Name: imaging mycobacterium tuberculosis in mice with reporter enzyme fluorescence
Uploaded: 2018-02-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 6 s
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Tierexperimentellen Studien wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften, die durch die institutionellen Animal Care und Nutzung Committee of Texas A & M University durchgeführt. Prüfung und Genehmigung von Biohazard Sicherheitsbeauftragten oder Ausschuss in Ihrer Institution sein erforderlich.
Achtung: Alle Verfahren erfordern BSL3 Containment. Die Mitarbeiter sind verpflichtet, persönlichen Schutzausrüstung zu allen Zeiten zu tragen. Alle Manipulationen sind innen Biosafety Cabinet (BSC) durchgeführt und alle Kleie in Sharps Container entsorgt werden. Arbeit Oberflächen und BSC werden vor Beginn der Arbeit und nach der Arbeit mit gepuffertem Phenol und 70 % Ethanol gereinigt. Verfahren würde normalerweise auf Sicherheitsstufe 3 mit Mycobacterium Tuberculosiserfolgen, sondern für Illustration und Dreharbeiten Zwecke, veranschaulichen die Autoren diese Verfahren auf Biosafety Niveau 2 mit weniger virulenten Bakterien.
(1) Stämme und Kultur Bedingungen
Hinweis: M. Tuberculosis Stamm CDC1551 wird in dieser Studie verwendet, aber jede M. Tuberculosis -Belastung kann auf die gleiche Weise verwendet werden.
<ol><li>Wachsen die Bakterien in M-OADC-TW (7H 9 Brühe ergänzt mit 0,5 % Glycerin, 10 % Ölsäure Traubenzucker komplexe ohne Katalase und 0,05 % Tween-80) mittlere stehen bei 37 ° C auf einem OD-600 von 0,5 (~ 0,2 x 107 KBE).</li>
	<li>Verdünnen Sie die Kultur in M-OADC-TW (Reihe von 01:10 Verdünnungen der Bakterien). Platte die Verdünnungen der Bakterien (105, 106107108) in dreifacher Ausfertigung auf selektive 7 H 11 Platten erlauben die Bestimmung der KBE.</li>
	<li>Vier Wochen bei 37 ° C oder bis Kolonien genau gezählt werden können inkubieren Sie die Platten.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie das bakterielle Inokulum 8.534 x g für 5 min um eine Kugel zu erhalten. Waschen Sie die Tablette einmal mit 10 mL Kochsalzlösung (0,9 % NaCl) und wieder auszusetzen das Pellet in 15 mL Kochsalzlösung (0,9 % NaCl).</li>
</ol>(2) Aerosol Infektion der Mäuse mit einer Madison-Kammer
<ol><li>Können Sie Mäuse, für eine Woche an die neue Umgebung gewöhnen.</li>
	<li>Wiegen Sie die Mäuse vor dem Laden sie in die Kammer.</li>
	<li>Drei Kabel in die Steckerleiste anschließen: die Hauptkammer macht, die Vakuumpumpe und der Luft-Kompressor, in dieser Reihenfolge.</li>
	<li>Schrauben Sie vorsichtig das Glasgefäß. Bringen das Glasgefäß zum Schrank Biosafety und fügen Herausforderung Inokulum ausgesetzt in 15 mL Kochsalzlösung (0,9 % NaCl) zu erreichen ~ 104 - 106 KBE von Bakterien in der Lunge.</li>
	<li>Schließen Sie den Deckel von Glas im Kabinett der Biosicherheit. Legen Sie das Glas auf die Verneblereinheit und stellen Sie das vertikale Edelstahlrohr so ein, dass das untere Ende (Intake) etwa ein Viertel eines Zoll unter dem Niveau der Flüssigkeit im Glas ist.</li>
	<li>Laden Sie alle Tiere, die notwendig für das Experiment (Saal fasst bis zu 90 Mäuse) in die Kammer und schließen Sie die Riegel an der Tür.</li>
	<li>Überprüfen Sie die wichtigsten (Raum) air-Flow-Meter. Stellen Sie sicher, dass das Zentrum des Schwimmers (Kugel) ca. 50 L/min, gemessen auf der Skala auf der linken Seite betreibt.</li>
