המחברים מודים M. Fiche של בית החולים של האוניברסיטה של ​​לוזאן למתן תמונת מאמופלסטית, מ &#39;וא&#39; וירט Ayyanan של שוויצרי מכון לחקר הסרטן ניסויי, המרכז הלאומי של יכולת המחקר המולקולרית אונקולוגיה, בית הספר למדעי חיים, אקול פוליטכניק הפדרלי דה לוזאן לקבלת סיוע טכני ור &#39;קלארק מאוניברסיטת מנצ&#39;סטר להערות ביקורתיות. המחקר שיוביל לתוצאות אלה קיבל תמיכה מSNF3100A0-112090, Oncosuisse 531,817, ותרופות היוזמה המשותפת ההתחייבות החדשנית תחת הסכם מענק לא. 115,188, משאבים אשר מורכבים מתרומה כספית מהתכנית של האיחוד האירופי מסגרת השביעית (FP7 / 2007-2013) ופדרציה האירופית של חברות תעשיות פרמצבטיות ועמותות &#39;בתרומה נדיבה. כתובת האינטרנט של תרופות חדשניות יוזמה היא <a href="http://www.imi.europa.eu/" target="_blank">http://www.imi.europa.eu/.</a> &lt;/ P&gt;

שיקולים כלליים: לפני הזמן, להגדיר פרוטוקול אתיקה, להכין שאלונים לחולים, ותראו להכשרת כוח האדם הקליני. לפני השימוש בחומר מניתוח מאמופלסטית הפחתה, להשיג אישורים, ולהבטיח את הסכמת מטופל. רקמה עשויה להיות מדבקת וצריכה להיות מטופל בהתאם. פרוטוקול זה אושר על ידי ועדת האתיקה של ISREC - שוויצרי מכון לחקר הסרטן ניסויי. 1. רקמות שחזור, עיבוד וביו-בנקאי על מנת להבטיח איכות מדגם אופטימלית ליו-בנקאי, מספר הצעדים מתבצעים בבית החולים לפני הובלה למעבדה. בבית החולים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג רקמות שד אנושיות בתנאים סטריליים מדגימות ניתוח מאמופלסטית ההפחתה ודם, במידת צורך. רקמה צריכה להיבדק על ידי פתולוג שידגום להוציא נוכחות של נגעים ממאירים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את t השדלהוציא מתחת למכסת המנוע על לוח סטרילי ולהכין מספריים, סכין מנתחים כירורגים ומלקחיים שכבר מעוקרים עם מעקר קיטור. הפוך חתך עמוק באתרים של רקמת החלב שונים באמצעות אזמל כדי לפתוח אותו. ברקמת שד אנושית לחפש גדילים לבנים המורכב מצינורות ואוניות, שמוטמעים ברקמת שומן צהובה. הערה: היחס של parenchymal הלבן לרקמת השומן הצהובה שונה בקרב נשים; בדרך כלל יש לי נשים צעירות רקמת האפיתל יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר חתיכות של חומר לבן ולהחזיק אותם עם מלקחיים, ולאחר מכן להפריד ביניהם בעדינות מרקמת השומן במספריים. להימנע מנטילת כלי דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתיכות שטיפה של רקמות שבנאגרו מלוח פוספט pH (PBS) 7.2 להסיר דם. העברת הרקמה לבקבוקי פלסטיק המכילים 250 מיליליטר בינוני F12 (F12 בינוני של הנשר השתנה Dulbecco) ללא פנול אדום עם 2% פניצילין / סטרפטומיצין (כולל יחידה 5000 / פניצילין מיליליטר ו5,000 g / ml סטרפטומיצין) ו% 1tibiotic / amphotericin B (כולל 10,000 יחידות / מיליליטר פניצילין, 10,000 מיקרוגרם / מיליליטר של סטרפטומיצין, ו -25 מיקרוגרם / מיליליטר של amphotericin B). רקמות חנות במדיום להובלה למעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן חתיכות של 3 - קוטר 5 מ&quot;מ להפקת RNA וחלבון ופלאש להקפיא אותם בcryovials עם איזופנטאן הקר (קרח יבש). העבר אותם לתיבת קרח יבשה לתחבורה למעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים חתיכות של 3 - 5 מ&quot;מ לתוך תבנית ולכסות אותו בשכבה של טמפרטורה אופטימלית חיתוך (אוקטובר) ולאחר מכן למקם את התבנית בתחתית שטוחה קופסא מלאה באיזופנטאן הקר של. לאחר הקפאה מוחלטת להעביר את התבנית לתיבת הקרח היבשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן 5 חתיכות של 3 - 5 מ&quot;מ קוטר בparaformaldehyde (PFA) 4% ו -5 חתיכות אחרת בפורמלדהיד (FA) 4% ב- ​​PBS בניתוח היסטולוגית RT מאוחר יותר. שני fixatives שונה מומלץ כחלק מהנוגדנים לעבוד טוב יותר עם אחד או האחר של שתיים. </li></ol> במעבדה: <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האםcument את כל המידע על מאמופלסטית ההפחתה, מועד הניתוח והאם הדגימות נגזרים משמאל לעומת שד ימני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הדגימות קפואות ב -80 ° C ולהעביר את הרקמות קבועות לקלטות היסטולוגיה לאחר שעה 2 של קיבעון. ואז לשים אותם גם בPBS או אתנול 70%, לO / אחסון N ב 4 מעלות