This study was supported by an operating grant from the Canadian Institutes of Health Research (CIHR) to Q.F. (grant #MOP-119600).

זוגות מקננים של C57BL / 6 ועכברים CD-1 IG-S נרכשו צ&#39;ארלס ריבר. בעלי חיים המשמשים במחקר זה טופלו בהתאם להנחיות המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים, ופרוטוקולים המחקר אושרו על ידי ועדת המשנה שימוש בבעלי חיים באוניברסיטת Western, לונדון, קנדה. 1. טיפול בבעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הלידה היא מלאה גורים כבר בתחילה הניקו ידי אמם במשך כמה שעות, למקם אותם בכלוב שונה עם אמו מאמצת CD-1. CD-1 אמהות להציג פנוטיפ יותר רגוע עם אינסטינקט טיפוח חזק, ויש לי נטייה נמוכה יותר קניבליזציה גורים פצועים 15. </li></ol> 2. כירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות הרדמה על ידי הצבת את הגור בתא isoflurane אטום (כ 500 μl של isoflurane 100% v / v מותר לפזר מעל 1,300 ס&quot;מ 3 קאמרית). שמור את העכבר בתא עד להפסקת התנועה (כ -30 שניות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מולהשתמש מחדר isoflurane ולגרום הרדמה היפותרמיה ידי הצבת העכבר על קרח רטוב. כדי למנוע כוויות קור, למקם קרח בתוך כפפה כירורגית סטרילית, לעטוף את העכבר בתוך כפפה ולכסות את הכפפה עם קרח או לעטוף את העכבר גזה רטוב סטרילית ומניחים אותו על קרח. הערה: עכברים לקרר מהר יותר כאשר במגע עם קרח הוא על פני שטח פנים גדול יותר, וכתוצאה קרח נמס כזה יכול לקצר את זמן אינדוקציה היפותרמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר הרדמה על ידי חוסר תגובת תנועת קמצוץ בוהן וזנב. הערה: הפסקת תנועה עוררה מתרחשת בטמפרטורת גוף בין 15 ° C ו -8 מעלות צלזיוס. (קירור הזמן בטמפרטורה זו כ 1 דק &#39;). דום נשימה ו asystole שלמים אינה נדרשו עבור קשירת LAD. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזיזו את המיטה קרח על אזור הניתוח מאובזר עם מיקרוסקופ ההפעלה. ודא כי גור העכבר נשאר על קרח במהלך ההליך הכירורגי כולו. הערה: אזור הניתוח, גזה מכשירי ניתוח צריך להיות מעוקר. Maintaבשדה סטרילי לאורך כל ההליך, וללבוש ליחד, כפפות מנתחים סטרילית. משחת עיניים אינו נדרש כעכברים נולדים בעיניים עצומות 17. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את גור העכבר במצב משכוב לרוחב הנכון. לחטא החזה ידי מנגב בעדינות עם פתרון povidone יוד ואחריו ספוגית אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע חתך בעור על החזה השמאלי לאורך קו אמצע השחי על ידי חיתוך העור בין xyphoid ו השחי השאירה כמה מילימטרים מתחת רגלה השמאלית הקדמית. כמו כן להשתמש במספריים לחתוך את שכבת השריר הבסיסית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע פתיחת בית חזה שמאלית במרחב 4 th צלעי ידי הפרדת צלעות ושרירי צלעי עם מלקחיים. הערה: צלעות ילודים הן שבירות מאוד ניתן לשבור בקלות. כדי למנוע זאת, צלעות נפרדות בעדינות על ידי פתיחת מלקחיים לאורך שריר צלעי (ולא אחיזת צלעות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דמיינו את השמאלי הקדמי היורד לב כלילית (LAD) המתעוררים משמאל Auricle מאחורי עורק הריאה ויורד מעבר וריד לב הרב. הערה: בחלון בילוד מוקדם זה, התימוס הוא מדמיין לעתים קרובות עשוי לכסות חלק מבסיס הלב. הנער ניתן לראות העולה ליד עמדת התימוס, בהתאם לזווית של חתך בית החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור את LAD ידי העברת תפר ניילון 11-0 (0.007 מ&quot;מ מחט בקוטר) מתחת העורק דרך החדר באמצע מתחת אפרכסת שמאל (תרשים 1C). איסכמיה הוא אישר עם הלבנה של שריר הלב שמתחת לאזור תפר (איור 1G). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת חתך החזה באמצעות 8-0 תפרי ניילון (מחט בקוטר 0.15 מ&quot;מ). השתמש בשני תפרים כדי לסגור את הצלעות. מניח שני תפרי הצלעות לפני ligating כדי להבטיח את המחט לא לנקב את הריאות כאשר עוברים דרך חלל הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סגירת הצלעות, הסר את העכבר מן המיטה קרח. שמור את העכבר בתוך אזור הניתוח, ולמקם אותו ישירות על ניתוח סטרילי כדיwel על כרית חימום חמה ב 37 מעלות צלזיוס להתחיל התחממות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר על האזור המחומם סטרילי, לסגור את שכבות שריר ועור באמצעות 8-0 תפרי ניילון (מחט בקוטר 0.15 מ&quot;מ). השתמש תפר אחד עבור שכבת השריר ולהשתמש שני התפרים עבור החתך בעור. הערה: שרירים ושכבות עור עלולים להיות סגורים על כרית חימום כדי לקצר את זמן חשיפה היפותרמיה. טמפרטורת העכבר מתחילה לעלות להציב פעם על כרית החימום, אבל נשארה מספיק נמוך מספיק עבור תחזוקת הרדמה במהלך סגר שרירים ועור. </li></ol> 3. שחזור כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משך התחממות מהירה על כרית חימום חמה עד להשבת תנועה ספונטנית. אל תשאירו חיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal. הסר povidone יוד ודם ידי מנגב פגיעה באתר בעדינות עם ספוגית אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר התאוששות מספיק מן ההרדמה, להסיר אותו מאזור ניתוח סטרילי, למרוח אותה עם מצעים מ אומנהאמו של כלוב, ותשואת הגור לטפח אמא. זה עוזר למנוע דחייה או קניבליזציה אימהית. הערה: אל תחזרו גורים לכלוב עם בעלי חיים אחרים עד התאושש לחלוטין. אם המלטה כולו לא נעשה שימוש, ואת להמלטה להישאר עם אמה המאמצת, למקם הגורים התאושש באמצע המלטה. אם ביצוע