עבודה זו נתמכה על ידי המענק הליבה קיבל את המחלקה לביוטכנולוגיה, ממשלת הודו על המכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי. הכתובת הנוכחית של ד ר Bhattacharjee הוא חטיבת לגסטרואנטרולוגיה, Hepatology, תזונה, החולים בלוס אנג'לס לילדים.

נהלים הוצג פרוטוקול זה אושרו על ידי ועדת אתיקה מוסדית חיה של המכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי. מספר האישור הפניה טורי הוא IAEC #319/13.
הערה: ישנם משאבים מעולה על נהלים כירורגיה כללית20 ופרוטוקולים ספציפיים עבור ניתוח מכרסמים21. אלה עושים את הניתוח בעלי חיים בפעם הראשונה, מומלץ לתרגל בהרחבה ניתוחים על בובות ההפעלה על בעלי חיים.
1. הכנה
<ol><li>לפני הניסוי, שמור תמיסת מלח סטרילית פוספט buffered (PBS) או מוכן מלוחים.</li>
	<li>להרכיב ערכה ניתוח המכיל מספריים מלקחיים משוננות, רקמות מלקחיים, כותנה, צמר גפן, חוטי ניילון, מחט מיקרו שונים. אוטוקלב ערכת ניתוח. טיפול מיוחד יש לנקוט אם הנהון החיסון-לסיכון. SCID העכבר נכלל בפרוטוקול.</li>
	<li>בצע את ההליך ניסיוני מלאה, משלב הכנת בסוף הניתוח, הביו-הבטיחות מחלקה אני ארון.</li>
	<li>שוקלים הנהון. SCID בעכבר של 6-8 שבועות לפני הניתוח. עכברים במשקל בין 14-18 גרם משמשים במחקר זה.</li>
	<li>לגלח העליון המרכזי, היפוכונדרית אזור הבטן של העכבר הקוצץ שיער. להחיל שיער הסרת קרם אחיד בכל רחבי האזור עם מרית כדי להסיר לחלוטין את השערות החתוך. להסיר את השיער בעדינות בעזרת פיסת צמר גפן סטרילי רטוב אחרי 2-5 דקות.</li>
	<li>הנח את העכבר בתא איזופלוריין ולפתוח את הברז של הגליל חמצן. לשמור על זרימת חמצן בשיעור של 4 L/דקה את אידוי איזופלוריין ב 4% כדי לגרום הרדמה.<ol>
<li>ודא כי העכבר יש כבר מורדם כראוי על ידי הבוהן עדין לצבוט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להציב לוח ניתוח בפנים אבטחה בארון. במקום החיה על ניתוח הלוח, כך פונה מעלה, בחלק הבטני של העכבר ואת החלק הקדמי של העכבר ממוקם בתוך אצטרובל האף מחובר את איזופלוריין ואת אספקת החמצן.</li>
	<li>להפחית את אידוי איזופלוריין ל- 2%, לשמור עליו לאורך כל הליך כירורגי.</li>
	<li>לחטא את העור של העכבר ולחטא אותו על ידי מנגב עם ספוג אתנול 70% כותנה סטרילי.</li>
</ol>2. ניתוח
<ol><li>
Hepatectomy חלקית
	<ol>
<li>לבצע חתך רוחבי של 1 ס מ של העור מתחת החזה, בניצב תהליך מצאתי ואת במקביל בית החזה, בעזרת מספריים הפעלה ישר.</li>
		<li>נפרדים בעדינות את העור המצורפת עם השכבה שריר הבטן בקרבת האזור חרות עם מלקחיים או ניתוח סטרילי כותנה בטעימת טיפים כדי להבחין בין העור לבין שכבת שריר הבטן. משרים את האזור intradermal עם PBS באמצעות צמר גפן סטרילי טיפים כדי להתחמק לייבוש.</li>
		<li>לחשוף את האזור של האונה השמאלית בצורה חלקה על ידי ביצוע חתך רוחבי דרך השכבה הצפק מתחת מצאתי. השתמש בעצות כותנה בטעימת שני לחשוף ולהרים האונה השמאלית של הכבד.</li>
		<li>מקום אחד הטיפים כותנה בצד הבטן של החתך, ולמקם עוד טיפ כותנה בצד הסרעפת. בעדינות את הטיפ להציב כלפי הסרעפת ואת לתת דחיפה הזזה. על ידי אחרים כדי להרים את האונה השמאלית של הכבד.</li>
		<li>להחליק חוט ניילון עם לולאה דרך האונה השמאלית המורמת והחלק הלולאה לעבר הבסיס של האונה השמאלית קרוב hilum בעזרת העצות מיקרו-מלקחיים או כותנה. לדחוף בעדינות את הלולאה בחוט ניילון בבסיס האונה השמאלית.</li>
		<li>לקשור שני קצוות של חוט ניילון מעל החלק העליון של האונה השמאלית באמצעות בעל מחט למיקרו המלקחיים מיקרו. לעשות שני קשרים נוספים בצד השני.</li>
		<li>שווייץ האונה קשור בעזרת מספריים. אל תנסו לחתוך מאוד קרוב החוט. למקרה ההליך נמשך יותר מ- 5 דקות, לשמור את חלל הצפק איברים לח עם PBS סטרילי כדי להימנע לייבוש בשל אובדן נוזלים.</li>
		<li>לתפור את הצפק באמצעות רציף הפתולוגיים בתפר לאללה 4-0. לאחר מכן, לסגור את העור על-ידי תפירת מקוטע מהר ככל האפשר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
השתלת תא הערה: hepatocytes מבטאים ה-GFP הם בודדו אותנו מהמתרחש העכברים הטרנסגניים GFP (6/C57BL-Tg (UBC-GFP) 30 Scha/J), על-פי ההליך המתואר על ידי Lee ואח. 22 , שן ואח. 23 תאים, כמו hepatocyte (NeoHep) ממוצא האנושי תריז ומונוציטים24 שימשו גם השתלת. עם זאת, תאים שמקורם מקורות אחרים עשוי לשמש גם בפרוטוקול.<ol>
<li>להשעות את התאים קיימא 0.2 מיליון ב בסביבות 50 µL של המדיום של Iscove שונה Dulbecco (IMDM), תשאף את זה בתוך מזרק אינסולין 1 מ"ל כתרים עם המחט 30 גרם. לשמור את המזרק קר על ידי הצבתו על קרח.</li>
		<li>הצב את העכבר בדרך בחלק הלטראלי השמאלי כלפי מעלה לכיוון האדם שמבצע ניתוח. לזהות את אזור הטחול ומנתחים באופן רוחבי על העור ליד האזור היפוכונדרית, ואחריו חתך קצר דרך השכבה הצפק רק כדי לחשוף את הטחול.</li>
		<li>בעדינות להרים את הטחול והחזק שאותו החוצה חלל הבטן בעזרת שני PBS לחלח טיפים כותנה.</li>
		<li>החזיקו הטחול בזהירות עם שתי עצות כותנה ביד אחת, ולמקם את המחט של המזרק בדיוק אנכית כדי הטחול. פירס הטחול ולדחוף את המחט בעדינות באיטיות פנימה; המחט לא צריך לקבל עמוקות יותר מ- 2 מ מ.</li>
		<li>לוחץ את הבוכנה של המזרק לאט כדי להזריק את התאים לתוך הטחול. לאחר ההשתלה, להשאיר את המחט של המזרק יציב ומסירים אותו לאט לאט הטחול כדי למנוע דימום או אובדן של תאים.</li>
