11.24 : Chromatographie d'affinité

La chromatographie d'affinité est une technique puissante largement utilisée pour séparer et purifier des biomolécules spécifiques à partir de mélanges complexes. Elle exploite la liaison hautement sélective entre un analyte et son homologue, comme les interactions anticorps-antigène. L'homologue est immobilisé sur la phase stationnaire, formant une colonne d'affinité. La phase stationnaire est généralement constituée d'un support solide, tel que de l'agarose ou des billes de verre poreuses, immobilisant le ligand d'affinité. La phase mobile a un double objectif : soutenir une forte liaison entre l'analyte et le ligand et affaiblir ensuite l'interaction pour éluer l'analyte. Seul l'analyte se lie lorsque le mélange contenant l'analyte souhaité traverse la colonne, tandis que d'autres substances sont lavées. L'analyte lié peut ensuite être élué en modifiant les conditions telles que le pH ou la force ionique, ce qui affaiblit sa liaison.

Cette méthode est particulièrement précieuse en biochimie pour sa spécificité et son application dans l'isolement des protéines, des enzymes, des substrats, des anticorps, des antigènes, des récepteurs et des hormones. La chromatographie d'affinité peut également être utilisée pour isoler des isomères optiques individuels de médicaments, qui peuvent présenter des effets thérapeutiques différents. Ce procédé implique l'utilisation d'anticorps monoclonaux spécifiques à chaque stéréoisomère.

Le principal avantage de la chromatographie d'affinité est sa spécificité exceptionnelle, qui la rend idéale pour l'isolement rapide de biomolécules lors de travaux préparatoires.