We would like to thank the Children&#8217;s Hospital at Montefiore, Department of Pediatrics, for providing support for these studies. We would like to thank the National Alopecia Areata Foundation for providing financial support for conducting studies with C3H/HeJ engrafted mice.

הצהרת אתיקה: כל המחקרים שכללו בעלי חיים חייבים להיות מאושרים על ידי IACUC של המוסד (לנתונים העוקב, פרוטוקולים אושרו על ידי מונטיפיורי IACUC, פרוטוקול # 11-6-240 ו# 13-7-100). בעלי חיים מסופקים הרדמה אור כפי שצוינו למטרה הבלעדית של שמירה עליהם עדיין בצילום, אין נהלים כואבים הנדרשים לפרוטוקול זה. 1. רכישת תמונות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את מוקד ושדה הראייה לתרמי ג&#39;ל משתמש בנייר עם טקסט מודפס. ודא אחידות של מקור אור על פני אזור מצולם. כדי להבטיח אחידות, להשתמש תרמי ג&#39;ל עם שנבנה במקור אור לצילום רעיוני. אל תשתמש במקור אור שקוף, כמו זה ליצור צללית של החיה שאינה מתאים לניתוח בגווני אפור נוסף. הערה: זה יהיה מקום העכבר קצת מחוץ לפוקוס, המספק מיצוע אופטי על פני האזור של העניין (ROI) ולעזור להפחית את שגיאות quantal לאזורים (כלומר, &lt;10 פיקסל) קטנים מאוד של עניין. אזורים גדולים יותר של ריבית לא יושפעו על ידי קטין זה מתמקד התאמה, לא יהיה להם להיות מושפע מהבדלים בגודל של החיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים בעלי חיים באמצעות קטמין (100 מ&quot;ג / מיליליטר) / xylazine (20 מ&quot;ג / מיליליטר) (2: 1), כפי שזה מספק השפעת הרדמה מהירה והתאוששות מהירה ואופטימלי לצילום בעלי חיים רבים. הערה: הרדמה הוא אישר כאשר החיה היא עדיין מספיק כדי לאפשר צילום. כבעלי חיים בדרך כלל להתאושש מההרדמה האור הזה בתוך 10-15 דקות, הווטרינר לא מומלץ שימוש במשחות עיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח בעלי חיים הרדימו על תרמי ג&#39;ל ביישור אנכי (קרוב במקביל ככל האפשר). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצילומי גב, הנח את בעלי החיים במצב שכיבה עם גפיים מורחבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצילומי הגחון, למקם את בעלי חיים במצב שכיבה, דואג שבעלי החיים לא מסובבים רוחבי. </li&gt; </ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח סטנדרטי בגווני אפור באזור מצולם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דלת גישה קרובה. החשוב: Ambient אור יכול להציג את השינויים בחשיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר F-stop לחשיפה המעמידה את האזור של עניין בטווח ליניארי של רכישה (קריאת F-stop). הערה: רוב המערכות תציג בי התמונה רוויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי F-להפסיק להגדרת חשיפה נוספת המעמידה את האזור של עניין בטווח ליניארי על ידי הגדלת או הקטנת F-stop על ידי 1, כך ששניהם הסטנדרטי באזור של עניין ולהישאר בטווח ליניארי של רכישה (התייחסות F- לעצור). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע צילום הושלם, למקם את בעלי החיים על שולחן התחממות ולעקוב אחר עד שהם יכולים לשמור על כיבו sternal. חזור חיות בכלובים שלהם. להחזיר את הקבוצה של בעלי חיים לביבר לאחר שכל בעלי החיים התאוששו באופן מלא. </li></ol> 2. כימות קליטת אור &lt;/ P&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזורי מארק ריבית על התמונות של בעלי החיים באמצעות סיפקו תוכנה לתרמי ג&#39;ל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקפת גב חיה שלמה, להשתמש בתמונה מלבנית או סגלגלה המשתרעת מהגפיים העליונים לגפיים התחתונים, המשתרעת לרוחב ככל האפשר כך ששום חלק של התיבה חורגת האחורי של בעלי החיים, כפי שמוצג באיור 1 א. הערה: אפשר גם לסמן את השטח של עניין באמצעות כלי ציור ביד חופשית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתצוגת הגחון בעלי חיים שלמה, להשתמש 2 מלבנים: אחד המכסה את אזור אגן ואחד המכסה את אזור החזה, כפי שמוצג באיור 1 ב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאזור קטן יותר של עניין, כלומר, מיקום של מתן תרופה, סימן כמתאים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מארק אזור (ים) של ריבית על תקן קליטה בגווני אפור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא קליטה מכל אחד מהאזורים המסומנים של עניין. </li></ol> 3. ניתוח obtaine רמות הקליטהד לאזורים של עניין ייתכן שיהיה הצורך מנורמל לסטנדרטי רקע להשוואה בין צילומים. מערכת היחסים של חשיפה לקליטה הוא לוג-לוג (כלומר, מערכת היחסים הוא ליניארי בין יומן (חשיפה) ולהיכנס (קליטה)). שימוש במערכת יחסים זו, הקליטה של האזור של עניין יכולה להיות מנורמלת לערך רקע סטנדרטי, אשר יאפשר קליטה להשוואה ישירה בין תמונות שונות, כוללים אלה שצולמו בנקודות זמן שונות (כלומר, מדידות סידוריים בתוך פרוטוקול מחקר). ההליך לביצוע תיקונים אלה מפורט בשלבים אופציונליים 3.1 ו -3.2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקומה (אופציונלית) מגרש של יומן (חשיפה) לעומת יומן (קליטה) תוך שימוש בערכים המתקבלים מתקן קליטה בגווני אפור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (אופציונאלי) כוון לוריאציות ברמת כל תצלום כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר F-stop לקריאה (כפי שנקבע בשלב 1.6) ו- F-stop להתייחסות (כפי שנקבע בסעיףTEP 1.8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב קליטה ממוצעת של סטנדרטי בכל התמונות בF-להפסיק לקרוא. ממוצע זה הוא התייחסות תקן הערך (RSV). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב הבדל בקליטה בין הקריאה והגדרות F-stop התייחסות בכל תצלום לסטנדרטי (דלתא-S) ולכל ROI המוגדר (דלתא-ROI-1, דלתא-ROI-2 ... ..delta-ROI-X) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את הספיגה המתוקנת לכל החזר על השקעה באופן הבא: קליטה מתוקנת (ROI-X) = קליטה (ROI-X) בקריאת F-stop + (RSV - קליטה סטנדרטית בקריאת F-stop) * (דלתא-ROI-X / דלתא-S) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקמפל נתוני ניסוי ולבצע ניתוח נתונים תוך שימוש בטכניקות סטטיסטיות סטנדרטית למשתנים רציפים (כלומר, ANOVA, T-test). </li></ol>