		<li>לאחר הצבת הטחול בחזרה לתוך חלל הצפק עם העצות כותנה, לסגור את השכבה הצפק על ידי תפירת רציף 4-0 בתפר לאללה. לתפור את העור באורח מקוטע עם התפר אותו. הימנע משימוש הפצע קליפים לסגירת העור; במקום זאת, לסגור את זה על ידי בתפר 4-0. הקליפים הפצע להגביל את התנועה הטבעית של העכבר, לעיתים קרובות קליפים להיות משוחרר. וצא החוצה במהירות.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>לאחר סגירת העור, נגב את הסביבה של שני האתרים תפר עם יודיפלור תמיסה (betadine) באמצעות טיפ כותנה סטרילי.</li>
	<li>תזריק מנה של אנטיביוטיקה cefotaxime כמו 600 מ"ג/ק"ג משקל (בדרך כלל 12 מ"ג cefotaxime ב µL 100 של תמיסת מלח/עכבר) גוף intraperitoneally באמצעות מזרק 1 מ"ל.</li>
	<li>לתת במינון יומי של Meloxicam כאבים בתור 1 מ"ג/ק"ג משקל גוף (בדרך כלל 12 µg Meloxicam ב µL 100 של תמיסת מלח/עכבר) לחיה intraperitoneally, במשך שלושה ימים אחרי הניתוח.</li>
	<li>לאחר סיום הניתוח, מפסיקים את זרימת הגז איזופלוריין ומניחים את העכבר חזרה לכלוב מאוורר בנפרד.</li>
</ol>4. euthanization, אפיוני
<ol><li>לאחר ניסיוני והגישור (יום 1 ו- 10 ימים לאחר הניתוח), המתת חסד העכברים על פי הנחיות מוסדיים אתיקה בעלי חיים.</li>
	<li>לאסוף דם על ידי סופני דימום החיות, ניקב את מקלעת מסוף עינית.</li>
	<li>לבודד נסיוב מהדם.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Nussler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Present+status+and+perspectives+of+cell-based+therapies+for+liver+diseases.">Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases.</a> J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).</li><li>Ponder, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+hepatocytes+migrate+to+liver+parenchyma+and+function+indefinitely+after+intrasplenic+transplantation.">Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and function indefinitely after intrasplenic transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (4), 1217-1221 (1991).</li><li>Kokudo, N., Horimoto, H., Ishida, K., Takahashi, S., Nozawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allogeneic+hepatocyte+and+fetal+liver+transplantation+and+xenogeneic+hepatocyte+transplantation+for+Nagase's+analbuminemic+rats.">Allogeneic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats.</a> Cell Transplant. 5 (5 Suppl 1), S21-S22 (1996).</li><li>Christ, B., Bruckner, S., Stock, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rodent+animal+models.">Hepatic transplantation of mesenchymal stem cells in rodent animal models.</a> Methods Mol. Biol. 698, 315-330 (2011).</li><li>Fox, I. J., Roy-Chowdhury, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+transplantation.">Hepatocyte transplantation.</a> J. Hepatol. 40 (6), 878-886 (2004).</li><li>Glanemann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+monocyte-derived+hepatocyte-like+cells+(NeoHeps)+improves+survival+in+a+model+of+acute+liver+failure.">Transplantation of monocyte-derived hepatocyte-like cells (NeoHeps) improves survival in a model of acute liver failure.</a> Ann. Surg. 249 (1), 149-154 (2009).</li><li>Rahman, T. M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+acute+hepatic+failure.">Animal models of acute hepatic failure.</a> Int. J. Exp. Pathol. 81 (2), 145-157 (2000).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulocyte+colony-stimulating+factor+treatment+ameliorates+liver+injury+and+improves+survival+in+rats+with+D-galactosamine-induced+acute+liver+failure.">Granulocyte colony-stimulating factor treatment ameliorates liver injury and improves survival in rats with D-galactosamine-induced acute liver failure.</a> Toxicol. Lett. 204 (1), 92-99 (2011).</li><li>Gardner, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+nitric+oxide+in+acetaminophen-induced+hepatotoxicity+in+the+rat.">Role of nitric oxide in acetaminophen-induced hepatotoxicity in the rat.</a> Hepatology. 27 (3), 748-754 (1998).</li><li>Nardo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+treatment+of+CCL4-induced+acute+liver+failure+with+portal+vein+arterialization+in+the+rat.">Successful treatment of CCL4-induced acute liver failure with portal vein arterialization in the rat.</a> Transplant Proc. 38 (4), 1187-1189 (2006).</li><li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fulminant+hepatic+failure+in+rats+induces+oxidative+stress+differentially+in+cerebral+cortex,+cerebellum+and+pons+medulla.">Fulminant hepatic failure in rats induces oxidative stress differentially in cerebral cortex, cerebellum and pons medulla.</a> Neurochem. Res. 32 (3), 517-524 (2007).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laennec+protects+murine+from+concanavalin+A-induced+liver+injury+through+inhibition+of+inflammatory+reactions+and+hepatocyte+apoptosis.">Laennec protects murine from concanavalin A-induced liver injury through inhibition of inflammatory reactions and hepatocyte apoptosis.</a> Biol. Pharm. Bull. 31 (11), 2040-2044 (2008).</li><li>Kaur, G., Tirkey, N., Chopra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effect+of+hesperidin+on+lipopolysaccharide-induced+hepatotoxicity.">Beneficial effect of hesperidin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity.</a> Toxicology. 226 (2-3), 152-160 (2006).</li><li>Rupertus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+but+not+minor+hepatectomy+accelerates+engraftment+of+extrahepatic+tumor+cells.">Major but not minor hepatectomy accelerates engraftment of extrahepatic tumor cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 24 (1), 39-48 (2007).</li><li>Selden, C., Casbard, A., Themis, M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+long-term+survival+of+syngeneic+hepatocytes+in+rat+peritoneum.">Characterization of long-term survival of syngeneic hepatocytes in rat peritoneum.</a> Cell Transplant. 12 (6), 569-578 (2003).</li><li>Tang, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+donor+hepatocytes+and/or+splenocytes+pre-injection+in+reducing+islet+xenotransplantation+rejection.">The role of donor hepatocytes and/or splenocytes pre-injection in reducing islet xenotransplantation rejection.</a> Hepatobiliary. Pancreat. Dis. Int. 2 (3), 344-350 (2003).</li><li>Goto, Y., Ohashi, K., Utoh, R., Yamamoto, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+transplantation+through+the+hepatic+vein:+a+new+route+of+cell+transplantation+to+the+liver.">Hepatocyte transplantation through the hepatic vein: a new route of cell transplantation to the liver.</a> Cell Transplant. 20 (8), 1259-1270 (2011).</li><li>Gabelein, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasplenic+or+subperitoneal+hepatocyte+transplantation+to+increase+survival+after+surgically+induced+hepatic+failure?.">Intrasplenic or subperitoneal hepatocyte transplantation to increase survival after surgically induced hepatic failure?.</a> Eur. Surg. Res. 41 (3), 253-259 (2008).</li><li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+NeoHep+Derived+From+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients'+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+cMET+Signaling.">Autologous NeoHep Derived From Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of cMET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. , (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic surgical skills. Emergency and Essential Surgical Care (EESC) programme. , (2017).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon.">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li><li>Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+hepatocytes+by+a+two-step+collagenase+perfusion+procedure.">Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure.</a> J. Vis. Exp. (79), (2013).</li><li>Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+primary+culture+of+rat+hepatic+cells.">Isolation and primary culture of rat hepatic cells.</a> J. Vis. Exp. (64), (2012).</li><li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+NeoHep+Derived+from+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients'+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+c-MET+Signaling.">Autologous NeoHep Derived from Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of c-MET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. 6 (1), 174-186 (2017).</li><li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+sure+methodology+for+massive+hepatectomy+in+the+mouse.">Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse.</a> Ann. Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).</li><li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+reproducible+hepatectomy+in+the+mouse+using+the+clip+technique.">Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique.</a> World J. Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).</li><li>Vidal, I., Richert, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nude+mouse+as+model+for+liver+deficiency+study+and+treatment+xenotransplantation.">The nude mouse as model for liver deficiency study and treatment xenotransplantation.</a> Int. J. Hepatol. , 1400147 (2012).</li><li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2/3+partial+hepatectomy+in+mice.">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat. Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).</li><li>Ahmed, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+subcutaneous+and+intrahepatic+human+hepatocellular+carcinoma+xenografts+in+immunodeficient+mice.">Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice.</a> J. Vis. Exp. (79), e50544 (2013).</li><li>Krikri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+vs.+open+abdominal+surgery+in+male+pigs:+marked+differences+in+cortisol+and+catecholamine+response+depending+on+the+size+of+surgical+incision.">Laparoscopic vs. open abdominal surgery in male pigs: marked differences in cortisol and catecholamine response depending on the size of surgical incision.</a> Hormones (Athens). 12 (2), 283-291 (2013).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

