Wir danken Dr. Wei Qi He (Soochow University, Suzhou, China) und Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi ' an, China) für die technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 und 81473420) und das Projekt finanziert die Priorität akademischen Programm Entwicklung von Jiangsu Hochschuleinrichtungen (Grant Nr. unterstützt. Ysxk-2016).

Tierische Manipulationen stimmten die institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) Modell Animal Research Center der Nanjing Universität.
1. Vorbereitung der Lösung
<ol><li>Bereiten Sie HEPES-Tyrode-Lösung (H-T) mit 137,0 mM NaCl, KCl 2,7 mM, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-Glukose und 10 mM HEPES, pH 7,3-7,4.</li>
	<li>Bereiten Sie HEPES-Tyrode-Lösung ohne Calcium (Ca2 +-freien H-T) mit 140,6 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-Glukose und 10 mM HEPES, pH 7,3-7,4.</li>
	<li>Bereiten HEPES-Tyrode-Lösung mit 124 mM KCl (hohe K+) mit 15,7 mM NaCl, 124,0 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-Glucose und 10 mM HEPES, pH 7,3-7,4.</li>
</ol>2. Experiment Vorbereitung
<ol><li>Heizen Sie H-T und High-K+ Lösungen mit Wasserbad 37 ° C vor.</li>
	<li>Schalten Sie die Myograph System, Datenerfassungshardware und Computer.</li>
	<li>Füllen Sie sorgfältig alle Myograph Kammern mit 5 mL H-T-Lösung.</li>
	<li>Füllen Sie zwei Petrischalen mit 20 mL 4 ° C H-T und Ca2 +-bzw. H-T Lösungen, frei, und speichern Sie auf dem Eis.</li>
	<li>Ein 10 cm beschichtete Petrischale mit 20 mL H-T-Lösung füllen, und bei Raumtemperatur zu erhalten.</li>
</ol>3. Maus mesenterialen Arterie Dissection
<ol><li>Eine 8-12 Wochen alten C57BL/6J weibliche oder männliche Maus durch zervikale Dislokation einschläfern. Fassen Sie die Maus mit ihren Bauch nach oben.</li>
	<li>Befeuchten Sie den Bauch mit 70 % Ethanol. Dann schneiden Sie die Haut mit einer Schere entlang der ventralen Mittellinie von der Leiste, und stellen Sie Einschnitte von Anfang an den ersten Schnitt nach unten an den Beinen auf beiden Seiten. Ziehen Sie die Haut wieder auf beiden Seiten; Stellen Sie ähnliche Einschnitte, das Peritoneum zu öffnen.</li>
	<li>Mit Schere, Schnitt der Speiseröhre, Dickdarm und andere Bindegewebe, den Magen-Darmtrakt mit der Fütterung Gefäßsystem aus dem Körper vollständig zu isolieren.</li>
	<li>Bewegen Sie mit der Pinzette die isolierten Gruppe in die Schüssel mit der Kälte H-T in Schritt 2.4 vorbereitet und sanft spülen Sie das Gewebe in H-T-Lösung mehrmals das Blut abwaschen.</li>
	<li>Übertragen Sie der isolierten Gruppe in der beschichteten Petrischale in Schritt 2.5 vorbereitet, und durchzuführen Sie mesenterialen Arterie Dissektion bei Raumtemperatur.</li>
	<li>Glätten Sie den Magen, Jejunum, Ileum und Blinddarm im Uhrzeigersinn und Stift Magen und Blinddarm auf der linken und rechten Seite bzw..</li>
	<li>Dehnen Sie die mesenterialen Gefäßsystem Bett und beheben Sie den Darm mit Stiften, die sezierten mesenterialen Arterien verfügbar zu machen. Hinweis: Unter diesen Bedingungen sind die Arterien auf die Venen.</li>
	<li>Schalten Sie die Übertragung Lichtquelle eine stereoskopische Mikroskop und sezieren Sie Arterien unter dem Mikroskop zu. Stellen Sie sicher, dass das gesamte Gewebe in die Lösung eingetaucht ist.</li>
	<li>Klemmen Sie das Fettgewebe um die Arterien mit Pinzette und isolieren Sie die Arterien durch das Abschneiden des Bindegewebes mit Dissektion Schere. Nicht zu verletzen, die Arterien.</li>
</ol>4. arterielle Montage
<ol><li>Transfer und Tauchen den mesenterialen Arterie Baum in den kalten Ca2 +-H-T-Lösung (in Schritt 2.4 vorbereitet) klemmend überschüssige Arterien mit der Pinzette frei.</li>
	<li>Ein 1,4-mm-Teil der Arterie geschnitten Sie an Darmwand eines mesenterialen Arcade-proximalen ab, und verwenden Sie zwei Pinzetten, um beide Seiten von dieser Arterie Segment vorsichtig öffnen.</li>
	<li>Bereiten Sie zwei Segmente aus rostfreiem Stahldraht 2,5 cm in der Länge, und legen Sie sie in das gleiche Gericht.</li>
	<li>Klemmen Sie sanft ein Ende der Arterie mit Pinzette, und legen Sie zwei Drähte in das Lumen der Arterie eins nach dem anderen mit Hilfe von einem anderen Zange. Stellen Sie sicher, dass die Drähte gerade gehalten werden und Sie nicht das Endothel berühren.</li>
	<li>Mit zwei Pinzetten, Klemmen Sie die beiden Stahldrähte außerhalb des Behälters Gewinde gleichzeitig und übertragen Sie sorgfältig das Schiff aus der Petrischale zu einer Myograph Kammer vorher gefüllt mit H-T-Lösung (Schritt 2.3).</li>
