Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, den menschlichen Zustand der Resonose nach der Revaskularisationstherapie bei Mäusen zu imitieren, um die molekularen Mechanismen zu untersuchen, die an der Verletzungsreaktion beteiligt sind. Die Hauptvorteile dieser Techniken sind, dass sie sehr reproduzierbar und leicht ausgeführt werden können, was es Forschern mit selbst minimaler Erfahrung ermöglicht, die Methode in Kleintiermodellen anzuwenden. Demonstriert wird das Verfahren von Adelina Curaj, einem Postdoc für mein Labor.
Um Hyperlipidämie zu induzieren, füttern Sie sechs bis acht Wochen alte 18 bis 20 Gramm Apoe Knockout Mäuse eine atherogene Diät eine Woche vor dem chirurgischen Eingriff und bis zur atherosklerotischen Plaque-Analyse. Am Tag der Operation, nach der Bestätigung einer mangelnden Reaktion auf Zehenkneifung, rasieren Sie die anästhesierte Maus im ventralen Halsbereich und desinfizieren Sie die exponierte Haut mit Betadine. Machen Sie einen Zentimeter Hautschnitt im mittleren Bereich des Halses über die Luftröhre und trennen Sie die beiden Fettkörper, um einen vollständigen Blick auf den Trachealbereich zu erhalten.
Mit einem Retraktor, um die Muskelschicht offen zu halten, die Halsschlagader freizulegen und scharfe gekrümmte Zangen zu verwenden, um die Arterie von der Vagusnerv- und Jugularvene zu trennen, bis der Bifurkationsbereich der inneren und äußeren Halsschlagader sichtbar ist. Locker eine sieben Zentimeter lange 0-5 Seidennaht unter die Halsschlagader proximal zum Aortenbogen legen, gefolgt von einer locker platzierten 1,5 Zentimeter langen 0-7 Seidennaht um die äußere Halsschlagader nahe der Bifurkationsstelle, und eine lose platzierte 1,5 Zentimeter lange 0-7 Seidennahtsotur so distal wie möglich. Legen Sie eine weitere offene 1,5 Zentimeter lange 0-7 Seidennaht unter die innere Halsschlagader.
Positionieren Sie das Tier dann mit dem Kopf auf der Sechs-Uhr-Position. Sofort die Nahtschleifen an der inneren Halsschlagader und die distale Naht an der äußeren Halsschlagader dicht schließen. Verwenden Sie Hämostat Zange, um an den Enden der 0-5 Naht zu ziehen, um den Blutfluss durch die gemeinsame Halsschlagader zu stoppen.
Mit einer kleinen Schere eine kleine Arteriotomie von der Hälfte des Gefäßdurchmessers distal zur äußeren Halsschlagader zwischen den beiden Schlaufen zu machen und einen 14 Zoll alkoholpolierten flexiblen Führungsdraht mit einem Tropfen von 0,9% Natriumchlorid in die gemeinsame Halsschlagader über den Inzisions einzufügen. Um arterielle Eruptionen während des Y-Inzisions zu vermeiden, verwenden Sie einen sorgfältig polierten Führungsdraht. Erhalten Sie endotheliale Denudation, indem Sie den Draht entlang des Gefäßes passieren, während Sie dreimal rotieren, dann schließen Sie die proximale Schleife auf der äußeren Halsschlagader fest und schneiden Sie die Nähte um die gemeinsamen und inneren Karotisarterien, um den Blutfluss wiederherzustellen.
Als nächstes entfernen Sie die Retraktoren und bringen Sie die Muskelschicht und die beiden Fettkörper in die physiologische Position zurück. Schließen Sie die Haut mit metallischen Clips, und lassen Sie die Maus dann auf ihrer linken Seite unter einem Infrarotlicht mit Überwachung erholen, bis sie vollständig liegend ist. Die Neointimabildung kann mit Movat-Färbung beurteilt werden.
Die Gesamtplaquegröße, die je nach Geschick des Chirurgen zwischen 70.000 und 100.000 Mikron im Quadrat variieren kann, kann dann für jede Probe mit der entsprechenden Software berechnet werden. Die entwickelte Plaque ähnelt der sofortigen Restenose, die überwiegend aus vermehrten und migrierten glatten Muskelzellen aus dem Medium besteht. Der Gehalt an glatten Muskelzellen macht etwa 30 bis 40% der Plaque aus, während die Makrophagen, die in der Neointima des verletzten Gefäßes gefunden werden, 15 bis 25% der gesamten Zellzahl ausmachen.
Die Reendothelialisierung erreicht in der Regel 80 bis 90% nach drei Wochen und sollte nach vier Wochen fast abgeschlossen sein. Um das Plaquewachstum während seiner Entwicklung zu verfolgen, kann die Analyse je nach experimenteller Frage an mehreren Zeitpunkten nach der Drahtverletzung wiederholt werden. Nach der Beherrschung kann diese Technik in 15 Minuten abgeschlossen werden, wenn sie ordnungsgemäß ausgeführt wird.
Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, dass der chirurgische Bereich ständig hydratisiert werden sollte, um das Trocknen zu verhindern und die Drahtmanipulation zu erleichtern.