יותר מאשר ניתוח אחד, להשלים את כל הניתוחים הנדרשים המלטה בודדת לפני שחזר עכברים האם האומנת שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתבונן בהתנהגות של אמה המאמצת לעבר הגור כל 10 - 15 דקות עבור 2 - 3 שעות כדי להבטיח קבלה של הגור. במידה והאם מציג בתוקפנות כלפי הגור הפצוע, להסיר את הגור ואת להרדים על ידי יתר isoflurane (&gt; 5%; עד למועד הפסקת נשימה), ואחריו עריפת ראש. הערה: תרופות שיכוך כאבי Perioperative אינן נדרשות כמו רפלקסים כאב הריכוזיים אינם מפותחים בגיל מוקדם זה 15. </li></ol> 4. מדידה של שריר לב אוטם גודל 4 -6 שעות לאחר MI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר גורים להתאושש בטיפול אם אומנת CD-1 לתקופה של 4 - שעות 6. הסר את הגור מהכלוב עם אמו להרדים אותו על ידי יתר isoflurane ואחריו עריפת ראש במספריים גדולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ובלו הלב תחת מיקרוסקופ לנתח, נזהר שלא לקרוע שריר הלב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את העור מתהליך xyphoid לחלק העליון של בית החזה. דופן הבטן להרחיב מתחת בית החזה. אחוז כלוב הצלעות התחתון ופצע דרך צלעות שרירי longitudinally לאורך הקו באמצע בית השחי השמאלי מן הסרעפת אל השחי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק מספריים מטוס רוחבי בזהירות לחתוך דרך הסרעפת משמאל לצד ימין. הקפד למקם מספריים מתחת לרמה של הלב כדי למנוע נזק הקודקוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחוז כלוב צלעות וחתך צד ימין של צלעות שרירות לאורך קו אמצע השחי הימני. הסר את כל החיבורים של כלי הדם אל הלב במספריים. הסר את הלב מתוך חלל החזה תוך כדי אחיזההבסיס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סעיף בלב לשלושה חלקים באמצעות סכין גילוח פלדת פחמן כירורגית. הפוך את החתך הראשון לאורך הציר הקצר של הלב בנקודת האמצע בין התפר ואת חוד הלב. עובר את הסינון השני ברמה של התפר (איור 3 א). הערה: זה משאיר קטע איפקס כ 0.75 מ&quot;מ עובי במשקל 0.0018 גרם; קטע באמצע בסיס כ 1 מ&quot;מ עובי, במשקל 0.0065 גרם; והבסיס של הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הסעיפים לב 1% כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium (TTC) בטמפרטורת החדר למשך 10 - 15 דקות. בזהירות לצפות דגימה להימנע מכתים מעל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להגביר את הניגודיות, לתקן פרוסות הלב מוכתם paraformaldehyde 4% בין לילה ב 4 ° C. כדי לחשב שטח אוטם%, סעיפי לב תצלום ולמדוד אזור אוטם על תוכנת הדמיה. שריר לב קיימא כתמים אדום ואילו באזור האוטם הוא תחום כמו 18 לבנים. </li></ol> 5. מדידהתפקוד הלב על ידי אקו לאחר MI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר הגורים להתאושש בטיפול אם אומנת CD-1 לתקופה של 24 - 48 שעות. להשרות הרדמה על ידי הצבת את הגור בתא isoflurane אטום (isoflurane 5%). שמור את העכבר בתא עד להפסקת התנועה (כ -30 שניות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Secure את הגור בעמדת פרקדן על מזח מחומם (C ° טמפרטורת 37) עם האף שלה חרוט כדי לספק 0.5 - 1 isoflurane% (לצורך תחזוקת הרדמה). מניחים ג&#39;ל חימם מראש הד על אזור החזה השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג ראייה ארוכת ציר parasternal של החדר השמאלי (LV). ודא את התמונות מתקבלות מתחת לרמה של תתפור את LV. לאחר שרכש את העמדה, להפוך בדיקת אולטרסאונד (40 מגה-הרץ) 90 ° עד שייתן להם תמונה קצר ציר parasternal, ולהקליט M-mode תמונות אקו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את הדיאסטולי סוף ולסיים בקטרים ​​חדרית פנימיים השמאלי סיסטולי מתמונות M-mode קצר הציר. חישוב מקטע פליטה ו fractioקיצור סופי. </li></ol> 6. מדידת שריר לב אוטם גודל 24 שעות לאחר MI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר גורים להתאושש בטיפול אם אומנת CD-1 לתקופה של 24 שעות. הסר את הגור מהכלוב עם אמו להרדים אותו על ידי יתר isoflurane ואחריו עריפת ראש במספריים גדולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את חלל החזה כמו בשלב 4.2. לפני מוציא את הלב, בזהירות לתפוס את אבי העורקים החזי בדיוק מעל הסרעפת עם מלקחיים בסדר. החזק מספריים בסדר במישור העטרה, שטוחים על קיר החזה, וחותכי האאורטה החזי מקיר החזה האחורי נע מספריים בכיוון גולגולתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך את אב עורקים חינם מקיר החזה וכל חיבורים אחרים עד שהוא מגיע אל הלב. ובלו הלב ידי אחיזת הווריד הנבוב המעולה חיתוך כל החיבורים של כלי הדם אחרים בגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטף את הלב (עם אב עורקים המצורפים) סליין. בזהירות cannulate האאורטה החזה עם מחט 30 מד ולקשוראורטה כדי צינורית עם חוט תפר ניילון 8-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Perfuse הלב עם 1 מ&quot;ל של תמיסת מלח דרך אבי העורקים באמצעות המחט 30 מד בשיעור של 1 מ&quot;ל / דקה. Perfuse הלב עם 150 μl של פתרון כחול -2% אוונס בשיעור של 1 מ&quot;ל / דקה. הסר את הלב מן הצינורית, סעיף אותו לתוך שלוש חתיכות ללכלך אותם עם TTC כמפורט בסעיף 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לחשב את הגודל אוטם, סעיפי לב תצלום ולמדוד אזור אוטם על תוכנת הדמיה. שריר לב קיימא כתמים כחול, באזור ב כתמי סיכון אדום, ואזור האוטם הוא תחום כמו לבן. </li></ol>