	<li>Schrauben Sie die Backen auseinander um Platz für die Montage zu schaffen. Klemmen Sie beide Seiten eines der beiden eingelegten Leitungen mit zwei Pinzetten, und stellen Sie das Gefäß in der Kiefer-Lücke (Abbildung 1A).</li>
	<li>Wickeln Sie beidseitig eingespannten Draht um Schrauben des Kiefers mit Mikrometer (Abbildung 1 b) verbunden.</li>
	<li>Befestigen Sie die linke Schraube durch Drehen im Uhrzeigersinn. Den Draht mit rechten Pinzette zu begradigen, dann die rechten Schraube durch Drehen im Uhrzeigersinn (Abbildung 1) zu beheben. Stellen Sie sicher, dass das Schiff immer in der Kiefer-Lücke, aber berühren Sie nicht den Kiefer um Schäden zu vermeiden.</li>
	<li>Schließen Sie die beiden Backen mit Mikrometer (Abbildung 1). Stellen Sie sicher, dass die beiden Backen nahe genug sind, sondern dass sie nicht berühren einander und, dass der fixierten Draht an der Oberseite der festen Draht.</li>
	<li>Mit der rechten Pinzette, sorgfältig Falten Sie abgeschraubt Draht an der Ecke des Kiefers erzwingen Wandler angeschlossen, und wickeln Sie es im Uhrzeigersinn um die rechten Schraube (Abb. 1E). Befestigen Sie die Schraube. Wiederholen Sie diesen Schritt auf der linken Seite des Drahtes und der linken Schraube (Abb. 1F).</li>
	<li>Verschieben Sie die Backen leicht auseinander, indem sorgfältig drehen Mikrometer (Abbildung 1). Dehnung des Schiffes zu vermeiden. Verwenden Sie Zange um den Draht seitlich Mikrometer auf der horizontalen Ebene des Drahtes an den Wandler-Seite verschieben. Drehen Sie vorsichtig das Mikrometer, so dass die Lücke zwischen den beiden Backen nur Platz für die zwei Drähte.</li>
	<li>Wiederholen Sie die Schritte 4.2 – 4.11 um Arterien auf die anderen Kammern zu montieren. Alle Kammern an das Gerät anschließen, decken die Kammern, die Versorgung mit 100 % Sauerstoff und einem Temperaturfühler und beginnt Erwärmung auf 37 ° C. Öffnen Sie die charting-Software, und drücken Sie die Start -Taste auf das Diagramm Fenster zum Starten der Aufnahme.</li>
	<li>Equilibrate für ca. 20 Minuten.</li>
</ol>(5) Normalisierung
Hinweis: Um den Versuchsbedingungen zu standardisieren und zuverlässige physiologischen Reaktionsfähigkeit von Schiffen zu erhalten, ist eine Normalisierung Verfahren notwendigen15. Nach der Beziehung zwischen der aktive Kraft und inneren Umfang des Schiffes hat das drahtsystem Myograph ein standard Normalisierung-Programm, um den internen Umfang (IC) der montierten Schiff5,8zu bewerten, 9. Kurz, IC (µm) zu berechnen, Lesen der Mikrometer und geben Sie den Wert als der X-Wert und der Wandler Kraft, d. h. ruht Wand Spannung (mN/mm), als der Y-Wert ausgegeben. Das Programm kehrt eine angepasste Kurve von (X, Y) und das IC entspricht einem Transmural Druck von 100 MmHg (IC100) zu berechnen. Das Schiff soll den normalisierten interne Umfang (IC1) Wenn die aktive Reaktionsfähigkeit ist maximal.
<ol><li>Kräfte auf NULL für alle Kanäle auf dem Gerät eingestellt, und equilibrate für weitere 1-2 Minuten.</li>
	<li>Wählen Sie Einstellungen der Normalisierung von der "DMT-Menü, und richten Sie die Parameter wie folgt: Okular-Kalibrierung (mm/Div): 0,36; Druck (kPa) Ziel: 13,3; IC1/IC100: 0,9; Online-Mittelungszeit (Sekunden): 2; Verzögerung (Sekunden): 60. Klicken Sie auf "OK" , um die DMT Normalisierung Einstellungen -Fenster zu schließen.</li>
	<li>Wählen Sie den Kanal von Interesse aus dem DMT-Menü , einem DMT-Normalisierung-Fenster für den entsprechenden Kanal zu öffnen. Geben Sie die Konstante Werte in das Fenster wie folgt: Gewebe Endpunkte a1: 0,1; Gewebe-Endpunkte a2: 4; Drahtdurchmesser (µm): 40. Das Fenster zeigt die berechneten Schiff Länge 1,40 mm.</li>
	<li>Lesen Sie das Mikrometer der entsprechenden Gewebe Kammer. Geben Sie den Wert im Feld Mikrometer zu lesen , und klicken Sie auf Punkt hinzufügen . Dieser Wert ist der Anfangswert von X (X0). Nach 60 s Verzögerungszeit zeigt das Fenster die Kraft und der wirksame Druck (ERTP) entspricht dieser Wert der Mikrometer. Gleichzeitig wird die Mikrometer lesen Box aktiv.</li>
	<li>Das Schiff wird durch Drehen gegen den Uhrzeigersinn das Mikrometer normalisiert zu dehnen. Geben Sie den Mikrometer-Wert im Feld Mikrometer zu lesen , und klicken Sie auf Punkt hinzufügen . Warten Sie auf eine Verzögerungszeit von 60 s wieder.</li>