<ol>
	<li>McAndrews, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=American+Hair+Loss+Association.">American Hair Loss Association.</a> , (2011).</li><li>Safavi, K. H., Muller, S. A., Suman, V. J., Moshell, A. N., Melton, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+alopecia+areata+in+Olmsted+County,+Minnesota,+1975+through+1989.">Incidence of alopecia areata in Olmsted County, Minnesota, 1975 through 1989.</a> Mayo Clin Proc. 70 (7), 628-633 (1995).</li><li>Hussein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotherapy-induced+alopecia:+new+developments.">Chemotherapy-induced alopecia: new developments.</a> South Med J. 86 (5), 489-496 (1993).</li><li>Trueb, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotherapy-induced+hair+loss.">Chemotherapy-induced hair loss.</a> Skin Therapy Lett. 15 (7), 5-7 (2010).</li><li>Sato, N., Leopold, P. L., Crystal, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+adenovirus-mediated+expression+of+Sonic+hedgehog+gene+on+hair+regrowth+in+mice+with+chemotherapy-induced+alopecia.">Effect of adenovirus-mediated expression of Sonic hedgehog gene on hair regrowth in mice with chemotherapy-induced alopecia.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (24), 1858-1864 (2001).</li><li>McGarvey, E. L., Baum, L. D., Pinkerton, R. C., Rogers, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+sequelae+and+alopecia+among+women+with+cancer.">Psychological sequelae and alopecia among women with cancer.</a> Cancer Pract. 9 (6), 283-289 (2001).</li><li>Baxley, K. O., Erdman, L. K., Henry, E. B., Roof, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alopecia:+effect+on+cancer+patients'+body+image.">Alopecia: effect on cancer patients' body image.</a> Cancer Nurs. 7 (6), 499-503 (1984).</li><li>Stough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+effect,+pathophysiology,+and+management+of+androgenetic+alopecia+in+men.">Psychological effect, pathophysiology, and management of androgenetic alopecia in men.</a> Mayo Clin Proc. 80 (10), 1316-1322 (2005).</li><li>Ogunmakin, K. O., Rashid, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alopecia:+the+case+for+medical+necessity.">Alopecia: the case for medical necessity.</a> Skinmed. 9 (2), 79-84 (2011).</li><li>Olsen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized+clinical+trial+of+5%+topical+minoxidil+versus+2%+topical+minoxidil+and+placebo+in+the+treatment+of+androgenetic+alopecia+in+men.">A randomized clinical trial of 5% topical minoxidil versus 2% topical minoxidil and placebo in the treatment of androgenetic alopecia in men.</a> J Am Acad Dermatol. 47 (3), 377-385 (2002).</li><li>Rossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1+mg+daily+administration+on+male+androgenetic+alopecia+in+different+age+groups:+10-year+follow-up.">1 mg daily administration on male androgenetic alopecia in different age groups: 10-year follow-up.</a> Dermatol Ther. 24 (4), 455-461 (2011).</li><li>Gibbons, R. D., Fiedler-Weiss, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-aided+quantification+of+scalp+hair.">Computer-aided quantification of scalp hair.</a> Dermatol Clin. 4 (4), 627-640 (1986).</li><li>Fleming, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+a+structural+analysis+of+dermatoscopic+imagery.">Techniques for a structural analysis of dermatoscopic imagery.</a> Comput Med Imaging Graph. 22 (5), 375-389 (1998).</li><li>Chamberlain, A. J., Dawber, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+evaluating+hair+growth.">Methods of evaluating hair growth.</a> Australas J Dermatol. 44 (1), 10-18 (2003).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , .</li><li>Freyschmidt-Paul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+alopecia+areata+in+C3H/HeJ+mice+with+the+topical+immunosuppressant+FK506+(Tacrolimus).">Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus).</a> Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).</li><li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+and+prevention+of+chemotherapy-induced+alopecia+with+PTH-CBD,+a+collagen-targeted+parathyroid+hormone+analog,+in+a+non-depilated+mouse+model.">Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model.</a> Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).</li><li>Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+strategy+for+modulating+chemotherapy-induced+alopecia,+using+PTH/PTHrP+receptor+agonist+and+antagonist.">A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist.</a> J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).</li><li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone+linked+to+a+collagen+binding+domain+promotes+hair+growth+in+a+mouse+model+of+chemotherapy+induced+alopecia+in+a+dose-dependent+manner.">Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner.</a> Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).</li></ol>