<ol>
	<li>Rosamond, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2008+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2008 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 117 (4), 25-146 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meta-analysis+Global+Group+in+Chronic+Heart+Failure.+The+survival+of+patients+with+heart+failure+with+preserved+or+reduced+left+ventricular+ejection+fraction:+an+individual+patient+data+meta-analysis.">Meta-analysis Global Group in Chronic Heart Failure. The survival of patients with heart failure with preserved or reduced left ventricular ejection fraction: an individual patient data meta-analysis.</a> Eur Heart J. 33 (14), 1750-1757 (2012).</li><li>Soonpaa, M. H., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+cardiomyocyte+DNA+synthesis+in+normal+and+injured+adult+mouse+hearts.">Assessment of cardiomyocyte DNA synthesis in normal and injured adult mouse hearts.</a> Am J Physiol. 272, 220-226 (1997).</li><li>D'Uva, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERBB2+triggers+mammalian+heart+regeneration+by+promoting+cardiomyocyte+dedifferentiation+and+proliferation.">ERBB2 triggers mammalian heart regeneration by promoting cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation.</a> Nat Cell Biol. 17 (5), 627-638 (2015).</li><li>Oberpriller, J. O., Oberpriller, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+the+adult+newt+ventricle+to+injury.">Response of the adult newt ventricle to injury.</a> J Exp Zool. 187 (2), 249-253 (1974).</li><li>Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+regeneration+in+zebrafish.">Heart regeneration in zebrafish.</a> Science. 298 (5601), 2188-2190 (2002).</li><li>Jopling, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+heart+regeneration+occurs+by+cardiomyocyte+dedifferentiation+and+proliferation.">Zebrafish heart regeneration occurs by cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation.</a> Nature. 464 (7288), 606-609 (2010).</li><li>Porrello, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+regenerative+potential+of+the+neonatal+mouse+heart.">Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart.</a> Science. 331 (6020), 1078-1080 (2011).</li><li>Haubner, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+cardiac+regeneration+in+a+mouse+model+of+myocardial+infarction.">Complete cardiac regeneration in a mouse model of myocardial infarction.</a> Aging. 4 (12), 966-977 (2012).</li><li>Soonpaa, M. H., Kim, K. K., Pajak, L., Franklin, M., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+DNA+synthesis+and+binucleation+during+murine+development.">Cardiomyocyte DNA synthesis and binucleation during murine development.</a> Am J Physiol. 271, 2183-2189 (1996).</li><li>Li, F., Wang, X., Capasso, J. M., Gerdes, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+transition+of+cardiac+myocytes+from+hyperplasia+to+hypertrophy+during+postnatal+development.">Rapid transition of cardiac myocytes from hyperplasia to hypertrophy during postnatal development.</a> J Mol Cell Cardiol. 28 (8), 1737-1746 (1996).</li><li>Feng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevation+of+an+endogenous+inhibitor+of+nitric+oxide+synthesis+in+experimental+congestive+heart+failure.">Elevation of an endogenous inhibitor of nitric oxide synthesis in experimental congestive heart failure.</a> Cardiovasc Res. 37 (3), 667-675 (1998).</li><li>Xiang, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte-specific+overexpression+of+human+stem+cell+factor+improves+cardiac+function+and+survival+after+myocardial+infarction+in+mice.">Cardiomyocyte-specific overexpression of human stem cell factor improves cardiac function and survival after myocardial infarction in mice.</a> Circulation. 120 (12), 1065-1074 (2009).</li><li>van Kats, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-converting+enzyme+inhibition+and+angiotensin+II+type+1+receptor+blockade+prevent+cardiac+remodeling+in+pigs+after+myocardial+infarction:+role+of+tissue+angiotensin+II.">Angiotensin-converting enzyme inhibition and angiotensin II type 1 receptor blockade prevent cardiac remodeling in pigs after myocardial infarction: role of tissue angiotensin II.</a> Circulation. 102 (13), 1556-1563 (2000).</li><li>Mahmoud, A. I., Porrello, E. R., Kimura, W., Olson, E. N., Sadek, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+models+for+cardiac+regeneration+in+neonatal+mice.">Surgical models for cardiac regeneration in neonatal mice.</a> Nat Protoc. 9 (2), 305-311 (2014).</li><li>Ahn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+C57BL/6+mice.">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 286 (3), 1201-1207 (2004).</li><li>Kao, W. W., Xia, Y., Liu, C. Y., Saika, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+pathways+in+morphogenesis+of+cornea+and+eyelid.">Signaling pathways in morphogenesis of cornea and eyelid.</a> Ocul Surf. 6 (1), 9-23 (2008).</li><li>Redfors, B., Shao, Y. Z., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarct+size+and+area+at+risk+assessment+in+mice.">Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice.</a> Experimental &amp; Clinical Cardiology. 17 (4), 268-272 (2012).</li><li>Phifer, C. B., Terry, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+hypothermia+for+general+anesthesia+in+preweanling+rodents.">Use of hypothermia for general anesthesia in preweanling rodents.</a> Physiol Behav. 38 (6), 887-890 (1986).</li><li>Jesty, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=c-kit++precursors+support+postinfarction+myogenesis+in+the+neonatal,+but+not+adult,+heart.">c-kit+ precursors support postinfarction myogenesis in the neonatal, but not adult, heart.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (33), 13380-13385 (2012).</li><li>Mahmoud, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meis1+regulates+postnatal+cardiomyocyte+cell+cycle+arrest.">Meis1 regulates postnatal cardiomyocyte cell cycle arrest.</a> Nature. 497 (7448), 249-253 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

