Funding for the production of this manuscript was provided by Nottingham Trent University. The authors wish to thank the University yard manager, Anna Gregory for the use of her horses and provision of fecal samples for use in the protocol. Thanks also to Chester Zoo Wildlife Endocrinology Laboratory for use of their facilities.

הצהרה אתיקה: הנהלים הקשורים בנושאים הדגימה ובעלי חיים בשדה אושרו על ידי בית הספר Animal, כפרי ואיכות הסביבה מדע (ARES) ב נוטינגהאם טרנט האוניברסיטה. 1. איסוף של דגימות צואה הערה: יש ללבוש כפפות בעת טיפול דגימות צואה, מתנול. אם קיים חשד כבד כי חיה יכול להיות סובל ממחלה zoonotic, ביגוד מגן כגון חלוק מעבדה צריך גם להיות משוחק. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף את דגימות צואה בהקדם האפשרי (בתוך דקות עד מספר שעות) לאחר עשיית צרכים ולהכניס אותם לתוך שקית מדגם. להימשך בין שלוש לחמש subsamples של כל מדגם חירבן במשקל כולל של כ -10 גרם. לייבל את השקית עם השעה והתאריך של אוסף, מזהה הפרט, ולהקפיא המדגם ב -20 ° C עד הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למזער שגיאות, להקפיא את כל הדגימות ב -20 מעלות צלזיוס עד המחקר הושלם ואז אוסף את הדגימות יחד לניתוח כקבוצה אחת. &lt;/ Li&gt; </ol> 2. הפקת הורמון צואה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו את דגימות צואה להפשיר ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי דגימות הומוגני ידי ערבוב כל דגימה ידנית בתיק מדגם משלו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל דגימה שוקלת 0.50 (± 0.003 גרם) של חומר צואתי על microbalance בסירה לשקול מכן להעביר את הצואה כדי בקבוקון זכוכית 8 מיליליטר. השתמש בסירה לשקול חדשה עבור כל דגימה ולנקות פינצטה עם מתנול 30% בין כל דגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים את 0.5 גרם של חומר צואתי עם 5 מ&quot;ל של 90% מתנול: מים, ולנער O / N על שייקר מסלולית ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת בבוקר, מערבולת המדגם ולאחר מכן צנטריפוגות במשך 20 דקות ב 600 גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזוג את שבר מתנול לתוך צינור זכוכית 16 x 125 מ&quot;מ 2 ומניחים מתלים באמבט מים על טמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. להתאדות כדי יובש באמצעות אוויר בתוך ארון קטר. יש לשטוף את בקבוקון החילוץ ומניח גלולת הצואה הנותרת לתוך שקית פסולת קלינית לסילוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re- להשעות את תמציות צואתי ב 100%, 1 מ&quot;ל מתנול להעביר צינור פוליפרופילן 12 x 75 מ&quot;מ 2. מיד כובע ולאחסן ב -20 ° C עד הניתוח. </li></ol> 3. ניתוח הורמון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את הניתוח עם-immunoassay מקושר האנזים (EIA) באמצעות antiserum CJM006 corticosterone polyclonal. הערה:. EIA השני נבדק (antiserum קורטיזול R4866, אבל זה לא הצליחה להשיג את שלב האימות ביוכימיים (ראה סעיף 4.1) את antiserum Polyclonal corticosterone CJM006 ו antiserum קורטיזול R4866 ואת בהתאמה HRP של מסופקים על ידי CJ מונרו, אוניברסיטת קליפורניה, דיוויס, קליפורניה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את antiserum ב 1: 15,000 חיץ ציפוי (0.05 מ &#39;NaHCO3, pH 9.6) בעזרת פיפטה חוזרות קצה פיפטה 50 μl, לטעון צלחת microtitre 96-היטב עם 50 μl / היטב. מכסים את הצלחת עם אוטם צלחת דגירה O / N ב 4 ° C. השאר שתי בארות ללא ציפוי לייצג את בארות מחייב הלא ספציפיות (NSB). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לפני המריחה יש לשטוף את צלחות microtitre חמש פעמים באמצעות מכונת כביסת צלחת microtitre אוטומטית (פתרון לשטוף; 0.15 M NaCl, 0.05% Tween 20). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את צלחות עם 50 μl לכל טוב עבור NSB של ו &#39;אפס&#39; בארות [חיץ EIA (0.1 M 4 Napo, 0.149 M NaCl, 0.1% בסרום שור אלבומין, pH 7.0) רק], תקנים (corticosterone, 3.9 - 1,000 pg / כן) או לחלץ דגימות צואה (מדולל כראוי בשעה 1:20 חיץ EIA, ראה סעיף 4.1). לתקני אפסים צריכים לרוץ בשלושה עותקים ארבעה פעמים, בהתאמה. מדוללים לחלץ דגימות צואה NSB של צריכות להתנהל בשני עותקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את זה מיד עם תוספת של 50 μl / טוב של ᵻ המצומד peroxidase תווית חזרת מדולל במאגר EIA עד 1: 70,000. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה צלחות microtitre בחושך במשך שעה 2 ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את צלחות microtitre עם פתרון לשטוף 5 פעמים דגירה צלחות ב RT בחושך עם 100 μl / well של המצע RT [0.4 מ&quot;מ 2,2&#39;-azino-דוּ (חומצה sulfonic 3-ethylbenzthiazoline) מלח diammonium, 1.6 מ&quot;מ H 2 O 2, 0.05 מ &#39;ציטראט, pH 4.0]. מכינים את המצע מיד לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש spectrophometer באורך גל של 405 ננומטר כדי לקרוא את לוחית microtitre. דגירה של צלחות נחשבת להשלים כאשר הצפיפות האופטית של אפס הבארות מגיעה 0.8 1.0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להבטיח את הדירות, השתמש שולטת [סטנדרטים EIA או דגימה ביולוגית מדולל במאגר EIA להיקשר בכ 30% (תקן EIA), 50% (א למשל דגימה ביולוגית, מאגר של תמצית המקומי סוס צואה) ו -70% (תקן EIA) ] להפגין מקדמי תוך-assay יתר