Authors have nothing to disclose.

בדוח זה תיאור מפורט מסופק בטכניקה חדשה לכימות נשירת שיער במכרסמים. טכניקה זו מנצלת תרמי ג&#39;ל לרכישת תמונה וניתוח, ציוד שהוא זמין ברוב המעבדות. המדידות הוכחו להיות חזק כדי שינויים קלים בטכניקה (איורים 4-5), ומתואמים היטב לדרגת אובדן ראייה שיער במודלים של טיפול...

Alopecia (נשירת שיער) יכול להיות אירוע נפשי ורגשי מצער עם גורמים רבים. התקרחות גברית-תבנית היא הגורם השכיח ביותר של התקרחות, המשפיע על כשני שלישים מהגברים בגיל 35 1. דפוס דומה של אובדן שיער יכול להיות שנצפה בנשים עם תסמונת שחלות פוליציסטיות. בשתי הפרעות אלו, נשירת השיער היא אנדרוגן בתיווך. Alopecia יכול להתרחש גם כמחלה אוטואימונית, alopecia areata, אשר משפיעה על 1.7% מכלל האוכלוסייה 2. Alopecia יכול להתרחש כתופעת לוואי של כמה טיפולים רפואיים, כגון כימותרפיה 3. אחוז גבוה (65-85%) של חולי כימותרפיה חוויה מסוים של התקרחות 4,5. ההשלכות הפסיכולוגיות של אובדן שיער נחקרו היטב בהגדרת כימותרפיה. התקרחות בעקבות כימותרפיה יכולה לגרום לחרדה, דיכאון, דימוי גוף שלילי, הערכה עצמית נמוכה ותחושה של רווחה 6,7 מופחתת. Pe גבוהrcentage (47-58%) של חולי סרטן נשיים לשקול נשירת שיער להיות ההיבט הטראומתי ביותר של כימותרפיה, ועד טיפול ירידה של 8% מחשש ל4,6 נשירת שיער. יש גם עדויות בהתקרחות אנדרוגנית לתמוך טיפול להפחתת השלכות פסיכולוגיות ואפילו רפואיות של 8,9 נשירת שיער. כמו כן, אלופציה אריאטה דווחה להיות השלכות פסיכולוגיות קשות 2, ואת האופי אחיד של נשירת השיער יכול להוביל לתוצאה קוסמטית לא נעימות, יותר מרוב הגורמים אחרים לנשירת שיער. בעוד תרופות עם השפעות מתונות אנטי-אנדרוגנית (כלומר, ספירונולקטון) היו בשימוש עם הצלחה מוגבלת כטיפול להתקרחות, התרופה היעילה הראשונה להתקרחות מינוקסידיל הייתה 10. יש להורדת לחץ דם זה תופעות לוואי שנצפה בגרימת צמיחת שיער, ועכשיו משמשת כטיפול מקומי לצורות רבות של התקרחות. עם זאת, תגובות הן לעתים קרובות לא שלמות, עם כמה נושאים המראים רק איטיing של נשירת שיער ולא לצמיחה מחודשת בפועל 10. פינסטריד הוא אנטגוניסט תחרותי להקליד השני 5α-רדוקטאז שהמרה בלוקים של טסטוסטרון לדיהידרוטסטוסטרון, וכתוצאה מכך השיפור בהתקרחות אנדרוגנית על חשבון מצור אנדרוגן המערכתי חלקי. שיעורי תגובה עם טווח ארוך טיפול (10 שנים) הם סביב 50% -11. בסך הכל, למרות מחקר רב בתחום זה, עדיין אין טיפול הולם לנשירת שיער. במשך עשרות שנים, מדענים ורופאים בחנו את שיטות של מדידת צמיחת שיער קרקפת בניסויים קליניים. עם התפתחותה של תרופות המטפלות בהתקרחות, חל צורך גדול יותר באמצעי אמין, חסכוני ופולשנית למדידת צמיחת שיער ו, במיוחד, תגובה לטיפול. טכנולוגית ניתוח תמונה לכימות מדויק של צפיפות שיער בחולים עם הפרעות נשירת שיער הניבה תוצאות עקביות ותקפה בעבר תוך שימוש במגוון של techniques, כולל ניתוח של תמונות דיגיטציה 12, ניתוח תמונה של שערות בודדות ועור נגעים 13, וסריקה מיקרוסקופית לכמת המוני שיער באזור קרקפת מוגדר 14. למרבה הצער, בעת מתודולוגיות מעל סיפקו הערכה משופרת של יעילות לשיער צמיחה-קידום התערבויות בניסויים קליניים, שיטות אלה לא הוחלו על מחקרים במכרסמים בחקירות פרה-קליניים. המטרה שלנו היא לפתח שיטה עקבית ואמינה לכמת נשירת שיער בעכברים, שיאפשר לחוקרים להעריך בצורה מדויקת יותר ולהשוות גישות טיפוליות חדשות לצורות שונות של התקרחות. פיתחנו מתודולוגיה שימוש בציוד זמין ברוב המעבדות אשר תאפשר כימות מהיר ואמין של צפיפות שיער בעכברים עם שיער שחור או חום. מתודולוגיה זו נבדקה במודלים של עכברים של התקרחות בעקבות כימותרפיה, alopecia areata, והתקרחות מwaxing. פרוטוקול מפורט מוצג לביצוע מדידות אלה, ובכלל זה נתונים אימות מC57BL / 6 וC3H / זני HeJ של עכברים. כטכניקה זו מסתמכת על גילוי קליטת אור מפיגמנטים בשערה, זה לא יכול לשמש כדי לזהות את צמיחת שיער בעכברים לבנים או עכברים לבקן.

<table><tbody><tr><td>KODAK Gel Logic 100 Imaging System</td><td>Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA</td><td></td><td>Gel imager for obtaining and analyzing photographs, must have built in light source for reflective photography.</td></tr><tr><td>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale</td><td><a href="http://www.imatest.com/docs/q13/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Imatest</a></td><td></td><td>Greyscale standard</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mice</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Mice for representative study</td></tr><tr><td>C3H/HeJ engrafted mouse</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Mice for representative study</td></tr></tbody></table>

a new technique for quantitative analysis of hair loss in mice using grayscale analysis

Alopecia הוא צורה נפוצה של נשירת שיער אשר יכול להתרחש בתנאים רבים ושונים, לרבות אובדן זכר-דפוס שיער, תסמונת שחלות פוליציסטיות, וalopecia areata. Alopecia יכול להתרחש גם כתופעת לוואי של כימותרפיה בחולי סרטן. במחקר זה, המטרה שלנו הייתה לפתח שיטה עקבית ואמינה לכמת נשירת שיער בעכברים, שיאפשר לחוקרים להעריך באופן מדויק ולהשוות גישות טיפוליות חדשות לאלה צורות שונות של התקרחות. השיטה משתמשת תרמי ג&#39;ל סטנדרטי להשיג ותהליך תמונות של עכברים, מדידת קליטת האור, אשר מתרחשת בחלק מחוספס לכמות שיער שחור (או אפור) על העכבר. נתונים שכבר לכמת באופן זה אז יכול להיות מנותח באמצעות טכניקות סטטיסטיות סטנדרטיים (כלומר, ANOVA, T-test). מתודולוגיה זו נבדקה במודלים של עכברים של התקרחות בעקבות כימותרפיה, areata התקרחות ונשירת שיער מהשעווה. בדוח זה, הפרוטוקול מפורט הוא פרהented לביצוע מדידות אלה, ובכלל זה נתונים אימות מC57BL / 6 וC3H / זני HeJ של עכברים. טכניקה חדשה זו מציעה מספר היתרונות, ביניהם פשטות היחסית של יישום, הסתמכות על ציוד שהוא זמין ברוב מעבדות מחקר, ומיישום מטרה, הערכה כמותית שהוא יותר חזק מאשר הערכות סובייקטיביות. השיפורים בכימות של צמיחת שיער בעכברים ישפרו מחקר של מודלים התקרחות ולהקל על הערכה של טיפולים חדשים ומבטיחים בניסויים פרה-קליניים.

טכניקה זו קיבלה תוקף באמצעות C3H / עכברים HeJ engrafted, מודל העכבר של אלופסיה 16. בעלי חיים אלה לפתח נשירת שיער בעולם, אשר מתקדמת בהדרגה לאורך זמן. עם זאת, נשירת השיער מתרחשת בטלאים, ועשויה להשתנות מעכבר אחד למשנהו, מציגה השתנות ניכרת ופוגעת הערכות איכותיות. מודל זה סיפק ?...

Watch this Scientific Journal Video about A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis at JoVE.com

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including as a side-effect of chemotherapy. We have developed a method to quantify hair loss in mice, utilizing a standard gel imager to perform a grayscale analysis, to facilitate study of promising new alopecia therapies.

טכניקה חדשה לניתוח כמותי של נשירת שיער בעכברים באמצעות ניתוח גווני אפור

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

a-new-technique-for-quantitative-analysis-hair-loss-mice-using

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

8.9K Views.  Children's Hospital at Montefiore. Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including as a side-effect of chemotherapy. We have developed a method to quantify hair loss in mice, utilizing a standard gel imager to perform a grayscale analysis, to facilitate study of promising new alopecia therapies.

Video: A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology

Skin is a highly heterogeneous tissue. Intra-dermal structures include hair follicles, arrector pili muscles, epidermal specializations (such as Merkel cell clusters), sebaceous glands, nerves and nerve endings, and capillaries. The spatial arrangement of these structures is tightly controlled on a microscopic scale - as seen, for example, in the orderly arrangement of cell types within a single hair follicle - and on a macroscopic scale - as seen by the nearly identical orientations of thousands of hair follicles within a local region of skin. Visualizing these structures without physically sectioning the skin is possible because of the 2-dimensional geometry of this organ. In this protocol, we show that mouse skin can be dissected, fixed, permeabilized, stained, and clarified as an intact two dimensional object, a flat mount. The protocol allows for easy visualization of skin structures in their entirety through the full thickness of large areas of skin by optical sectioning and reconstruction. Images of these structures can also be integrated with information about position and orientation relative to the body axes.

Mammalian skin contains a diverse array of structures - such as hair follicles and nerve endings - that exhibit distinctive patterns of spatial organization. Analyzing skin as a flat mount takes advantage of the 2-dimensional geometry of this tissue to produce full-thickness high-resolution images of skin structures.

הר הדמיה שטוחה של עור העכבר ויישומו לניתוח של שיער זקיק דפוסים וחושי אקסון מורפולוגיה

Skin is a highly heterogeneous tissue. Intra-dermal structures include hair follicles, arrector pili muscles, epidermal specializations (such as Merkel ...

Neuroscience

Combined Recording of Mechanically Stimulated Afferent Output and Nerve Terminal Labelling in Mouse Hair Follicle Lanceolate Endings

A novel dissection and recording technique is described for monitoring afferent firing evoked by mechanical displacement of hairs in the mouse pinna. The technique is very cost-effective and easily undertaken with materials commonly found in most electrophysiology laboratories, or easily purchased. The dissection is simple and fast, with the mechanical displacement provided by a generic electroceramic wafer controlled by proprietary software. The same software also records and analyses the electroneurogram output. The recording of the evoked nerve activity is through a commercial differential amplifier connected to fire-polished standard glass microelectrodes. Helpful tips are given for improving the quality of the preparation, the stimulation and the recording conditions to optimize recording quality. The system is suitable for assaying the electrophysiological and optical properties of lanceolate terminals of palisade endings of hair follicles, as well as the outcomes from their pharmacological and/or genetic manipulation. An example of combining electrical recording with mechanical stimulation and labeling with a styryl pyridinium vital dye is given.

A simple and novel technique for recording afferent discharge due to mechanical stimulation of lanceolate terminals of palisade endings innervating mouse ear skin hair follicles is presented.

הקלטה משולב של תוויות מסוף פלט ועצב מבחינה מכנית מאולצת מביא ב Endings עכבר זקיק השיער אזמלי

A novel dissection and recording technique is described for monitoring afferent firing evoked by mechanical displacement of hairs in the mouse pinna. The ...

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

A novel dissection and recording technique is described for optical monitoring staining and de-staining of lanceolate terminals surrounding hair follicles in the skin of the mouse pinna. The preparation is simple and relatively fast, reliably yielding extensive regions of multiple labeled units of living nerve terminals to study uptake and release of styryl pyridinium dyes extensively used in studies of vesicle recycling. Subdividing the preparations before labeling allows test vs. control comparisons in the same ear from a single individual. Helpful tips are given for improving the quality of the preparation, the labeling and the imaging parameters. This new system is suitable for assaying pharmacologically and mechanically-induced uptake and release of these vital dyes in lanceolate terminals in both wild-type and genetically modified animals. Examples of modulatory influences on labeling intensity are given.

Optical Monitoring of Living Nerve Terminal Labeling in Hair Follicle Lanceolate Endings of the Ex Vivo Mouse Ear Skin

Here we describe a novel preparation for imaging live lanceolate sensory terminals of palisade endings that innervate mouse ear skin hair follicles during staining and destaining with styryl pyridinium dyes.

ניטור אופטי של תיוג מסוף העצב חיים זקיק השיער אזמלי Endings של<em&gt; Ex Vivo</em&gt; עור אוזן עכבר

A novel dissection and recording technique is described for optical monitoring staining and de-staining of lanceolate terminals surrounding hair follicles ...

Bioluminescence-Based Tumor Quantification Method for Monitoring Tumor Progression and Treatment Effects in Mouse Lymphoma Models

Although bioluminescence imaging (BLI) shows promise for monitoring tumor burden in animal models of cancer, these analyses remain mostly qualitative. Here we describe a method for bioluminescence imaging to obtain a semi-quantitative analysis of tumor burden and treatment response. This method is based on the calculation of a luminoscore, a value that allows comparisons of two animals from the same or different experiments. Current BLI instruments enable the calculation of this luminoscore, which relies mainly on the acquisition conditions (back and front acquisitions) and the drawing of the region of interest (manual markup around the mouse). Using two previously described mouse lymphoma models based on cell engraftment, we show that the luminoscore method can serve as a noninvasive way to verify successful tumor cell inoculation, monitor tumor burden, and evaluate the effects of in situ cancer treatment (CpG-DNA). Finally, we show that this method suits different experimental designs. We suggest that this method be used for early estimates of treatment response in preclinical small-animal studies.

Bioluminescence imaging is a well-known tool for localizing tumors and metastases, but quantification of these images often requires complex calculations and particular instruments. We describe the easy-to-use luminoscore method, based on precise acquisition conditions, requiring no calculations, and enabling tumor burden and treatment response to be monitored in mouse models.

פליטת אור מבוסס שיטת כימות גידול עבור התקדמות גידול ניטור שפעות טיפול מודלים לימפומה העכבר

Although bioluminescence imaging (BLI) shows promise for monitoring tumor burden in animal models of cancer, these analyses remain mostly qualitative. ...

Medicine

Analysis of Craniomaxillofacial Malformations in Mice Using Three-dimensional Microcomputed Tomography

To model craniofacial malformations caused by vitamin A deficiency (VAD), we expressed a dominant-negative retinoid receptor mutation in osteoblasts to specifically inhibit RAR transcriptional activity in mice. This approach allowed us to investigate the effects of VAD on cranial hypomineralization, mandibular deformity, and clavicular hypoplasia in clinical cases. In this study, microcomputed tomography (microCT) scanning of the craniomaxillofacial region of mice represented a valuable tool for studying the growth and development of this animal model. The manual estimation of images is both time-consuming and inaccurate. Hence, here, we present a straightforward, efficient, and accurate approach for segmenting and quantifying the microCT images of each craniomaxillofacial bone. MicroCT software was used to slice the mandible, frontal bone, parietal bone, nasal bone, premaxilla, maxilla, interparietal bone, and occipital bone of mice and measure their corresponding lengths and widths. This segmentation method can be applied to study growth and development in developmental biology, biomedicine, and other related sciences and allows researchers to analyze the effects of genetic mutations on individual craniofacial bones.

Here, we describe in depth a method, which is based on microcomputed tomography, to segment and measure 3D models of craniomaxillofacial bones in mice, for better assessment of craniomaxillofacial bone development in mice than what is possible with current methods.

ניתוח מומים קרניומקסילופציאליים בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת תלת מימדית

To model craniofacial malformations caused by vitamin A deficiency (VAD), we expressed a dominant-negative retinoid receptor mutation in osteoblasts to ...

Developmental Biology

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an attractive model system to study organ development and tissue-specific signaling. Although hair follicle development is genetically tractable, fast and reproducible analysis of factors essential for this process remains a challenge. Here we describe a procedure to generate targeted overexpression or shRNA-mediated knockdown of factors using lentivirus in a tissue-specific manner. Using a modified version of a hair regeneration model 5, 6, 11, we can achieve robust gain- or loss-of-function analysis in primary mouse keratinocytes or dermal cells to facilitate study of epithelial-mesenchymal signaling pathways that lead to hair follicle morphogenesis. We describe how to isolate fresh primary mouse keratinocytes and dermal cells, which contain dermal papilla cells and their precursors, deliver lentivirus containing either shRNA or cDNA to one of the cell populations, and combine the cells to generate fully formed hair follicles on the backs of nude mice. This approach allows analysis of tissue-specific factors required to generate hair follicles within three weeks and provides a fast and convenient companion to existing genetic models.

Tissue-specific analysis of a hair follicle regeneration model using lentivirus to mediate gain- or loss-of-function.

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Digital Planimetry for Assessing Wound Closure Kinetics in a Mouse Model

Chronic wounds, due to their high prevalence, are a serious global health concern. Effective therapeutic strategies can significantly accelerate healing, thereby reducing the risk of complications and alleviating the economic burden on healthcare systems. Although numerous experimental studies have investigated wound healing, most rely on qualitative observations or quantitative direct measurements. The objective of this study was to standardize an indirect wound measurement method using digital planimetry, incorporating digital scaling and segmentation. This approach addresses the lack of detailed, step-by-step methodologies for accurate wound assessment. A photodocumentation booth was designed and constructed, and computer-assisted digital planimetry tools were employed to minimize variability in measurements of the wound area, perimeter, and the distance from the wound center to its edges. A circular traumatic wound (5 mm in diameter) was created on the dorsal midline at the shoulder blade level of male CD1 mice (n = 4, 10 weeks old, 30-35 g). Wound evolution was photodocumented for 14 days using the custom-designed photo booth, which controlled lighting conditions, focal distance, and subject positioning. Scaling and wound measurements were performed using segmentation in ImageJ software, and statistical analysis was conducted using statistical analysis software. The kinetics of wound closure showed a slight increase in wound size and perimeter between day 0 and day 2, followed by a gradual decrease until complete closure by day 14. The photodocumentation booth and computer-assisted digital planimetry enabled quantitative measurements with minimal variability. In conclusion, these tools provide a reliable and reproducible method for evaluating wound closure kinetics in pre-clinical models.

Wounds represent a global health challenge. This study developed a standardized photo booth utilizing digital planimetry to minimize wound measurement variability. Monitoring wounds in mice over 14 days revealed an initial increase in wound area and perimeter, followed by gradual closure. This methodology may aid in evaluating wound closure kinetics in pre-clinical models.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

Chronic wounds, due to their high prevalence, are a serious global health concern. Effective therapeutic strategies can significantly accelerate healing, ...

