מעיים ויוו. חסימות מעי דק מתבצעות בעכברים באמצעות טבעת סיליקון בניתוח ממוקמים סביב מעי. העכברים פו הראו עלייה מוקדם מספר התאים (היפרפלזיה), וכן הגדלה עובי שכבת השריר (היפרטרופיה) אחרי פו ניתוח8,15. SMC הם תאים פלסטיק ראשי צומחים בתוך שכבות שריר חלק כתגובה היפרטרופית התנאים14, אך תאים אחרים כגון ICC תאים PDGFRα+ קשורים קשר הדוק עם SMC, גם אוכלס. בעבר דיווחנו כי העכברים פו לפתח היפרטרופיה במעי הדק, ב- SMC אילו הם dedifferentiated לתוך תאים PDGFRα+ , כי הם מאוד proliferative7,15,16. לעומת זאת, ICC מנוון, איבד בתוך הרבדים מתעצם שריר חלק במהלך הפיתוח של המעי obsruction7. יתרון מרכזי נוסף של דגם פו הוא את יכולתו לגרום שינויים במערכת העצבים המעית הפצת neurogenic תבניות מוטוריות. מרכזי הפצת neurogenic דפוס מנוע במעי הדק העכבר הוא העברת המנוע מורכב (MMC), אשר neurogenic אינה דורשת ICC או חשמל גלים איטיים17. דגם פו יכולה לספק תובנות ברורות איך MMCs ואת העצבים המעית הם שופצה על ידי חסימה חלקית.
כאן, אנו מציעים פרוטוקול מאתר לניתוח פו מעיים באמצעות טבעת סיליקון. עכברים קבלת ניתוח פו בצורה אמינה לייצר היפרטרופיה ב muscularis tunica של המעי הדק. בתוך היפרטרופית שריר, SMC, ICC, PDGFRα+, תאים עצביים הם באופן דרמטי ועיצבנו מחדש.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>Medical and veterinary supplies</td>
			<td>SMS40</td>
			<td>40&#8221;X100 yards</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Underpad, econ, pro plus</td>
			<td>Medical and veterinary supplies</td>
			<td>MSC281224</td>
			<td>17x24&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors</td>
			<td>Braintree scientific, Inc</td>
			<td>SC-i-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris scissors</td>
			<td>Vantage</td>
			<td>V95-304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont electronic &#38; jeweler tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>98-180-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided absorbable suture</td>
			<td>Covidien polysorb</td>
			<td>SL-5687G</td>
			<td>5-0, polyglactin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon non-absorbable mono filament</td>
			<td>AD surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td>6-0, nylon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical blade</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>No.15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Jacobson microvascular</td>
			<td>36-1342TC</td>
			<td>8.5 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Flinn scientific</td>
			<td>AB1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissor</td>
			<td>WPI</td>
			<td>503305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petrolatum ophthalmic ointment</td>
			<td>Puralube VET</td>
			<td></td>
			<td>3.5 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluriso (isoflurane)</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>V1 502017</td>
			<td>250 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steri-strip reinforced skin closure</td>
			<td>3M</td>
			<td>R1547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gloves</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MSG2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ear loop face mask</td>
			<td>The safety zone</td>
			<td>RS700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avant gauze non-woven sponges</td>
			<td>Caring</td>
			<td>PRM25444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical cup</td>
			<td>Admiral&#160; craft OYC-2</td>
			<td>725-A42</td>
			<td>2.5 oz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swabstick</td>
			<td>ChloraPrep</td>
			<td>260103</td>
			<td>2% w/v Chlorhexidine&#160; Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tipped applicator</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>Zoo pharm</td>
			<td>BZ8069317</td>
			<td>1 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin sulfate</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>G-6336-04</td>
			<td>100 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting gel cream remover</td>
			<td>Veet</td>
			<td>8111002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>AHS</td>
			<td>AH01T2516</td>
			<td>1 ml with needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon ring</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60985-720</td>
			<td>6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td></td>
			<td>4-6 weeks old</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of intestinal partial obstruction