של וריאציה של &lt;10% ו- &lt;15% בהתאמה. </li></ol> 4. אנזימים צמוד immunoassay: תיקוף של מיני הלימוד והמין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אימות ביוכימיים (מקביליות) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות חיץ EIA, לבצע דילול סדר על ותקווה צואה נוספתct, אידיאלי שנלקחו דגימות ריכוז הורמון גבוהות ונמוכות חשד מכמה אנשים (טווח: מסודר, 1: 2 עד 1: 8192) ולהפעיל על EIA כמפורט בסעיף 3. הערה: הקבלה נחשבת מושגת כאשר דילולי סדרה של תמציות צואה להניב במקביל עקום עקירה לתוצאות רגרסיה העקומה ולינארית התקן להפגין R2&gt; 0.90, מדרון&gt; 0.50 ו- p &lt;0.05. התמצה הצואה המדוללת סדרה שקושר סביב 50% על עקומת הסטנדרט יש לשקול דילול האידיאלי כדי להפעיל את כל התמציות בצואה (למשל, 1:20). אין הפרעה נחשב על assay כשתוצאות רגרסיה ליניארית להפגין R2&gt; 0.90 ו- p &lt;0.05. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אימות ביוכימיים (התאבכות) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספייק 200 μl של סטנדרטים בדילול סדרתי (אפס, 3.9 כדי 1000 ng / טוב corticosterone) עם 200 μl של תמצית צואה בדילול ונקווה כראוי [מדולל ב 50% כריכת שקבע paralleliSM (1:20)] ולהפעיל על EIA כמו בסעיף 3. בעקבות עלילת ניתוח EIA הריכוז שנצפה מינוס ברקע (הריכוז של המדגם אפס) לעומת הריכוז הצפוי. הערה: אם תוספת של תמצית צואה ונקווה בדילול לתקנים לא לשנות באופן משמעותי את הסכום הצפוי ולינארית תוצאות רגרסיה מניב R 2&gt; 0.90, מדרון קרוב ל -1.0 ו- p &lt;0.05. אין התערבות עם EIA הושגה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אימות ביולוגיות: הערה: הפגנה כי EIA נבחר יש את היכולת למדוד שינויים רלוונטיים הביולוגי של הורמון עניין [למשל, העלייה הריכוזית בסטרואידים בעקבות תרופתי (ACTH היא בדרך כלל הליך מורשה) או אתגר ביולוגי (למשל, פסיכולוגיים ו / או סביבתי; סיכוי גבוה יותר להיות אירוע מוסדר אופורטוניסטים)]. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר, לחלץ ולנתח דגימות צואה לריכוזי המטבוליט בסטרואידיםבאמצעות התהליך המפורטים בסעיפים 1 - 3 לפני ואחרי אירוע מאתגר. הערה: אירוע מאתגר יהיה מינים ספציפיים. שיטה למשל מוצגת להלן הסוס המקומי. דוגמאות מלאות של אירועים מאתגרים לסוסים פורסמו בעבר כולל שימוש פרוצדורות ניהול 9 ו בעלי 16. עלייה משמעותית בריכוז המטבוליט בסטרואידים בעקבות האירוע המאתגר יש להקפיד ואשרה באמצעות ניתוח סטטיסטי. זה חייב לשלב במידת צורך, את ההשפעה של מדידות חוזרות, תאריך מדגם בודד. אימות ביולוגית נחשבה אז מושגת. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Morm&#232;de, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploration+of+the+hypothalamic-pituitary-adrenal+function+as+a+tool+to+evaluate+animal+welfare.">Exploration of the hypothalamic-pituitary-adrenal function as a tool to evaluate animal welfare.</a> Physiology and Behaviour. 92 (3), 317-339 (2007).</li><li>Lane, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+non-invasive+glucocorticoid+measures+be+used+as+reliable+indicators+of+stress+in+animals?.">Can non-invasive glucocorticoid measures be used as reliable indicators of stress in animals?.</a> Animal Welfare. 15 (4), 331-342 (2006).</li><li>Morgan, K. N., Tromborg, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sources+of+stress+in+captivity.">Sources of stress in captivity.</a> Applied Animal Behaviour Science. 102, 262-302 (2007).</li><li>Nelson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> An introduction to behavioural endocrinology (3rd Ed). , 670-671 (2005).</li><li>Sapolsky, R. M., Romero, L. M., Munck, A. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Do+Glucocorticoids+Influence+Stress+Responses?+Integrating+Permissive,+Suppressive,+Stimulatory,+and+Preparative+Actions.">How Do Glucocorticoids Influence Stress Responses? Integrating Permissive, Suppressive, Stimulatory, and Preparative Actions.</a> Endocrine Reviews. 21 (1), 55-89 (2000).</li><li>Macdonald, K. M., Macdonald, I. A., Bokkenheuser, V. D., Winter, J., McLernon, A. M., Mosbach, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation+of+steroids+in+the+human+gut.">Degradation of steroids in the human gut.</a> Journal of Lipid Research. 24, 675-700 (1983).</li><li>Young, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+monitoring+of+adrenocortical+activity+in+carnivores+by+fecal+glucocorticoid+analysis.">Non-invasive monitoring of adrenocortical activity in carnivores by fecal glucocorticoid analysis.</a> General and Comparative Endocrinology. 137, 148-165 (2004).</li><li>Merl, S., Scherzer, S., Palme, R., Mostl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+causes+increased+concentrations+of+glucocorticoid+metabolites+in+horse+faeces.">Pain causes increased concentrations of glucocorticoid metabolites in horse faeces.</a> Journal of Equine Veterinary Science. 20, 586-590 (2000).