The authors would like to thank the many individuals who have worked on and perfected this technique and have been responsible for the generation of many manuscripts both in this lab and others. This work was supported by National Institutes of Health Grant EY12707 (PMS) and an unrestricted grant from Research to Prevent Blindness to Department of Ophthalmology.

הערה: מטופלים כל בעלי החיים המשמשים בהליך זה בהתאם לאגודה לחקר חזון הצהרת עיניים לשימוש בבעלי החיים ברפואת עיניים ומחקר חזון, כמו גם את ההנחיות שנקבעו על ידי הוועדה לפיקוח על בעלי החיים באוניברסיטת סנט לואיס. הערה: כל המכשירים ופתרונות כירורגיים הם מעוקרים לפני ניתוח, כדי לצמצם את זיהום חיידקים של העין. יש לציין, כי בעוד שבעלי החיים עושים לחוות קצת כאב מהליך זה, אנחנו לא מעסיקים משככי כאבים. הסיבה לכך היא כי כל משככי הכאבים אנטי דלקתיים ומאז תגובות השתלה הקרנית כרוכות דלקת, השימוש בתרופות אנטי-דלקתיות יפגע ביכולת שלנו כדי לקבוע אילו גורמים מעורבים בכישלון שתל קרני. 1. הרדמה <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עכברי תורם למקבל בהרדמה כללית על ידי זריקות IP של קטמין (86.98 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (13.04 מ&quot;ג / קילוגרם). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את עכבר הנמען בהרדמה לאורך כל ההליך אשר בדרך כלל לוקח 30 דקות לשעה. כתוצאה מכך, כל הזמן לפקח על העכבר עבור כל סימנים של חזרה להכרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל המשחה puralube לעין עד שלא תעבור ניתוח אחרי בעל החיים הוא מורדם כדי למנוע יובש. </li></ol> 2. הארכת קרנית <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבלתן של קרנית התורם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שבעלי החיים הוא בהרדמה מלאה, להשיג mydriasis ההולם מצד ממשל של כמה טיפות עיניים של tropicamide 1% ו -2.5% hydrochloride phenylephrine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את הראש של החיה התורמת בצורה אופקית על לוח מונח על תמיכת מטלטלין חסון. תקן את הראש עם רצועה של סרט על פני הצוואר, כדי להבטיח כי העין היא במצב אופקי לאורך כל הפעולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במקדחה בקוטר 2 מ&quot;מ, שקצה שלו היה צבוע עם מתיל הכחול, החוצהמרפד את האתר שתל קרנית המרכזית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסכין חד, לחדור הקרנית ולהזריק healon ללשכה הקדמית להעמיק אותו כדי להפחית את הסיכוי לניזק לאנדותל התורם והעדשה בסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלו שתל התורם במספריים Vannas ומקום לצלחת המכילה תמיסת מלח מאוזנת &quot;הנקס ועד שימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שתל התורם כבר הוסר, להרדים את העכבר התורם באמצעות CO 2 שאיפה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת מיטת השוחד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על אותם השלבים כפי שמתואר ב2.1.1 דרך 2.1.2 לנמען. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במקדחה בקוטר 1.5 מ&quot;מ, מתאר את אתר שתל נמען. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסכין חד, לחדור הקרנית ולהזריק healon ללשכה הקדמית להעמיק אותו כדי להפחית את הסיכוי לניזק לעדשה הבסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכפתור קרני המרכזי שהותווה מהנמען באמצעות מספריים Vannas וזורקים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפירתשתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את קרנית התורם מעל שתל המיטה בקרנית של הנמען. הקפד שhealon נאות הוא תחת קרנית התורם להגנה על תאי האנדותל תורם מנזק על ידי מגע ישיר עם עדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות microforceps היטה Super Fine, למקם את הנגיסה הראשונה של 11-0 תפר ניילון לצד התורם, דרך התורם עם עומק 90% מעובי מלא לצד של הנמען, ואז לקשור את. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהקרנית מעוגנת במקום, לבצע תפרי midcardinal קטע כזה שיש לו את הקרנית 8 עד 10 תפרים כולל וקרנית התורם היא בשורה בצורה מאובטחת עם ומחוברת למיטת השתל הקרנית הנמען. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העמקת הלשכה הקדמית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעמיק את הלשכה הקדמית על ידי הזרקת HBSS או בועת אוויר ללשכה הקדמית ובעדינות לבדוק את התקינות של השתל קרני לדליפה עם ספוג. הערה: אם לא ניתן רפורמה הלשכה הקדמית אז יש הסתברות גבוהה של גataract אשר יהפוך את ההערכות עתידיות של הקרנית המושתלת קשות מאוד וגם להוביל לבעיות בתפקוד תורם קרנית האנדותל וכישלון ובכך שתל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכה סופית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב לעין לקבוע כי התלמיד הוא עגול ועומק הלשכה הקדמית הוא נורמלי. הערה: אם התלמיד אינו עגול זה עולה כי בתפירת איריס נפגעה וכך השתל נחשב לכישלון טכני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה אנטיביוטית לעין. אופציונאלי: סגור את המכסה עין עם תפר 7-0 משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב עכברים עד שהם התעוררו לגמרי ולאחר מכן בנפרד לשכן אותם למינימום של שני ימים שלאחר ניתוח. </li></ol></li></ol> הסרת 3. תפר <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרים בם תפר מכסה משמש, להרדים עכברים כפי שתואר לעיל ולהסיר את תפר המכסה ב 48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים ביום 7 לאחר הניתוח. הסר את sutures אבטחת השתל קרני. ברגע שהתפרים יוסרו ובעלי החיים התעוררו באופן מלא, להחזיר אותו לכלוב שלה. </li></ol> 4. הערכה קלינית <ol style="margin-left: 40px;;text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את העין לאינדיקציות של סיבוכים פרוצדורליים הכוללים, קטרקט (ערפול של העדשות), hyphema (דם בלשכה הקדמית), לשכה קדמית שאינה של העומק הנכון, או אטימות משמעותיות של הקרנית. שקול אלה המדגימים סיבוכים אלה כ&quot; התפשר &quot;ולהרדים אותם משאיפת CO 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את כל הבדיקות על עכברי unanesthetized. החזק את העכבר ביד אחת ובכך מרסן את העכבר, כך ששני יכול proptose עין כדי לאפשר תצפית טובה יותר של העין. ברגע שהתצפיות הושלמו, להחזיר את בעל החיים לכלוב שלה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האם צופה שאינו מכיר את קבוצות הטיפול העריך את השווי מושתל קרניות 2 עד 3 פעמים בשבוע לסימנים של שתל קרניפרקי דחייה או כישלון שתל קרני. להשתמש במיקרוסקופ הניתוחי או biomicroscope מנורת סדק אופקי לתצפיות אלה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך כל קרנית לאטימות באמצעות סולם של 0 עד 5. קנה המידה מוגדרת באופן הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 0 עד אלה קרניות שאין להם סימנים של אטימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 1 לאלה קרניות שמראות אטימות שטחיות מינימליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 2 עד קרניות המציגות אטימות קלות ועמוקות יותר, אבל התלמיד ואיריס שהבסיס עדיין ניתן להבחין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 3 עד קרנית המציגות אטימות סטרומה בי לא ניתן לראות את איריס בפירוט למעט השוליים התלמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 4 לקרנית, המציגות אטימות סטרומה צפופות ואם ניתן לראות אין מבנים שבבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת ציון של 5 עד קרנית המציגות אטימות מלאים ובצקת סטרומה אינטנסיבית, עם תלמיד ואיריס טשטש לחלוטין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"><html> גם להעריך כל קרנית למידת חדירה של כלי דם (ניאו-וסקולריזציה) משתמש בסולם דירוג של 1 עד 8. לשם כך, להציג את הקרנית כמורכבת של 4 רביעים שווים ולקבוע את הסכום של כלי דם בכל אחד מרביעים עם ציון שטווח הרצון בין 0 (ללא כלי) 2 לכלי דם נרחבים של הרבע הזה. הוסף את הציונים הבודדים מכל רבע כדי לחשב את הציון הסופי ניאו-וסקולריזציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסווג קרניות בחריפות כזאת בדחו אם יש להם ציון של 3 לשתי תצפיות רצופות במשך זמן מצביע עד 5 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסווג עכברים שהקרניות היו ברורים בשעה 5 שבועות, אבל לפתח עננות בזמנים&gt; 45 ימי הודעה קליטתם, עם ציון של 3 לשתי נקודות זמן ברציפות, כבעל דחיית שתל קרני לטווח מאוחר עבר. השתמש בעקומות הישרדות קפלן-מאייר לנתח הישרדות שתל. </li></ol></li></ol> 5. מניפולציה של הדגם בשמאל: 40px; &quot;&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה של תאים בודדים מהטחול. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין תאים בודדים, להרדים את עכבר התורם ראשון. לאחר מכן, להסיר את הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הטחול במסננת תא ולשבש אותה עם בוכנת מזרק ממזרק 3 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף תאים וגלולים ב 10 מיליליטר של תמיסת מלח מאוזנת הנקס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר 10 μl של השעיה תא ולהוסיף עד 10 μl של trypan 0.4% כחולים ולערבב. תוסיף את זה לhemocytometer ולספור את התאים ברשת המרכזית. מספר התאים בצינור הוא ספירת התאים 10 4 x 2 (גורם לדילול בtrypan הכחול) X X 10 (נפח בצינור). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקה ללשכה הקדמית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכברים כפי שתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע זריקות באמצעות מיקרוסקופ לנתח. לכל הזרקה intracameral, להשתמש 6 10 תאי טחול ב0.005 מיליליטר נפח ומצויד במחט 33 G מזרק microliter 0.25 מיליליטר. הערה: מניפולציות אחרותשל המודל יכול להתבצע על ידי טיפול בבעלי חיים עם חומרים כימיים הפועלים כשני יריבים או אגוניסטים כדי לקבוע את התפקיד שגורם מסוים עשוי לשחק לאחר ניתוח שתל קרני orthotopic. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Farooq, A. V., Shukla, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+epithelial+and+stromal+keratitis:+an+epidemiologic+update.">Herpes simplex epithelial and stromal keratitis: an epidemiologic update.</a> Surv. Ophthalmol. , 448-462 (2012).</li><li>Gipson, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+and+diseases+of+the+ocular+surface+and.">Age-related changes and diseases of the ocular surface and.</a> Invest. Opthlamol. Vis. Sci. 54, 48-53 (2013).</li><li>Edwards, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indications+for+corneal+transplantation+in+New+Zealand:+1991-1999.">Indications for corneal transplantation in New Zealand: 1991-1999.</a> Cornea. 21, 152-155 (2002).</li><li>Thompson, R. W., Price, M. O., Bowers, P. J., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival+after+penetrating+keratoplasty.">Long-term survival after penetrating keratoplasty.</a> Ophthalmol. 110, 1396-1402 (2003).</li><li>Williams, K. A., Roder, D., Esterman, A., Muehlberg, S. M., Coster, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+predictive+of+corneal+graft+survival.+Report+form+the+Australian+Corneal+Graft+Registry.">Factors predictive of corneal graft survival. Report form the Australian Corneal Graft Registry.</a> Ophthalmology. 99, 403-414 (1992).</li><li>Larkin, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+allograft+rejection.">Corneal allograft rejection.</a> Br. J. Ophthalmol. 78, 649-652 (1994).</li><li>Boisjoly, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+of+corneal+graft+failure.">Risk factors of corneal graft failure.</a> Ophthalmol. 100, 1728-1735 (1993).</li><li>Sugar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recipient+Risk+Factors+for+Graft+Failure+in+the+Cornea+Donor+Study.">Recipient Risk Factors for Graft Failure in the Cornea Donor Study.</a> Ophthalmol. 116, 1023-1028 (2009).</li><li>Namba, K., Kitaichi, N., Nishida, T., Taylor, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+regulatory+T+cells+by+the+immunomodulating+cytokines+alpha-melanocyte-stimulating+hormone+and+transforming+growth+factor-beta2.">Induction of regulatory T cells by the immunomodulating cytokines alpha-melanocyte-stimulating hormone and transforming growth factor-beta2.</a> J. Leukoc. Biol. 72, 946-952 (2002).</li><li>Taylor, A. W., Yee, D. G., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+nitric+oxide+generated+by+inflammatory+macrophages+by+calcitonin+gene-related+peptide+in+aqueous+humor.">Suppression of nitric oxide generated by inflammatory macrophages by calcitonin gene-related peptide in aqueous humor.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1372-1378 (1998).</li><li>Wilbanks, G. A., Mammolenti, M., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+induction+of+anterior+chamber-associated+immune+deviation+(ACAID).+III.+Induction+of+ACAID+depends+upon+intraocular+transforming+growth+factor-beta.">Studies on the induction of anterior chamber-associated immune deviation (ACAID). III. Induction of ACAID depends upon intraocular transforming growth factor-beta.</a> Eur. J. Immunol. 22, 165-173 (1992).</li><li>Volpert, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducer-stimulated+Fas+targets+activated+endothelium+for+destruction+by+anti-angiogenic+thrombospondin-1+and+pigment+epithelium-derived+factor.">Inducer-stimulated Fas targets activated endothelium for destruction by anti-angiogenic thrombospondin-1 and pigment epithelium-derived factor.</a> Nat. Med. , 8-349 (2002).</li><li>Apte, R. S., Sinha, D., Mayhew, E., Wistow, G. J., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+role+of+macrophage+migration+inhibitory+factor+in+inhibiting+NK+cell+activity+and+preserving+immune+privilege.">Cutting edge: role of macrophage migration inhibitory factor in inhibiting NK cell activity and preserving immune privilege.</a> J. Immunol. 160, 5693-5696 (1998).</li><li>Kennedy, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+production+of+interleukin-1+receptor+antagonist+peptides+in+normal+human+cornea.">Novel production of interleukin-1 receptor antagonist peptides in normal human cornea.</a> J. Clin. Invest. 95, 82-88 (1995).</li><li>Shimmura-Tomita, M., Wang, M., Taniguchi, H., Akiba, H., Yagita, H., Hori, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Galectin-9-mediated+protection+from+allo-specific+T+cells+as+a+mechanism+of+immune+privilege+of+corneal+allografts.">Galectin-9-mediated protection from allo-specific T cells as a mechanism of immune privilege of corneal allografts.</a> PLoS One. 8, (2013).</li><li>Goldberg, M. F., Ferguson, T. A., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cellular+adhesion+molecules+in+inflamed+human+corneas.">Detection of cellular adhesion molecules in inflamed human corneas.</a> Ophthalmol. 101, 161-168 (1994).</li><li>Stuart, P. M., Griffith, T. S., Usui, N., Pepose, J. S., Yu, X., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD95+ligand+(FasL)-induced+apoptosis+is+necessary+for+corneal+allograft+survival.">CD95 ligand (FasL)-induced apoptosis is necessary for corneal allograft survival.</a> J Clin Invest. 99, 396-402 (1997).</li><li>Yamagami, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fas-Fas+ligand+interactions+in+the+immunorejection+of+allogeneic+mouse+corneal+transplants.">Role of Fas-Fas ligand interactions in the immunorejection of allogeneic mouse corneal transplants.</a> Transplantation. 64, 1107-1111 (1997).</li><li>Stuart, P. M., Pan, F., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fas/Fas+ligand+interactions+regulate+neovascularization+in+the+cornea.">Fas/Fas ligand interactions regulate neovascularization in the cornea.</a> Invest. Ophthalmmol. Vis. Sci. 44, 93-98 (2003).</li><li>Stuart, P. M., Yin, X. T., Pan, F., Haskova, Z., Plambeck, S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitors+of+matrix+metalloproteinases+activity+prolong+corneal+allograft+acceptance+by+increasing+FasL+expression.">Inhibitors of matrix metalloproteinases activity prolong corneal allograft acceptance by increasing FasL expression.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1169-1173 (2004).</li><li>Joo, C. -. K., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+mediated+responses+in+a+murine+model+of+orthotopic+corneal+transplantation.">T-cell mediated responses in a murine model of orthotopic corneal transplantation.</a> Invest.Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 1530-1540 (1995).</li><li>Sonoda, Y., Sano, Y., Ksander, B., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cell-mediated+immune+responses+elicited+by+orthotopic+corneal+allografts+in+mice.">Characterization of cell-mediated immune responses elicited by orthotopic corneal allografts in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 427-434 (1995).</li><li>Sano, Y., Osawa, H., Sotozono, C., Kinoshita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+expression+during+orthotopiccorneal+allograft+rejection+in+mice.">Cytokine expression during orthotopiccorneal allograft rejection in mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 1953-1957 (1998).</li><li>Haskova, Z., Usui, N., Ferguson, T. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4++T+cells+are+critical+in+corneal+but+not+skin+allograft+rejection.">CD4+ T cells are critical in corneal but not skin allograft rejection.</a> Transplantation. 69, 483-488 (2000).</li><li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+disruption+of+antiangiogenic+signals+by+recruited+allospecific+T+cells+leads+to+corneal+allograft+rejection.">Immunological disruption of antiangiogenic signals by recruited allospecific T cells leads to corneal allograft rejection.</a> J. Immunol. 188, 5962-5969 (2012).</li><li>Dana, M. R., Yamada, J., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+interleukin-1+receptor+antagonist+promotes+corneal+transplant+survival.">Topical interleukin-1 receptor antagonist promotes corneal transplant survival.</a> Transplantation. 63, 1501-1507 (1997).</li><li>Cunnusamy, K., Chen, P. W., Niederkorn, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-17A-dependent+CD4+CD25++regulatory+T+cells+promote+immune+privilege+of+corneal+allografts.">IL-17A-dependent CD4+CD25+ regulatory T cells promote immune privilege of corneal allografts.</a> J. Immunol. 186, 6737-6745 (2011).</li><li>Fu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine+depletion+as+a+mechanism+for+the+immune+privilege+of+corneal+allografts.">Arginine depletion as a mechanism for the immune privilege of corneal allografts.</a> Eur. J. Immunol. 41, 2997-3005 (2011).</li><li>Medina, C. A., Rowe, A. M., Yun, H., Knickelbein, J. E., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Azithromycin+treatment+increases+survival+of+high-risk+corneal+allotransplants.Cornea.">Azithromycin treatment increases survival of high-risk corneal allotransplants.Cornea.</a> , 32-658 (2013).</li><li>Cho, Y. K., Zhang, X., Uehara, H., Young, J. R., Archer, B., Ambati, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor+1+morpholino+increases+graft+survival+in+a+murine+penetrating+keratoplasty.">Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1 morpholino increases graft survival in a murine penetrating keratoplasty.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 8458-8471 (2012).</li><li>Kim, H. K., Choi, J. A., Uehara, H., Zhang, X., Ambati, B. K., Cho, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presurgical+corticosteroid+treatment+improves+corneal+transplant+survival+in+mice.">Presurgical corticosteroid treatment improves corneal transplant survival in mice.</a> Cornea. 32, 1591-1598 (2013).</li><li>Yamazoe, K., Yamazoe, K., Shimazaki-Den, S., Shimazaki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+for+corneal+graft+recovery+after+severe+corneal+graft+rejection+following+penetrating+keratoplasty.">Prognostic factors for corneal graft recovery after severe corneal graft rejection following penetrating keratoplasty.</a> BMC Ophthalmol. 13, 5 (2013).</li><li>Panda, A., Vanathi, M., Kumar, A., Dash, Y., Priya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+graft+rejection.">Corneal graft rejection.</a> Surv. Ophthalmol. 52, 375-396 (2007).</li><li>Patel, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+survival+and+endothelial+outcomes+in+the+new+era+of+endothelial+keratoplasty.">Graft survival and endothelial outcomes in the new era of endothelial keratoplasty.</a> Exp. Eye Res. 95, 40-47 (2012).</li><li>Anshu, A., Price, M. O., Tan, D. T., Price, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+keratoplasty:+a+revolution+in+evolution.">Endothelial keratoplasty: a revolution in evolution.</a> Surv. Ophthalmol. 57, 236-252 (2013).</li></ol>

The authors have no competing financial interests.

המודל העכברי של השתלת קרנית המתוארת כאן מאפשר לחוקר ללמוד דחיית שתל קרנית אדם במודל שהוא ניבוי של מה גורמים הקשורים הטובים ביותר עם ​​שתי הדחייה 15,17,18,20, 26-30 וקבלת 21-25 של קרנית allografts. בשונה השתלת קרנית אנושית, שבו מטופלים מקבלים גם טיפול בסטרואידים מקומי א?...

השתלת קרנית היא אחד מהסוגים המוצלחים והנפוצים ביותר של השתלה שבוצעו בבני אדם. הסיבות לכך שניתוח זה מבוצע הן תוצאה של פציעה, מחלה זיהומית 1, או צורות אחרות של מחלה בקרנית שאינה מדבקת 2. דמויות מעין הבנק האגודה של אמריקה עולות כי מעל 46,000 בוצעו בשנת 2011 (ראה באתר אינטרנט בכתובת: restoresight.org/eye_banks/eye_banks.html). אינדיקציה להצלחתו היא ששיעורי כישלון שנה אחת עבור שתלי קרנית אלוגנאית נעים 10-15% ולאחר 5 שנים של ההצלחה היא בעודף של 70% 3-8. מחקרים רבים הראו, ההצלחה של allografts קרנית קשורה באופן ישיר לעובדה כי העין היא אתר מועדף אימונולוגית. גורמים אחראים למצב הקרניות כאתר זכות חיסוני כוללים חוסר של שני כלי הדם והלימפה בקרנית, היעדר יחסי של תאי הצגת אנטיגן, גורמים המיוצר על ידי הקרנית שsuppresזה funtions מפעיל חיסוני 9-15, ביטוי נמוך של MHC אנטיגנים 16, ואת הביטוי של מקאל 17-20. עם זאת, למרות גורמים אלה, גורם שתלים אלה להצלחה, הם עוברים דחייה 3-7. כתוצאה מכך, הבנת מנגנונים אלה שמתווכים דחייה זו, כמו גם בדיקת טיפולים שונים למניעת דחייה היא בעל חשיבות קריטית. לצורך כך, אנו מתארים כאן מודל עכברי של השתלת קרנית שכבר בשימוש במשך 20 שנים כדי ללמוד השתלת קרנית בסביבה ניסויית מבוקרת. מאז תגובות השתלה כרוכות בגורמים רבים ושונים הפועלים בקונצרט שאולטימטיבי לקבוע אם הרקמה המושתלת נכשלת או מצליחה, שלא ניתן להבין את החשיבות של גורמים אלה בכל דגם במבחנה. כתוצאה מכך, מחקרים שנערך בבעלי חיים שלמים נדרשים כדי לקבוע מה גורמים חשובים להצלחה או או failuמחדש של רקמה מושתלת. בעוד מינים אחרים של בעלי חיים שימשו במחקר השתלה קרנית, יש במודל העכברי מספר יתרונות בהשוואה לשימוש במינים אחרים. הראשון הוא קיומה של זנים רבים של עכברים המבטאים את גנים מושתלים מסוימים או היו ממוקד-גן לחוסר ביטוי של גורמים חיסוניים ספציפיים שתפקידה בהשתלה ניתן ללמוד טוב יותר. בנוסף, יש חומרים כימיים רבים (שני גורמים רקומביננטי ונוגדנים המנטרלים את הגורמים) שהם ספציפיים לעכברים ושאינם קיימים למינים רבים אחרים של בעלי חיים. בגלל קיומם של גורמים אלה, מודל זה כבר נעשה שימוש נרחב כדי לזהות גורמים רלוונטיים מעורבים בתגובה החריפה של קרנית שתל 15, 17,18,20 -29. יתר על כן, רבים מן הגורמים המעורבים בהשתלת קרנית ידוע גם להיות פונקציונלי בהשתלה של רקמות אחרות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:71px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Zeiss Surgical Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">Rebuilt</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vannus Scissors</td>
			<td style="width:71px;">Stortz</td>
			<td style="width:119px;">E-3387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">11-0 Sutures</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td style="width:119px;">717939M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trephine 2.0mm</td>
			<td style="width:71px;">Katena</td>
			<td style="width:119px;">K 2-7520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trephine 1.5 mm</td>
			<td style="width:71px;">Katena</td>
			<td style="width:119px;">K 2-7510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Tricaine Hydrochloride 0.5%</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td style="width:119px;">NDC 0065-0741-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Healon</td>
			<td style="width:71px;">Abbott</td>
			<td style="width:119px;">Healon OVD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">7-0 Sutures</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">8065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">2.5% Phenylephrine HCl</td>
			<td style="width:71px;">Alcon</td>
			<td style="width:119px;">NDC 61314-342-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">1% Tropicamide</td>
			<td style="width:71px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td style="width:119px;">NDC-24208-585-59</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hamilton Syringe</td>
			<td style="width:71px;">Hamilton</td>
			<td style="width:119px;">7654-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">33 gauge needle</td>
			<td style="width:71px;">Hamilton</td>
			<td align="right" style="width:119px;">90033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Cell Strainer (100 &#956;m nylon)</td>
			<td style="width:71px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:71px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:119px;">B3175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine corneal transplantation: a model to study the most common form of solid organ transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

המודל העכברי של השתלת קרנית היה בשימוש כבר למעלה מ -20 שנים לאפיין בהצלחה מנגנונים של שני דחיית קרנית שתל 19-23 וקבלת קרנית שתל 13, 15,16,18, 24-27. מודל זה שימש להקמת חשיבות ביטוי מקאל בקבלת שתל קרנית, שבבעלי חיים שאין לי מקאל לא היו מסוגל לקבל allografts קרני 15. כמו כ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation at JoVE.com

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

השתלת קרנית עכברית: דגם לחקר הצורה נפוצה ביותר של Solid השתלות איברים

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

murine-corneal-transplantation-model-to-study-most-common-form-solid

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

9.6K Views.  Saint Louis University. Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

Video: Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize their blood glucose levels, islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes 1,2. More recently, advances in human islet transplantation have further strengthened this view 1,3. However, two major limitations prevent islet transplantation from being a widespread clinical reality: (a) the requirement for large numbers of islets per patient, which severely reduces the number of potential recipients, and (b) the need for heavy immunosuppression, which significantly affects the pediatric population of patients due to their vulnerability to long-term immunosuppression. Strategies that can overcome these limitations have the potential to enhance the therapeutic utility of islet transplantation.
Islet transplantation under the mouse kidney capsule is a widely accepted model to investigate various strategies to improve islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and implantation of islets to the diabetic recipients. Both procedures require surgical steps that can be better demonstrated by video than by text. Here, we document the detailed steps for these procedures by both video and written protocol. We also briefly discuss different transplantation models: syngeneic, allogeneic, syngeneic autoimmune, and allogeneic autoimmune.

Transplantation of isolated islets has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Here we describe a method to isolate islets from mouse pancreata and transplant them to the subcapsular space of the kidney.

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these strategies is to examine their effects on heart function. There are several techniques to measure in vivo cardiac mechanics (e.g., echocardiography, pressure/volume relations, etc.). Compared to echocardiography, real-time left ventricular (LV) pressure/volume analysis via catheterization is more precise and insightful in assessing LV function. Additionally, LV pressure/volume analysis provides the ability to instantaneously record changes during manipulations of contractility (e.g., &#946;-adrenergic stimulation) and pathological insults (e.g., ischemia/reperfusion injury). In addition to the maximum (+dP/dt) and minimum (-dP/dt) rate of pressure change in the LV, an accurate assessment of LV function via several load-independent indexes (e.g., end systolic pressure volume relationship and preload recruitable stroke work) can be attained. Heart rate has a significant effect on LV contractility such that an increase in the heart rate is the primary mechanism to increase cardiac output (i.e., Bowditch effect). Thus, when comparing hemodynamics between experimental groups, it is necessary to have similar heart rates. Furthermore, a hallmark of many cardiomyopathy models is a decrease in contractile reserve (i.e., decreased Bowditch effect). Consequently, vital information can be obtained by determining the effects of increasing heart rate on contractility. Our and others data has demonstrated that the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) knockout mouse has decreased contractility. Here we describe the procedure of measuring LV pressure/volume with increasing heart rates using the NOS1 knockout mouse model.

This article describes the measurement of murine left ventricular function via pressure/volume analysis at different heart rates.

צנתור לב בעכברים כדי למדוד את יחסי נפח לחץ: חקירת אפקט Bowditch

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

מודל של הקרנית של הקרניות הפותל באמצעות לחצני הקרנית מפוצלת

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

פיתוח של מודל פולשני, בסיוע לייזר של הקרנית הפסד של תא אנדותל

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

סיבוכים מופחתים לאחר חיבור מחדש עורקי במודל חולדה של השתלת כבד אורתוטופית

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for kidney transplantation (KT). Even though, the use of allografts from extended criteria donors (ECD) could partially ease the shortage of organ donors, ECD organs carry a potentially higher risk for inferior outcomes and postoperative complications. Dynamic organ preservation techniques, modulation of ischemia-reperfusion and preservation injury, and allograft therapies are in the spotlight of scientific interest in an effort to improve allograft utilization and patient outcomes in KT.
Preclinical animal experiments are playing an essential role in translational research, especially in the medical device and drug development. The major advantage of the porcine orthotopic auto-transplantation model over ex vivo or small animal studies lies within the surgical-anatomical and physiological similarities to the clinical setting. This allows the investigation of new therapeutic methods and techniques and ensures a facilitated clinical translation of the findings. This protocol provides a comprehensive and problem-oriented description of the porcine orthotopic kidney auto-transplantation model, using a preservation time of 24 hours and telemetry monitoring. The combination of sophisticated surgical techniques with highly standardized and state-of-the-art methods of anesthesia, animal housing, perioperative follow up, and monitoring ensure the reproducibility and success of this model.

Large animal models play an essential role in preclinical transplantation research. Due to its similarities to the clinical setup, the porcine model of orthotopic kidney auto-transplantation described in this article provides an excellent in vivo setting for the testing of organ preservation techniques and therapeutic interventions.

השתלת כליה אורתוטופית במודל פורצין באמצעות 24 שעות שימור איברים וטלמטריה רציפה

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Intramyocardial Transplantation of MSC-Loading Injectable Hydrogels after Myocardial Infarction in a Murine Model

One of the major issues facing current cardiac stem cell therapies for preventing postinfarct heart failure is the low retention and survival rates of transplanted cells within the injured myocardium, limiting their therapeutic efficacy. Recently, the use of scaffolding biomaterials has gained attention for improving and maximizing stem cell therapy. The objective of this protocol is to introduce a simple and straightforward technique to transplant bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) using injectable hydroxyphenyl propionic acid (GH) hydrogels; the hydrogels are favorable as a cell delivery platform for cardiac tissue engineering applications due to their ability to be cross-linked in situ and high biocompatibility. We present a simple method to fabricate MSC-loading GH hydrogels (MSC/hydrogels) and evaluate their survival and proliferation in three-dimensional (3D) in vitro culture. In addition, we demonstrate a technique for intramyocardial transplantation of MSC/hydrogels in mice, describing a surgical procedure to induce myocardial infarction (MI) via left anterior descending (LAD) coronary artery ligation and subsequent MSC/hydrogels transplantation.

Stem cell-based therapy has emerged as an efficient strategy to repair injured cardiac tissues after myocardial infarction. We provide an optimal in vivo application for stem cell transplantation using gelatin hydrogels that are able to be enzymatically cross-linked.

השתלה תוך-שרירית של הידרוג'ל להזרקה בטעינת MSC לאחר אוטם שריר הלב במודל מורין

One of the major issues facing current cardiac stem cell therapies for preventing postinfarct heart failure is the low retention and survival rates of ...