	<li>Wiederholen Sie Schritt 5.5, weiterhin dehnen das Schiff, und Mikrometer Werte hinzufügen, bis das Fenster den Wert des "Mikrometer X1", die die berechneten Mikrometer Einstellung erforderlich zeigt, um das Schiff auf der IC1Strecken ist.</li>
	<li>Festlegen der Mikrometer bis1 Wert X. Hinweis: Die normalisierten Spannung ist in der Regel 1-2 mN.</li>
</ol>(6) Arterie Kontraktion Aufnahme
Hinweis: Alle Lösungen, einschließlich H-T und High-K+ -Lösung, die in diesem Abschnitt verwendet wurden in Schritt 2.1 vorbereitet.
<ol><li>Nach der Normalisierung equilibrate das Schiff in die Kammer für 15-20 min. Hinweis: Dies ist keine Notwendigkeit, die Lösung in diesem Schritt ändern.</li>
	<li>Fordern Sie das Gefäß mit High-K+ Lösung zweimal.<ol>
<li>Um das Schiff herauszufordern, ersetzen Sie H-T-Lösung mit 5 mL High-K+ Lösung für die Kontraktion für 10 min, gefolgt von 3 - 4 mal mit 5 mL H-T-Lösung Waschen zu induzieren. Hinweis: Typische Kontraktion hat eine maximale Kraft über 3 mN und eine Konstante anhaltende Kraft um 2,5 mN12. Wenn die erste Herausforderung eine maximale Kraft unter 2,5 mN erzeugt oder die nachhaltige Kraft mit der Zeit sinkt die zweite Herausforderung eine viel geringere Kraft als die erstmalige Dosis erzeugt, das Schiff wird verworfen und nicht zur weiteren Untersuchung verwendet werden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fordern Sie das Schiff mit 5 mL High-K+ -Lösung um Kontraktion zu induzieren. Fügen Sie nach 5 min 0,5 µL der Stammlösung (10 mM in DMSO) Neoliensinine14 in die Kammer, das Schiff auf eine Endkonzentration von 1 µM Neoliensinine entspannen hinzu.</li>
	<li>Wenn die Kraft stabil ist (Dies dauert in der Regel mehrere Minuten), fügen Sie ein weiteres 0,5 µL der Stammlösung Neoliensinine in die Kammer, die Konzentration auf 2 µM. Add 1 µL der Vorratslösung jedes Mal erhöhen, erhöhen Sie die Konzentration auf 4, 6, 8 und 10 µM, t zu generieren He-Dosis-Wirkungs-Kurve. Hinweis: Lager und arbeiten Konzentrationen schwanken unter Drogen.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro.">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats.">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li><li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats.">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li><li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , (2004).</li><li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels.">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li><li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function.">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li><li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , (2015).</li><li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function.">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li><li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system.">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li><li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+phosphatase+target+subunit+1+(MYPT1)+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure.">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li><li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension.">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li><li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn,+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant.">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li><li>Slez&#225;k, P., Waczul&#237;kov&#225;, I., Bali&#353;, P., P&#250;zserov&#225;, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery.">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li><li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+burden+of+hypertension:+analysis+of+worldwide+data.">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li><li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research.">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Hypertonie ist eine weit verbreitete gesundheitspolitische Herausforderung aufgrund seiner schweren Komplikationen, einschließlich Herz-Kreislauf- und Nieren-Erkrankungen-16. Verständnis der Pathogenese der Hypertonie und mehr blutdrucksenkende Medikamenten zu erkunden ist eine dringende Aufgabe auf diesem Gebiet geworden. Blutdruck wird erstellt und gepflegt von peripheren Widerstand der Zirkulation. Nach dem Poiseuille Gesetz relativ kleinen Arterien erzeugen einen Großteil der Kreislauf Wide...