צלזיוס. ביום שלמחרת, להעביר את קלטות היסטולוגיה למתקני היסטולוגיה להטבעת פרפין. </li></ol> 2. רקמות עיכול והורמוני גירוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הבקבוקים המכילים דגימות רקמה לזרימה למינרית בחדר תרבית תאי P2. מניחים חתיכות רקמה על לוח סטרילי הקיצוץ (29 x 19 סנטימטרים). החזק את החומר עם מלקחיים ולגרד את השומן וכלי נותר מparenchyma השד (חלק לבן) עם אזמל. הנח את החומר הלבן בPBS בצלחת תרבות 10 סנטימטרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת החומר השומני מכל החלקים והשלכתם על פי הכלל הבטיחותים של המעבדה, למקם את החלקים הלבנים המכילים את רקמות אפיתל חזרה על קרש החיתוך. באמצעות אזמלים מנוגדים לחתוך את הרקמה וקוצץ אותו לחתיכות בקוטר של עד 2 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החומר הטחון לתוך צינורות בגודל מתאים: עד 1, 2.5 ו -10 מיליליטר ל5, 15 או 50 מיליליטר צינורות, בהתאמה. בדרך כלל תשואות צינור 5 מיליליטר מספיק חומר לגירויי embedment פרפין והורמון, ותשואות 15 מיליליטר צינור מספיק חומר לסלולרי קרינה המופעל מיון (FACS). צינורות גדולים יותר משמשים להקפאת aliquots. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תערובת עיכול אדון בהיקף של מדיום (DMEM / F12 ללא פנול אדום) עם 1% פניצילין / סטרפטומיצין / amphotericin B וCollagenase (Clostridiopeptidase מhistolyticum Clostridium). מנת collagenase לפי זמני עיכול. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במשך 12, 24, ו -36 שעות של דגירה, להשתמש בריכוז סופי של collagenase של 1.5 מ&quot;ג / מיליליטר, 1.0 מ&quot;ג / מיליליטר ומ&quot;ג 0.5 / בהתאמה מ&quot;ל. להוסיף תערובת אמן עיכול עד 4 פעמים בנפח של החומר מתעכל כדי להבטיח אוורור נאות ותסיסה. הערה: בהתאם לתכנון ניסוי ואת משך הזמן של גירוי הורמונלי, להוסיף הורמונים או במהלך או לאחר התאוששות צעד העיכול ומייקרו האנזימטית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף הורמון (ים) בריכוז רצוי כדי לבדוק את הדגימות והרכב לשליטה. לגירוי עם 17-β-אסטרדיול, וpromegestone (R5020) להשתמש ריכוז סופי של 20 ננומטר. הערה: R5020 הוא אגוניסט קולטן פרוגסטרון סינטטי, שהוא יציב יותר מפרוגסטרון הטבעי במדיום. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום צינורות על מיקסר רולר בתוך חממה ב 37 מעלות צלזיוס ו -40 O סל&quot;ד / N. לפני הצבת הדגימות במיקסר, resuspend אותם היטב כדי להבטיח שכל החומר מפיץ לאורך צינורות צנטריפוגה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כעיכול לוקח לפחות 12 שעות (O / N), לפעמי גירוי הורמון של שעות פחות מ -12, להוסיף את ההורמונים לאחר ההתאוששות של microstructures (deזנב תחת שלב 3). הוסף את ההורמונים כמו שאתה resuspend microstructures ולמקם את ההשעיה על צלחות מצורפים נמוכות במיוחד. יכולה להיות כל הזמן microstructures רקמות על צלחות נמוכות במיוחד מצורפים לתקופה של עד 7 ימים במדיום גידול-ללא גורם שימור כדאיות כ -70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לRNA וניתוח חלבון, לאסוף microstructures רקמה על ידי צנטריפוגה ב 400 XG במשך 5 דקות והקפאת הבזק בצינורות צנטריפוגה. </li></ol> 3. שחזור של Microstructures רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגות הצינור (ים) ב 400 XG במשך 5 דקות. לשאוב השומן מהחלק העליון של צינור צנטריפוגות ולהעביר את supernatant של supernatant המימי שנותר, שהוא מועשר בfibroblasts, לצינור צנטריפוגות חדש וצנטריפוגות ב 1250 XG במשך 5 דקות. הערה: ככל שmicrostructures רקמת השד היא מאוד דביקה, את כל הצעדים הבאים resuspend גלולה בעדינות על ידי התססה הצינור. Pipetting אינו מומלץ בשל הסיכון של אובדן חומר. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend את כדורים מועשרים בmicrostructures ובfibroblasts נגזר מsupernatant המימי בPBS, 2% עגל סרום עוברי (FCS). בהמשך לכך ספין שני הצינורות ב1,250 XG במשך 5 דקות ולאחר מכן למחוק את supernatants. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend את כדורים ב 3 - 5 מיליליטר מאגר תמוגה תאי דם אדום ולהעביר אותם לניקוי צינורות. דגירתם במשך 5 דקות בRT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת נפח 2x של PBS, 2% FCS ו צנטריפוגות ב1,250 XG במשך 5 דקות. לשטוף את כדורים עם PBS, 2% FCS ו צנטריפוגות ב 1250 XG במשך 5 דקות. חזור על פעולה זו פעמיים. </li></ol> 4. דוגמאות לcytometry הזרימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1-2 מיליליטר טריפסין 0.25% לגלולה ולערבב אותו על ידי pipetting מעלה ומטה בעדינות במשך 2 דקות עם pipetman 1,000 μl לנתק תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעכב פעילות טריפסין ידי הוספת 9 מיליליטר PBS, 2% FCS. צנטריפוגה ב 450 XG במשך 5 דקות ו resuspend גלולה ב 10 מיליליטר PBS, 2% FCS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את ההשעיה התא על מסננת תא 40 מיקרומטר מונחת על top של צינור צנטריפוגות 50 מיליליטר להכין תאים בודדים. אם כמה מיקרוליטר של השעיה תא להישאר בחלק העליון של המסנן, לעזור להם לעבור את הסינון על ידי aspirating מהצד השני של מסננת האחר עם pipet ולהוסיף אותם לmicrostructures המסוננת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוגדני תאי חיסון נפרדים, fibroblasts ותאי האנדותל מmicrostructures עם קוקטייל של אנטי-CD45, אנטי-FAP ואנטי-CD31 ולאחר מכן למיין אותם עם FACS, המבוססים על EpCAM פאן-אפיתל סמן CD10 ולהפריד תאי luminal ובסיס בהתאמה 10 . </li></ol> 5. דוגמאות להיסטולוגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שטיפת החומר מתעכל באופן מכאני ואנזימים כפי שתואר לעיל, לתקן כדורים מחומר ראשוני 1.5 מיליליטר ב 1 מיליליטר של 4% PFA PBS ב RT למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב1,250 XG במשך 5 דקות ולשטוף עם 1-2 מיליליטר PBS פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה XG ב 16,000 במשך 10 דקות. במהלך תקופה זו, להכין 1% רב תכליתי agarose בטריס-אצטט-EDTA (טה) חיץ ולחמם את הפתרון במיקרוגל עד הפתרון מגיע לרתיחה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הפתרון מתנור המיקרוגל ולערבל את הבקבוק בעדינות לתערובת הפתרון וresuspend כל חלקיקי agarose שנותרו. פתרון agarose מגניב עד 50 ° C ויוצקים 1 מיליליטר בעובש בסיס פרפין בגודל 31 × 23 × 13.5 מ&quot;מ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant ומניח את כדורים על גבי השכבה המוצקה (1 - 3 מ&quot;מ) של agarose בעזרת מרית עם קצה שטוח. לכסות את כולם עם שכבה נוספת של agarose (40 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר agarose המבצרת, בדרך כלל תוך 5 דקות, לשים בלוקים agarose לקלטות היסטולוגיה לembedment פרפין. יחד עם דגימות agarose למקם נייר משרדי לבן בקלטת עם כל המידע על מספר מאמופלסטית ההפחתה, תנאי ניסוי, ותאריך כתוב באותיות קטנות בעיפרון; כתיבת שורות אלה עומדים בכל צעדי הטיפול עוקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את הקלטות בPBS O / N, או ב -70% אתנול לאחסון בסוף השבוע, בשעה 4 מעלות צלזיוס. לא שם לב כל הבדל בין שני פתרונות האחסון. לאחר מכן להעביר את קלטות היסטולוגיה למתקני היסטולוגיה להטבעת פרפין. </li></ol> 6. Microstructures הקפאה (עתיד Culturing) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> microstructures רקמות הגלולה בהקפאה בינונית בהיקף של FCS עם sulfoxide דימתיל 10% (DMSO) ולהקפיא 1 מיליליטר aliquots בcryovials. מספר cryovials השיג תלוי בכמות של חומר ראשוני המתקבל מהפחתת מאמופלסטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקפיא את cryovials המכיל microstructures רקמות באמצעות מקפיא קצב מבוקר עם התכנית הבאה: 5 דקות מגורים על 4 מעלות צלזיוס, הטמפרטורה יורד ל-7 ° C עם שיעור של 6 מעלות צלזיוס / min, ומקטין את הטמפרטורה ל -12 מעלות צלזיוס עם שיעור של 6 מעלות צלזיוס / min, 10 דקות מגורים, ומקטין את הטמפרטורה ל -40 מעלות צלזיוס עם שיעור של 6 מעלות צלזיוס / min, ירידה בטמפרטורה ל -80 מעלות צלזיוס עםשיעור C / min 6 מעלות. לאחר מכן להעביר את cryovials למקפיא -80 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, להעביר את cryovials מ-80 ° C למכל חנקן נוזלי לאחסון ארוך. </li></ol>