Hepatectomy חלקית היא טכניקה הוקמה עבור החקירה התחדשות הכבד, hepatectomy מוגזמת הוא דיווח כדי לחקות את מודל AHF. בין מודלים חייתיים של AHF, מכרסמים, עכברים במיוחד, הם המודל הכי חקר. כדי להשיג פגיעה בכבד מודל בעכברים, עד hepatectomy 70% דווח עם הישרדות טוב שיעור25,26. עם זאת בעירום, עכ...

כיום, השתלת hepatocyte מוצע כחלופה השתלת איברים כל בטיפול בחולים לאחר הפרעות כבד קשות. הוא האמין כי זה יכול לגשר בין חולים השתלת איברים כל1. בנוסף allogenic hepatocytes2, xenogenic hepatocytes3 ו hepatocytes שמקורם בתאי גזע4 גם נחקר במודלים של בעלי חיים. בהקשר זה, יונת, engraftment הפוטנציאל של התאים המושתלים של הנמען הוא קריטריון חשוב עבור טיפול בתאי מבוסס על כשל של הכבד חריפה (AHF).
עבור חוקרים את השתלת hepatocytes או תאים דמויי hepatocyte5, AHF נוצרת במודל חיה כירורגי6 או תרופתי7 נהלים, ואחריו משתילים תאים. כדי להפוך מודל חיה AHF על ידי ריאגנטים תרופתי, hepatotoxins רבים כגון d-galactosamine8, פרצטמול9, פחמן tetrachloride10, thioacetamide11, Concanavalin A12, ליפופוליסכריד13 , ועוד., היו בשימוש. מתוך רשימה זו, כל ריאגנט יוצר קבוצת תכונות ייחודיות עבור AHF, אך למרבה הצער לא מגיב יחיד מחקה את AHF האנושית. יתר על כן, AHF שנגזרות hepatotoxins אורכת זמן רב, אשר מעמידה חיות תחת מתח כרוני, ויש תוצאות לשחזור קשה להשיג.
מצד שני, ההליך הכירורגי של חלקי hepatectomy (PHx) היא מיומנות התלויים, תוצאות לשחזור קל להשיג לאחר פיתוח הכישורים הנדרשים. כדי לגרום AHF על ידי התערבות כירורגית לבד, נדרשת כריתה של יותר מ 70% של הכבד; עם זאת, פחות ממה hepatectomy 70% עדיין יכול להיות מנוצל כדי ללמוד engraftment והתפשטות של מושתלים תאי הכבד לניתוח יכולת טיפולית שלהם במהלך פגיעה בכבד14. ההשתלה של hepatocytes כבר hepatectomy פוסט שבוצעו דרך ה צפק15, וריד הזנב16, וריד הכבד17או את הטחול18. כיום, וריד הכבד אינפוזיה והשתלות intrasplenic של hepatocytes הן ההליכים מועדף, הם יותר קל להתרבות.
בנייר זה, תארנו הליך של hepatectomy חלקי 30% ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) שבו טוחנות האונה השמאלית של הכבד הוא עכברים. זה ואחריו השתלת hepatocytes העכבר (6/C57BL-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) לביטוי GFP 0.2 מיליון וכן מקור אנושי NeoHep19 של הטחול. הליך זה מוביל engraftment של התאים המושתלים בכבד. ההליך זה לפחות פולשני, טכניקה כואב מינימלית.