חסימות מעיים, לעכב או לחסום תנועה ממברנות, יכולה להיגרם על ידי הדבקויות בבטן ומחלות ביותר במערכת העיכול (GI) כולל גידולים tumorous. עם זאת, הטלפון הסלולרי שיפוץ מנגנונים מעורבים, נגרמת על ידי, חסימות מעיים הם הבינו. פותחו מספר מודלים חייתיים של חסימות מעיים, אך המודל העכבר ביותר העלות/זמן יעיל. המודל העכבר משתמש השתלה כירורגית של חסימת חלקי מעיים (PO) כי יש תמותה גבוה אם זה לא מבוצע כהלכה. בנוסף, עכברים שקיבלו פו ניתוח לא מצליחים לפתח היפרטרופיה אם המצור המתאים לא רגיל או להציב כראוי. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מפורט לניתוח פו המייצרת חסימות מעיים לשחזור ואמין עם שיעור תמותה נמוך מאוד. פרוטוקול זה מנצל טבעת סיליקון בניתוח שמוקם שמקיפה מעי אשר יחסום חלקית תנועה העיכול במעי הדק. חסימה חלקית הופך את המעי להיות מורחבים עקב הפסקת תנועת עיכול. התרחבות של המעי גורם היפרטרופיה של השריר החלק בצד הפה של הטבעת שמתפתח בהדרגתיות מעל שבועיים עד שהיא גורמת למוות. המודל העכבר פו כירורגית מציע מודל ויוו רקמת המעי היפרטרופית שימושי עבור הלומדים שינויים פתולוגיים של תאים במעי כולל תאי שריר חלק (SMC), תאים ביניים של קחאל (ICC), PDGFRα+, ו עצביים תאים במהלך הפיתוח של חסימת מעיים.

חסימה חלקית (PO) היה בניתוח המושרה בעכברים בת חודש על ידי הנחת טבעת סיליקון מסביב מעי קרוב הטבעת ileocecal. טבעת זו יצרה חסימה חלקית מעי. מבצעי בשאם (אז) בוצעו גם בלי טבעת על גיל/מין מתאימים עכברים, עכברים אלה לא הראה תסמינים דומים לאלה שנמצאו בעכברים פו. עכברים התאושש במהירות מהנ...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction at JoVE.com

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

חסימות מעיים הם סתימה חלקית או מלאה של המעי העלולה לגרום כאבי בטן, בחילות, הקאות, מניעת המעבר של צואה. ההליך ליצירת obsructions חלקי המעי בעכברים זה אמין בלימוד המנגנונים צמיחת תאים פתולוגיים ומוות במעי.

דגם העכבר של חסימת מעיים חלקית

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

a-mouse-model-of-intestinal-partial-obstruction

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

20.9K Views.  University of Nevada, Reno School of Medicine. חסימות מעיים הם סתימה חלקית או מלאה של המעי העלולה לגרום כאבי בטן, בחילות, הקאות, מניעת המעבר של צואה. ההליך ליצירת obsructions חלקי המעי בעכברים זה אמין בלימוד המנגנונים צמיחת תאים פתולוגיים ומוות במעי.

Video: A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease (CD). Both UC and CD, when present in the colon, generate a similar symptom profile which can include diarrhea, rectal bleeding, abdominal pain, and weight loss.1 Although the pathogenesis of IBD remains unknown, it is described as a multifactorial disease that involves both genetic and environmental components.2
There are numerous and variable animal models of colonic inflammation that resemble several features of IBD. Animal models of colitis range from those arising spontaneously in susceptible strains of certain species to those requiring administration of specific concentrations of colitis-inducing chemicals, such as dextran sulphate sodium (DSS). Chemical-induced models of gut inflammation are the most commonly used and best described models of IBD. Administration of DSS in drinking water produces acute or chronic colitis depending on the administration protocol.3 Animals given DSS exhibit weight loss and signs of loose stool or diarrhea, sometimes with evidence of rectal bleeding.4,5 Here, we describe the methods by which colitis development and the resulting inflammatory response can be characterized following administration of DSS. These methods include histological analysis of hematoxylin/eosin stained colon sections, measurement of pro-inflammatory cytokines, and determination of myeloperoxidase (MPO) activity, which can be used as a surrogate marker of inflammation.6
The extent of the inflammatory response in disease state can be assessed by the presence of clinical symptoms or by alteration in histology in mucosal tissue. Colonic histological damage is assessed by using a scoring system that considers loss of crypt architecture, inflammatory cell infiltration, muscle thickening, goblet cell depletion, and crypt abscess.7 Quantitatively, levels of pro-inflammatory cytokines with acute inflammatory properties, such as interleukin (IL)-1&beta;, IL-6 and tumour necrosis factor (TNF)-&alpha;,can be determined using conventional ELISA methods. In addition, MPO activity can be measured using a colorimetric assay and used as an index of inflammation.8
In experimental colitis, disease severity is often correlated with an increase in MPO activity and higher levels of pro-inflammatory cytokines. Colitis severity and inflammation-associated damage can be assessed by examining stool consistency and bleeding, in addition to assessing the histopathological state of the intestine using hematoxylin/eosin stained colonic tissue sections. Colonic tissue fragments can be used to determine MPO activity and cytokine production. Taken together, these measures can be used to evaluate the intestinal inflammatory response in animal models of experimental colitis.