	<li>Drücken Sie die Schaltfläche "Start" auf dem Bedienfeld der Kammer. Legen Sie die Luftmenge durch den Kompressor Luft Durchflussmesser (die kleineren m links) als 4 L/min auf die Waage. Überprüfen Sie visuell, um sicherzustellen, dass die Herausforderung Inokulum vernebelt wird.</li>
	<li>Nach 15 min Wenn das rote Licht an der Vorderseite des Bedienfelds angezeigt wird und ein akustisches Signal das Ende des Laufs zeigt, Taste Reset auf der unteren rechten Ecke des Bedienfelds um den Timer zurückzusetzen.</li>
	<li>Halten Sie den kleinen roten Knopf an der Tür der Kammer, das Vakuum zu lösen.</li>
	<li>Öffnen Sie die Tür und entfernen Sie die Tiere. Setzen Sie die Mäuse wieder in ihren Käfigen.</li>
	<li>Zerstäuber Glas zu entfernen und in einem geschlossenen, auslaufsicheren Behälter legen. Stellen Sie den Behälter in die Bio-Sicherheit-Schrank und entsorgen Sie die Herausforderung-Suspension in einen dafür vorgesehenen Abfallbehälter.</li>
	<li>Legen Sie das gebrauchte Vernebler Glas innen ein Biohazard Beutel und Verschließen der Tasche für den Transport zu den Autoklaven.</li>
	<li>Am Ende des Verfahrens Infektion sprühen Sie das Innere der Kammer mit gepuffertem Phenol und 70 % Ethanol und lassen Sie die Kammer für 10 min sitzen.</li>
	<li>Dann wischen Sie alle zugänglichen Innenflächen sehr gründlich. Entsorgen Sie alle kontaminierten Papierhandtücher, etc.. in den Biohazard-Papierkorb. Autoklaven den Papierkorb, Abfallbehälter und Vernebler Gläser verwendet.</li>
	<li>Platziere die Tiere zurück in das Containment-Zimmer bis zu den bildgebenden Zeit-Punkt.</li>
	<li>Am Tag der Bildgebung übertragen Sie die Tiere in einem sekundären Container auf den bildgebenden Raum.</li>
</ol>3. Tier Anästhesie
<ol><li>Die Mäuse mit Isofluran verwenden eine benutzerdefinierte Gasanlage Anästhesie zu betäuben.</li>
	<li>Wiegen Sie jedes der zwei Aktivkohlefilter Kanister befindet sich oben auf die Anästhesie-Einheit.</li>
	<li>Ersetzen Sie durch einen neuen Kanister, wenn das Gewicht 50 g über das Ausgangsgewicht ist.</li>
	<li>Überprüfen Sie die Vaporizer Gerät dafür ausreichend Isofluran für das Verfahren.</li>
	<li>Platzhalter in der bildgebenden Kammer Bugnase. Legen Sie die Anzahl der Nase Kegel für das Verfahren erforderlichen und verschließen Sie die verbleibenden Öffnungen mit der Nase Kegel-Blocker.</li>
	<li>Schalten Sie die Sauerstoffzufuhr aus dem Hochdruck-Zylinder und 55 Psi festgesetzt.</li>
	<li>Die Evakuierung-Pumpe befindet sich vor dem Anästhesie-Gerät einschalten und auf 8 L/min eingestellt.</li>
	<li>Schalten Sie den Sauerstoff-Schalter befindet sich vor der Anästhesie-Einheit.</li>
	<li>Schalten Sie den Gasstrom der Anästhesie Induktion Kammer die Strömung des Gases bei 1,5 L/min drehen den Gasstrom aufzubrechen.</li>
	<li>Schalten Sie den Gasstrom der bildgebenden Kammer der Strömung des Gases in 0,25 L/min drehen den Gasstrom aufzubrechen.</li>
	<li>Schalten Sie den Verdampfer Isoflurane und setzen Sie ihn auf 2-2,5 %. Passen Sie den Isofluran nach Anzahl und Gewicht der Tiere durch Drehen des Knopfes auf dem Verdampfer Isoflurane (2-2,5 % für eine Maus mit einem Gewicht von ~ 20 g; 4 % für ein Meerschweinchen mit einem Gewicht von 300 g) für das Experiment verwendet wird.</li>
	<li>Legen Sie die Mäuse in der Anästhesie-Kammer und schließen Sie den Deckel. Schalten Sie die Gaszufuhr an der Anästhesie Induktion Kammer.</li>