<table><tbody><tr><td>Gas Anesthesia System</td><td>Ugo Basile; Italy</td><td>211000</td><td></td></tr><tr><td>Weighing machine</td><td>Goldtech ; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Biological safety cabinet ( Class I)</td><td>Kartos international;&amp;nbsp; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Hair Trimmer</td><td>Panasonic ;&amp;nbsp; Japan&amp;nbsp;</td><td>ER-GY10&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Straight operating scissor with sharp /sharp blades</td><td>Major Surgicals; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Forceps with Serrations</td><td>Major Surgicals; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Micro needle holders&amp;nbsp; straight &amp;amp; curved&amp;nbsp;</td><td>Mercian ;&amp;nbsp; England&amp;nbsp;</td><td>BS-13-8</td><td></td></tr><tr><td>1 ml insulin syringe with 30G *5/16 needles&amp;nbsp;</td><td>Dispo Van; India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringe with 26 G * 1/2 needle</td><td>BD ; US&amp;nbsp;</td><td>REF 303060</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Threads&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Mighty ; India</td><td></td><td>(1-0) Local Procurement</td></tr><tr><td>MERSUTURES 4-0 Sterilised Surgical Needled Suture</td><td>Ethicon, Johnson &amp;amp; Johnson, India</td><td>NW 5047</td><td></td></tr><tr><td>TRUGUT 76 cm 4-0 absorbable surgical suture</td><td>Sutures India Pvt. Ltd; India</td><td>SN 5048</td><td>Sterilised Surgical Needled Suture Catgut Chromic</td></tr><tr><td>Cotton Buds</td><td>Pure Swabs Pvt Ltd ;&amp;nbsp; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Surgical Tape</td><td>3M India ; India</td><td>1530-1</td><td>Micropore Surgical Tape</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Histo-Line Laboratories, Italy</td><td>MRS3500</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cryotome E Cryostat</td><td>Thermo Electron Corporation ; US</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Confocal laser scanning microscope</td><td>Carl Zeiss ; Germany&amp;nbsp;</td><td>LSM 510 META</td><td></td></tr><tr><td>Bright Field Microscope</td><td>Olympus, Japan</td><td>LX51</td><td></td></tr><tr><td>Automated analyser</td><td>Tulip, Alto Santracruz, India</td><td>Screen Maaster 3000</td><td>Biochemical analyser for liver functional test</td></tr><tr><td>Flow Cytometer</td><td>BD ; US&amp;nbsp;</td><td>BD FACSverse</td><td>Assesment of presence of cells post transplantation</td></tr><tr><td>Veet hair removal cream&amp;nbsp;</td><td>Reckitt Benckiser , India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FORANE</td><td>Abbott ; US</td><td></td><td>isoflurane USP 99.9%&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Taxim</td><td>AlKem ; India</td><td></td><td>cefotaxime sodium injection</td></tr><tr><td>Povidone-Iodine solution&amp;nbsp;</td><td>Win-Medicare;&amp;nbsp; India</td><td></td><td>Betadine</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Himedia; India</td><td>GRM 3660</td><td></td></tr><tr><td>Iscove&#039;s Modified Dulbecco&#039;s Medium (IMDM)</td><td>Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td><td>12200-036</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma ; US</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek</td><td>Sakura; US</td><td>25608-930</td><td>O.C.T compound</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Himedia; India</td><td>MB 097</td><td></td></tr><tr><td>anti-Albumin goat Polyclonal</td><td>Thermo Scientific,Pierce, US</td><td>PA126081</td><td></td></tr><tr><td>anti-connexin 32/GJB1 Polyclonal</td><td>abcam, UK</td><td>ab64609-500</td><td></td></tr><tr><td>antiGFP rabbit polyclonal&amp;nbsp;</td><td>Santa Cruz biotechnology; US</td><td>SC 8334</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 donkey anti-goat</td><td>&amp;nbsp;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&amp;nbsp; US</td><td>A11058</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep</td><td>&amp;nbsp;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&amp;nbsp; US</td><td>A11015</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 chicken anti rabbit</td><td>&amp;nbsp;Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;&amp;nbsp; US</td><td>A21442</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti rabbit IgG HRP</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific; US&amp;nbsp;</td><td>65-6120</td><td></td></tr><tr><td>anti-Ki67 antibody</td><td>abcam, UK</td><td>ab15580</td><td></td></tr><tr><td>Antigen Unmasking Solution, Citric acid base</td><td>Vector laboratories, US</td><td>H-3300</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Diamond antifade mountant</td><td>Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td><td>P36966</td><td></td></tr><tr><td>SGOT (ASAT) KIT</td><td>Coral Clinical System, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SGPT (ALAT) KIT</td><td>Coral Clinical System, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alkaline Phosphatase Kit (DEA)</td><td>Coral Clinical System, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin Solution, Mayer&#039;s</td><td>Sigma ; US</td><td>MHS16</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y solution, alcoholic</td><td>Sigma ; US</td><td>HT110132</td><td></td></tr><tr><td>DPX Mountant&amp;nbsp;</td><td>Sigma ; US</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>Melonex (Pain Killer)</td><td>Intas Pharmaceuticals Ltd; India</td><td></td><td>Meloxicam injection&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>DAB enhanced liquid substrate system tetrahydrochloride</td><td>Sigma ; US</td><td>D3939</td><td></td></tr></tbody></table>

intrasplenic transplantation of hepatocytes after partial hepatectomy in nod.scid mice

