11.24 : כרומטוגרפיית זיקה

כרומטוגרפיית זיקה (או: אפיניות) היא טכניקה עוצמתית המשמשת באופן נרחב להפרדה ולניקוי של ביומולקולות ספציפיות מתערובות מורכבות. היא מתבססת על הקישור הסלקטיבי הגבוה בין האנליט לבן זוגו, כמו אינטראקציות נוגדן-אנטיגן. בן הזוג מקובע על הפאזה הנייחת, ויוצר עמודת אפיניות. הפאזה הנייחת מורכבת בדרך כלל מתמיכה מוצקה, כמו אגרוז או חרוזי זכוכית נקבוביים, שמקבעים את הליגנד האפיני.

הפאזה הניידת משמשת מטרה כפולה – תמיכה בקישור חזק בין האנליט לליגנד ולאחר מכן החלשת האינטראקציה לשם שטיפת האנליט. כאשר התערובת המכילה את האנליט הרצוי מועברת דרך העמודה, רק האנליט נקשר, בעוד חומרים אחרים נשטפים החוצה. לאחר מכן, ניתן לשטוף את האנליט המקושר על ידי שינוי תנאים כמו pH או חוזק יוני, אשר מחלישים את הקישור.

שיטה זו חשובה במיוחד בביוכימיה בשל הסלקטיביות שלה והשימוש בה לבידוד חלבונים, אנזימים, סובסטרטים, נוגדנים, אנטיגנים, קולטנים והורמונים. כרומטוגרפיית אפיניות יכולה לשמש גם לבידוד איזומרים אופטיים בודדים של תרופות, אשר עשויים להציג השפעות טיפוליות שונות. תהליך זה כולל שימוש בנוגדנים מונוקלונליים הספציפיים לכל סטריאואיזומר.

היתרון המרכזי של כרומטוגרפיית אפיניות הוא הספציפיות היוצאת מן הכלל שלה, מה שהופך אותה לאידיאלית לבידוד מהיר של ביומולקולות בעבודות הכנה.