</li><li>Yarnell, K., Hall, C., Royle, C., Walker, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Domesticated+horses+differ+in+their+behavioural+and+physiological+responses+to+isolated+and+group+housing.">Domesticated horses differ in their behavioural and physiological responses to isolated and group housing.</a> Physiology and Behaviour. 143, 51-57 (2015).</li><li>Wielebnowski, N., Watters, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+fecal+endocrine+monitoring+to+conservation+and+behaviour+studies+of+wild+mammals:+important+considerations+and+preliminary+tests.">Applying fecal endocrine monitoring to conservation and behaviour studies of wild mammals: important considerations and preliminary tests.</a> Israel journal of ecology and evolution. 53, 439-460 (2007).</li><li>Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+fecal+steroids:+guidelines+for+a+practical+application.">Measuring fecal steroids: guidelines for a practical application.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 75-80 (2005).</li><li>Uden, P., Rounsaville, G. R., Wiggans, G. R., Van Soest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+measurement+of+liquid+and+solid+digesta+retention+in+ruminants,+equines+and+rabbits+given+timothy+hay.">The measurement of liquid and solid digesta retention in ruminants, equines and rabbits given timothy hay.</a> British Journal of Nutrition. 48, 329-339 (1982).</li><li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+monitoring+of+hormones+in+bird+droppings:+biological+validations,+sampling,+extraction,+sex+differences+and+the+influence+of+diet+on+hormone+metabolite+levels.">Non-invasive monitoring of hormones in bird droppings: biological validations, sampling, extraction, sex differences and the influence of diet on hormone metabolite levels.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 35-53 (2005).</li><li>Touma, C., sachser, N., Mostl, E., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sex+and+time+of+day+on+metabolism+and+excretion+of+corticosterone+in+urine+and+feces+of+mice.">Effects of sex and time of day on metabolism and excretion of corticosterone in urine and feces of mice.</a> General and comparative Endocrinology. 130, 267-278 (2003).</li><li>Rattenbacher, S., Mostl, E., Hackl, R., Ghareeb, K., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+corticosterone+metabolites+in+chicken+droppings.">Measurement of corticosterone metabolites in chicken droppings.</a> British Poultry Science. 45, 704-711 (2004).</li><li>Yarnell, K., Hall, C., Billett, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assessment+of+the+aversive+nature+of+an+animal+management+procedure+using+behavioural+and+physiological+measures.">An assessment of the aversive nature of an animal management procedure using behavioural and physiological measures.</a> Physiology &amp; Behaviour. 118, 32-39 (2013).</li><li>Goymann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+use+of+non-invasive+hormone+research+in+uncontrolled,+natural+environments:+the+problem+with+sex,+diet,+metabolic+rate+and+the+individual.">On the use of non-invasive hormone research in uncontrolled, natural environments: the problem with sex, diet, metabolic rate and the individual.</a> Methods in Ecology and Evolution. 3, 757-765 (2012).</li><li>Sheriff, M. J., Dantzer, B., Delehanty, B., Palme, R., Boonstra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+stress+in+wildlife:+techniques+for+quantifying+glucocorticoids.">Measuring stress in wildlife: techniques for quantifying glucocorticoids.</a> Oecologia. 166, 614-619 (2011).</li><li>Watson, R., Munro, C. J., Edwards, K. L., Norton, V., Brown, J. L., Walker, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+versatile+enzyme+immunoassay+for+non-invasive+assessment+of+glucocorticoid+metabolites+in+a+diversity+of+taxonomic+species.">Development of a versatile enzyme immunoassay for non-invasive assessment of glucocorticoid metabolites in a diversity of taxonomic species.</a> General Comparative Endocrinology. 186, 16-24 (2013).</li><li>Touma, C., Palme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+fecal+glucocorticoid+metabolites+in+mammals+and+birds:+the+importance+of+validation.">Measuring fecal glucocorticoid metabolites in mammals and birds: the importance of validation.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1046, 54-74 (2005).</li><li>Millspaugh, J. J., Washburn, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+fecal+glucocorticoid+metabolite+measures+in+conservation+biology+research:+considerations+for+application+and+interpretation.">Use of fecal glucocorticoid metabolite measures in conservation biology research: considerations for application and interpretation.</a> General and Comparative Endocrinology. 138, 189-199 (2004).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