Das kleine Schiff Myograph System hier verwendet wurde zur Messung die isometrische Kontraktion der kleinen Widerstand Schiffe mit Innendurchmesser von 100 bis 400 µm. isolierte kleine Schiffe (etwa 2 mm lang) durch zwei 40 µm Durchmesser Drähte eingefügt wurden und waren dann nacheinander montiert auf den Mikrometer und Wandler-Side backen. Diese Myograph Technik wurde erstmals im Jahr 19721 vorgeschlagen und dann in erster Linie durch Mulvany und seine Kollegen2,3,4,5,6entwickelt. Es ist jetzt eine ausgereifte Technik mit Stalleinrichtungen, einfach Leistung und ein standard Normalisierung Verfahren7,8,9. Wir nutzten diese Methode mit einigen Modifikationen für Messungen in der Maus mesenterialen Arterie.
Vaskulären glatten Muskelzellen Linien die Wände fast alle Blutgefäße. Ihre grundlegende Funktion ist es, Kräfte durch Kontraktion in Reaktion auf verschiedene Reize erzeugen. Die normalen Kontraktilität von vaskulären glatten Muskelzellen ist unerlässlich für die Blutdruckregulation und Ernährung zu ergänzen10. Abnorme Regulation des Blutdrucks führt zu einer Vielzahl von Erkrankungen wie Bluthochdruck, Herzinsuffizienz und Ischämie. Mehrere Studien haben vorgeschlagen, dass abnorme Blutdruck immer dysfunktionalen vaskulären glatten Muskelzellen Kontraktilität7,11,12,13zugeordnet ist. Die Myograph-Methode erlaubt die Untersuchung von isometrischen Kontraktilität der Maus Schiffe durch verschiedene Reize wie vasokonstriktoren, Inhibitoren und Drogen induziert. Erfolgreiche Messungen der Kontraktion hilft uns zu verstehen, die Mechanismen der Blutdruck Wartung und die Pathogenese der vaskulären glatten Muskelzellen-assoziierten Erkrankungen und neue therapeutische Ansätze zu erkunden.
Viele chinesische Kräuter sind weit verbreitet für die klinische Behandlung von Gefäßerkrankungen benutzt worden; Ihre wirksamen Bestandteile sind jedoch in der Regel unbekannt. Somit, Isolierung und Identifizierung der wirksamen Komponenten ist sehr wichtig für die Entwicklung neuartiger Medikamente. Mehradrigen Myograph Technologie bietet eine einfache Methode für das screening von aktiver Komponenten in Kräutern. Wir haben mehrere Studien mit dem kleinen Schiff Myograph System um zu untersuchen, Maus mesenterialen Arterie Kontraktion berichtet und Naturstoffe mit Anti-Hypertonie Aktivität12,13,14gekennzeichnet. Hier beschreiben wir das ausführliche Protokoll für die Myograph-Methode und die entspannende Wirkung der Neoliensinine isoliert von Embryonen von Lotus Samen (Nelumbo Nucifera Gaertn.) 14.

