כבד הוא אתר עיקרי להשתלה בסביבה הקלינית של האי האנושי. השתלת איים תוך-הפטנטיים של העכבר היא מאתגרת מבחינה טכנית, ואחוז גבוה של עכברים עלול למות מסיבוכים כירורגיים, במיוחד דימום. במחקר זה, שתי השיטות שהראנו שתיהן יכולות למנוע ביעילות מוות של עכברים כתוצאה מדימום.
השיטה שלנו יכולה להיות מיושמת למחקר בסרטן הכבד ומחלות כבד אחרות על ידי מתן אפשרות הזרקה של תאים סרטניים, תאי גזע mesenchymal, hepatocyte ישירות לכבד. בתור התחלה, לנתק תרבות אי אנושית עם שריטות עדינות. השתמש מזרק 1 ס"מ מעוקב לקטוף 300 עד 350 איים לתוך צינורות מיקרו-צנטריפוגה סטריליים 1.5 מיליליטר על קרח.
כאשר כל האיים כבר הרים, צנטריפוגות הצינורות במשך 10 שניות כדי לשקם את התאים. להשליך את כל אבל נפח קטן של supernatant כדי למנוע אובדן גלולה ו resuspend האיים ב 200 microliters HBSS המכיל 5%BSA. טען את האיים resuspended לתוך מזרק אינסולין 5 מיליליטר ולהפוך את מחט מזרק בסופו של דבר במשך 1 דקה כדי לתת את האיים להתיישב על הבוכנה.
לדכא את הבוכנה כדי להסיר את כל הבועות, שמירה על כ 100 עד 150 מיקרוליטרים של פתרון במזרק ולהפוך את המזרק עם הקשה עדינה כדי להפיץ באופן שווה את האיים. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס דוושה, להחיל משחה על העיניים כדי למנוע ייבוש. לגלח את הבטן של העכבר מרדים כדי להסיר את הפרווה ולחטא את האזור הניתוחי עם שלושה מגבונים לסירוגין של 2% יוד ו 75% אלכוהול.
לאחר מכן, לעשות חתך 1 עד 1.5 ס"מ בבטן ולפתוח את חלל הצפק. מניחים חתיכת גזה סטרילית סביב החתך ולהשתמש מלקחיים או קצות כותנה כדי להעביר בעדינות את המעי על הגזה. לאחר מכן לכסות את המעי עם חתיכת גזה ספוגה מלוחים ולחשוף את וריד הפורטל.
כדי לעצור דימום המושרה בהעברת האי באמצעות קצף ג'ל, החזק את המחט עם השיפוע הפונה כלפי מטה ומקם את קצה המחט עם פתח מקביל לקיר וריד הפורטל לפני החדרת המחט לווריד הפורטל. הסר את הבוכנה כדי למשוך 20 עד 50 מיקרוליטרים של דם לתוך המזרק כדי לערבב עם האיים לפני החדרת האיים לתוך וריד הפורטל תוך כדי דיכאון חוזר ונשנה ונסיגה הבוכנה. כאשר כל האיים נמסרו, מניחים כ 5 על 5 ס"מ של קצף ג'ל מעל אתר ההזרקה.
השתמש בקצה כותנה כדי ללחוץ על קצף הג'ל למטה בעת הסרת המחט מווריד הפורטל. החזק את הג'ל במקום במשך כ 2 דקות, מגלגל את קצף הג'ל כדי לוודא שהוא מכסה את וריד הפורטל. לאחר הדימום נעצר, בעדינות להחזיר את המעי לחלל הצפק בתנוחה המקורית ולהזריק 500 מיקרוליטרים של מלוחים חמים לתוך חלל הבטן.
השתמשו בתפרים כדי לסגור את שכבות השרירים והעור. לאחר מכן מניחים את העכבר בכלוב נקי על כרית חימום עם ניטור עד התאוששות מלאה מהרדמה, מתן משככי כאבים כל 12 שעות וחום במשך 48 שעות. כדי לעצור דימום המושרה בהעברת האי באמצעות כרית שומן, לאחר חשיפת וריד הפורטל כפי שהודגם, השתמש בשני קצות כותנה כדי להחזיק את הווריד החשוף בצד שמאל ובצד ימין ולאתר את כרית רקמת השומן בין התריסריון לווריד הפורטל.
לחדור את כרית השומן עם קצה המחט לפני הכניסה לתוך וריד הפורטל. החדירו את האיים לווריד השער כפי שהוכח. כאשר כל האיים נמסרו, לחץ על רקמת השומן עם קצה כותנה במשך כ 1 דקה תוך הסרת המחט מן הווריד.
לאחר מכן להחזיר את המעי לחלל הבטן ולבצע את שאר ההליכים טיפול posturgical כפי שהוכח. ההשפעות של השתלת האיון תלויות במינון, כמו גליקמיה נורמלית הוא ציין 30 ימים לאחר השתלת האי הסינגנית כאשר 500 איים מועברים, אבל רק נורמוגליקמיה חולפת הוא ציין כאשר 250 איים מועברים, עם העכברים חוזרים היפרגליקמיה על ידי 10 ימים לאחר ההשתלה. משקל גוף מוגבר נצפתה בשתי הקבוצות ותגובות זהות שנצפו כאשר איים אנושיים מושתלים בעכברים NOD-SCID סוכרתיים, עם נורמוגליקמיה נצפתה כאשר מספר גבוה יותר של שווה ערך לאי מושתלים אך לא מספרים קטנים יותר.
רוב העכברים שיש להם דימום לאחר ההעברה למות לאחר הניתוח, בעוד העכברים ללא דימום לשרוד. ב 28 ימים לאחר ההשתלה, כתמי אינסולין חושפים התפלגות אחידה של האי האנושי בכל הכבד, בעיקר קרוב לכלי הדם. בנוסף לאינסולין, פיברין וסינון תאים פולימורפונוקלארי נצפים גם בתוך האיים האנושיים המושתלים.
השתלת איים תוך-הפטיים תיצור חור גדול בווריד הפורטל שעלול לגרום לדימום. שימוש בשני ההליכים המשופרים שלנו יכול למנוע דימום ולהפחית את התמותה לאחר השתלת איון. מודל השתלת האי הפנימי יכול לחקות השתלת איון אנושי קלינית.
ההליכים המעודנים שלנו יכולים להוביל לשיעורי הישרדות גבוהים יותר עבור נמענים, המאפשרים מחקר נוסף של תפקוד האי לאחר ההשתלה.