ניתוח corticosterone צואה מספק אמצעי להערכת דפוסים לטווח ארוך של פעילות כליה בסוסים. האופי הלא-פולשני של השיטה מתגבר על תופעות בלבול של שיטות דגימה אחרות המשמשות כדי להעריך את פעילות כליה כוללים ניתוח רוק פלזמה 9. בנוסף הטכניקה יש יתרון לא פולשנית ברורה אם לומדים סוסי?...

המטרות תארו השיטה לנתח ריכוזי corticosterone בצואת סוסים כדי לספק הערכה לא פולשנית של פעילות כליה. מדידת ההיפותלמוס-היפופיזה-אדרנל (HPA) פעילות ציר היא גישה מקובלת ללמוד התגובה למצבים מרתיעים פוטנציאל בשני מיני בשבי ומקומיים. טכניקת התייחסות השיטה הנפוצה ביותר היא השימוש פלזמת דם 1 עם זאת, שיטות חלופיות כגון ניתוח צואה פותחו כדי להתגבר על הלחץ הנגרם על ידי לקיחת דמים עצמו ולאפשר את היכולת לפקח מינים הנעים בחינם. במהלך מצב מרתיע, הומאוסטזיס פיסיולוגי מופר. ההיפותלמוס ב המוח משחרר corticotrophin משחררים הורמון (CRH) אשר פועלת על בלוטת יותרת המוח הקדמית ומעורר שחרור הורמון אדרנוקורטיקוטרופי (ACTH). ACTH נכנס לזרם הדם ומעורר את קליפת יותרת הכליה להפריש מצלצליםזה גלוקוקורטיקואידים ספציפיים (GC). Glucocorticoids מתקיים קשר הדוק לאירועים מלחיצים ולא שיופק באופן עקבי בכל המדינות מוגברות האנרגיה ולכן הם נמדדים לעתים קרובות עדיפים על פני הורמונים צמודי מתח אחרים 2. Glucocorticoids אחראי מספר השפעות אדפטיבית בסוסים. אנרגיה מגויסת במהירות מאתרי אחסון בגוף בצורה של חומצות שומן וגלוקוז, צריכת חמצן מוגברת, תפקוד חושי הוא משופר 3 ואת זרימת דם יורדת לאזורים אין צורך לתנועה 4. כמו גם מתנהג כמו מנגנון התמודדות, עליית המתח המושרית ב Glucocorticoids עשויה גם לעזור להכין את חית הדחק הבא 5. הערכת רמות הורמוני הפלזמה ורוק כרוך מדידת ההורמון במחזור בפועל לעומת זאת, מדידת מטבוליטים אמצעי צואת המוצר הסופי המטבולית של ההורמון. סטרואידים במחזור הם catabolized ב lIver לפני ההפרשה אל המרה שם הם עוברים שינויים נוספים בהנחייתם של הפעילות אנזימטית של פלורת חיידקים בתוך מסלול מעי 6. לכן, immunoassays מכוונת גלוקוקורטיקואידים דם ואינה מתאימה לניתוח של מטבוליטים בסטרואידי צואת 7. כמו אוסף צואה יכול להתבצע ללא הפרעה אל הסוס, ניתוח ובצואה corticosterone, כבר נעשה שימוש נרחב כדי לעקוב אחר פעילות HPA בכמה נסיבות. Corticosterone הגבוהה בצואה של סוסים דווחה בתגובה למצבים מרתיעים פוטנציאל כלל במהלך טיפול וטרינרי ניתוח שלאחר 8 ו בדיור 9 מגבילים. דגימת צואה משקפת רמה בסטרואידים נקוותה לאורך זמן ולא טעם דגימת זמן המוצע על ידי פלזמה ורוק מה שהופך אותו מתאים לניטור ארוך טווח, כרוני או דפוסים עונתיים 10. בשל פולשניטבעה של השיטה, דגימות ניתן לאסוף שוב ושוב ליחיד ללא צורך ללכוד או ריסון 11. עם זאת, זמן מעבר במעי ספציפי מינים חייב להילקח בחשבון בעת ​​תכנון פרוטוקול דגימה. בסוסים, זמן מעבר במעי הוא סביב 18 שעות 12 ולכן, תגובת כלית מטבוליטים corticosterone עוקבים ניתן לאתר בצואה יום אחד לאחר הפעלה ראשונית של ציר HPA. כאשר ניצול טכניקות immunoassay פולשני אימות זהירה עבור המין הנחקרת היא 13 חיונית. בנוסף, קיימים הבדלים בין המגדרים בהפרשת הורמון המטבוליט דווחו ככל הנראה בשל הבדלים בקצב חילוף החומרים וסוג המטבוליט corticosterone מופרש מינים שונים, כולל עכברים 14, ותרנגולות 15. לכן היה חשוב כחלק בשיטה זו כי assay שקיבל תוקף לשימוש גם זכר וגם נקבה סוסים המקומי כפי מפורט הפרוטוקול הדואר. להבדל הזה במטבוליזם הורמון בין המינים השלכות על איכות הנתונים ובכל זאת לעתים רחוקות התייחס וכלל כחלק מאימות assay. שיטה לא פולשנית זו מאפשרת הערכה לטווח ארוכה של פעילות כליה בסוסים מקומיים. פרטי הפרוטוקול הוא האימות של assay ואת טכניקת assay עצמו.

<table><tbody><tr><td>Corticosterone antibody &amp;amp; HRP kit</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>No longer available through UC Davis - please see Arbor Assays</td></tr><tr><td>Cortisol antibody &amp;amp; HRP kit</td><td>Coralie Munro - UC Davis</td><td></td><td>No longer available through UC Davis - please see Arbor Assays</td></tr><tr><td>Corticosterone synthetic standard hormone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>50-23-7</td><td>Harnful if ingested or with skin contact. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Cortisol synthetic standard hormone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>15087-01-1</td><td>Harmful if ingested or with skin contact. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>67-56-1</td><td>Irritant. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>144-55-8</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Carbonate Anhydrous</td><td>Sigma Aldrich</td><td>497-19-8</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Phosphate Dibasic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7558-79-4</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Phosphate Monobasic</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10049-21-5</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9048-46-8</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>9005-64-5</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Citric Acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>77-92-9</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>ABTS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>30931-67-0</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Hydrogen Peroxide 30%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7722-84-1</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>7647-14-5</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Buffer capsules - pH 4</td><td>VWR</td><td>332732B</td><td></td></tr><tr><td>Buffer capsules - pH 7</td><td>VWR</td><td>332742D</td><td></td></tr><tr><td>Buffer capsules - pH 10</td><td>VWR</td><td>332762H</td><td></td></tr><tr><td>Hydrochloric Acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>435570</td><td>Irritant. Use in fume cupboard</td></tr><tr><td>Sodium Hydroxide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Irritant</td></tr><tr><td>Analytical balance</td><td>Fisher Scientific</td><td>BFS-525-010A</td><td></td></tr><tr><td>Air compressor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Computer +printer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>fridge-freezer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drying apparatus</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>+tubing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flammable liquid storagecabinet</td><td>VWR</td><td>649-002</td><td></td></tr><tr><td>Fume cupboard</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hot-plate stirrer</td><td>VWR</td><td>640-282</td><td></td></tr><tr><td>Microplate reader</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microplate washer</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH meter</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research&amp;reg; pipettes - multipack option 2</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 1,000 &amp;micro;l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 200 &amp;micro;l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette - 20 &amp;micro;l</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Repeater pipette</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette filler</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orbital shaker</td><td>Progen Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Hilsonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warm water bath</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water purification system</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fecal glucocorticoid analysis: non-invasive adrenal monitoring in equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

סוסים מקומיים (n = 16, 8 סוסות, 8 מסורסים) עם גיל ממוצע של 15 שנים (± 3) קובצו לפי מגדר נתון העיצובים דיור ארבעה ברמות הולכות וגדלות של בידוד חברתי (n = 4 סוסים / טיפול). שיכון 1 מעורבת סוסים חיים בסביבת עדר, מקרוב המדמה את סביבתם הטבעית. דיור 2 מעורבות סוסים חיים ?...

Watch this Scientific Journal Video about Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids at JoVE.com

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

ניתוח Glucocorticoid צואה: לא פולשני ניטור הכליה ב Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

fecal-glucocorticoid-analysis-non-invasive-adrenal-monitoring

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

9.6K Views.  Nottingham Trent University. Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

Video: Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Cortisol Measurement in Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial species, the koala (Phascolarctos cinereus), faces prolonged exposure to anthropogenic-induced stressors and assessment of chronic stress in wild populations is urgently warranted. One of the most effective ways to measure chronic stress is through analyzing the glucocorticoid hormone cortisol in hair or fur, as it supports physiological and behavioral responses. This laboratory validation study aims to test current techniques to validate an optimal hormone extraction method to be used as a non-invasive measure of cortisol in koala fur. It is recognized that using non-invasive techniques to measure stress hormones is preferred over traditional, invasive techniques due to their ideal practical and ethical standpoints. Additionally, it is comparatively easier to acquire fur from koalas than it is to acquire samples of their blood. This study used samples of koala fur acquired from the Adelaide Koala and Wildlife Hospital to run a number of hormone extraction techniques in an attempt to validate an optimal cortisol extraction method. Results showed that 100% methanol provided the most optimal solvent extraction compared to 100% ethanol or 100% isopropanol based on parallelism results. In conclusion, this method of cortisol extraction from koala fur provided a reliable non-invasive assay that could be used to study chronic stress in koalas.

Cortisol Measurement in Koala Phascolarctos cinereus Fur

We present a protocol to determine the optimal extraction solvent to measure cortisol from koala fur. The solvents used in this protocol are methanol, ethanol and isopropanol. Determining an optimal extraction solvent will aid in reliably measuring fur to determine the impact of chronic stress on koalas.

הקורטיזול מדידה קואלה (פאיסקולארקטוס cinereus) פרווה

Optimal methods of hormone extraction used to measure stress in animals across sample types are not always the same. Australia&#39;s iconic marsupial ...

Biochemistry

Cortisol Extraction from Sturgeon Fin and Jawbone Matrices

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) and quantify any differences in fin cortisol levels among three main sturgeon species. Fins were harvested from 19 sacrificed sturgeons including seven beluga (Huso huso), seven Siberian (Acipenser baerii), and five sevruga (A. stellatus). The sturgeons were raised in Iranian farms for 2 years (2017-2018), and cortisol extraction analysis was conducted in South Korea (January-February 2019). Jawbones from five H. huso were also used for cortisol extraction. Data were analyzed using the general linear model (GLM) procedure in the SAS environment. The intra- and inter-assay coefficients of variation were 14.15 and 7.70, respectively. Briefly, the cortisol extraction technique involved washing the samples (300 &#177; 10 mg) with 3 mL of solvent (ultrapure water and isopropanol) twice, rotation at 80&#160;rpm for 2.5 min, air-drying the washed samples at room temperature (22-28 &#176;C) for 7 days, further drying the samples using a bead beater at 50 Hz for 32 min and grinding them into powder, applying 1.5 mL methanol to the dried powder (75 &#177; 5 mg), and slow rotation (40 rpm) for 18 h at room temperature with continuous mixing. Following extraction, samples were centrifuged (9,500 x g for 10 min), and 1 mL supernatant was transferred into a new microcentrifuge tube (1.5 mL), incubated at 38 &#176;C to evaporate the methanol, and analyzed via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). No differences were observed in fin cortisol levels among species or in fin and jawbone cortisol levels between washing solvents. The results of this study demonstrate that the sturgeon jawbone matrix is a promising alternative stress indicator to solid matrices.

In this study, we present a protocol for cortisol extraction from the fin and jawbone of sturgeon species. Fin and jawbone cortisol levels were further examined by comparing two washing solvents followed by ELISA assays. This study piloted the feasibility of jawbone cortisol as a novel stress indicator.

מיצוי הקורטיזול של החדקן פין ואת עצם הלסת מטריצות

The aims of this study were to develop a technique for the extraction of cortisol from sturgeon fins using two washing solvents (water and isopropanol) ...

Environment

Measuring Biophysical and Psychological Stress Levels Following Visitation to Three Locations with Differing Levels of Nature

Visitation to natural environments has been linked to psychological stress reduction. Although most stress-related research has relied on self-report formats, a growing number of studies now incorporate biological stress-related hormones and catalysts, such as cortisol and &#945;-amylase, to measure levels of stress. Presented here is a protocol to examine the effects on levels of biophysical and psychological stress following visitation to three different locations with differing levels of nature. Biophysical and self-reported psychological stress levels are measured immediately upon entering the selected locations and just prior to the visitors leaving the site. Using a &#34;drool&#34;&#160;method, the biophysical measure consists of 1-2 mL samples of saliva provided by study subjects upon entry to one of three study locations. As prescribed by extant literature, the saliva is collected within a 45 minute time frame following the end of the visitor&#8217;s engagement at the location. Following saliva collection, the samples are labeled and transported to a biological lab. Cortisol is the biophysical variable of interest in this study and measured using an ELISA process with a TECAN plate reader. To measure self-reported stress, the Perceived Stress Questionnaire (PSQ), which reports levels of worry, tension, joy, and perceived demands. Data are collected at all three sites in the late afternoon through early evening. When compared across all three settings, stress levels, as measured by both the biological markers and self-reports, are significantly lower after visitation to the most natural setting.

The purpose of this paper is to identify changes in stress levels after visitation to three different settings and to describe the methods used in identifying stress levels based on measures of salivary cortisol, &#945;-amylase, and a psychological self-report instrument.&#160;

מדידת רמות המתח הביופיזיקלי והפסיכולוגית בעקבות ביקורי שלושה מיקומים בעלי רמות שונות של טבע

Visitation to natural environments has been linked to psychological stress reduction. Although most stress-related research has relied on self-report ...

Behavior

Providing Meaningful Environmental Enrichment and Measuring Saliva Cortisol in Pigs Housed on Slatted Flooring

As pork is the most consumed meat worldwide, the welfare of animals in the swine industry has increasingly become a major public concern, which imposes a substantial pressure coming from customers, legislators and other stakeholders, to make management changes to improve the well-being of these animals. Several studies have demonstrated that providing environmental enrichment to pigs allows them to express their natural behavior, such as rooting and exploring, as well as nesting prior to farrowing, and is associated with reduced stress and improved production and welfare. However, many considerations should be taken into account when providing environmental enrichment, such as the type of floor, drainage and sewage systems, the pigs&#39; stage in life, the material, as well as its hanging method, height and location within the pen. The objectives of this paper are (1) to give methodologic information on how to provide a relatively simple and practical meaningful environmental enrichment for pigs which are housed on slatted floors during the different stages of their life, and (2) to demonstrate how to collect saliva samples for the measurement of cortisol concentrations, as a biomarker for acute stress. Protocols include information regarding the use of jute, cotton ropes, straw in racks, as well as chewable silicone sticks devices as environmental enrichment in pens of farrowing and lactation, weaners and finishers. In addition, the use of cotton rope for a non-invasive saliva samples collection for cortisol concentrations analysis is detailed. The protocols provided are relevant for professionals aiming to improve and monitor animal welfare, in both research and industrial swine farming.

This protocol demonstrates how to provide practical meaningful environmental enrichment for pigs which are housed on slatted flooring during the different stages of their lives, and how to collect saliva samples in a non-invasive manner for the measurement of cortisol concentrations, as a biomarker for acute stress.

מתן העשרה סביבתיים משמעותיים ומדידת הרוק קורטיזול בחזירים שוכנו על ריצוף סלטד

As pork is the most consumed meat worldwide, the welfare of animals in the swine industry has increasingly become a major public concern, which imposes a ...