Experimental models of inflammatory bowel disease have allowed us to examine the complex innate and adaptive immune responses associated with pathogenesis. Using histological scoring, quantification of pro-inflammatory cytokines and myeloperoxidase activity, one can begin to assess these responses seen in inflammatory bowel disease.

חקירת דלקת מעיים במודל DSS-Induced של IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and composed of mature enterocytes, goblet cells and enteroendocrine cells; and crypts, residing proximal to the submucosa and the muscularis, harboring adult stem and progenitor cells and mature Paneth cells, as well as stromal and immune cells of the crypt microenvironment. Until the last few years, in vitro studies of small intestine was limited to cell lines derived from either benign or malignant tumors, and did not represent the physiology of normal intestinal epithelia and the influence of the microenvironment in which they reside. Here, we demonstrate a method adapted from Sato et al. (2009) for culturing primary mouse intestinal crypt organoids derived from C57BL/6 mice. In addition, we present the use of crypt organoid cultures to assay the crypt metabolic profile in real time by measurement of basal oxygen consumption, glycolytic rate, ATP production and respiratory capacity. Organoids maintain properties defined by their source and retain aspects of their metabolic adaptation reflected by oxygen consumption and extracellular acidification rates. Real time metabolic studies in this crypt organoid culture system are a powerful tool to study crypt organoid energy metabolism, and how it can be modulated by nutritional and pharmacological factors.

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Small intestinal crypt organoids cultured ex vivo provide a tissue culture system that recapitulates growth of crypts dependent on stem cells and their niche. We established a method to assay the metabolic profile in real time in primary mouse crypt organoids. We found organoids maintain physiological properties defined by their source.

אמיתי ניתוח זמן של פרופיל המטבולי ב<em&gt; Ex Vivo</em&gt; תרבויות עכבר המעיים קריפטה Organoid

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth factors. Since organoids are highly similar to the original tissue in terms of homeostatic stem cell differentiation, cell polarity and presence of all terminally differentiated cell types known to the adult intestinal epithelium, they serve as an essential resource in experimental research on the epithelium. The possibility to express transgenes or interfering RNA using lentiviral or retroviral vectors in organoids has increased opportunities for functional analysis of the intestinal epithelium and intestinal stem cells, surpassing traditional mouse transgenics in speed and cost. In the current video protocol we show how to utilize transduction of small intestinal organoids with lentiviral vectors illustrated by use of doxycylin inducible transgenes, or IPTG inducible short hairpin RNA for overexpression or gene knockdown. Furthermore, considering organoid culture yields minute cell counts that may even be reduced by experimental treatment, we explain how to process organoids for downstream analysis aimed at quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry. Techniques that enable transgene expression and gene knock down in intestinal organoids contribute to the research potential that these intestinal epithelial structures hold, establishing organoid culture as a new standard in cell culture.

In this video protocol we give a step by step explanation of lentiviral transduction in organoids of primary intestinal epithelium and of processing and downstream analysis of these cultures by quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry.

פרוטוקול לlentiviral התמרה וניתוח במורד הזרם של המעיים Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile duct proliferation. However, long-term experiments can lead to increased morbidity and mortality. In select mouse strains with underlying liver disease, meaningful comparisons can be made even with ligation of a single lobe of the liver, which can reduce animal losses and expenses. Here, we describe partial bile duct ligation (pBDL) in the mouse, in which only the left hepatic bile duct is ligated, causing biliary obstruction in the left lobe but not the remaining lobes. With careful microsurgical technique, pBDL experiments can be cost-effective, since the unligated lobe serves as an internal control to the ligated lobes, when subjected to the same conditions in the same animal. Unlike cBDL, a separate sham-operated control group is not necessary. pBDL is highly useful to directly compare localized versus systemic effects of cholestasis and other retained bile components. pBDL can also be repurposed as a novel method to investigate mechanisms related to medications and cell migration.