קשירת LAD כירורגית הפגינו בזאת היא שיטה אמינה לייצר MI בעכברים הילוד. מודל זה מספק חוקרים עם מודל לשחזור שבה ללמוד התחדשות לב יונקת. ויזואליזציה של כלי הדם הכליליים היא מרכיב מרכזי של שיטה זו, הבטחת מיקום תפר נכון ובכך להבטיח שחזור. בעוד עכברים בוגרים אינם בעלי יכולות poik...

אוטם שריר הלב (MI) הוא הגורם המוביל למוות ברחבי העולם, ונשאר אחראי כשליש מהמקרים אי ספיקת לב 1. בעוד כניסתו של התערבות מלעורית ואופטימיזציה מתמדת של שימוש thrombolytics גדלה reperfusion הבא MI, מות cardiomyocyte ואובדן שריר לב התכווצות בכל זאת מתרחשת. יש גם להישאר מספר רב של &quot;אין-אפשרות&quot; לחולים שאינם מועמדים או לא רואים תועלת התערבויות אלה. חולים אלה ממשיכים לחוות איסכמיה השבתת מוביל צלקת היווצרות שיפוץ חדרית מזיק כמנגנון של ריפוי אוטם. תהליך זה בסופו של דבר התוצאות אי ספיקת לב, אשר הפרוגנוזה נשאר עני למרות ניהול תרופתי אופטימלי עם מעכבי אנגיוטנסין-המרת אנזים (ACE) וחוסמי בטא. למרבה הצער, שיעור התמותה לשנה עבור חולים עם תפקוד חדר שמאל נפגע קשה עדיין נשארגבוה ככל 26% 2. השתלת לב היא אופציית הטיפול הסופי עבור חולים עם כשל לבבי. עם זאת, את מאגר התורמים המוגבל השתלת לב לא להפוך את זה אפשרות מעשית עבור רוב החולים. לפיכך, חשיפת סוכנים טיפוליים חדשניים כדי לשחזר את שריר לב הניזוק נשארת עליונה לפתרון הבעיה מהחלות-הלב. במודלים של בעלי חיים אמינים של פגיעה לבבית ולכן נדרשים כמרכיב קריטי של תהליך זה. דוגמא מסורתית כתיב כי cardiomyocytes המבוגר הם-mitotic פוסט, תאים מובחנים סופנים, מסוגל חלוקתם או דה-הבחנה להחליף את שריר הלב הפגוע 3. ככזה, לב יונקי בוגרים לא יכול להחלים לגמרי מפציעה, ו cardiomyocytes אבד יוחלף עם רקמה סיבית. לפיכך, מחקר התמקד בעיקר בתרופות כדי למזער התרחבות אוטמת ולהפחית היווצרות צלקת. לאחרונה עם זאת, שינוי פרדיגמה התרחשבחשיבה סביב ריפוי לב מאמצי מחקר רבים כבר מנותב להתמקד פוטנציאל התחדשות לב 4. עד לאחרונה, in vivo המחקר של התחדשות לב הוגבל דגמים שאינם חוליות, כגון אלה דו חיים urodele ו teleost דגים 5-7. אולם גילוי יכולת התחדשות לב של העכבר בילוד הוביל להתפתחות של שני מודלים כירורגית של התחדשות לב יונקת: כריתה של הספיגה העורק איפקס הכליליים של הלב לגרום לאוטם שריר לב 8,9. בשנת 2011, מודל כריתת איפקס עכבר שמש על מנת להוכיח כי התחדשות לב מלאה אפשרית יום לאחר לידת 1 (P1). אולם, קיבולת זו צונחת בתוך זמן קצר לאחר תקופת בילוד הראשונית. הלב היונק מאבד פוטנציאל ההתחדשות שלה זמן קצר לאחר לידה ב P7 כמו ירידה במספרי תא אב, ואת cardiomyocytes הופך binucleated, לאבדכשירות השגשוג שלהם, ולצמיתות לצאת 10,11 מחזור התא. הבנת ההבדלים הבסיסיים בין בילוד ולב יונק בוגרים עשויה להוביל לתובנה רומן לתוך התחדשות לב. בעוד כריתת איפקס אכן מציעה תובנה מחדש הצמיחה של רקמת התכווצות, המודל אינו לדמות פציעת לב אנושית טיפוסית, ולכן אינו להשאיל עוצמה כמו גם אל בפיתוח התרופה. המודל חסימה של העורקים הכליליים, אולם, באופן ישיר יותר המדמה את ההיבטים pathophysiologic של פתולוגיה MI, ובכך עשויה לספק תובנות מועילות יותר לתוך המנגנונים שעשויים לחול על קידום טיפולי לשימוש בבני אדם. קשירת כלילית כירורגי נעשה שימוש כטכניקה ניסיוני שימושי במודלים של חיות רבות 12-14. בשנת מודל הקשירה כלילית עורק המבוגרים, בעלי חיים מורדמים חובר לצינור