Thermal Imaging to Study Stress Non-invasively in Unrestrained Birds

Stress, a central concept in biology, describes a suite of emergency responses to challenges. Among other responses, stress leads to a change in blood flow that results in a net influx of blood to key organs and an increase in core temperature. This stress-induced hyperthermia is used to assess stress. However, measuring core temperature is invasive. As blood flow is redirected to the core, the periphery of the body can cool. This paper describes a protocol where peripheral body temperature is measured non-invasively in wild blue tits (Cyanistes caeruleus) using infrared thermography. In the field we created a set-up bringing the birds to an ideal position in front of the camera by using a baited box. The camera takes a short thermal video recording of the undisturbed bird before applying a mild stressor (closing the box and therefore capturing the bird), and the bird&#8217;s response to being trapped is recorded. The bare skin of the eye-region is the warmest area in the image. This allows an automated extraction of the maximum eye-region temperature from each image frame, followed by further steps of manual data filtering removing the most common sources of errors (motion blur, blinking). This protocol provides a time series of eye-region temperature with a fine temporal resolution that allows us to study the dynamics of the stress response non-invasively. Further work needs to demonstrate the usefulness of the method to assess stress, for instance to investigate whether eye-region temperature response is proportional to the strength of the stressor. If this can be confirmed, it will provide a valuable alternative method of stress assessment in animals and will be useful to a wide range of researchers from ecologists, conservation biologists, physiologists to animal welfare researchers.

There is a need for a non-invasive assessment of stress. This paper describes a simple protocol using thermal imaging to detect a significant response in eye-region temperature in wild blue tits to a mild acute stressor.

הדמיה תרמית לחקר מתח הלא פולשני בציפור ללא ריסון

Stress, a central concept in biology, describes a suite of emergency responses to challenges. Among other responses, stress leads to a change in blood ...

Neuroscience

A Novel Method: Super-selective Adrenal Venous Sampling

Primary aldosteronism (PA) and subclinical Cushing&#39;s syndrome (SCS) are conditions in which the adrenal glands autonomously produce excessive amounts of aldosterone and cortisol, respectively. The conventional adrenal venous sampling (cAVS) method collects blood samples from both adrenal central veins and is useful for identifying the laterality of excess hormone production in a unilateral lesion(s), as documented in PA cases. In cAVS, plasma cortisol concentrations (PCCs) are used to normalize plasma aldosterone concentrations (PACs). A novel &#34;super-selective&#34; adrenal venous sampling (ssAVS) method was developed using a micro-catheter, which collects blood samples from adrenal tributary veins (TVs). PACs in ssAVS samples do not require PCC normalization because samples contain a limited amount of systemic venous blood, if any. The ssAVS method enabled segmental lesion(s) to be detected in both adrenal glands, which may be treated by bilateral adrenalectomy, thereby sparing lesion-free segment(s). Right and left adrenals typically have three TVs each, i.e., the superior, lateral, and inferior TVs in the right adrenal as well as the superior-median, superior-lateral, and lateral TVs in the left adrenal. In the ssAVS method, specific parent catheters and a technique to handle them are required, and have been described herein. Furthermore, ssAVS results from three cases of PA are presented: bilateral aldosterone-producing adenoma (APA) (Case #1), left APA and right possible cortisol-producing adenoma causing SCS (Case #2), and idiopathic hyperaldosteronism in which bilateral adrenal segments produced excessive amounts of aldosterone (Case #3). The ssAVS method is not difficult for expert angiographers, and, thus, is recommended worldwide to treat PA cases for which cAVS does not represent a viable surgical treatment option.

&#39;Super-selective&#39; adrenal venous sampling (ssAVS, also called segmental adrenal venous sampling: sAVS)&#160;was performed using a micro-catheter to identify adrenal segment(s) that produce excessive amounts of hormones. The ssAVS technique was described, cases in which adrenal segmental lesion(s) were identified by ssAVS were presented, and the usefulness of ssAVS in future adrenal research was discussed.

שיטה: סופר-סלקטיבית האדרנל ורידים

Primary aldosteronism (PA) and subclinical Cushing&#39;s syndrome (SCS) are conditions in which the adrenal glands autonomously produce excessive amounts ...

Medicine

A Chemical Screening Procedure for Glucocorticoid Signaling with a Zebrafish Larva Luciferase Reporter System

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids can lead to severe side effects. Test systems are needed to search for novel compounds influencing glucocorticoid signaling in vivo or to determine unwanted effects of compounds on the glucocorticoid signaling pathway. We have established a transgenic zebrafish assay which allows the measurement of glucocorticoid signaling activity in vivo and in real-time, the GRIZLY assay (Glucocorticoid Responsive In vivo Zebrafish Luciferase activitY). The luciferase-based assay detects effects on glucocorticoid signaling with high sensitivity and specificity, including effects by compounds that require metabolization or affect endogenous glucocorticoid production. We present here a detailed protocol for conducting chemical screens with this assay. We describe data acquisition, normalization, and analysis, placing a focus on quality control and data visualization. The assay provides a simple, time-resolved, and quantitative readout. It can be operated as a stand-alone platform, but is also easily integrated into high-throughput screening workflows. It furthermore allows for many applications beyond chemical screening, such as environmental monitoring of endocrine disruptors or stress research.

We describe the procedure and data analysis of a chemical screening system for glucocorticoid stress hormone signaling using zebrafish larvae: the Glucocorticoid Responsive In vivo Zebrafish Luciferase activitY (GRIZLY) assay. The assay sensitively and specifically detects effects on glucocorticoid signaling by compounds that require metabolization or affect endogenous glucocorticoid production.