<ol>
	<li>Beral, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+and+hormone-replacement+therapy+in+the+Million+Women+Study.">Breast cancer and hormone-replacement therapy in the Million Women Study.</a> Lancet. 362 (9382), 419-427 (2003).</li><li>MacMahon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age+at+first+birth+and+breast+cancer+risk.">Age at first birth and breast cancer risk.</a> Bull World Health Organ. 43 (2), 209-221 (1970).</li><li>Pike, M. C., Krailo, M. D., Henderson, B. E., Casagrande, J. T., Hoel, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Hormonal'+risk+factors,+'breast+tissue+age'+and+the+age-incidence+of+breast+cancer.">'Hormonal' risk factors, 'breast tissue age' and the age-incidence of breast cancer.</a> Nature. 303 (5920), 767-770 (1983).</li><li>Brisken, C., O'Malley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormone+action+in+the+mammary+gland.">Hormone action in the mammary gland.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (12), a003178 (2011).</li><li>Levenson, A. S., Jordan, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF-7:+the+first+hormone-responsive+breast+cancer+cell+line.">MCF-7: the first hormone-responsive breast cancer cell line.</a> Cancer Res. 57 (15), 3071-3078 (1997).</li><li>Tanos, T., Rojo, L. J., Echeverria, P., Brisken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER+and+PR+signaling+nodes+during+mammary+gland+development.">ER and PR signaling nodes during mammary gland development.</a> Breast Cancer Res. 14 (4), 210 (2012).</li><li>Roskelley, C., Desprez, P., Bissell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix-dependent+tissue-specific+gene+expression+in+mammary+epithelial+cells+requires+both+physical+and+biochemical+signal+transduction.">Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 91 (26), 12378-12382 (1994).</li><li>Kass, L., Erler, J. T., Dembo, M., Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+epithelial+cell:+influence+of+extracellular+matrix+composition+and+organization+during+development+and+tumorigenesis.">Mammary epithelial cell: influence of extracellular matrix composition and organization during development and tumorigenesis.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39 (11), 1987-1994 (2007).</li><li>Graham, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+replication+licensing+and+progenitor+numbers+are+increased+by+progesterone+in+normal+human+breast.">DNA replication licensing and progenitor numbers are increased by progesterone in normal human breast.</a> Endocrinology. 150 (7), 3318-3326 (2009).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comment+on+&#34;Progesterone/RANKL+is+a+major+regulatory+axis+in+the+human+breast&#34;.">Comment on &#34;Progesterone/RANKL is a major regulatory axis in the human breast&#34;.</a> Sci Transl Med. 5 (215), 215le214 (2013).</li><li>Brisken, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+signalling+in+breast+cancer:+a+neglected+hormone+coming+into+the+limelight.">Progesterone signalling in breast cancer: a neglected hormone coming into the limelight.</a> Nat Rev Cancer. 13 (6), 385-396 (2013).</li><li>Xu, R., Boudreau, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+architecture+and+function:+dynamic+reciprocity+via+extra-+and+intra-cellular+matrices.">Tissue architecture and function: dynamic reciprocity via extra- and intra-cellular matrices.</a> Cancer Metastasis Rev. 28 (1-2), 167-176 (2009).</li><li>Tanos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone/RANKL+is+a+major+regulatory+axis+in+the+human+breast.">Progesterone/RANKL is a major regulatory axis in the human breast.</a> Sci Transl Med. 5 (182), 182ra155 (2013).</li><li>Yalcin-Ozuysal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonistic+roles+of+Notch+and+p63+in+controlling+mammary+epithelial+cell+fate.">Antagonistic roles of Notch and p63 in controlling mammary epithelial cell fate.</a> Cell Death Differ. 17 (10), 1600-1610 (2010).</li><li>Hines, W. C., Su, Y., Kuhn, I., Polyak, K., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sorting+out+the+FACS:+a+devil+in+the+details.">Sorting out the FACS: a devil in the details.</a> Cell Rep. 6 (5), 779-781 (2014).</li></ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