לאפשר פתיחת בית החזה תוך שמירת respiratiעַל. הלב ממשיך לפעום באופן סדיר, המתיר ההדמיה של כלי הדם הכליליים ומאפשר עבור מיקום תפר מדויק. יתר על כן, הלב נשאר ורוד כמו זלוף ממשיך, ואחרי קשירת שריר לב איסכמי מופיע חיוור, המציין קשירת עורקים כלילית מוצלחת. הפרוטוקול המתואר לעכברים ילודים, אולם הוא פחות אמין כמו העורקים כליליים לא דמיינו והמנתח חייב להעריך היכן למקם את התפר 15. למרות האנטומיה כללית של כלי הדם הכליליים זהה, השתנות חיה הפרט בכיוון הסתעפות של LAD קיים 16. לפיכך, כאשר &quot;הולך עיוור,&quot; העורק יכול בקלות לפספס. טכניקות אחרות כגון אקו הם מכן נדרשו לאשר אינדוקציה מוצלחת של MI, ועל מנת להבטיח את כל הניתוחים לגרום גודל אוטם דומה. המתואר כאן הוא שיפור על שיטה שפורסמו לאחרונה 15, שם עמדת LAD ניתן established ובכך LAD ניתן ligated לגרום MI reproducibly. טכניקה זו אינה דורשת אינטובציה endotracheal או אוורור מכני, כמו פתיחת בית החזה במצב היפותרמיה בתוך העכבר הילוד לא לגרום לקריסת הריאות. עם זאת, בשיטה שתוארה לעיל, היפותרמיה חמורה חייבת להיגרם עד לנקודה של שני להשלים דום נשימה והפסקה של קצב לב 15. המגבלה העיקרית של גישה זו היא כי העורק הכלילי הוא perfused כבר לא והלב מופיע חיוור עוד לפני קשירת LAD. לפי הגישה המתוארת כאן, ויזואליזציה עורק כלילי אפשרי בנקודה של קהות חושים לפני היפותרמיה עמוק והפסקת קצב לב, עם החלמה מלאה של העכבר בילוד לאחר הניתוח. שיטה זו מציעה יתרון גדול של שחזור 100%.

<table><tbody><tr><td>8-0 Nylon Suture</td><td>Microsurgery Instruments</td><td>8-0 Nylon</td><td></td></tr><tr><td>11-0 Nylon Suture</td><td>Shanghai Pudong Medical Products Co Ltd</td><td>H1101</td><td></td></tr><tr><td>Fine Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Small forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>Micro Needle Holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-02</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Opmi 6s/S3 Microscope</td><td>Zeiss</td><td>300002</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>CA2L9100</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane Chamber</td><td>Made in Feng laboratory</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bead Sterilizer</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-Triphenyltetraolium chloride (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope SteREO Discovery. V8</td><td>Zeiss</td><td>435400</td><td></td></tr><tr><td>AxioVision 8.0</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiocam Icc5</td><td>Zeiss</td><td>426554</td><td></td></tr><tr><td>Heat pad</td><td>Sunbeam&amp;nbsp;</td><td>731A0-CN</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Gloves</td><td>VWR</td><td>414004-430</td><td></td></tr><tr><td>Gauze Sponges</td><td>Ducare</td><td>90212</td><td></td></tr><tr><td>Ice</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound imaging system, Vevo2100</td><td>Visual Sonics</td><td>VEVO2100</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasound transducer, 40 MHz</td><td>Visual Sonics</td><td>MS400</td><td></td></tr></tbody></table>