	<li>Verlassen Sie die Mäuse in der Anästhesie Induktion Kammer für 5-10 min bis vollständig betäubt.</li>
	<li>Sobald die Mäuse betäubt sind, gelten Sie eine optische Salbe für die Augen, sie während der Bildgebung zu schützen.</li>
	<li>Legen Sie die Mäuse in ventralen oder sternale liegen, so dass ihre Nasen in die Bugnase Anästhesie von Mäusen während der bildgebenden Verfahren zu erleichtern platziert werden.</li>
</ol>(4) Reporter Enzym Fluoreszenz (REF) Bildgebung
<ol><li>Injizieren Sie das Substrat (20 µM, 2,5 µL/g Gewicht) durch intraperitoneale Injektion in den infizierten sowie der Kontroll-Mäusen. Die Mäuse sind unter Narkose in der bildgebenden Kammer für weniger als 1 min.</li>
	<li>Starten Sie die imaging-System.</li>
	<li>Initialisieren Sie das System durch Anklicken initialisieren. Warten Sie, bis die Temperatur Bar auf grün wechselt. Hinweis: Die bildgebende Kammer besteht aus einer beheizten Plattform auf Körpertemperatur des Tieres während der Bildgebung.</li>
	<li>Für imaging-Erwerb Einstellung, wählen Sie Leuchtstofflampen | Trans-Beleuchtung für ganze Tier oder Epi-Beleuchtung für Lungengewebe, Struktur und Overlay in Übernahme der Systemsteuerung.</li>
	<li>B Sichtfeld für einzelne Maus und Lampe Niveau zu hoch gesetzt.</li>
	<li>Belichtungszeit auf Auto, mittlere binning, 2-3 für die f/Stop und Erregung Filter bei 745 nm und Emission Filter festgelegt, von 780 nm bis 840 nm.</li>
	<li>Klicken Sie für Sequenz-Setup auf Reihenfolge-Setup, wählen Sie 9-12 Trans-Beleuchtung Punkte im Bereich der Lunge.</li>
	<li>Klicken Sie auf erfassen, für die Bildaufnahme.</li>
	<li>Platzieren Sie den Mauszeiger wieder in den Käfig Post-Bildgebung.</li>
	<li>Überwachen Sie die Mäuse bis vollständig erholt oder zur Quantifizierung KBE, wenn zu einem Zeitpunkt des Experiments imaging zu opfern. Führen Sie einen modifizierten Karnofsky-Score um das Wohlergehen von Mäusen, die Post-imaging zu überwachen.</li>
</ol>5. Analyse der REF imaging
<ol><li>Öffnen Sie die imaging-Software.</li>
	<li>Laden Sie Bilddateien durch durchsuchen anklicken.</li>
	<li>Klicken Sie für spektrale Entmischung in der Werkzeugpalette auf Spectral Unmixing und klicken Sie auf die Spektren unmix verpflichtet. Klicken Sie auf Start zu entmischen.</li>
	<li>Klicken Sie für optische Flächenrückführung auf Oberfläche Topographie.</li>
	<li>Wählen Sie Ausrichtung, dorsal, je nach Fell Maus, und klicken Sie auf Generate Oberfläche.</li>
	<li>Zeichnen Sie Bild zuschneiden und Schwelle Bild für eine Region von Interesse. Klicken Sie auf fertig.</li>
	<li>Gehen Sie für Orgel Registrierung zur Registerkarte Registrierung 3D optische Werkzeuge im Dropdown-Menü.</li>
	<li>Organe des Interesses an einer Orgel-Atlas zu registrieren.</li>
	<li>Passen Sie Orgel Größe oder Lage, um die generierten Oberflächentopographie mit Werkzeug "transformieren" ein-/befindet sich auf der Panel-Registrierung Tools an.</li>
	<li>Rufen Sie fluoreszierende Tomographie 3D-Rekonstruktion (FLIT), und wählen Sie analysieren tab. Wählen Sie die Bilder für die Analyse einbezogen werden, Bildtyp, normalisiert Übertragung Fluoreszenz (NTF) Effizienz, klicken Sie auf Start.</li>
	<li>Überprüfen Sie auf alle auswählen und in der Registerkarte "Datenvorschau" zu rekonstruieren.</li>
	<li>Gehen Sie für die Quantifizierung der Fluoreszenz Region von Interesse (ROI)-Tools, ROI Cube, die Orgel von Interesse hinzuzufügen und passen Sie Cube Größe zur Deckung die Orgel von Interesse. Klicken Sie auf 3D ROIs zu messen.</li>
	<li>Im Fenster ROI Messungen zur ROI 3D-Messungen, wählen Sie Datentyp an Quelle Voxel-Messungen-Einheit auf PmolM-1cm-1.</li>
	<li>Sichern Sie und exportieren Sie das Ergebnis der FLIT 3D-Rekonstruktion Analyse in einer Abbildung oder Daten-Datei.</li>
</ol>(6) Quantifizierung der Bakterien von KBE
<ol><li>Die Mäuse durch intraperitoneale Injektion von Pentobarbital-Natrium 0,1 mL (390 mg/mL) einschläfern.</li>
	<li>Suchen Sie nach Pedal Reflex durch Zusammendrücken der Pads der Füße von Mäusen um sicherzustellen, dass keine reflex Reaktion.</li>
	<li>Explant das Lungengewebe von Mäusen, die mit einer sterilen Pinzette und Schere. Homogenisieren des Lungengewebes in 1 mL 1 x Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS).</li>
	<li>10-divisibel serielle Verdünnungen der Lunge Homogenat in sterilen 1 X PBS zu machen.</li>
	<li>Vor Ort für Beschichtung, drei Aliquote von 20 µL der jeweiligen Verdünnung auf der Agarplatte.</li>
	<li>Inkubieren Sie die Platten in einem Inkubator bei 37 ° C und Monitor für Bakterienwachstum.</li>
	<li>Anzahl der Kolonien in den einzelnen vor Ort nach der Inkubationszeit und express als KBE / mL durch Korrektur der Lautstärke und Verdünnung mit folgender Gleichung: KBE / mL = (C/V) x M Wo C = Kolonie zählt pro Spot, V = Volumen der Probe inokuliert auf jeder Platte (mL), und M = Multiplikationsfaktor (Kehrwert der Verdünnung verwendet). Hinweis: Wenn an einer Stelle für ein Probenvolumen von 0,002 mL bei einer Probenverdünnung von 10-411 Kolonien gezählt werden, werden unter Verwendung der Gleichung, die Anzahl der Kolonie berechnet (11/0.02) X 104 = 5,5 x 106 KBE / mL</li>
</ol>

<ol>
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J., Riedel, E., Glickman, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+radiographic+differentiation+of+lung+nodules+caused+by+mycobacteria+and+lung+cancer:+a+case-control+study.">Clinical and radiographic differentiation of lung nodules caused by mycobacteria and lung cancer: a case-control study.</a> BMC Infect Dis. 15 (482), (2015).</li></ol>

Bei der Verwendung von bildgebender Verfahren, wie z. B. REF, gibt es Schlüsselstrategien, die Generierung von stabilen und konsistenten Daten zu ermöglichen. Optische Verfahren erzeugt Streulicht im Gewebe, die die Tiefe der Penetration, auswirken können, da es schwierig ist, in alle Richtungen emittierte Licht einzufangen. Verwendung von einem in der Nähe von Infrarot-Fluorophor (NIR) Substrat für REF Bildgebung mit einer Anregung und Emission Wellenlänge in der Querange von 700-900 nm ermöglicht minimale Absorption das Fluoreszenzsignal durch Säugetier-Gewebe. Die benutzerdefinierten gestaltete Substrat wurde durch die Verknüpfung einer NIR Fluorophor, IRDye 800Cw einen Quencher gebaut IRDye QC-1, von einem Lactam-Ring ermöglicht Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer-basierte abschrecken. IRDye hat ausgezeichnete Gewebe eindringen und Licht Streuung Eigenschaften und hat keinen keine offensichtlich schädliche Wirkung auf Säugetiere36, aus dem Blut und Organe durch 24 h. Fluoreszenz ausgeglichen signalisieren deutlich erhöht, ab 4 h nach Substrat-Verwaltung erreichen maximale Ebenen 6 h nach Verabreichung.