Bioengineering

Non-invasive Skeletal Muscle Quantification in Small Animals Using Micro-computed Tomography

Skeletal muscle size, mass, and composition are critical properties for studying metabolic and muscle-related diseases, as they directly impact the understanding of disease progression and treatment outcomes. Quantifying a live animal's lean, adipose, and skeletal mass is important in metabolic, physiology, pharmacologic, and geroscience studies. However, obtaining accurate body composition measurements, especially of lean mass, remains challenging due to the inherent limitations of conventional assessment techniques. Micro-computed tomography (micro-CT) is a non-invasive radiological technique that enables high-resolution visualization of internal structures in small animal models. A standardized micro-CT method can significantly enhance translational research with more reliable and impactful results, particularly during aging studies or at different time points within the same animal. Despite its potential, the lack of standardization in image acquisition and analysis methods significantly hinders the comparability of results across different studies. Herein, we present a comprehensive and detailed low-cost protocol for lean mass analysis using micro-CT to address these challenges and promote consistency in research involving small animal models.

This protocol uses micro-computed tomography to enable the cost-effective quantification of lean mass, including skeletal muscle and visceral tissue, adipose tissue, and skeletal tissue in small animals. It distinguishes between lean and adipose tissue, which offers significant advantages for biomedical research, particularly in translational research in small animals.

כימות שרירי שלד לא פולשני בבעלי חיים קטנים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת

Skeletal muscle size, mass, and composition are critical properties for studying metabolic and muscle-related diseases, as they directly impact the ...

Non-Invasive Visualization of Nailbed Microvascular Morphology in Mice Using Capillaroscopy

Imaging microcapillary networks of the skin in humans using nailfold capillaroscopy (NFC) has underscored the importance of microcirculation as a target organ system in critical systemic illnesses. Nailfold capillaroscopy is applied clinically to detect peripheral microvascular dysfunction and abnormalities in a range of systemic conditions, including rheumatic, cardiac, ocular (e.g., glaucoma), and endocrine disorders (e.g., hypertension and diabetes mellitus). NFC is useful not only in detecting peripheral systemic microvasculature disruption but also in assessing drug efficacy. However, translating clinical NFC findings to animal disease models can be challenging. Detecting microvascular dysfunction or abnormalities in animals is often invasive (e.g., endoscopic), carried out ex vivo (e.g., post-mortem imaging of tissues), or expensive, requiring specialized equipment such as those used in microcomputed tomography and photoacoustic imaging techniques. Developing quick, non-invasive, and inexpensive techniques to image peripheral microvasculature in animal models of disease is warranted to decrease research expenses and increase translatability to the clinic.
Capillaroscopy has previously been used to visualize the nailfold microvasculature in animal models, including in guinea pigs and mice, thus demonstrating the capability of capillaroscopy as a non-invasive imaging tool in animal models. This study provides a protocol that applies capillaroscopy to a mouse nailbed, allowing researchers to easily and inexpensively assess the morphology of its microvasculature. Representative images of typical nailbed microvascular architecture in wild-type mice using two commonly used laboratory strains, SV129/S6 and C57/B6J, are provided. Further studies using this method are essential for applying nailbed capillaroscopy to a wide range of mouse disease models with peripheral microvascular abnormalities.

Capillaroscopy is an accessible tool for direct, inexpensive, and non-invasive visualization of microvasculature. The goal of this protocol is to enable researchers to use capillaroscopy for the visualization of peripheral microvascular morphology in the nailbeds of mice.

הדמיה לא פולשנית של מורפולוגיה מיקרו-וסקולרית ממוסמרת בעכברים באמצעות קפילרוסקופיה

Imaging microcapillary networks of the skin in humans using nailfold capillaroscopy (NFC) has underscored the importance of microcirculation as a target ...

A Technique for Human Skin Grafting in a Mouse Model

Source: Moss, M. I. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/64040">Xenograft Skin Model to Manipulate Human Immune Responses&#160;In Vivo.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2022)
This video demonstrates a method for grafting human skin onto an immunodeficient mouse with a suppressed neutrophil response. The method involves applying human split-thickness skin to the mouse&#39;s graft bed, sealing it, and covering it for recovery. Eventually, the human skin adheres to the mouse&#39;s skin, establishing vascularization and circulation, resulting in a successful skin xenograft.

טכניקה להשתלת עור אנושי במודל עכבר

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...