Nous étudions s’il est possible de récupérer le microbiote d’un lait maternel spécifique en préservant la structure nutritionnelle du lait pasteurisé grâce à une méthodologie qui peut être mise en œuvre dans les hôpitaux. Notre objectif est de développer une nouvelle super stratégie nutritionnelle pour les nouveau-nés et d’évaluer sa visibilité. Nous pensons que le plus grand défi dans la reconstitution expérimentale du microbiote du lait humain est de parvenir à une reconstruction encore plus proche du profil original présent dans le lait maternel, et de le faire rapidement.
Cela augmentera non seulement ses effets, mais augmentera également la sécurité de la procédure. Notre objectif est de déterminer si cette nouvelle super stratégie nutritionnelle offre des avantages cliniques significatifs pour les nouveau-nés. Nous pensons que si les avantages pratiques sont confirmés, la stratégie pourrait être facilement mise en œuvre dans toutes les régions dotées de banques de lait maternel, ce qui aurait un impact positif sur la santé globale des non-adultes.
Après avoir obtenu le consentement requis, demandez à la mère d’exprimer son lait à l’aide d’un tire-lait électrique dans un contenant stérilisé sous la supervision de l’infirmière. Après la collecte, étiquetez le récipient contenant le lait avec les informations de la mère, la date et l’heure de la collecte. Conservez le lait de la mère ou le lait maternel à moins quatre degrés Celsius ou moins jusqu’à 12 heures.
Décongeler le lait cru ou le lait de donneuse pasteurisé ou PDM, stocké dans des récipients en verre stérilisés avec des couvercles en plastique dans un bain-marie à 40 degrés Celsius. Retirez le biberon de lait humain du bain-marie avant que la température du lait ne dépasse cinq degrés Celsius. Ensuite, portez une blouse de laboratoire, un masque, une casquette et des gants.
Nettoyez la surface de travail avec une solution de nettoyage de surface, en suivant le protocole institutionnel local. Transférez l’aliquote d’un millilitre maximum de MOM dans un cryotube pour le séquençage 16S et le comptage bactérien ultérieurs. Stockez le cryotube à moins 80 degrés Celsius.
À l’aide d’une pipette stérile, transférez le volume restant de MOM, équivalent à 10 % du volume final souhaité, dans un récipient sans danger pour les aliments. Plongez le récipient dans un bain-marie à 37 degrés Celsius. Ensuite, transférez l’aliquote d’un millilitre du PDM dans un cryotube sans DNase/RNase pour le séquençage 16S et le comptage bactérien.
Stockez le cryotube à moins 80 degrés Celsius. À l’aide d’une pipette stérile, transférez une quantité de PDM équivalente à 90 % du volume final souhaité dans le récipient contenant le MOM, formant ainsi le lait de la mère inoculée. Fermez le récipient avec un couvercle pour éviter toute contamination et plongez-le dans un bain-marie à 37 degrés Celsius pendant quatre heures pour permettre aux micro-organismes de se multiplier dans le lait.
Après quatre heures, retirez du bain-marie le récipient contenant le lait maternel inoculé fermenté. Transférez l’aliquote d’un millilitre du lait reconstitué dans un cryotube sans DNase/RNase pour le séquençage 16S et la numération bactérienne. Stockez le cryotube à moins 80 degrés Celsius.
Transférez le volume restant de lait reconstitué dans un récipient aseptisé pour l’alimentation des nouveau-nés.