<table><tbody><tr><td>Multi wire myograph system</td><td>DMT</td><td>610-M</td><td></td></tr><tr><td>Stainless steel wire</td><td>DMT</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>Geuder dissection scissor</td><td>DMT</td><td>400431</td><td></td></tr><tr><td>Dumont forceps</td><td>DMT</td><td>300413</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab/8SP</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td>ADInstruments</td><td>LabChart 5</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&amp;middot;6H2O</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>SigmaAldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100511-0250</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SigmaAldrich</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SigmaAldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr></tbody></table>

isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography

Myograph Leitertechnik dient zur Bewertung der Kontraktilität der vaskulären glatten Muskeln in Reaktion auf depolarization, GPCR-Agonisten/Inhibitoren und Drogen. Es ist in vielen Studien über die physiologischen Funktionen von vaskulären glatten Muskelzellen, die Pathogenese der vaskulären Erkrankungen wie Bluthochdruck und die Entwicklung der Glattmuskel Beruhigungsmittel Drogen verbreitet. Die Maus ist ein weit verbreitetes Modell Tier mit einem großen Pool von Krankheitsmodellen und gentechnisch veränderte Sorten. Wir haben diese Methode zur Messung der isometrischen Kontraktion der Maus mesenterialen Arterie im Detail eingeführt. Ein 1,4-mm-Segment der Maus mesenterialen Widerstand Arterie war isoliert und durch die Übergabe von zwei Drähten durch seine Lumen auf eine Myograph Kammer montiert. Nach Gleichgewichtherstellung und Normalisierung Schritten wurde das Schiff Segment durch eine High-K+ -Lösung zweimal vor der Kontraktion Assay potenzierte. Als ein Beispiel für die Anwendung dieser Methode in der Medikamentenentwicklung wir die entspannende Wirkung einer neuartigen natürlichen Substanz, Neoliensinine, isoliert aus ein chinesisches Kraut, Embryonen von Samen der Lotus (Nelumbo Nucifera Gaertn.) auf Maus mesenterialen gemessen. Arterien. Die Schiff-Segmente auf der Myograph Kammer montiert wurden mit einer High-K+ -Lösung stimuliert. Wenn die Kraft-Spannung eine stabile anhaltende Phase erreicht, wurden die Kammer kumulativen Dosen von Neoliensinine hinzugefügt. Wir fanden, dass Neoliensinine hatte eine dosisabhängige muskelrelaxierende Wirkung auf Kontraktion der glatten Muskulatur, hindeutet, dass es möglichen Aktivität gegen Bluthochdruck trägt. Darüber hinaus wie das Schiff-Segment kann mindestens 4 Stunden nach der Montage überleben und Kontraktilität induziert durch die High-K+ -Lösung für viele Male, wir empfehlen pflegen kann Myograph drahtsystem für die zeitraubende Drogen-Screening verwendet werden.

Wir die isometrische Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit einem mehradrigen Myograph System gemessen und bewertet die entspannende Wirkung der Neoliensinine gereinigt von Embryonen von Lotus Samen (Nelumbo Nucifera Gaertn.) 14. Maus mesenterialen Widerstand Arterie wurde isoliert, gereinigt von Bindegewebe und 1,4 mm Segmente geschnitten. Die Arterie-Segment wurde von zwei Drähten in Ca2 +eingefügt-H-T-Lösung in einer Petrischal...

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Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

Myograph Leitertechnik dient zur vaskulären glatten Muskelzellen Funktionen und Bildschirm neue Drogen zu untersuchen. Wir berichten über ein detailliertes Protokoll zur Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie und für das screening von neuen Muskelrelaxantien von vaskulären glatten Muskelzellen.

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

14.6K Aufrufe.  Nanjing University. Myograph Leitertechnik dient zur vaskulären glatten Muskelzellen Funktionen und Bildschirm neue Drogen zu untersuchen. Wir berichten über ein detailliertes Protokoll zur Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie und für das screening von neuen Muskelrelaxantien von vaskulären glatten Muskelzellen.