Die bakterielle infektiöse Dosis, die Art der Verwaltung von infektiöse Dosis und das Substrat sowie Zeitpunkte der imaging-Post-Infektion durch Pilotstudien durchführen sollten standardisiert werden, vor dem Einschiffen auf großen, komplexen, Experimente. Pilotstudien können erheblich reduzieren, Zeit und Kosten, wenn eine große Anzahl von Tieren imaging, weil ein Standardverfahren vor dem Ausführen der wichtigsten Experiment optimiert werden kann. Bakterielle Belastungen sollte ermittelt werden, in den Organen/Geweben von Interesse nach Ganzkörper-Bildgebung mit Trans-Beleuchtung und ex Vivo Lunge Bildgebung mit Epi-Beleuchtung um die Quelle des Signals zu überprüfen und bestimmen die Qualität der Korrelation mit bakteriellen Zahlen vorhanden8. Pilot-Studien bieten einen Einblick in die Schwelle der Erkennung, dynamischen Bereich der Technik sowie die Bestimmung der optimalen Versuchsbedingungen für die Bildgebung.
Die Hauptvorteile der Verwendung von REF Bildgebung im Vergleich zu anderen fluoreszenten und biolumineszenten Strategien sind seine hohe Sensibilität und die Fähigkeit zur natürlichen M. Tuberculosis Bild Stämme. REF imaging nutzt das katalytisch robuste Enzym BlaC, die in allen klinischen Isolaten von M. Tuberculosis und Tuberkulose-Komplex Stämme konserviert ist. Die große Empfindlichkeit des REF imaging ist aufgrund der raschen katalytische Rate von BlaC in Kombination mit Eigentumsvorbehalt gespalten fluoreszierende Produkts durch die Wirtszelle. Signalisieren Sie kontinuierlich erhöht, solange das Substrat zur Verfügung, wodurch nahezu unbegrenzte Aufbau des Signals innerhalb der infizierten Zellen und Gewebe ist. Diese erhöhte Empfindlichkeit des REF Bildgebung im Vergleich zu alternativen Ansätzen der Bildgebung ermöglicht spezifische Erkennung von M. Tuberculosis sowohl in Vitro und in Vivo8,23,24, 29.
REF imaging einsetzbar für bakterielle Erkennung ohne gentechnische Veränderungen ermöglichen die direkte Anwendung Infektionsmodell, entweder Labor Tiere8,37 oder menschlichen klinischen Materials29,38 . REF kann verwendet werden, zu erkennen und eine Vielzahl von Krankheitserregern39,40, Bild, da Fluorogenic Substrate für zahlreiche enzymatische Ziele außer BlaC wie Proteasen, Kinasen, Ureases und β-Galactosidases entwickelt werden können. Zeigt jedoch vorsichtig sein, dass das Ziel nachgedacht werden sollte um sicherzustellen es optimale Eigenschaften für die Bildgebung. BlaC stellt ein gutes Modell Enzym für Merkmale, die erfolgreiche Anwendung dieser Strategie sicherstellt. REF imaging bietet eine sofortige auslesen auf bakterielle Last in Lunge bei Infektionen, die stark Fortschritte beschleunigt im Studium der Tuberkulose Pathogenese, da die Bestimmung der bakteriellen Zahlen erfordert in der Regel drei bis sechs Wochen, aber auch in mehr schnellsten wachsenden Organismen, die diese Vorgehensweise sehr viel spart Zeit. REF kann auch verwendet werden, Karzinome an Tuberkulose, ein zentrales Problem bei der Diagnose von nodulären Läsionen in Patienten41,42zu unterscheiden. "REF" dient als neuartige Werkzeug, translationale Tuberkulose Bildgebung zu beschleunigen und kann auch für den Menschen potenziell ermöglicht schnellen Vorhersage von therapeutischen Ergebnissen angewendet werden.