תרבות vivo לשעבר המתוארת כאן מספקת microstructures רקמת שד המכילה צינורות שלמים ואוניות, יחד עם סוגי תאים אחרים בדרך כלל נמצאים בחזה הנשי האנושי. בעיבוד של רקמת השד האנושית בדרך כלל מתקבלת מmammoplasties ההפחתה, הסרת רקמת שומן, עיכול מכאני והאנזימטית של מטריצת סטרומה, ותמוגה של ...

A correction was made to <a href="/video/52436">An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast</a>. There was an error with the author, Marie Shamsheddin&#39;s, name. The author&#39;s name has been corrected to:
Marie Shamseddin
instead of:
Marie Shamsheddin

A correction to the author list has been made for the article <a href="/video/52436">An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast</a>.

Erratum: An Ex Vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

מידע על נוף מוטאציות בסרטן השד גדל בקצב מהיר. פחות תשומת לב הוקדשה לגורמים מערכתיים המשפיעים על התפתחות סרטן השד. חשיפה להורמוני רבייה יש השפעה משמעותית על התקדמות מחלה 1-3. עם זאת, המנגנונים שבאמצעותם הורמוני רבייה לפגוע בשד האנושי הם הבינו היטב. עבודה עם מודלים של עכברים מהונדסים גנטי גילתה כי הם כרוכים איתות פנימית ואוטוקריני תא באמצעות מספר effectors במורד הזרם 4. הידע המוגבל על פעולת הורמונים בשד האנושי הוא במידה רבה מיוחס לחוסר מודלים נאותים. רוב העבודה על המנגנונים של קולטן אסטרוגן (ER) וקולטני פרוגסטרון איתות (PR) שבוצעה עם קווי קולט הורמון חיוביים סרטן שד תא, כגון MCF-7 וT47D. אלה נגזרים מיפליטו פלאורלי מחולים עם סרטן השד מתקדם שהיה לי already קיבל טיפולים מרובים 5. רלוונטי הביולוגית של ממצאים במבחנת מודלים פשוטים כל כך של השד האנושי הוא גנים מפוקפקים ויעד שזוהו במודלים אלה במבחנה הם שונים מגני היעד שמזוהים במודלים של בעלי חיים 6. כאשר תאי אפיתל שד אנושי ראשוני בתרבית במבחנה הם נוטים לאבד את ביטוי קולט הורמון ולכן תגובת הורמון 7,8. בעיה זו ניתן circumventd על ידי גישות 3D מתוחכמות באמצעות matrigel. בדרך זו, סי קלארק ועמיתים הצליחו להקים תאי האפיתל שד שנשמרו ביטוי קולט הורמון והראה תגובת שגשוג לפרוגסטרון גירוי 9. ובכל זאת, שתי חשובים בגנים המטרה קולטני פרוגסטרון vivo, Wnt-4 וRANKL, לא נגרם על גירוי פרוגסטרון במערכת זו 9. גישה זו צולמה לאחרונה על עוד עם במבחנה </em&gt; טיפול מקדים הורמון ואינדוקצית RANKL הושג 10. אזהרה היא שיש matrigel פעילויות שהן אצווה תלויות, היא יקר, ודורשת תכנון ניסוי כי הוא מתאים למספרים סלולריים קטנים בלבד. בהתבסס על הממצא שבER vivo ואיתות יחסי הציבור מתווכים במידה רבה על ידי אינטראקציות אוטוקריני 11, אנחנו טענו שאינטראקציות בין תאית צריכה להישמר. גורם חשוב נוסף שהולך לאיבוד כרקמות הם ניתקו לתאים בודדים לתרבות במבחנה הן האינטראקציות של תאי האפיתל במטריצה ​​תאית; אך אלה הם קריטיים לבידול אפיתל ושיבושם חשוב ביצירת גידולים 12. עם זה בחשבון, הקמנו שיטה לבודד microstructures רקמת שד מחומר שנזרק כירורגית טרי 13. Parenchyma השד, בהיקף של אפיתל שני שכבות עם luminal הפנימי וחיצוני myoepitheliתאי אל, הוא גזורים מרקמת שומן ונתונים לניתוק מכאני והאנזימטית. לאחר הכביסה וצנטריפוגה, שברי צינורות החלב מתקבלים ששומרים אינטראקציות קרובות עם הרבה תאי סטרומה. microstructures רקמות אלה יישאר הורמון תגובה. המודל היה תוקף בדגימות קליניות 13. ככזה, ההליך הנוכחי יכול לעזור ללמוד פעולת הורמון בשד בהקשר ביולוגי ורלוונטי מבחינה קלינית.