Here, we present partial bile duct ligation as a surgical model of liver injury and regeneration in rodents.

צינור המרה חלקית מצדו העכבר: מודל מבוקרת של מקומי חסימתית לחסימת מרה תוך כבדית

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

תא הטרנס-הפנימית המוני הזרקה של תאי גזע עובריים מוביל שיעור גבוה יותר של Chimerism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

ניתוח ספקטרומטר המסה כדי לזהות את אוביקווילציה של EYFP-מתויג CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding the pathological processes and evaluating new drugs. Here, we introduced a surgically induced lumbar spine instability (LSI) mouse model that develops IDD starting from 1 week post operation. In detail, the mouse under anesthesia was operated by low back skin incision, L3&#8211;L5 spinous processes exposure, detachment of paraspinous muscles, resection of processes and ligaments, and skin closure. L4&#8211;L5 IVDs were chosen for the observation. The LSI model develops lumbar IDD by porosity and hypertrophy in endplates at an early stage, decrease in intervertebral disc volume, shrinkage in nucleus pulposus at an intermediate stage, and bone loss in lumbar vertebrae (L5) at a later stage. The LSI mouse model has the advantages of strong operability, no requirement of special equipment, reproducibility, inexpensive, and relatively short period of IDD development. However, LSI operation is still a trauma that causes inflammation within the first week post operation. Thus, this animal model is suitable for study of lumbar IDD.

We developed a lumbar intervertebral disc degeneration mouse model by resection of L3&#8211;L5 spinous processes along with supra- and inter-spinous ligaments and detachment of paraspinous muscles.

דגם עכבר של חוסר יציבות בעמוד השדרה המותני

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...

Organoid-Derived Epithelial Monolayer: A Clinically Relevant In Vitro Model for Intestinal Barrier Function

In the past, intestinal epithelial model systems were limited to transformed cell lines and primary tissue. These model systems have inherent limitations as the former do not faithfully represent original tissue physiology, and the availability of the latter is limited. Hence, their application hampers fundamental and drug development research. Adult stem-cell-based organoids (henceforth referred to as organoids) are miniatures of normal or diseased epithelial tissue from which they are derived. They can be established very efficiently from different gastrointestinal (GI) tract regions, have long-term expandability, and simulate tissue- and patient-specific responses to treatments in vitro. Here, the establishment of intestinal organoid-derived epithelial monolayers has been demonstrated along with methods to measure epithelial barrier integrity, permeability and transport,&#160;antimicrobial protein secretion, as well as histology. Moreover, intestinal organoid-derived monolayers can be enriched with proliferating stem and transit-amplifying cells as well as with key differentiated epithelial cells. Therefore, they represent a model system that can be tailored to study the effects of compounds on target cells and their mode of action. Although organoid cultures are technically more demanding than cell lines, once established, they can reduce failures in the later stages of drug development as they truly represent in vivo epithelium complexity and interpatient heterogeneity.

Here, we describe the preparation of human organoid-derived intestinal epithelial monolayers for studying intestinal barrier function, permeability, and transport. As organoids represent original epithelial tissue response to external stimuli, these models combine the advantages of expandability of cell lines and the relevance and complexity of primary tissue.

מונו-שכבת אפיתל שמקורה באורגנואידים: מודל במבחנה רלוונטי מבחינה קלינית לתפקוד מחסום המעי

In the past, intestinal epithelial model systems were limited to transformed cell lines and primary tissue. These model systems have inherent limitations ...

Partial Hepatectomy in Adult Zebrafish

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy livers are capable of regenerating from toxic damage, but in advanced liver disease, the natural ability of the liver to regenerate is impaired. Zebrafish have emerged as a powerful experimental system for studying regeneration. They are an ideal model for studying liver regeneration from partial hepatectomy, a procedure with direct clinical relevance in which part of the liver is surgically removed, leaving the rest intact. There is no standard protocol for partial hepatectomy; previous studies using this model have used slightly different protocols and reported disparate results. Described here is an efficient, reproducible protocol for performing a partial hepatectomy in adult zebrafish. We use this technique to demonstrate that zebrafish are capable of epimorphic regeneration of the resected lobe. This protocol can be used to further interrogate the mechanisms required for liver regeneration in zebrafish.

This protocol describes the procedure for removing the ventral lobe of the liver in adult zebrafish to enable the study of liver regeneration.

כריתת הפטקטומיה חלקית בדגי זברה למבוגרים

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy ...