אנו מודים לקריסטין ג&#39;ונסון לעבודה הגרפית.

כל הפרוטוקולים מעורבים בעלי חיים מוצגים ולאושרו על ידי ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים בבית החולים לילדים בבוסטון ונערכים בהתאם להמלצותיה של האגודה להערכה והסמכה של מעבדה טיפול בבעלי חיים (AAALAC). הקפד להשתמש מכשור סטרילי וtechniqure ספטית בעת ביצוע ההליך. 1 הכנת פלטות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את 10 מ&quot;ג של סוקרלפט ו60 מ&quot;ג של Hydron עם מרית ניע סטרילי. מניחים בmicrocentrifuge צינורות נפרדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים פיסה מרובעת 1 סנטימטר של רשת לתוך צלחת 10 סנטימטר סטרילי. היפוך כל כך רשת נשענת על מכסה רדוד. מניח בצד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 500 μl של אתנול לHydron והמערבולת לפחות 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף את הכמות המתאימה של גורם גדילה (סטנדרטי: 20 מיקרוגרם לbFGF, 50 מיקרוגרם לVEGF) לסוקרלפט ובקצרה מערבולת. גורם גדילת חנות ב-80 ° C מקפיא בריכוז של 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל. כרכי נוזל הוסיפו צריכים להיות מינימום של 20 μl כדי להבטיח סוקרלפט היא הרטיבה לגמרי, אבל לא יעלו על 50 μl. נפח גדול יותר הופך את האידוי של הנוזל בשלב הבא קשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את תערובת סוקרלפט למאייד צנטריפוגלי על החום נמוך עד שהתערובת יבשה לחלוטין, בדרך כלל 30-50 דקות בהתאם לכמות של נוזל המשמשת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את התערובת ללחות שיורית עם הקצה החד של מרית סטרילי. התערובת צריכה להרגיש &quot;פריכה&quot;. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בקצה החד של המרית כדי לשבור את תערובת סוקרלפט בתוך הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 μl של Hydron לסוקרלפט. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשל האופי צמיג של Hydron, לחתוך את הקצה מקצה pipet 200 μl ולאחר מכן לצייר ולשחרר את 10 μl לפני pipetting למעלה שוב ומוסיף לסוקרלפט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות להשתמש ירק כפוףאולא לערבב Hydron וסוקרלפט ומסירים מצינור. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את התערובת בצד התחתון של הקצה של המרית הכפופה ולאחר מכן לסובב את הצינור בעת הציור את המרית לאורך הקיר של הצינור. התערובת תתייבש במהירות כל כך חייב להיעשות צעד זה ביעילות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים את התערובת על גבי הרשת מוכנה באמצעות מלקחיים כדי להחזיקו במקום. התערובת צריכה להיות גם שכבה ולמלא לתוך החורים של הרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את המרית הכפופה לHydron הצינור המכיל ולהשתמש בו מעיל משני צידי הרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הרשת המצופה נשענת על צד נגד קצה הצלחת ולאפשר ייבוש ב RT עבור 30-45 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הרשת במקפיא -20 ° C או פנה מייד לשלב הבא. שמור רשת בתוך צלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את צלחת 35 מ&quot;מ בתוך צלחת פטרי הגדולה יותר, המכסה. השתמש בזוג המלקחיים למשוך בזהירות את הסיבים של הרשת בנפרד על צלחת 35 מ&quot;מ. ג כדורים תועיםייגבה מהצלחת הגדולה יותר בסוף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו כדורים לאחידות בהיקף. תהליך התשואה של כ 250 כדורים ובכך המינון הסטנדרטי לגלולה לbFGF וVEGF הוא 80 ng ו200 ng, בהתאמה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדורי חנות ב35 צלחת מ&quot;מ במקפיא -20 ° C עד 3 חודשים. </li></ol> .2 השתלה כירורגית של פלטות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את אזור ניתוח תחת מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם Avertin (400-500 מ&quot;ג / קילוגרם, intraperitoneal) ומקם את העכבר מתחת למיקרוסקופ כך עין גלויה. בצע קמצוץ הבוהן כדי להבטיח רמה מספקת של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העין העכבר על ידי הצבת 1 טיפה של פתרון proparacaine על גבי גלגל העין. חכה 20-30 שניות ולהספיג עם תחבושת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Proptose עין העכבר עם # הקהה להיות בטוח לעזוב את העור בין מלקחיים ועין 1 מלקחיים תכשיטנים. חשוב לשפוט את הלחץ המופעל בצורה נכונה.60; מחזיק את העין בחוזקה מדי יגרום לו להיות אדום ומגורה, ואילו מדי לאבד את האחיזה תאפשר עין לנוע במהלך ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בmicroknife 30 ° לעשות חתך לתוך הקרנית כ 1 מ&quot;מ מימבוס. החתך צריך להיות 1-2 מ&quot;מ אורך. חתך צריך להיות עמוק מספיק כדי לחדור מעבר לשכבת האפיתל לmidstroma אבל לא כל כך עמוק כדי לקרוע את העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בסכין פון GRAEF לעשות כיס בניצב לחתך. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק את הסכין מתחת לשכבה הקרנית באתר החתך ובעדינות לעבוד סכין ובהעבר אותו לאורך החתך להגדלת החלל, ובכך ליצור הכיס. זה עוזר להזיז את העכבר, כמו גם להיות מסוגל לעבוד עם העקמומיות של העין. היזהר שלא לדחוף כלפי מטה עם הקצה כדי למנוע פקיעת עין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרטיב המלקחיים של צורף # 5 עם proparacaine לקחת גלולה עד מתוך צלחת. מניחים גלולה על העין. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרטיב את סכין פון GRAEF עם proparacaine ולהעביר חלק מנוזל על גלולה כדי להפוך אותו גומי וגמיש. להסיר לחות עודפת עם תחבושת או מטלית כותנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הכדור לתוך הכיס באמצעות סכין פון GRAEF לדחוף אותו פנימה מתחת לשכבת הקרנית. ברגע שכל גלולה היא בפנים, להפעיל את הצד השטוח של סכין פון GRAEF על אתר כדי לבדוק שהגלולה היא מאובטחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל עין עם משחה אנטיביוטית משולשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפכתי את העכבר ולחזור על ניתוח בעין השנייה. </li></ol> .3 כימות של הקרנית neovascularization. השאר בעלי חיים כדי לפתח כלי מעל פרק זמן מוגדר. היום לדירוג כלי תלוי בגורם גדילה בשימוש. הכיתה bFGF ביום 5 וVEGF חלש יותר ביום .6 יום ההשתלה הוא יום 0. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם Avertin (400-500 מ&quot;ג / קילוגרם, intraperitoneal). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במיקרוסקופ מנורת הסדק להגר&quot;אדינג. יש עינית אחת reticule, קווים בתוך העינית משמשת ככולים עזר למדידה לכמת אונייה שאורכה ומרחק סביב ההיקף של העין שהכולים צצו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את העכבר מול היקף, מיקום עכבר ולכן העין נראית בעיניים עם גלולה ישירות קדימה. לייצב את הראש בין האגודל לאצבע ולכן העור מתהדק על פנים והעין proptosed מעט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את ציר y של reticule לאורך כלי limbal ישירות מתחת גלולה. מדוד את האורך של כלי הסתעפות כלפי מעלה לכיוון כדורים. להקליט מדידה זו בעשירית מילימטרים ולייעד אונייה שאורכה (VL) (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל או העכבר או ארנק, כך שהמרחק סביב העין שהכלים האלה צצו מתבהר. זה הכי קל לחשוב על עין כפני שעון במרווחים של 1 עד 12. מיועד שעת שעון מספר זה (CH) (איור 1B). זה יכול להיות מספר או שברים של 0.25 (למשל, 2, 2.25, 2.5 או 2.75) שלמים. הערה: CH הוא סובייקטיבי. לדוגמא, חלקם עשוי למדוד את המרחק סביב העין שיכלול את כל נבטו מימבוס ואילו אחרים עשויים להפסיק מדידה בנקודה שבי האונייה שאורכה הוא מחצית מקסימלי כלי. הגורם החשוב הוא להיות עקבי עם איך אחד בוחר לכיתה. </li></ol><img alt="איור 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51375/51375fig1.jpg" /> איור 1 כימות neovascularization קרנית. () 80 ng bFGF גלולה הושתלה בעכבר / 6J C57BL מראה מנורת סדק reticule אוריינטציה למדוד אונייה שאורכה. VL = 0.9 מ&quot;מ. (ב) reticule מנורת הסדק מראה עין אותו מסובב למדוד שעת שעון. CH = 3.25. אזור ספינה מחושב = 1.84 מ&quot;מ 2. תמונות אלה שופרו באופן דיגיטלי על מנת לאפשר לתוספת של סכמטי reticule. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/51375/51375fig1highres.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.</a> <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את שטח הכלי (VA) תוך שימוש בנוסחה הבאה, המבוסס על השטח של סגלגל (הערה, זה עוזר לשמור את זה בחשבון בעת ​​דירוג.) אקספרס VA במילימטרים בריבוע. הנוסחה היא כדלקמן: שעת x 0.2 π = אזור כלי שעון Vessel אורך X </li></ol>

<ol>
	<li>Gospodarowicz, D., Moran, J., Braun, D., Birdwell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+growth+of+bovine+vascular+endothelial+cells:+fibroblast+growth+factor+as+a+survival+agent.">Clonal growth of bovine vascular endothelial cells: fibroblast growth factor as a survival agent.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 73, 4120-4124 (1976).</li><li>Glaser, B. M., D'Amore, P. A., Seppa, H., Seppa, S., Schiffmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+tissues+contain+chemoattractants+for+vascular+endothelial+cells.">Adult tissues contain chemoattractants for vascular endothelial cells.</a> Nature. 288, 483-484 (1980).</li><li>Kubota, Y., Kleinman, H. K., Martin, G. R., Lawley, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+laminin+and+basement+membrane+in+the+morphological+differentiation+of+human+endothelial+cells+into+capillary-like+structures.">Role of laminin and basement membrane in the morphological differentiation of human endothelial cells into capillary-like structures.</a> J. Cell Biol. 107, 1589-1598 (1988).</li><li>Montesano, R., Orci, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-promoting+phorbol+esters+induce+angiogenesis+in+vitro.">Tumor-promoting phorbol esters induce angiogenesis in vitro.</a> Cell. 42, 469-477 (1985).</li><li>Korff, T., Augustin, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+endothelial+cells+in+multicellular+spheroids+prevents+apoptosis+and+induces+differentiation.">Integration of endothelial cells in multicellular spheroids prevents apoptosis and induces differentiation.</a> J. Cell Biol. 143, 1341-1352 (1998).</li><li>Nicosia, R. F., Tchao, R., Leighton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histotypic+angiogenesis+in+vitro:+light+microscopic,+ultrastructural,+and+radioautographic+studies.">Histotypic angiogenesis in vitro: light microscopic, ultrastructural, and radioautographic studies.</a> In Vitro. 18, 538-549 (1982).</li><li>Wong, K. H., Chan, J. M., Kamm, R. D., Tien, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+models+of+vascular+functions.">Microfluidic models of vascular functions.</a> Annu Rev Biomed Eng. 14, 205-230 (2012).</li><li>Sandison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+microscopic+study+of+living+growing+tissues+by+the+introduction+of+a+transparent+chamber+in+the+rabbit's+ear.">A new method for the microscopic study of living growing tissues by the introduction of a transparent chamber in the rabbit's ear.</a> Anat. Rec. 28, 281-287 (1924).</li><li>Jain, R. K., Schlenger, K., Hockel, M., Yuan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+angiogenesis+assays:+progress+and+problems.">Quantitative angiogenesis assays: progress and problems.</a> Nat. Med. 3, 1203-1208 (1997).</li><li>Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+cornea+micropocket+angiogenesis+assay.">The mouse cornea micropocket angiogenesis assay.</a> Nat. Protoc. 2 (10), 2545-2550 (2007).</li><li>Gimbrone, M. A., Leapman, S. B., Cotran, R. S., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+dormancy+in+vivo+by+prevention+of+neovascularization.">Tumor dormancy in vivo by prevention of neovascularization.</a> J. Exp. Med. 136, 261-276 (1972).</li><li>Gimbrone, M. A., Cotran, R. S., Leapman, S. B., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+growth+and+neovascularization:+an+experimental+model+using+the+rabbit+cornea.">Tumor growth and neovascularization: an experimental model using the rabbit cornea.</a> J. Natl. Cancer Inst. 52, 413-427 (1974).</li><li>Rohan, R. M., Fernandez, A., Udagawa, T., Yuan, J., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+heterogeneity+of+angiogenesis+in+mice.">Genetic heterogeneity of angiogenesis in mice.</a> FASEB J. 14 (7), 871-876 (2000).</li><li>Chang, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-dependent+response+of+FGF-2+for+lymphangiogenesis.">Dose-dependent response of FGF-2 for lymphangiogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (32), 11658-11663 (2004).</li><li>Udagawa, T., Birsner, A. E., Wood, M., D'Amato, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+suppression+of+angiogenesis+following+radiation+exposure+is+independent+of+hematopoietic+reconstitution.">Chronic suppression of angiogenesis following radiation exposure is independent of hematopoietic reconstitution.</a> Cancer Res. 67 (5), 2040-2045 (2007).</li><li>Turner, P. V., Albassam, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+rats+to+corneal+lesions+after+injectable+anesthesia.">Susceptibility of rats to corneal lesions after injectable anesthesia.</a> Med Comp. 55 (2), 175-182 (2005).</li><li>Calderone, L., Grimes, P., Shalev, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+reversible+cataract+induced+by+xylazine+and+by+ketamine-xylazine+anesthesia+in+rats+and+mice.">Acute reversible cataract induced by xylazine and by ketamine-xylazine anesthesia in rats and mice.</a> Exp. Eye Res. 42, 331-337 (1986).</li></ol>

יש לי המחברים אין לחשוף.

ישנם מספר צעדים קריטיים בביצוע assay קרנית מוצלח. הוא עושה הראשון כדורים אחידים אפשר להשתיל ומגרים כלי. החלקים החשובים ביותר של הכנת גלולה הם 1) שימוש בגורם גדילה ללא ספק; 2) להבטיח תערובת טובה של גורם גדילה עם סוקרלפט וHydron ו3) נע התערובת הסופית במהירות אבל בזהירות מצינור E...

התהליך של אנגיוגנזה, היווצרותם של כלי דם חדשים בצורה קודמת נותרים אלה, הוא מורכב מאוד והוא מוסדר על ידי מספר גורמים במשק ששולטים בצעדים שונים של הנבטה הכלי והמורפוגנזה. אנגיוגנזה מופעלת עקב שינוי באיזון בין גורמים בעד ונגד אנגיוגנזה, איזון, כי בדרך כלל שומר על כלי הדם במצב שקט. אנגיוגנזה במבוגרים מתרחשת בתנאים מסוימים פיסיולוגיים כמו במהלך מחזור השחלות הנקבה או בתהליכי תיקון כגון ריפוי פצעים והתחדשות רקמות. עם זאת, זה גם סימן היכר של כמה פתולוגיות הכוללים גידולים ממאירים, מחלות אוטואימוניות ומחלות דלקתיות. המעורבות של אנגיוגנזה בתנאים פיסיולוגיים ופתולוגיים אלה הופכת אותו לנושא חשוב למחקר וליעד אטרקטיבי לטיפול. בשל המורכבות של אנגיוגנזה ומעורבותם של כמה ceLLS וגורמים בתהליך, כוללים תאים אנדותל, pericytes, תאים במחזור ותאי סטרומה, במודלים חוץ גופית יישארו מוגבלים ולא יכולים לשחזר את microenvironment הייחודי in vivo. העיקרי במבחני חוץ גופית של אנגיוגנזה מתמקדים במידה רבה בהתבוננות השפעות ישירות על תאי האנדותל ומדידת צעדים מסוימים בתהליך angiogenic בתנאים מבוקרים. מבחני אלה כוללים את הכימות של תא האנדותל התפשטות 1, הגירה 2, היווצרות רשת 3, היווצרות צינור 4 ומבצבצות spheroids 5. דגמי Ex vivo, שלא כמו במבחנה אלה, הם מורכבים יותר ולשלב סוגים שונים של תאי רקמה, דוגמא ש assay טבעת אב העורקים 6. עם זאת, כמו מערכות אחרות, זה לא יכול ללכוד את תרומתם של תאים במחזור וסטרומה הטבעית של תאי האנדותל כקיים בגוף חי. ניסיונותללמוד אנגיוגנזה תחת זרימה לחקות את הגדרת in vivo מבוצעים באמצעות מערכות microfluidic 7, אפילו אולם מבחני אלה, למרות שהשתפר מאוד, עדיין לא מצליחין להסביר את כל התאים קיימים בגוף חי. בשל המגבלות של במבחנה ולשעבר מודלים אנגיוגנזה vivo, in vivo מודלים יישארו הבחירות אמינות יותר ללימודי אנגיוגנזה. דוגמאות למודלים אלה כוללים השתלה של תאים שקופים, &quot;חלונות&quot;, המאפשרים ההדמיה של כלי דם גדלו תחת מיקרוסקופ 8, CAM שתלים תת עורית בהזרקה כגון היווצרות matrigel וכלי ברקמות נורמליות כמו אוזן עכבר וקרום chorioallantoic העוף ( ). עם זאת, אחד מדגמי אנגיוגנזה in vivo המקובלים וכמותיים ביותר הוא assay קרנית neovascularization micropocket המתואר כאן, המנצל את באופן טבעי avascularקרנית כ&quot; מסך &quot;כדי לחזות ולהעריך צמיחת angiogenic חדשה 9. כאן אנו מתארים את assay micropocket הקרנית כפי שפותח בעכברים. בתחילה המודל המשמש למדידת גירויי angiogenic ספציפיים בקרניות ארנב. הדבר נעשה על ידי החדרת חתיכות גידול לתוך ההומור המימית של הלשכה הקדמית של העין הארנב ונמדד neovascularization מושרה גידול 11. עם זאת, assay מאוחר יותר התפתח לחוקר את ההשפעות של גידול ספציפי גורמי 10 לציין טוב יותר ולתקנן את השפעת angiogenic. על מנת לשחרר את גורם הגדילה בעיניים, כדורים בשחרור איטי המכילים כמויות ידועות של גורמי גדילת angiogenic שמשו במקום רקמות. הזמינות של חלבוני angiogenic רקומביננטי מטוהרים כגון bFGF או VEGF אפשרה את השימוש בם כמטרות ספציפיות של modulaters אנגיוגנזה 12. בתחילה, assay היהמשמש בעיקר בארנבות, שהם קלים יותר לעבוד עם בשל גודלם, אך מאוחר יותר המודל תורגם לעכברים; מודל חיה קטן יותר ופחות יקר. עובר מארנב לעכברים סיפק יתרון חשוב של להיות מסוגל להשתמש בבעלי חיים מניפולציות גנטיים, ובכך ליצור תחום חדש של מחקר למרכיבים הגנטיים המשפיעים על היווצרות כלי דם 13. בנוסף לשימוש מקובל יותר של assay קרנית בלימוד אנגיוגנזה, תהליכים ביולוגיים אחרים יכולים גם נחקר באמצעות מבחני שונה. לדוגמא, מחקרים של lymphangiogenesis התאפשרו באמצעות ההשתלה של כדורים במינון bFGF נמוכים שאפשרו להדמיה של כלי הלימפה דרך סמנים מולקולריים ספציפיים 14. בנוסף, assay זה סיפק אמצעי כדי להעריך את ההשפעות של קרינה על אנגיוגנזה 15. לסיכום, assay אנגיוגנזה micropocket הקרנית הוא כמותי, נציגroducible, הערכה גמישה של אנגיוגנזה in vivo. יתרון עיקרי של assay זה הוא שהמדידה של כלי רקע היא מיותרת, משום שהכולים גדלים על רקמות באופן טבעי avascular. אנו מתארים כאן את הפרוטוקול של assay זה בפרטים ולדון בתרחישים שונים שיכול להתרחש. Assay כולל 3 מקטעים בדידים. כאן אנו מתארים את ההכנה של כדורי גורם כלול צמיחה, השתלה כירורגית שלאחר מכן ולבסוף שיטה לכמת את צמיחת neovascular וכתוצאה מכך.

<table><tbody><tr><td>Section 1: Pellet preparation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sucralfate</td><td>Sigma</td><td>#S0652</td><td></td></tr><tr><td>Hydron (aka Poly(2-Hema))</td><td>Sigma</td><td>#P3932-10G</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Pharmco Products Inc</td><td>#111000200CSGL</td><td></td></tr><tr><td>Growth factors:</td><td></td><td></td><td>Must be carrier-free (no bovine serum albumin(BSA))</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;Fibroblast growth factor (FGF)</td><td>PeproTech</td><td>#AF-100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Vascular endothelial growth factor (VEGF)</td><td>R D Systems</td><td>#293-VE-050/CF</td><td></td></tr><tr><td>35 mm dish</td><td>Becton-Dickson</td><td>#353001</td><td>Used for storage of pellets</td></tr><tr><td>10 cm petri dish</td><td>VWR</td><td>#25384-342</td><td>Used as work surface for preparing pellets</td></tr><tr><td>Mesh</td><td>Sefar America</td><td>#03--300/51</td><td>300 um nitex nylon, cut into cm square pieces and sterilzed in autoclave</td></tr><tr><td>Spatulas</td><td>Fisher Scientific</td><td>#21-401-10</td><td>Use tapered end of one to break up pellet mixture. Bend tapered end of other to help remove mixture from microcentrifuge tube.</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>#05-408-146</td><td>One for hydron, one for sucralfate</td></tr><tr><td>Jewelers forceps, #5</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2315E</td><td>Need 2 for pulling mesh apart</td></tr><tr><td>Centrifugal evaporator</td><td>ThermoSavant</td><td>DNA110 SpeedVac</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Section 2: Surgical implantation of pellets</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Operating microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2.5% Avertin</td><td></td><td></td><td>General anesthetic</td></tr><tr><td>Proparacaine hydrochloride ophthalmic solution 0.5%</td><td>Falcon</td><td>NDC# 6131401601</td><td>Eye anesthetic</td></tr><tr><td>Triple Antibiotic Ophthalmic Ointment</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC# 2420878055</td><td>Contains neomycin, polymixin and bacitracin</td></tr><tr><td>Ophthalmic microknife, 5 mm</td><td>Surgistar</td><td>#924501</td><td>30 degree angle</td></tr><tr><td>von Graef knife</td><td>Ambler Surgical</td><td>#3401E</td><td></td></tr><tr><td>Jewelers forceps, #1</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2301E</td><td>Must be blunted with sharpening stone for proptosing eye</td></tr><tr><td>Jewelers forceps, #5</td><td>Ambler Surgical</td><td>#2305E</td><td>For picking up pellets and placing on eye</td></tr><tr><td>Small curved scissors</td><td>Ambler Surgical</td><td>#5636E</td><td>For trimming whiskers</td></tr><tr><td>Gauze</td><td></td><td></td><td>For blotting eye after proparacaine</td></tr><tr><td>Section 3: Grading of Corneal Neovascularization</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2.5% Avertin</td><td></td><td></td><td>General anesthetic</td></tr><tr><td>Slit lamp</td><td>Nikon</td><td>FS-2</td><td>Needs an ocular with a reticule to assist in measuring</td></tr></tbody></table>

the corneal micropocket assay: a model of angiogenesis in the mouse eye

Assay micropocket קרנית העכבר הוא assay חזק וכמותיים in vivo להערכת אנגיוגנזה. על ידי שימוש בכדורים בשחרור איטי סטנדרטיים המכילים גורמי גדילה ספציפיים שמעוררים צמיחת כלי דם בכל הקרנית באופן טבעי avascular, אנגיוגנזה ניתן למדוד ולכמת. ב assay זה התגובה angiogenic נוצרה במהלך כמה ימים, תלוי בסוג והמינון של גורם גדילה בשימוש. האינדוקציה של neovascularization מופעלת בדרך כלל על ידי או גורם בסיסי גידול פיברובלסטים (bFGF) או גורם כלי דם האנדותל צמיחה (VEGF). על ידי שילוב של הגורמים הללו צמיחה עם סוקרלפט וHydron (פולי המו (פולי (methacrylate 2-Hydroxyethyl))) וליהוק התערובת לתוך כדורים, הם יכולים להיות מושתלים בניתוח בעין העכבר. כדורים אחידים אלה לאט-לשחרר גורמי גדילה על פני חמישה או שישה ימים (bFGF או VEGF בהתאמה) המאפשרים תגובת angiogenic מספיקה הנדרשת לq אזור הספינהuantification באמצעות מנורת סדק. assay זה יכול לשמש ליישומים שונים, כוללים ההערכה של תרופות angiogenic מאפנן או טיפולים, כמו גם השוואה בין רקע גנטי שונה המשפיע על היווצרות כלי דם. חוקר מיומן לאחר תרגול assay זה יכול להשתיל גלולה בפחות מ -5 דקות לכל עין.

תוצאות אופייניות לכדורי bFGF וVEGF בC57BL / 6J angiogenic הנמוך הנורמלי מוצגות באיור 2 א &#39;וב&#39;, בהתאמה. 2E איור מציג את ההתפלגות הנורמלית של אזור הספינה (VA) בC57BL / מתח 6J עם מינונים שונים של הצמיחה הבאות גורמים. 80 כדורי bFGF ng בדרך כלל לגרום לVA של כ 2.0 2 מ&quot;מ, אם כ?...

Watch this Scientific Journal Video about The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye at JoVE.com

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

הפרוטוקול מתאר את assay micropocket הקרנית כפי שפותח בעכברים.

קרנית Micropocket Assay: דגם של אנגיוגנזה בעין העכבר

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

the-corneal-micropocket-assay-a-model-of-angiogenesis-in-the-mouse-eye

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

16.7K Views.  Boston Children's Hospital.  הפרוטוקול מתאר את assay micropocket הקרנית כפי שפותח בעכברים. 

Video: The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are administered 1. This uniqueness has made the cornea pocket assay one of the most used models for angiogenesis studies. The cornea composes multiple layers of cells. It is therefore possible to embed a pellet containing the angiogenic factor of interest in the cornea to investigate its angiogenic effect 2,3. Here, we provide a step by step demonstration of how to (I) produce the angiogenic factor-containing pellet (II) embed the pellet into the cornea (III) analyze the angiogenesis induced by the angiogenic factor of interest. Since the basic fibroblast growth factor (bFGF) is known as one of the most potent angiogenic factors 4, it is used here to induce angiogenesis in the cornea.

The cornea is unique in that it lacks vascular tissues. However, robust blood vessel growth and survival can be induced in the cornea by potent angiogenic factors. Therefore, the cornea can provide with us a valuable tool for angiogenic studies. This protocol demonstrates how to perform the mouse model of cornea pocket assay and how to assess the angiogenesis induced by angiogenic factors using this model.

במודל עכבר של Assay את הקרנית Pocket לחקר אנגיוגנזה

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Medicine

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Angiogenesis is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting of new blood vessels from a pre-existing vessel network. Angiogenesis plays a key role not only in normal development of organs and tissues, but also in many diseases in which blood vessel formation is dysregulated, such as cancer, blindness and ischemic diseases. In adult life, blood vessels are generally quiescent so angiogenesis is an important target for novel drug development to try and regulate new vessel formation specifically in disease. In order to better understand angiogenesis and to develop appropriate strategies to regulate it, models are required that accurately reflect the different biological steps that are involved. The mouse neonatal retina provides an excellent model of angiogenesis because arteries, veins and capillaries develop to form a vascular plexus during the first week after birth. This model also has the advantage of having a two-dimensional (2D) structure making analysis straightforward compared with the complex 3D anatomy of other vascular networks. By analyzing the retinal vascular plexus at different times after birth, it is possible to observe the various stages of angiogenesis under the microscope. This article demonstrates a straightforward procedure for analyzing the vasculature of a mouse retina using fluorescent staining with isolectin and vascular specific antibodies.

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

The neonatal murine retina provides a well characterized physiological model of angiogenesis, which permits investigations of the roles of different genes or drugs that modulate angiogenesis in an in vivo context. Immunofluorescent staining to accurately visualize the vascular plexus is pivotal to the success of these types of studies.

מכתים Immunofluorescent הר שלם של רשתית עכבר ילודים לחקר אנגיוגנזה<em&gt; בvivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Normal adult vascularized mammalian tissue that lacks physiologic angiogenesis and that has not been exposed to surgical intervention is used to study: (i) the initiation and development of angiogenesis following intraperitoneal administration of test agents; and (ii) modification of angiogenesis following systemic administration of selected test agents.

עכברוש mesentery Assay אנגיוגנזה

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

Biology

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Development of a Noninvasive, Laser-Assisted Experimental Model of Corneal Endothelial Cell Loss

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the optical breakdown at the laser focus. Acoustic shock waves and cavitation bubbles are generated, causing tissue rupture. Bubble sizes and pressure amplitudes vary with pulse energy and position of the focal point. In this study, enucleated porcine eyes were positioned in front of a commercially available Nd:YAG laser. Variable pulse energies as well as different positions of the focal spots posterior to the cornea were tested. Resulting lesions were evaluated by two-photon microscopy and histology to determine the best parameters for an exclusive detachment of corneal endothelial cells (CEC) with minimum collateral damage. The advantages of this method are the precise ablation of CEC, reduced collateral damage, and above all, the non-contact treatment.

Here, we present a protocol to detach corneal endothelial cells (CEC) from Descemet&#8217;s membrane (DM) using a neodymium:YAG (Nd:YAG) laser as an ex vivo disease model for bullous keratopathy (BK).

פיתוח של מודל פולשני, בסיוע לייזר של הקרנית הפסד של תא אנדותל

Nd:YAG lasers have been used to perform noninvasive intraocular surgery, such as capsulotomy for several decades now. The incisive effect relies on the ...

An Ex Vivo Choroid Sprouting Assay of Ocular Microvascular Angiogenesis

Pathological choroidal angiogenesis, a salient feature of age-related macular degeneration, leads to vision impairment and blindness. Endothelial cell (EC) proliferation assays using human retinal microvascular endothelial cells (HRMECs) or isolated primary retinal ECs are widely used in vitro models to study retinal angiogenesis. However, isolating pure murine retinal endothelial cells is technically challenging and retinal ECs may have different proliferation responses than choroidal endothelial cells and different cell/cell interactions. A highly reproducible ex vivo choroidal sprouting assay as a model of choroidal microvascular proliferation was developed. This model includes the interaction between choroid vasculature (EC, macrophages, pericytes) and retinal pigment epithelium (RPE). Mouse RPE/choroid/scleral explants are isolated and incubated in growth-factor-reduced basal membrane extract (BME) (day 0). Medium is changed every other day and choroid sprouting is quantified at day 6. The images of individual choroid explant are taken with an inverted phase microscope and the sprouting area is quantified using a semi-automated macro plug-in to the ImageJ software developed in this lab. This reproducible ex vivo choroidal sprouting assay can be used to assess compounds for potential treatment and for microvascular disease research to assess pathways involved in choroidal micro vessel proliferation using wild type and genetically modified mouse tissue.

This protocol presents choroid sprouting assay, an ex vivo model of microvascular proliferation. This assay can be used to assess pathways involved in proliferating choroidal micro vessels and assess drug treatments using wild type and genetically modified mouse tissue.

אקס ויוו צ'רויד נבט א-סאי של אנגיוגנזה מיקרו-וסקולרית עינית

Pathological choroidal angiogenesis, a salient feature of age-related macular degeneration, leads to vision impairment and blindness. Endothelial cell ...

מחקר של אנגיוגנזה באמצעות נדידת פצעי שריטה ומבחני הנבטה ספרואידים

Investigating Angiogenesis on a Functional and Molecular Level by Leveraging the Scratch Wound Migration Assay and the Spheroid Sprouting Assay

Angiogenesis plays a crucial role in both physiological and pathological processes within the body including tumor growth or neovascular eye disease. A detailed understanding of the underlying molecular mechanisms and reliable screening models are essential for targeting diseases effectively and developing new therapeutic options. Several in vitro assays have been developed to model angiogenesis, capitalizing on the opportunities a controlled environment provides to elucidate angiogenic drivers at a molecular level and screen for therapeutic targets.
This study presents workflows for investigating angiogenesis in vitro using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). We detail a scratch wound migration assay utilizing a live cell imaging system measuring endothelial cell migration in a 2D setting and the spheroid sprouting assay assessing endothelial cell sprouting in a 3D setting provided by a collagen matrix. Additionally, we outline strategies for sample preparation to enable further molecular analyses such as transcriptomics, particularly in the 3D setting, including RNA extraction as well as immunocytochemistry. Altogether, this framework offers scientists a reliable and versatile toolset to pursue their scientific inquiries in in vitro angiogenesis assays.

מחבר זרקור: חקירת אנגיוגנזה באמצעות אתגרים וחידושים בפיתוח Assay

This study presents the two-dimensional (2D) scratch wound migration assay and the three-dimensional (3D) spheroid sprouting assay, along with their respective downstream analysis methods, including RNA extraction and immunocytochemistry, as suitable assays to study angiogenesis in vitro.

חקירת אנגיוגנזה ברמה תפקודית ומולקולרית על ידי מינוף בדיקת נדידת פצע השריטה ובדיקת הנבטת הספרואיד

Angiogenesis plays a crucial role in both physiological and pathological processes within the body including tumor growth or neovascular eye disease. A ...

קרנית Micropocket Assay: דגם של אנגיוגנזה בעין העכבר

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

במודל עכבר של Assay את הקרנית Pocket לחקר אנגיוגנזה

מכתים Immunofluorescent הר שלם של רשתית עכבר ילודים לחקר אנגיוגנזה

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

עכברוש mesentery Assay אנגיוגנזה

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

פיתוח של מודל פולשני, בסיוע לייזר של הקרנית הפסד של תא אנדותל

אקס ויוו צ'רויד נבט א-סאי של אנגיוגנזה מיקרו-וסקולרית עינית

חקירת אנגיוגנזה ברמה תפקודית ומולקולרית על ידי מינוף בדיקת נדידת פצע השריטה ובדיקת הנבטת הספרואיד

חקירת אנגיוגנזה ברמה תפקודית ומולקולרית על ידי מינוף בדיקת נדידת פצע השריטה ובדיקת הנבטת הספרואיד