Serie: Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

Myo-mechanischen Analyse von isolierten Skelettmuskel

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Forschung

Medizin

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Mouse Model of Middle Zerebralarterie

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

Die Anwendung des dauerhaften mittleren Hirnarterie Ligation in der Maus

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

Beurteilung Myogenic Antwort und Vasoaktivität In Resistance Mesenterialarterien Mit Druck Myographie

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate postprandial delivery of nutrients and hormones to insulin-sensitive tissues. We here describe a technique for combining intravital microscopy (IVM) and contrast-enhanced ultrasonography (CEUS) of the adductor compartment of the mouse hindlimb to simultaneously visualize muscle resistance arteries and perfusion of the microcirculation in vivo. Simultaneously assessing insulin's effect at multiple levels of the vascular tree is important to study relationships between insulin's multiple vasoactive effects and muscle perfusion. Experiments in this study were performed in mice. First, the tail vein cannula is inserted for the infusion of anesthesia, vasoactive compounds and ultrasound contrast agent (lipid-encapsulated microbubbles). Second, a small incision is made in the groin area to expose the arterial tree of the adductor muscle compartment. The ultrasound probe is then positioned at the contralateral upper hindlimb to view the muscles in cross-section. To assess baseline parameters, the arterial diameter is assessed and microbubbles are subsequently infused at a constant rate to estimate muscle blood flow and microvascular blood volume (MBV). When applied before and during a hyperinsulinemic-euglycemic clamp, combined IVM and CEUS allow assessment of insulin-induced changes of arterial diameter, microvascular muscle perfusion and whole-body insulin sensitivity. Moreover, the temporal relationship between responses of the microcirculation and the resistance arteries to insulin can be quantified. It is also possible to follow-up the mice longitudinally in time, making it a valuable tool to study changes in vascular and whole-body insulin sensitivity.

Insulin-induced vasodilation regulates muscle perfusion and increases the microvascular surface area (microvascular recruitment) available for solute exchange between blood and tissue interstitium. Combined intravital microscopy and contrast-enhanced ultrasonography is presented to simultaneously assess insulin&#39;s action at the larger vessels and the microcirculation in vivo.

Kombiniert intravitalen Mikroskopie und Kontrast-verstärkte Sonographie der Maus Megalosauridae Insulin-induzierte Vasodilatation und Muskel-Durchblutung zu untersuchen

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

Pressure myograph systems are exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized to a suitable transmural pressure. The near physiological condition achieved in pressure myography permits in-depth characterization of intrinsic responses to pharmacological and physiological stimuli, which can be extrapolated to the in vivo behavior of the vascular bed. Pressure myograph has several advantages over conventional wire myographs. For example, smaller resistance vessels can be studied at tightly controlled and physiologically relevant intraluminal pressures. Here, we study the ability of 3rd order mesenteric arteries (3-4 mm long), preconstricted with phenylephrine, to vaso-relax in response to acetylcholine. Mesenteric arteries are mounted on two cannulas connected to a pressurized and sealed system that is maintained at constant pressure of 60 mmHg. The lumen and outer diameter of the vessel are continuously recorded using a video camera, allowing real time quantification of the vasoconstriction and vasorelaxation in response to phenylephrine and acetylcholine, respectively.
	To demonstrate the applicability of pressure myography to study the etiology of cardiovascular disease, we assessed endothelium-dependent vascular function in a murine model of systemic hypertension. Mice deficient in the &alpha;1 subunit of soluble guanylate cyclase (sGC&alpha;1-/-) are hypertensive when on a 129S6 (S6) background (sGC&alpha;1-/-S6) but not when on a C57BL/6 (B6) background (sGC&alpha;1-/-B6). Using pressure myography, we demonstrate that sGC&alpha;1-deficiency results in impaired endothelium-dependent vasorelaxation. The vascular dysfunction is more pronounced in sGC&alpha;1-/-S6 than in sGC&alpha;1-/-B6 mice, likely contributing to the higher blood pressure in sGC&alpha;1-/-S6 than in sGC&alpha;1-/-B6 mice. 
	Pressure myography is a relatively simple, but sensitive and mechanistically useful technique that can be used to assess the effect of various stimuli on vascular contraction and relaxation, thereby augmenting our insight into the mechanisms underlying cardiovascular disease.