<table><tbody><tr><td>Microlitre Centrifuge</td><td>Heraeus Biofuge Fresco</td><td>75005521</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>5810 000.327</td><td></td></tr><tr><td>Cryobox</td><td>Nalgene&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Controlled Rate Freezer EF600 Grant</td><td>Asymptote&amp;nbsp;</td><td>EF600</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; incubator</td><td>Hera Cell Heraeus</td><td>51022391</td><td></td></tr><tr><td>Roller Mixer SRT9D</td><td>Sturt</td><td>SRT9D</td><td></td></tr><tr><td>Histology Cassettes</td><td>Medizintechnik</td><td>81-0021-00</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainer</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Strile Surgical Blade&amp;nbsp;</td><td>Aesculap</td><td>BB536&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Aesculap</td><td>BB084R</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Aesculap</td><td>BD047R</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Aesculap</td><td>BC374R</td><td></td></tr><tr><td>Paraffin base mold</td><td>SAKURA</td><td>4166</td><td></td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature (OCT) Cryomatrix</td><td>Thermoscientific</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic/Antimycotic</td><td>Life Technologies</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F/12</td><td>Life Technologies</td><td>11039-021</td><td>Prewarm (37 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Roche</td><td>11 088 793 001</td><td>Prewarm (37 &amp;deg;C)</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Life Technologies</td><td>10270</td><td>Can be replaced with Fetal Calf Serum</td></tr><tr><td>Cell Blood Lysis Buffer</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Sigma</td><td>F1635</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Roth</td><td>335</td><td></td></tr><tr><td>Isopentane</td><td>Sigma</td><td>M32631</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>1009831000</td><td></td></tr><tr><td>Cryogenic vials (5.0 ml)</td><td>VWR, International</td><td>479-0820</td><td></td></tr><tr><td>Ultra low attachment culture dish</td><td>Corning, NY 14831</td><td>3471</td><td></td></tr></tbody></table>

an ex vivo model to study hormone action in the human breast

מחקר פעולה של הורמונים בשד האנושי כבר הקשו על ידי היעדר מערכות מודל הולמים. על התרבות במבחנה, תאי אפיתל החלב ראשוניים נוטים לאבד ביטוי קולט הורמון. נרחב שורות תאי סרטן השד חיובי קולט הורמון המשמשות הן רלוונטיות מוגבלות למצב in vivo. כאן אנו מתארים מודל vivo לשעבר ללמוד פעולת הורמון בשד האנושי. דגימות טריות אנושיות רקמת שד מחומר שנזרק כירורגית כגון mammoplasties הפחתה או mammectomies הם מכניים ואנזימים מתעכלים להשיג שברי רקמה המכילים צינוריות ואוניות וסוגים שונים של תאי סטרומה. microstructures הרקמות אלה המשיכו במדיום בסיסי ללא גורמי גדילה לשמר הקשר בין תאיתם, מבנה הרקמה, ולהישאר הורמון מגיב במשך כמה ימים. הם מעובדים בקלות לRNA ומיצוי חלבון, ניתוח היסטולוגית או מאוחסנים בהקפאה בינונית. הקרינהמיון תא פעיל (FACS) ניתן להשתמש כדי להעשיר לאוכלוסיות תאים ספציפיות. פרוטוקול זה מספק גישה פשוטה, סטנדרטית ללימודי translational עם דגימות מורכבות ביותר, מגוונות אנושיות.

כדי ללמוד את התפקיד של אסטרוגנים ופרוגסטרון ולהבין טוב יותר את התפקידים המולקולריים שלהם בשד האנושי, אנו אוספים דגימות רקמת שד אנושיות טריות מחולים שעברו mammoplasties הפחתה (איור 1) לאחר קבלת ההסכמה מהדעת שלהם. אנחנו גם לקבל היסטוריה של החולים רפואי ורבייה, כמו גם...

Watch this Scientific Journal Video about An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast at JoVE.com

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

פיתחנו מודל vivo לשעבר רומן ללמוד פעולת הורמון בשד האנושי. היא מבוססת על microstructures הרקמה מבודדת מדגימות רקמת שד ניתוחיות המשמרות מבנה רקמה, אינטראקציות בין תאית, ואיתות אוטוקריני.

<em&gt; Ex vivo</em&gt; דגם לחקר הורמוני פעולה בשד האדם

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

an-ex-vivo-model-to-study-hormone-action-in-the-human-breast

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

11.4K Views.  Ecole polytechnique fédérale de Lausanne.  פיתחנו מודל vivo לשעבר רומן ללמוד פעולת הורמון בשד האנושי. היא מבוססת על microstructures הרקמה מבודדת מדגימות רקמת שד ניתוחיות המשמרות מבנה רקמה, אינטראקציות בין תאית, ואיתות אוטוקריני. 

Video: An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

הזרקת Orthotopic של תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב עכברים

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Cancer Research

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

השתלה אורתוטופית של גידולי שד כמודלים פרה-אקליניים לסרטן השד

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major contributors to breast cancer initiation, relapse, metastasis and therapy resistance. It is imperative to understand the biology of breast cancer stem cells in order to identify novel therapeutic targets to treat breast cancer. Breast cancer stem cells are isolated and characterized based on expression of unique cell surface markers such as CD44, CD24 and enzymatic activity of aldehyde dehydrogenase (ALDH). These ALDHhighCD44+CD24- cells constitute the BCSC population and can be isolated by fluorescence-activated cell sorting (FACS) for downstream functional studies. Depending on the scientific question, different in vitro and in vivo methods can be used to assess the functional characteristics of BCSCs. Here, we provide a detailed experimental protocol for isolation of human BCSCs from both heterogenous populations of breast cancer cells as well as primary tumor tissue obtained from breast cancer patients. In addition, we highlight downstream in vitro and in vivo functional assays including colony forming assays, mammosphere assays, 3D culture models and tumor xenograft assays that can be used to assess BCSC function.

