L’objectif global de cette procédure est d’imiter la condition humaine de restenosis après thérapie de revascularisation chez les souris pour étudier les mécanismes moléculaires impliqués dans la réponse de blessure. Les principaux avantages de ces techniques sont qu’il est hautement reproductible et facilement effectué, permettant aux chercheurs ayant même peu d’expérience d’appliquer la méthode dans les modèles de petits animaux. La démonstration de la procédure sera Adelina Curaj, un postdoc pour mon laboratoire.
Pour induire l’hyperlipidémie, nourrir les souris apoe knockout de six à huit semaines de 18 à 20 grammes un régime athérogénique une semaine avant la procédure chirurgicale et jusqu’à l’analyse de la plaque athéroclérotique. Le jour de la chirurgie, après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des pieds, raser la souris anesthésiée dans la région ventrale du cou et désinfecter la peau exposée avec de la bétadine. Faire une incision cutanée d’un centimètre dans la région médiane du cou au-dessus de la trachée et séparer les deux corps gras pour obtenir une vue complète de la région trachéale.
À l’aide d’un rétracteur pour maintenir la couche musculaire ouverte, exposer l’artère carotide et utiliser des forceps incurvés pointus pour séparer l’artère du nerf vague et de la veine jugulaire jusqu’à ce que la zone de bifurcation de l’artère carotide interne et externe soit visible. Lâchement, placez une suture de soie de sept centimètres de long 0-5 sous l’artère carotide proximale à l’arc aortique, suivie d’une suture de soie lâchement placée de 1,5 centimètre de long 0-7 autour de l’artère carotide externe près du point de bifurcation, et une boucle de suture de soie lâchement placée de 1,5 centimètre de long 0-7 aussi distal de la bifurcation que possible. Placez une autre suture de soie ouverte de 1,5 centimètre de long sous l’artère carotide interne.
Placez ensuite l’animal avec la tête à la position de six heures. Fermez immédiatement les boucles de suture sur l’artère carotide interne et la suture distale sur l’artère carotide externe. Utilisez des forceps d’hémostat pour tirer sur les extrémités de la suture 0-5 pour arrêter le flux sanguin à travers l’artère carotide commune.
À l’aide de petits ciseaux, faire une petite artériotomie de la moitié du diamètre du navire distal à l’artère carotide externe entre les deux boucles et insérer un 14 pouces d’alcool poli guide flexible humidifié avec une goutte de chlorure de sodium 0,9% dans l’artère carotide commune via l’incision. Pour éviter les éruptions artérielles pendant l’incision Y, utilisez un fil de guidage soigneusement poli. Obtenez la dénudation endothéliale en passant le fil le long du navire tout en tournant trois fois, puis fermez étroitement la boucle proximale sur l’artère carotide externe et coupez les sutures autour des artères carotides communes et internes pour reconstituer le flux sanguin.
Ensuite, retirez les rétracteurs et retournez la couche musculaire et les deux corps gras à la position physiologique. Fermez la peau avec des clips métalliques, puis laissez la souris récupérer sur son côté gauche sous une lumière infrarouge avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit complètement couchée. La formation de neointima peut être évaluée à l’aide de la coloration Movat.
La taille totale de la plaque, qui peut varier entre 70 000 et 100 000 microns carrés, selon les compétences du chirurgien, peut ensuite être calculée pour chaque échantillon à l’aide du logiciel approprié. La plaque développée ressemble à une reposnose instantanée, qui se compose principalement de cellules musculaires lisses proliférées et migrées à partir du milieu. La teneur en cellules musculaires lisses représente environ 30 à 40% de la plaque tandis que les macrophages trouvés dans le néointima du vaisseau blessé représentent 15 à 25% du nombre total de cellules.
La ré-endothélialisation atteint généralement 80 à 90% après trois semaines et devrait être presque complète après quatre semaines. Pour suivre la croissance de la plaque au cours de son développement, l’analyse peut être répétée à plusieurs moments après la lésion du fil selon la question expérimentale. Une fois maîtrisée, cette technique peut être complétée en 15 minutes si elle est effectuée correctement.
Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler que la zone chirurgicale devrait être constamment hydratée pour empêcher le séchage et pour rendre la manipulation de fil plus facile.