Hepatectomy חלקית היא שיטה לשחזור רב-תכליתי ללמוד התחדשות הכבד ואת השפעת התא מבוסס הרפוי בתנאים פתולוגיים שונים. Hepatectomy חלקית מקלה גם engraftment מוגבר של התפשטות התאים המושתלים על ידי מאיץ כורוידאלית ואת נדידת תאים לכיוון הכבד. כאן, אנו מתארים פרוטוקול פשוט עבור מבצע 30% hepatectomy והשתלת תאי הטחול של שאינו שמנים סוכרת/חמור בשילוב הנד immunodeficient. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) העכבר.
בהליך זה, מתבצעים שני חתכים קטנים. החתך הראשוני היא לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, והוא חתך קטן אחר עשוי לחשוף את הטחול כבר intrasplenic של תאים. הליך זה אינו דורש כל כישורים מיוחדים, ניתן להשלים אותו תוך 5-7 דקות עם פחות לחץ, כאב, התאוששות מהירה יותר של הישרדות טוב יותר. הראו את השתלת של hepatocytes מבודד של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) המבטאת העכבר (הטרנסגניים C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), כמו גם hepatocyte כמו תאים ממקור אנושי (NeoHep) ב חלקית hepatectomized במנוד ראש. SCID עכברים.

Hepatocyte התפשטות לאחר hepatectomy חלקי 30%: התפשטות hepatocytes הנותרים הכבד לאחר 30% hepatectomy נבדק על ידי immunohistochemical (IHC) צביעת עבור סמן התפשטות תאים, Ki-67. פוסט יום אחד hepatectomy, העכברים היו מורדמים, האונות הכבד הנותרים היו טוחנות, פרפין מקטעים התקבלו. הסעיפים היו מוכתמים נוגדן Ki-67, ואחריו labelling עם חזרת pero...

Watch this Scientific Journal Video about Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice at JoVE.com

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

תארנו פרוטוקול לביצוע חלקי hepatectomy (PHx), השתלת תא באמצעות הטחול ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) עכברים. ב פרוטוקול זה, חתך לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, ואחריו עוד חתך השתלת intrasplenic של תאים.

השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

intrasplenic-transplantation-hepatocytes-after-partial-hepatectomy

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

13.9K Views.  National Institute of Immunology. תארנו פרוטוקול לביצוע חלקי hepatectomy (PHx), השתלת תא באמצעות הטחול ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) עכברים. ב פרוטוקול זה, חתך לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, ואחריו עוד חתך השתלת intrasplenic של תאים.

Video: Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

An Oncogenic Hepatocyte-Induced Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Cancer Arising in the Setting of Hepatic Inflammation and Fibrosis

The absence of a clinically relevant animal model addressing the typical immune characteristics of hepatocellular cancer (HCC) has significantly impeded elucidation of the underlying mechanisms and development of innovative immunotherapeutic strategies. To develop an ideal animal model recapitulating human HCC, immunocompetent male C57BL/6J mice first receive a carbon tetrachloride (CCl4) injection to induce liver fibrosis, then receive histologically-normal oncogenic hepatocytes from young male SV40 T antigen (TAg)-transgenic mice (MTD2) by intra-splenic (ISPL) inoculation. Androgen generated in recipient male mice at puberty initiates TAg expression under control of a liver-specific promoter. As a result, the transferred hepatocytes become cancer cells and form tumor masses in the setting of liver fibrosis/cirrhosis. This novel model mimics human HCC initiation and progression in the context of liver fibrosis/cirrhosis and reflects the most typical features of human HCC including immune dysfunction.

Here, we describe the development of a clinically relevant murine model of liver cancer recapitulating the typical immune features of hepatocellular cancer (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

The absence of a clinically relevant animal model addressing the typical immune characteristics of hepatocellular cancer (HCC) has significantly impeded ...

Cancer Research

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult liver regeneration after 70% partial hepatectomy results in hepatocyte hypertrophy with some replication in remaining lobes with restoration of metabolic activity, but with permanent loss of the injured lobe&#39;s morphology and architecture. Here, we detail a new surgical method in the neonate that leaves a physiologic environment conducive to regeneration. This model involves amputation of the left lobe apex and a subsequent conservative management regimen, and lacks the necessity for ligation of major liver vessels or chemical injury, leaving a physiologic environment where regeneration may occur. We extend this protocol to amputations on juvenile (P7-14) mice, during which the injured liver transitions from organ regeneration to compensatory growth by hypertrophy. The presented, brief 30 min protocol provides a framework to study the mechanisms of regeneration, its age-associated decline in mammals, and the characterization of putative hepatic stem or progenitors.

Here, we present a new method for partial resection of the left hepatic lobe in neonatal (day 0) mice. This new protocol is suitable for studying acute liver injury and injury response in the neonatal setting.

