La microscopie de la force de traction à haut débit à l'aide du SMD révèle les effets dépendants de la dose de la transformation du facteur de croissance sur la transition épithéliale à mesenchymale

Mon laboratoire s’intéresse à la mécanobiologie, qui examine comment les cellules exercent et sont influencées par les forces mécaniques. Une façon de quantifier la mécanobiologie est de mesurer la contractilité cellulaire. Dans les cellules adhérentes, la contractilité se manifeste dans les forces de traction exercées sur le substrat cellulaire. Nous quantifions ces forces à l’aide d’une méthodologie généralement appelée microscopie de force de traction ou TFM. Et TFM est mis en œuvre dans une grande variété de méthodes différentes, mais un aspect commun est qu’il s’agit d’une technique de laboratoire plutôt sérielle et lente fait généralement dans un seul plat comme celui-ci ici. Cela nous limite à évaluer une population ou une condition à la fois. Tout au long de la culture cellulaire a été améliorée il ya quelque temps, mais la création de plats multiwell et nous avons pensé, ne serait-il pas génial qu’il nous pourrions à TFM avec le même débit accru et la même efficacité du temps et des reagents? Et c’était notre solution. Nous avons donc créé un plat de force de traction de 96 puits. Et il ressemble beaucoup à un plat conventionnel de culture de tissu de puits 96, cependant avec ce plat nous pouvons non seulement examiner 96 conditions différentes de culture cellulaire, mais également quantifier leur contractilité cellulaire. Cela présente une solution de débit beaucoup plus élevée que les approches à plat unique, ce qui nous permet d’examiner diverses conditions cellulaires et les réponses contractiles. Pendant la métastase de cancer, les cellules cancéreuses voyagent de leur emplacement primaire aux emplacements secondaires, propageant la maladie dans notre corps. Ce comportement métastatique des cellules cancéreuses explique 90% de la mort liée au cancer. L’un des mécanismes proposés pour les cellules cancéreuses épithéliales pour acquérir un phénotype plus migrateur et invasif est la transition épithéliale-mésenchymale, EMT. Pendant l’EMT, ils deviennent plus migrateurs et envahissants, changeant leur comportement physique. Pour mieux comprendre ces changements dans le comportement physique, nous utilisons notre substrat de silicium mou pour mesurer les changements dans la contractilité des cellules de glande mammaire de souris avec l’induction d’EMT par TGF-Dans cette étude, nous avons étudié comment différentes concentrations et temps d’incubation du comportement physique des cellules TGF-affect. Le polydimethylsiloxane est un caoutchouc très conforme avec le modulus young le plus bas d’environ 0,6 kilopascal. La rigidité de ce matériau peut également être tunable en utilisant différentes concentrations d’agent crosslink, y compris SYLGARD 184.To mesurer les propriétés mécaniques de PDMS nous utilisons un rhéomètre. Après avoir mélangé la partie A et la partie B du PDMS, dans un rapport de poids un à un et en ajoutant l’agent de séchage avec le pourcentage de poids spécifié, chargez le lot préparé sur la plaque du rhéomètre. Assurez-vous de charger suffisamment de l’échantillon pour couvrir complètement la zone du fuseau. Il est important de s’assurer que le fuseau touche complètement l’échantillon sans espace libre laissé à son bord. Tout échantillon supplémentaire doit être soigneusement coupé et effacé de la plaque. Mesurer le module de stockage final et la dépendance au temps de la viscoéasticité de chaque échantillon en faisant des balayages de temps et de fréquence à une souche de cisaillement oscillatoire de 0,5%Newsha]Ce graphique est un exemple de test de seq de temps, ayant fait pour mesurer le comportement rhéologique du polydimethylsiloxane avec la souche de cisaillement oscillatoire appliquée de 0,5% et la température de 100