This experimental protocol describes the isolation of BCSCs from breast cancer cell and tissue samples as well as the in vitro and in vivo assays that can be used to assess BCSC phenotype and function.

בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs fail clinical trials. Therefore, new models are needed to improve our understanding of the disease. The NIH Microphysiological Systems (MPS) program was developed to improve the clinical translation of basic science discoveries and promising new therapeutic strategies. Here we present a method for generating MPS for breast cancers (BC-MPS). This model adapts a previously described approach of culturing primary human white adipose tissue (WAT) by sandwiching WAT between adipose-derived stem cell sheets (ASC)s. Novel aspects of our BC-MPS include seeding BC cells into non-diseased human breast tissue (HBT) containing native extracellular matrix, mature adipocytes, resident fibroblasts, and immune cells; and sandwiching the BC-HBT admixture between HBT-derived ASC sheets. The resulting BC-MPS is stable in culture ex vivo for at least 14 days. This model system contains multiple elements of the microenvironment that influence BC including adipocytes, stromal cells, immune cells, and the extracellular matrix. Thus BC-MPS can be used to study the interactions between BC and its microenvironment. 
We demonstrate the advantages of our BC-MPS by studying two BC behaviors known to influence cancer progression and metastasis: 1) BC motility and 2) BC-HBT metabolic crosstalk. While BC motility has previously been demonstrated using intravital imaging, BC-MPS allows for high-resolution time-lapse imaging using fluorescence microscopy over several days. Furthermore, while metabolic crosstalk was previously demonstrated using BC cells and murine pre-adipocytes differentiated into immature adipocytes, our BC-MPS model is the first system to demonstrate this crosstalk between primary human mammary adipocytes and BC cells in vitro.

This protocol describes the construction of an in vitro microphysiological system for studying breast cancer using primary human breast tissue with off the shelf materials.

דוגמנות סרטן השד ברקמת השד האנושית באמצעות מערכת מיקרופיזיולוגית

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

Brain metastasis is a serious consequence of breast cancer for women as these tumors are difficult to treat and are associated with poor clinical outcomes. Preclinical mouse models of breast cancer brain metastatic (BCBM) growth are useful but are expensive, and it is difficult to track live cells and tumor cell invasion within the brain parenchyma. Presented here is a protocol for ex vivo brain slice cultures from xenografted mice containing intracranially injected breast cancer brain-seeking clonal sublines. MDA-MB-231BR luciferase tagged cells were injected intracranially into the brains of Nu/Nu female mice, and following tumor formation, the brains were isolated, sliced, and cultured ex vivo. The tumor slices were imaged to identify tumor cells expressing luciferase and monitor their proliferation and invasion in the brain parenchyma for up to 10 days. Further, the protocol describes the use of time-lapse microscopy to image the growth and invasive behavior of the tumor cells following treatment with ionizing radiation or chemotherapy. The response of tumor cells to treatments can be visualized by live-imaging microscopy, measuring bioluminescence intensity, and performing histology on the brain slice containing BCBM cells. Thus, this ex vivo slice model may be a useful platform for rapid testing of novel therapeutic agents alone or in combination with radiation to identify drugs personalized to target an individual patient&#39;s breast cancer brain metastatic growth within the brain microenvironment.

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

We introduce a protocol for measuring real-time drug and radiation response of breast cancer brain metastatic cells in an organotypic brain slice model. The methods provide a quantitative assay to investigate the therapeutic effects of various treatments on brain metastases from breast cancer in an ex vivo manner within the brain microenvironment interface.