Hepatectomy Lobular חלקית: מודל ניתוח עבור התחדשות הכבד מורפולוגיות

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

Developmental Biology

A Familial Hypercholesterolemia Human Liver Chimeric Mouse Model Using Induced Pluripotent Stem Cell-derived Hepatocytes

Familial hypercholesterolemia (FH) is mostly caused by low-density lipoprotein receptor (LDLR) mutations and results in an increased risk of early-onset cardiovascular disease due to marked elevation of LDL cholesterol (LDL-C) in blood. Statins are the first line of lipid-lowering drugs for treating FH and other types of hypercholesterolemia, but new approaches are emerging, in particular PCSK9 antibodies, which are now being tested in clinical trials. To explore novel therapeutic approaches for FH, either new drugs or new formulations, we need appropriate in vivo models. However, differences in the lipid metabolic profiles compared to humans are a key problem of the available animal models of FH. To address this issue, we have generated a human liver chimeric mouse model using FH induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived hepatocytes (iHeps). We used Ldlr-/-/Rag2-/-/Il2rg-/- (LRG) mice to avoid immune rejection of transplanted human cells and to assess the effect of LDLR-deficient iHeps in an LDLR null background. Transplanted FH iHeps could repopulate 5-10% of the LRG mouse liver based on human albumin staining. Moreover, the engrafted iHeps responded to lipid-lowering drugs and recapitulated clinical observations of increased efficacy of PCSK9 antibodies compared to statins. Our human liver chimeric model could thus be useful for preclinical testing of new therapies to FH. Using the same protocol, similar human liver chimeric mice for other FH genetic variants, or mutations corresponding to other inherited liver diseases, may also be generated.

Here, we present a protocol to generate a human liver chimeric mouse model of familial hypercholesterolemia using human induced pluripotent stem cell-derived hepatocytes. This is a valuable model for testing new therapies for hypercholesterolemia.

מודל אנושי העכבר Chimeric הכבד היפרכולסטרולמיה משפחתית באמצעות Hepatocytes נגזר תאי גזע Pluripotent המושרה

Familial hypercholesterolemia (FH) is mostly caused by low-density lipoprotein receptor (LDLR) mutations and results in an increased risk of early-onset ...

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in which the liver has been repopulated with functional human hepatocytes, could serve as a useful tool for investigating human hepatic cell biology, drug metabolism, and other preclinical applications. One of the key factors required for successful transplantation of human hepatocytes into mice is the elimination of the endogenous hepatocytes to prevent competition with the human cells and provide a suitable space and microenvironment for promoting human donor cell expansion and differentiation. To date, two major liver injury mouse models utilizing fumarylacetoacetate hydrolase (Fah) and uroplasminogen activator (uPA) mice have been established. However, Fah mice are used mainly with mature hepatocytes and the application of the uPA model is limited by decreased breeding. To overcome these limitations, Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice were used for in vivo differentiation of immature human hepatocytes and humanized liver generation. Human hepatic stem cells (HpSCs) successfully repopulated the livers of Alb-TRECK/SCID mice that had developed lethal fulminant hepatic failure following diphtheria toxin (DT) treatment. This model of a humanized liver in Alb-TRECK/SCID mice will have functional applications in studies involving drug metabolism and drug-drug interactions and will promote other in vivo and in vitro studies.

Here, we present a novel humanized mouse liver model generated in Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice following the transplantation of immature and expandable human hepatic stem cells.

דור של כבד עכבר אנושי באמצעות תאי גזע אנושי כבדיה

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of their morbidity. The liver immunopathology caused by HIV-1 remains elusive. Small xenograft animal models with human hepatocytes and human immune system can recapitulate the human biology of the disease&#39;s pathogenesis. Herein, a protocol is described to establish a dual humanized mouse model through human hepatocytes and CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells (HSPCs) transplantation, to study liver immunopathology as observed in HIV-infected patients. To achieve dual reconstitution, male TK-NOG (NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug Tg(Alb-TK)7-2/ShiJic) mice are intraperitoneally injected with ganciclovir (GCV) doses to eliminate mouse transgenic liver cells, and with treosulfan for nonmyeloablative conditioning, both of which facilitate human hepatocyte (HEP) engraftment and human immune system (HIS) development. Human albumin (ALB) levels are evaluated for liver engraftment, and the presence of human immune cells in blood detected by flow cytometry confirms the establishment of human immune system. The model developed using the protocol described here resembles multiple components of liver damage from HIV-1 infection. Its establishment could prove to be essential for studies of hepatitis virus co-infection and for the evaluation of antiviral and antiretroviral drugs.

This protocol provides a reliable method to establish humanized mice with both human immune system and liver cells. Dual reconstituted immunodeficient mice achieved via intrasplenic injection of human hepatocytes and CD34+ hematopoietic stem cells are susceptible to human immunodeficiency virus-1 infection and recapitulate liver damage as observed in HIV-infected patients.

הקמתה של הומניזציה Dual-TK-חעוגה מודל העכבר עבור הנגיף הקשור HIV פתוגנזה

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Immunology and Infection

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone splenectomy regardless of precipitating causes are prone to develop an overwhelming post-splenectomy infection and experience increased risks of deep venous thrombosis and malignancies. Recently, epidemiological studies indicated that splenectomy might be associated with the occurrence of cardiovascular diseases, suggesting that physiological functions of the spleen have not yet been fully recognized. Here, we introduce a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, which not only can be utilized to study the function and behavioral activity of splenic immune cell subsets in different biologic processes, but also can be a powerful tool to test the therapeutic potential of spleen transplantation in certain diseases. The main surgical steps of this model include donor spleen harvest, the removal of recipient native spleen, and spleen graft revascularization. Using congenic mouse strains (e.g., mice with CD45.1/CD45.2 backgrounds), we observed that after syngeneic transplantation, both donor-derived splenic lymphocytes and myeloid cells migrated out of the graft as early as post-operative day 1, concomitant with the influx of multiple types of recipient cells, thus generating a unique chimera. &#160;Despite relatively challenging techniques, this procedure can be performed with &#62;90% success rate. This model allows tracking the fate, longevity, and function of splenocytes during steady state and in a disease setting following a spleen transplantation, thereby offering a great opportunity to discover the distinct role for spleen-derived immune cells in different disease processes.