myocardial infarction in neonatal mice, a model of cardiac regeneration

אוטם שריר לב הנגרמת על ידי קשירת עורקים כלילית נעשה שימוש במודלים של בעלי חיים רבים ככלי ללמוד את המכניזם של תיקון לב והתחדשות, ולהגדיר מטרות חדשות עבור רפוי. במשך עשרות שנים, מודלים של התחדשות לב מלאה קיימים דו-חיים ודגים, אבל עמיתו יונק לא היה זמין. התגלית האחרונה של חלון לאחר לידה שבמהלכה עכברים בעלי יכולות משובים הובילה להקמת מודל יונק של התחדשות לב. מודל כירורגית של התחדשות לב יונקת העכבר בילוד מוצג במסמך זה. בקצרה, היום לאחר לידה 1 (P1) בעכברים מורדמים על ידי isoflurane והניחו על כרית קרח כדי לגרום היפותרמיה. לאחר החזה נפתח, ואת השמאלי הקדמי היורד לב כלילי (LAD) הוא מדמיין, תפר ממוקם סביב LAD לגרום איסכמיה לבבית בחדר השמאלי. ההליך הכירורגי לוקח 10-15 דקות. לדמיין את העורקים הכליליים הואחיוני עבור מיקום ואת שחזור תפר מדויק. אוטם שריר הלב וחוסר תפקוד הלב יאושרו על ידי כלוריד triphenyl-tetrazolium (TTC) מכתים אקוקרדיוגרפיה, בהתאמה. התחדשות מלאה 21 ימים לאחר אוטם שריר לב מאומת על ידי היסטולוגיה. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי ככלי להבהיר מנגנונים של התחדשות לב יונקת לאחר אוטם שריר לב.

ההליך אוטם שריר הלב בבית P1 יכול להסתיים בתוך כ -10 - 15 דקות ויש לו שיעור תמותה של 7.8% (5 מתוך 64 גורים). לאחר ניתוח, עכברים להתאושש מן ההרדמה היפותרמיה בתוך 5 הבאות - 20 הדקות (זמן החלמה תלוי טמפרטורת גוף הגיע במהלך הרדמה ומהירות המנתח). בעת שימוש גורי P7 (להשווא...

Watch this Scientific Journal Video about Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration at JoVE.com

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

This protocol describes a highly reproducible model of cardiac regeneration by surgical induction of myocardial infarction in the left ventricle of postnatal day 1 mice. The method involves induction of hypothermic anesthesia and ligation of the left anterior descending coronary artery.

אוטם שריר לב עכברים ילודים, מודל התחדשות לב

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

myocardial-infarction-in-neonatal-mice-a-model-of-cardiac-regeneration

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

18.3K Views.  Western University. This protocol describes a highly reproducible model of cardiac regeneration by surgical induction of myocardial infarction in the left ventricle of postnatal day 1 mice. The method involves induction of hypothermic anesthesia and ligation of the left anterior descending coronary artery.

Video: Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

Transplantation of Neonatal Mouse Cardiac Macrophages into Adult Mice

In an injured neonatal myocardium, macrophages facilitate cardiomyocyte proliferation and angiogenesis and promote heart regeneration. The present study reveals that transplantation of neonatal cardiac macrophages recruited by injury promotes adult heart regeneration after myocardial infarction with improvement of cardiac function and cardiomyocyte proliferation. The results indicate that neonatal cardiac macrophage transplantation could be a promising strategy for cardiac injury treatment. Here, we provide the technical details, including the isolation of neonatal cardiac macrophages from apical resection-injured neonatal mouse hearts, the transplantation of macrophages into myocardial-infarcted adult mice, and the estimation of heart regeneration after a macrophage graft.

We provide a protocol for neonatal cardiac macrophage separation and transplantation into an adult mouse heart, which could be a promising way to promote cardiac repair.

השתלת מקרופאגים לב של עכבר יילודים בעכברים בוגרים

In an injured neonatal myocardium, macrophages facilitate cardiomyocyte proliferation and angiogenesis and promote heart regeneration. The present study ...

Biochemistry

Capturing the Cardiac Injury Response of Targeted Cell Populations via Cleared Heart Three-Dimensional Imaging

Cardiovascular disease outranks all other causes of death and is responsible for a staggering 31% of mortalities worldwide. This disease manifests in cardiac injury, primarily in the form of an acute myocardial infarction. With little resilience following injury, the once healthy cardiac tissue will be replaced by fibrous, non-contractile scar tissue and often be a prelude to heart failure. To identify novel treatment options in regenerative medicine, research has focused on vertebrates with innate regenerative capabilities. One such model organism is the neonatal mouse, which responds to cardiac injury with robust myocardial regeneration. In order to induce an injury in the neonatal mouse that is clinically relevant, we have developed a surgery to occlude the left anterior descending artery (LAD), mirroring a myocardial infarction triggered by atherosclerosis in the human heart. When matched with the technology to track changes both within cardiomyocytes and non-myocyte populations, this model provides us with a platform to identify the mechanisms that guide heart regeneration. Gaining insight into changes in cardiac cell populations following injury once relied heavily on methods such as tissue sectioning and histological examination, which are limited to two-dimensional analysis and often damage the tissue in the process. Moreover, these methods lack the ability to trace changes in cell lineages, instead providing merely a snapshot of the injury response. Here, we describe how technologically advanced methods in lineage tracing models, whole organ clearing, and three-dimensional (3D) whole-mount microscopy can be used to elucidate mechanisms of cardiac repair. With our protocol for neonatal mouse myocardial infarction surgery, tissue clearing, and 3D whole organ imaging, the complex pathways that induce cardiomyocyte proliferation can be unraveled, revealing novel therapeutic targets for cardiac regeneration.

Cardiomyocyte proliferation following injury is a dynamic process that requires a symphony of extracellular cues from non-myocyte cell populations. Utilizing lineage tracing, passive CLARITY, and three-dimensional whole-mount confocal microscopy techniques, we can analyze the influence of a variety of cell types on cardiac repair and regeneration.

לכידת תגובת פגיעה לב של אוכלוסיות תאים ממוקדות באמצעות לב נקי תלת מימדי הדמיה

Cardiovascular disease outranks all other causes of death and is responsible for a staggering 31% of mortalities worldwide. This disease manifests in ...

Developmental Biology

Clonal Analysis of the Neonatal Mouse Heart using Nearest Neighbor Modeling

By replacing lost or dysfunctional myocardium, tissue regeneration is a promising approach to treat heart failure. However, the challenge of detecting bona fide heart regeneration limits the validation of potential regenerative factors. One method to detect new cardiomyocytes is multicolor lineage tracing with clonal analysis. Clonal analysis experiments can be difficult to undertake, because labeling conditions that are too sparse lack sensitivity for rare events such as cardiomyocyte proliferation, and diffuse labeling limits the ability to resolve clones. Presented here is a protocol to undertake clonal analysis of the neonatal mouse heart by using statistical modeling of nearest neighbor distributions to resolve cardiomyocyte clones. This approach enables resolution of clones over a range of labeling conditions and provides a robust analytical approach for quantifying cardiomyocyte proliferation and regeneration. This protocol can be adapted to other tissues and can be broadly used to study tissue regeneration.

Presented here is a protocol for using multicolor lineage tracing and nearest-neighbor modeling to identify clonally derived cardiomyocytes during growth and regeneration in mice. This approach is objective, works across different labeling conditions, and can be adapted to incorporate a variety of image analysis pipelines.

By replacing lost or dysfunctional myocardium, tissue regeneration is a promising approach to treat heart failure. However, the challenge of detecting ...

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring cardiomyocytes lost due to injury and disease. In contrast to the robust cardiac regeneration of certain lower vertebrates, adult mammalian hearts typically show minimal capacity for heart regeneration and repair. However, recent studies have sparked considerable scientific interest with the finding that, between postnatal day 1 to 7 (P1 to P7), the neonatal mouse heart retains significant regenerative potential after apical resection (i.e., surgical amputation and exposure of left ventricular apex). One major controversy over this finding might be due to the diverse surgery-related procedures used in efforts to replicate or expand upon this important finding. These instructions dynamically present the materials and methodology for apical resection in a mouse model. The salient steps of this rodent survival surgery involve hypothermia anesthesia, thoracotomy, surgical amputation of heart ventricular apex, and suture and recovery of mice. The approach described could expand the application of the apical resection mouse model for cardiovascular research.

A step-by-step video protocol of apical resection is demonstrated in this study. Apical resection is a recently highlighted surgical approach in mammalian heart regeneration research. This study may promote the application of apical resection as a standard methodology in research into the mechanism underlying heart regeneration.

דגם פסגת כריתת עכבר כדי ללמוד התחדשות לב יונקים מוקדמת

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

Transplantation of a 3D Bioprinted Patch in a Murine Model of Myocardial Infarction

Testing regenerative properties of 3D bioprinted cardiac patches in vivo using murine models of heart failure via permanent left anterior descending (LAD) ligation is a challenging procedure and has a high mortality rate due to its nature. We developed a method to consistently transplant bioprinted patches of cells and hydrogels onto the epicardium of an infarcted mouse heart to test their regenerative properties in a robust and feasible way. First, a deeply anesthetized mouse is carefully intubated and ventilated. Following left lateral thoracotomy (surgical opening of the chest), the exposed LAD is permanently ligated and the bioprinted patch transplanted onto the epicardium. The mouse quickly recovers from the procedure after chest closure. The advantages of this robust and quick approach include a predicted 28-day mortality rate of up to 30% (lower than the 44% reported by other studies using a similar model of permanent LAD ligation in mice). Moreover, the approach described in this protocol is versatile and could be adapted to test bioprinted patches using different cell types or hydrogels where high numbers of animals are needed to optimally power studies. Overall, we present this as an advantageous approach which may change preclinical testing in future studies for the field of cardiac regeneration and tissue engineering.

This protocol aims to transplant a 3D bioprinted patch onto the epicardium of infarcted mice modeling heart failure. It includes details regarding anesthesia, the surgical chest opening, permanent ligation of the left anterior descending (LAD) coronary artery and application of a bioprinted patch onto the infarcted area of the heart.

השתלה של תיקון ביו-מודפס בתלת מיתד במודל מורין של אוטם שריר הלב

Testing regenerative properties of 3D bioprinted cardiac patches in vivo using murine models of heart failure via permanent left anterior descending (LAD) ...

Bioengineering

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we demonstrate a murine cryoinjury infarct model that generates precise infarct sizes with high reproducibility and replicability. In brief, after intubation and sternotomy of the animal, the heart is lifted from the thorax. The probe of a handheld liquid nitrogen delivery system is applied onto the myocardial wall to induce cryoinjury. Impaired ventricular function and electrical conduction can be monitored with echocardiography or optical mapping. Transmural myocardial remodeling of the infarcted area is characterized by collagen deposition and loss of cardiomyocytes. Compared to other models (e.g., LAD-ligation), this model utilizes a handheld liquid nitrogen delivery system to generate more uniform infarct sizes.

This article demonstrates a model to study cardiac remodeling after myocardial cryoinjury in mice.

מודל לפציעה בהקפאה לחקור אוטם שריר הלב בעכבר

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of heart reflow and induce secondary myocardial injury. A simple and reproducible model of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury is a good tool for researchers. Here, a customizable method to create a myocardial infarction (MI) model and MIRI by precision ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD) through micromanipulation is described. Accurate and reproducible ligature positioning of the LAD helps obtain consistent results for heart injury. ST-segment changes can help to identify model accuracy. The serum level of cardiac troponin T (cTnT) is used to assess the myocardial injury, cardiac ultrasound is employed to evaluate the myocardial systolic function, and Evans-Blue/triphenyl tetrazolium chloride staining is used to measure infarct size. In general, this protocol reduces procedure duration, ensures controllable infarct size, and improves mouse survival.

Here we describe a simple and reproducible method that can induce myocardial infarction or myocardial ischemia-reperfusion injury in mice by precision ligation of the left anterior descending coronary artery through micromanipulation.

השראת אוטם שריר הלב ופגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

Modified Technique for the Use of Neonatal Murine Hearts in the Langendorff Preparation

The use of the ex-vivo retrograde perfused heart has long been a cornerstone of ischemia-reperfusion investigation since its development by Oskar Langendorff over a century ago. Although this technique has been applied to mice over the last 25 years, its use in this species has been limited to adult animals. Development of a successful method to consistently cannulate the neonatal murine aorta would allow for the systematic study of the isolated retrograde perfused heart during a critical period of cardiac development in a genetically modifiable and low-cost species. Modification of the Langendorff preparation enables cannulation and establishment of reperfusion in the neonatal murine heart while minimizing ischemic time. Optimization requires a two-person technique to permit successful cannulation of the newborn mouse aorta using a dissecting microscope and a modified commercially available needle. The use of this approach will reliably establish retrograde perfusion within 3 min. Because the fragility of the neonatal mouse heart and ventricular cavity size prevents direct measurement of intraventricular pressure generated using a balloon, use of a force transducer connected by a suture to the apex of the left ventricle to quantify longitudinal contractile tension is necessary. This method allows investigators to successfully establish an isolated constant-flow retrograde-perfused newborn murine heart preparation, permitting the study of developmental cardiac biology in an ex-vivo manner. Importantly, this model will be a powerful tool to investigate the physiological and pharmacological responses to ischemia-reperfusion in the neonatal heart.

The present protocol describes aortic cannulation and retrograde perfusion of the ex-vivo neonatal murine heart. A two-person strategy, using a dissecting microscope and a blunted small gauge needle, permits reliable cannulation. Quantification of longitudinal contractile tension is achieved using a force transducer connected to the apex of the left ventricle.

טכניקה שונה לשימוש בלבבות מורין יילודים בהכנת לנגנדורף

The use of the ex-vivo retrograde perfused heart has long been a cornerstone of ischemia-reperfusion investigation since its development by Oskar ...

An Experimental Model of Myocardial Infarction for Studying Cardiac Repair and Remodeling in Knockout Mice

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of death in Western countries, with acute myocardial infarction (MI) being the most prevalent form. This paper describes a protocol for studying the role of galectin 3 (Gal-3) in the temporal evolution of cardiac healing and remodeling in an experimental animal model of MI. 
The procedures described include an experimental model of MI with a permanent coronary ligature in male C57BL/6J (control) and Gal-3 knockout (KO) mice, an echocardiography procedure to study cardiac remodeling and systolic function in vivo, a histological evaluation of interstitial myocardial fibrosis with picrosirius red-stained and rhodamine-conjugated lectin-stained sections for studying myocyte hypertrophy by the cross-sectional area (MCSA), and the quantification of infarct size and cardiac remodeling (scar thinning, septum thickness, and expansion index) by planimetry in slices stained with Masson's trichrome and triphenyl tetrazolium chloride. Gal-3 KO mice with MI showed disrupted cardiac remodeling and an increase in the scar thinning ratio and the expansion index. At the onset of MI, myocardial function and cardiac remodeling were also severely affected. At 4 weeks post MI, the natural evolution of fibrosis in infarcted Gal-3 KO mice was also affected. 
In summary, the experimental model of MI is a suitable model for studying the temporal evolution of cardiac repair and remodeling in mice with the genetic deletion of Gal-3 and other animal models. The lack of Gal-3 affects the dynamics of cardiac repair and disrupts the evolution of cardiac remodeling and function after MI.

Here, we describe an experimental model of myocardial infarction, an echocardiography procedure to study cardiac remodeling and function, and procedures for quantifying fibrosis and hypertrophy in picrosirius red-stained and rhodamine-stained sections, as well as the infarct size and expansion index in slices stained with Masson's trichrome.

Cardiovascular disease is the most prevalent cause of death in Western countries, with acute myocardial infarction (MI) being the most prevalent form. ...