Ce protocole permet d’étudier la régénération de la moelle épinière chez les grenouilles. Les connaissances acquises pourraient fournir de nouvelles perspectives pour comprendre comment les humains réagissent aux lésions de la moelle épinière. Le principal avantage de ce protocole est la facilité d’exécution de la blessure, et aussi que par rapport au paradigme de l’amputation de la queue, cette technique imite mieux ce qui se passe chez l’homme.
Cette technique permet de défier le processus de régénération pour mieux comprendre la participation de différents gènes, protéines, molécules et voies de signalisation, identifiant ainsi de nouvelles cibles thérapeutiques, Le trouver le bon endroit pour générer la blessure, ainsi que son extension, est difficile. Être capable de voir ces étapes est crucial pour rendre cette procédure simple et reproductible. Trois à quatre semaines après la fécondation, placez les têtards dans une boîte de Pétri et vérifiez la morphologie et l’apparence des membres antérieurs et postérieurs.
Recherchez les caractéristiques anatomiques suivantes des animaux de stade 50, les membres antérieurs qui viennent d’apparaître et qui sont sphériques, et les membres postérieurs qui dépassent et sont sphériques. Avant la chirurgie, anesthésiez les têtards en les plaçant dans du mésylate de 0,02% de tricaïne dans 0,1 fois la solution de Barth, et vérifiez que les animaux ne réagissent pas en les retournant. Pour effectuer la chirurgie de transsection de la moelle épinière, utilisez une cuillère à soupe et une pince pour placer un têtard anesthésié de stade 50 côté dorsal sur un morceau de gaze humide dans la moitié supérieure d’une boîte de Petri en verre.
Ensuite, à l’aide de ciseaux à ressort à microdissection, faites une incision de la peau et des muscles dorsaux au niveau mi-thoracique. Pour les animaux simulés de contrôle, assurez-vous que la taille de l’incision n’est que de 0,2 millimètre et n’endommage pas la moelle épinière. Chez les animaux transectés, faites une deuxième incision de 0,2 millimètre pour transecter complètement la moelle épinière.
Après la chirurgie, transférer les têtards dans un réservoir contenant 500 millilitres de 0,1 fois la solution de Barth avec une fois la pénicilline et la streptomycine à une densité de 10 à 12 têtards par réservoir. Maintenez les têtards transectés et contrôlez les têtards simulés dans des réservoirs séparés. Maintenir les têtards avec aération à une température de 20 à 21 degrés Celsius.
Changez la solution barth avec des antibiotiques tous les deux jours jusqu’à la fin de l’expérience. Commencez à nourrir les têtards un jour après la chirurgie et éliminez les animaux morts. Pour le test de natation, procurez-vous une boîte avec éclairage LED de l’intérieur, recouverte d’une feuille de polystyrène transparente permettant à la lumière de passer, et installez une caméra sur la boîte LED.
Ensuite, placez une boîte de Petri de 15 centimètres de diamètre sur le dessus de la boîte remplie de 100 millilitres de solution de Barth 0,1 fois. Un jour après la transsection, placez un têtard dans la boîte de Pétri et laissez-le pendant une période d’adaptation de cinq minutes. Après l’adaptation, commencez à suivre la vidéo du comportement de nage libre à l’aide du logiciel de référence pendant cinq minutes.
Une fois la vidéo terminée, transférez le têtard dans son réservoir. Ce diagramme à points représentatif montre la récupération de la fonction motrice à travers le temps. Cinq jours après la transsection, les têtards ont nagé en moyenne 0,7 mètre en cinq minutes, montrant une capacité de nage réduite.
Cette capacité augmentait avec les jours qui passaient, affichant une moyenne de 2,1 mètres en cinq minutes après 10 jours, et de 3,1 mètres en cinq minutes après 15 jours après la transsection. Une récupération complète des capacités de nage a été observée 20 jours après la transsection, avec une moyenne de 5,7 mètres en cinq minutes. La moyenne de nage peut varier en fonction de chaque lot d’animaux.
Ainsi, le groupe expérimental doit toujours être comparé aux témoins respectifs et ne pas obtenir de données préalables. Après la chirurgie, les animaux peuvent être utilisés pour l’analyse globale, y compris la transcriptomique, la protéomique et la métabolomique, et pour dépister les composés qui inhibent ou favorisent la régénération de la moelle épinière, dans le but de développer de nouvelles approches thérapeutiques.