מודל פרוסת מוח Ex Vivo כדי לחקור ולמקד את צמיחת הגידול הגרורתי של סרטן השד במוח

Brain metastasis is a serious consequence of breast cancer for women as these tumors are difficult to treat and are associated with poor clinical ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its progression. Although the mechanisms involved in promoting breast cancer growth have been intensively studied using monocultures of breast cancer cells such as MCF-7 cells, the contribution of other cell types, such as vascular and lymphatic endothelial cells that are intimately involved in tumor growth, has not been investigated in depth. Cell-cell interaction plays a key role in tumor growth and progression. Neoangiogenesis, or the development of vessels, is essential for tumor growth, whereas the lymphatic system serves as a portal for cancer cell migration and subsequent metastasis. Recent studies provide evidence that vascular and lymphatic endothelial cells can significantly influence cancer cell growth. These observations imply a need for developing in vitro models that would more realistically reflect breast cancer growth processes in vivo. Moreover, restrictions in animal research require the development of ex vivo models to elucidate better the mechanisms involved.
This article describes the development of breast cancer spheroids composed of both breast cancer cells (estrogen receptor-positive MCF-7 cells) and vascular and/or lymphatic endothelial cells. The protocol describes a detailed step-by-step approach in creating dual-cell spheroids using two different approaches, hanging drop (gold standard and cheap) and 96-well U-bottom plates (expensive). In-depth instructions are provided for how to delicately pick up the formed spheroids to monitor growth by microscopic sizing and assessing viability using dead and live cell staining. Moreover, procedures to fix the spheroids for sectioning and staining with growth-specific antibodies to differentiate growth patterns in spheroids are delineated. Additionally, details for preparing spheroids with transfected cells and methods to extract RNA for molecular analysis are provided. In conclusion, this article provides in-depth instructions for preparing multi-cell spheroids for breast cancer research.

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Crosstalk between mammary epithelial cells and endothelial cells importantly contributes to breast cancer progression, tumor growth, and metastasis. In this study, spheroids have been made from breast cancer cells together with vascular and/or lymphatic endothelial cells and demonstrate their applicability as an in vitro system for breast cancer research.

כדורי תא אפיתל ואנדותל של חלבי כמודל הפריה תפקודי פוטנציאלי לחקר סרטן השד

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...

A Hormone-responsive 3D Culture Model of the Human Mammary Gland Epithelium

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is limited to cell proliferation and gene expression endpoints. However, in the organism, mammary morphogenesis occurs in a 3D environment. 3D culture systems help bridge the gap between monolayer cell culture (2D) and the complexity of the organism. Herein, we describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action. It uses the commercially available hormone-responsive human breast epithelial cell line, T47D, and rat tail collagen type 1 as a matrix. This 3D culture model responds to the main mammotropic hormones: estradiol, progestins and prolactin. The influence of these hormones on epithelial morphogenesis can be observed after 1- or 2-week treatment according to the endpoint. The 3D cultures can be harvested for analysis of epithelial morphogenesis, cell proliferation and gene expression.

We describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action.

מודל התרבות 3D-תגובת הורמון של האפיתל בלוטת חלב האדם

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is ...

Bioengineering

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

הזרקת orthotopic של תאי סרטן השד לחלב שומן Pad של עכברים לחקר התפתחות גידול.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both direct and rapid analysis of therapeutic sensitivity and resistance. However, recent evidence suggests that therapeutic response is not exclusive to the inherent molecular composition of cancer cells but rather is greatly influenced by the tumor cell microenvironment, a feature that cannot be recapitulated by traditional culturing methods. Even implementation of tumor xenografts, though providing a wealth of information on drug delivery/efficacy, cannot capture the tumor cell/microenvironment crosstalk (i.e., soluble factors) that occurs within human tumors and greatly impacts tumor response. To this extent, we have developed an ex vivo (fresh tissue sectioning) technique which allows for the direct assessment of treatment response for preclinical and clinical therapeutics development. This technique maintains tissue integrity and cellular architecture within the tumor cell/microenvironment context throughout treatment response providing a more precise means to assess drug efficacy.

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Established cancer cell lines and xenografts have been the mainstay of cancer research for the past several decades. However, recent evidence suggests that therapeutic response is greatly influenced by the tumor cell microenvironment. Therefore, we have developed an ex vivo analysis of primary tumor specimens for drug development purposes.

Ex Vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

Methods for Culturing Human Femur Tissue Explants to Study Breast Cancer Cell Colonization of the Metastatic Niche

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little is known about breast cancer cell properties and behaviors within the native microenvironment of human bone tissue.We have developed approaches to track, quantify and modulate human breast cancer cells within the microenvironment of cultured human bone tissue fragments isolated from discarded femoral heads following total hip replacement surgeries. Using breast cancer cells engineered for luciferase and enhanced green fluorescent protein (EGFP) expression, we are able to reproducibly quantitate migration and proliferation patterns using bioluminescence imaging (BLI), track cell interactions within the bone fragments using fluorescence microscopy, and evaluate breast cells after colonization with flow cytometry. The key advantages of this model include: 1) a native, architecturally intact tissue microenvironment that includes relevant human cell types, and 2) direct access to the microenvironment, which facilitates rapid quantitative and qualitative monitoring and perturbation of breast and bone cell properties, behaviors and interactions. A primary limitation, at present, is the finite viability of the tissue fragments, which confines the window of study to short-term culture. Applications of the model system include studying the basic biology of&#160;breast cancer and other bone-seeking malignancies within the metastatic niche, and developing therapeutic strategies to effectively target breast cancer cells in bone tissues.

Protocols are described for studying breast cancer cell migration, proliferation and colonization in a human bone tissue explant model system.

שיטות לExplants רקמות Culturing עצם ירך האדם ללמוד התיישבות תאי סרטן השד גרורתי של הנישה

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little ...

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video