In pressure myography, an intact small segment of a vessel is mounted onto two small cannulas and pressurized to a suitable luminal pressure. Here, we describe the method to measure vasorelaxation response of the mouse 3rd order mesenteric arteries in c57 and sGC&alpha;1-/- mice using pressure myography.

Beurteilung Murine Widerstand Artery Funktion Mit Druck Myographie

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

Biologie

Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The contractile characteristics can be evaluated independently of external influences such as vascular tonus or neurohumoral status. It depicts a scientific approach between single cell measurements with isolated cardiac myocytes and in vivo studies like echocardiography. Thus, papillary muscle preparations serve as an excellent model to study cardiac physiology/pathophysiology and can be used for investigations like the modulation by pharmacological agents or the exploration of transgenic animal models. Here, we describe a method of isolating the murine left anterior papillary muscle to investigate cardiac contractility in an organ bath setup. In contrast to a muscle strip preparation isolated from the ventricular wall, the papillary muscle can be prepared in toto without damaging the muscle tissue severely. The organ bath setup consists of several temperature-controlled, gassed and electrode-equipped organ bath chambers. The isolated papillary muscle is fixed in the organ bath chamber and electrically stimulated. The evoked twitch force is recorded using a pressure transducer and parameters such as twitch force amplitude and twitch kinetics are analyzed. Different experimental protocols can be performed to investigate the calcium- and frequency-dependent contractility as well as dose-response curves of contractile agents such as catecholamines or other pharmaceuticals. Additionally, pathologic conditions like acute ischemia can be simulated.

Murine left ventricular papillary muscle can be used to investigate cardiac contractility in vitro. This article describes in detail the isolation and experimental protocols to study cardiac contractile characteristics.

Kontraktilität Messungen auf isolierte Papillarmuskeln für die Untersuchung von Herz Inotropie bei Mäusen

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic diseases. Endothelial dysfunction represents a major culprit for the reduced vasodilatation and enhanced vasoconstriction of arteries. Adipose (fat) tissues surrounding the arteries play important roles in the regulation of endothelium-dependent relaxation and/or contraction of the vascular smooth muscle cells. The cross-talks between the endothelium and perivascular adipose tissues can be assessed ex vivo using mounted blood vessels by a wire myography system. However, optimal settings should be established for arteries derived from animals of different species, ages, genetic backgrounds and/or pathophysiological conditions.

The protocol describes the use of wire myography to evaluate the transmural isometric tension of mesenteric arteries isolated from mice, with special consideration of the modulation by factors released from endothelial cells and perivascular adipose tissues.

Bewertung der Reaktion der Gefäß-Tone mit isolierten mesenterischen Arterien mit einem Schwerpunkt auf der Modulation durch Perivascular Adipose Tissues

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in laboratory animals and small arteries isolated from human tissue. The technique allows researchers to maintain isolated blood vessels in a tightly controlled and standardized (near-physiological) setting, with the option of adjusting to various environmental factors, while challenging the isolated vessels with different pharmacological agents that can induce vasoconstriction or vasodilation. The myograph chamber also provides a platform to measure vascular reactivity in response to various hormones, inhibitors, and agonists that may impact the function of smooth muscle and endothelial layers separately or simultaneously. The blood vessel wall is a complex structure consisting of three different layers: the intima (endothelial layer), media (smooth muscle and elastin fibers), and adventitia (collagen and other connective tissue). To gain a clear understanding of the functional properties of each layer, it is critical to have access to an experimental platform and system that would allow for a combinational approach to study all three layers simultaneously. Such an approach demands access to a semi-physiological condition that would mimic the in vivo environment in an ex vivo setting. Small volume chamber tensometric myography has provided an ideal environment to evaluate the impact of environmental cues, experimental variables, or pharmacological agonists and antagonists on vascular properties. For many years, scientists have used the tensometric myograph technique to measure endothelial function and smooth muscle contractility in response to different agents. In this report, a small volume chamber tensometric myograph system is used to measure endothelial function in the isolated mouse aorta. This report focuses on how small volume chamber tensometric myography can be used to evaluate the functional integrity of the endothelium in small segments of a large artery such as the thoracic aorta.

The present protocol describes the concepts and technical application of the tensometric myograph technique using a multi-chamber myograph system in the experimental ex vivo assessment of mouse aortic endothelial function.