הליך מיון כימי לGlucocorticoid איתות עם מערכת כתב דג הזברה הזחל בלוציפראז

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and validated a method for CORT extraction and analysis from rhesus monkey hair and subsequently adapted this method for use with human scalp hair. In contrast to CORT &#34;point samples&#34; obtained from plasma or saliva, hair CORT provides an integrated measure of hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) system activity, and thus physiological stress, during the period of hormone incorporation. Because human scalp hair grows at an average rate of 1 cm/month, CORT levels obtained from hair segments several cm in length can potentially serve as a biomarker of stress experienced over a number of months.
In our method, each hair sample is first washed twice in isopropanol to remove any CORT from the outside of the hair shaft that has been deposited from sweat or sebum. After drying, the sample is ground to a fine powder to break up the hair&#39;s protein matrix and increase the surface area for extraction. CORT from the interior of the hair shaft is extracted into methanol, the methanol is evaporated, and the extract is reconstituted in assay buffer. Extracted CORT, along with standards and quality controls, is then analyzed by means of a sensitive and specific commercially available enzyme immunoassay (EIA) kit. Readout from the EIA is converted to pg CORT per mg powdered hair weight. This method has been used in our laboratory to analyze hair CORT in humans, several species of macaque monkeys, marmosets, dogs, and polar bears. Many studies both from our lab and from other research groups have demonstrated the broad applicability of hair CORT for assessing chronic stress exposure in natural as well as laboratory settings.

Cortisol (CORT) accumulates in the growing hair shaft of humans and nonhuman primates. We describe methods for extracting and analyzing hair CORT with high precision and sensitivity. Measurement of hair CORT is particularly well-suited for assessing chronic stress over periods of weeks to months.

הפקה וניתוח של קורטיזול מאדם וקוף השיער

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Confocal Microscopy to Measure Three Modes of Fusion Pore Dynamics in Adrenal Chromaffin Cells

Dynamic fusion pore opening and closure mediate exocytosis and endocytosis and determine their kinetics. Here, it is demonstrated in detail how confocal microscopy was used in combination with patch-clamp recording to detect three fusion modes in primary culture bovine adrenal chromaffin cells. The three fusion modes include 1) close-fusion (also called kiss-and-run), involving fusion pore opening and closure, 2) stay-fusion, involving fusion pore opening and maintaining the opened pore, and 3) shrink-fusion, involving shrinkage of the fusion-generated &#937;-shape profile until it merges completely at the plasma membrane.
To detect these fusion modes, the plasma membrane was labeled by overexpressing mNeonGreen attached with the PH domain of phospholipase C &#948; (PH-mNG), which binds to phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PtdIns(4,5)P2) at the cytosol-facing leaflet of the plasma membrane; vesicles were loaded with the fluorescent false neurotransmitter FFN511 to detect vesicular content release; and Atto 655 was included in the bath solution to detect fusion pore closure. These three fluorescent probes were imaged simultaneously at ~20-90 ms per frame in live chromaffin cells to detect fusion pore opening, content release, fusion pore closure, and fusing vesicle size changes. The analysis method is described to distinguish three fusion modes from these fluorescence measurements. The method described here can, in principle, apply to many secretory cells beyond chromaffin cells.

This protocol describes a confocal imaging technique to detect three fusion modes in bovine adrenal chromaffin cells. These fusion modes include 1) close-fusion (also called kiss-and-run), involving fusion pore opening and closure, 2) stay-fusion, involving fusion pore opening and maintaining the opened pore, and 3) shrink-fusion, involving fused vesicle shrinkage.

מיקרוסקופיה קונפוקלית למדידת שלושה מצבים של דינמיקת נקבוביות היתוך בתאי כרומפין של יותרת הכליה

Dynamic fusion pore opening and closure mediate exocytosis and endocytosis and determine their kinetics. Here, it is demonstrated in detail how confocal ...

Primary Culture of Rat Adrenocortical Cells and Assays of Steroidogenic Functions

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary cultured rat adrenal cells and related functional assays (immunofluorescence staining of lipid droplet surface protein, as well as corticosterone analysis). Unlike an in vivo model, the variation of interexperiments in adrenal monolayer cultures is less and the experimental condition is easy to control. Besides, the source of rats is also more stable than other animals, like bovine ones. There are also several human adrenal cell lines (NCI-H295, NCI-H295R, SW13, etc.) that can be used in adrenal studies. However, the steroid production of these lines will still be influenced by numerous factors, which include serum lot number, passage number, mutant/loss of distinct genes, etc. Except for lacking 17&#945;-hydroxylase, the primary culture of rat adrenocortical cells is a better and more convenient technique for studying adrenal physiology. In summary, primary rat adrenal cultures could be a good in vitro platform for researchers to investigate the mechanisms of the reagent of interest in the adrenal gland system.

The hormone secreted by the adrenal cortex is vital for animals against stress and diseases. Here, we present a protocol to culture the primary rat adrenal cells. It could be a good in vitro platform for investigating the mechanisms of the reagent of interest in adrenal steroidogenesis and lipid biosynthesis.

תרבות העיקרי של תאים Adrenocortical חולדה, מבחני של פונקציות שחלת בקר

The hormone which the adrenal cortex secretes is vital for animals against stress and diseases. The method described here is the procedure of primary ...