This protocol details the surgical steps of a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, a technically challenging model that can serve as a powerful tool in studying the fate and longevity of spleen cells, the mechanisms of distinct spleen cell populations in disease progression, and transplant immunity.

מודל של העכבר של ואסיאני הטרוגרההשתלת הטחול ללמוד תא הטחול ביולוגיה וחסינות להשתלות

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the kidney capsule in most rodent preclinical islet transplantation studies. This model is commonly used because murine intrahepatic islet transplantation is technically challenging, and a high percentage of mice could die from surgical complications, especially bleeding from the injection site post-transplantation. In this study, two procedures that can minimize the incidence of post-infusion portal vein bleeding are demonstrated. The first method applies an absorbable hemostatic gelatin sponge to the injection site, and the second method involves penetrating the islet injection needle through the fat tissue first and then into the portal vein by using the fat tissue as a physical barrier to stop bleeding. Both methods could effectively prevent bleeding-induced mouse death. The whole liver section showing islet distribution and evidence of islet thrombosis post-transplantation, a typical feature for intrahepatic islet transplantation, were presented. These improved protocols refine the intrahepatic islet transplantation procedures and may help laboratories set up the procedure to study islet survival and function in pre-clinical settings.

Here we present refined surgical procedures on successfully performing intraportal islet transplantation, a clinically relevant but technically challenging surgical procedure, in mice.

מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

Isolation of Regenerating Hepatocytes after Partial Hepatectomy in Mice

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream single-cell applications is challenging. A marked accumulation of lipids within regenerating hepatocytes is observed during the first 2 days of normal liver regeneration in mice. This so-called transient regeneration-associated steatosis (TRAS) is temporary but partially overlaps the major proliferative phase. Density-gradient purification is the backbone of most existing protocols for the isolation of primary hepatocytes. As gradient purification relies on the density and size of cells, it separates non-steatotic from steatotic hepatocyte populations. Therefore, fatty hepatocytes often are lost, yielding non-representative hepatocyte fractions. 
The presented protocol describes an easy and reliable method for the in vivo isolation of regenerating hepatocytes regardless of their lipid content. Hepatocytes from male C57BL/6 mice are isolated 24-48 h after hepatectomy by a classic two-step collagenase perfusion approach. A standard peristaltic pump drives the warmed solutions via the catheterized inferior vena cava into the remnant, using a retrograde perfusion technique with outflow through the portal vein. Hepatocytes are dissociated by collagenase for their release from the Glisson's capsule. After washing and careful centrifugation, the hepatocytes can be used for any downstream analyses. In conclusion, this paper describes a straightforward and reproducible technique for the isolation of a representative population of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. The method may also aid the study of fatty liver disease.

Lipid-laden hepatocytes are inherent to liver regeneration but are usually lost upon density-gradient centrifugation. Here, we present an optimized cell isolation protocol that retains steatotic hepatocytes, yielding representative populations of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice.

בידוד של הפטוציטים מתחדשים לאחר כריתת כבד חלקית בעכברים

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream ...

השתלת כבד בעכבר וניתוח פטנט אלוגרפט

Successful Orthotopic Liver Transplantation in Mice Utilizing Microcomputed Tomography Angiography

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality images to be obtained of micro-vasculature and are high-fidelity tools in the field of organ transplantation. In this model of orthotopic liver transplantation (OLT) in mice, microCT affords the opportunity to evaluate allograft anastomosis in real time and has the added benefit of not having to sacrifice study animals. The choice of contrast, as well as image acquisition settings, create a high-definition image, which gives researchers invaluable information. This allows for evaluation of the technical aspects of the procedure as well as potentially evaluating different therapeutics over an extended duration of time. In this protocol, we detail an OLT model in mice in a stepwise fashion and finally describe a microCT protocol that can give high-quality images, which aid researchers in in-depth analysis of solid organ transplantation. We provide a step-by-step guide for liver transplantation in a mouse, as well as briefly discuss a protocol for evaluating the patency of the graft through microCT angiography.

מחבר זרקור: שיפור מחקר השתלות באמצעות אנגיוגרפיה microCT במודלים Murine 

In this protocol, we discuss the implementation of a model of successful orthotopic liver transplantation (OLT) in mice. Additionally, adjuvants to further analyze allograft patency after successful OLT in a mouse are discussed as well, specifically utilizing microcomputed tomography (microCT) scans.

השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת אנגיוגרפיה

Microcomputed tomography (microCT) angiography is an invaluable resource to researchers. New advances in this technology have allowed for high-quality ...