Die langsame Wachstumsrate von M. Tuberculosis ist ein Haupthindernis in schnelle Diagnose von Tuberkulose1,2,3. Während Kultur Diagnose dauert es Wochen basierte, Ergebnisse zu erzielen, hat säurefeste Abstrich diagnostische Einschränkungen4 Kinder5 und Patienten mit humanen Immundefizienz-Virus6,7. Optical imaging-Technologien wurden kürzlich als Alternative zu herkömmlichen Diagnoseverfahren für Tuberkulose8,9anerkannt. Fluoreszenz und Biolumineszenz können verwendet werden, um optisch M. Tuberculosis mit lebenden Tieren in Echtzeit-10,11,12,13,14Bild, 15,16,17,18,19. Optische Verfahren hat den Vorteil einer schnellen und spezifischen Beurteilung einer Infektion mit Mycobacterium Tuberculosis20,21,22.
Wir skizzieren Details für optische Bildgebung von M. Tuberculosis in live Mäuse mit REF. Diese Methode ist sehr spezifisch und sensitiv23,24 , und ähnlich wie bei anderen optischen Methoden ist weniger teuer als andere Methoden der Tuberkulose (TB) imaging25, einschließlich Computertomographie (CT)26, magnetische Magnetresonanz-Bildgebung (MRI)27und F-FDG-Positronen-Emissions-Tomographie/CT (F-FDG-PET/CT)28. REF nutzt benutzerdefinierte fluoreszierende oder biolumineszenten Substrate, die bei der Spaltung durch eine bakterielle Enzym eine fluoreszierende Produkt8,29zu produzieren. Daher hat es den Vorteil, dass eine rekombinante mykobakteriellen Reporter Belastung30,31. Der Bund Substrat beschrieben besteht aus einem Fluorochrom und einen Durstlöscher, verbunden durch ein β-Lactam-Ring, der durch BlaC (β-Lactamase), natürlich konstitutiv durch Tuberkulose-Komplex Mycobacterium8, ausgedrückt hydrolysiert 32. die Bakterien erzeugen direkt Signal durch REF katalytische Aktivität, die Verstärkung von vielen Größenordnungen und empfindliche Detektion von M. Tuberculosisermöglicht.
In dieser Studie verwendeten REF-Substrat hat ausgezeichnete Gewebe eindringen in lebenden Tieren und Hintergrund aufgrund seiner langen Wellenlänge reduziert. Mit dieses langwellige Substrat ist es möglich, einen Schwellenwert von Erkennung für M. Tuberculosis von fast 100 zu erreichen Koloniebildenden Einheiten (KBE) in Vitro und < 1000 KBE in den Lungen von Mäusen in Vivo (ganze Tier)8, 33. REF kann als ein Diagnosetool für Auswurf, klinischen Materials und sogar direkt bei Patienten mit Mikro endoskopische Systeme16,32,33,34 aufgrund seiner hohen Sensitivität und Spezifität verwendet werden. REF kann auf jede klinische Belastung von Tuberkulose angewendet werden, weil es ein natürlich produzierten bakterielle Enzym, BlaC, für die Erkennung in allen Sorten vorhanden verwendet. Diese Eigenschaften machen REF imaging ein wertvolles Werkzeug in der präklinischen Tuberkuloseforschung im allgemeinen therapeutischen Erleichterung sowie Impfstoff Auswertung und Analyse der Pathogenese, aber letztlich auch zur Diagnose Tuberkulose angewandt werden Patienten.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>VETONE</td><td>501027</td><td></td></tr><tr><td>CNIR800</td><td>Custom synthesized</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fatal Plus solution</td><td>Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7H9 Middlebrook broth</td><td>BD</td><td>271310</td><td></td></tr><tr><td>OADC Middlebrook enrichment</td><td>BD</td><td>212351</td><td></td></tr><tr><td>Sporcidin</td><td></td><td>RE-1284F</td><td></td></tr><tr><td>7H11 Middlebrook Agar</td><td>BD</td><td>212203</td><td></td></tr><tr><td>Madison Chamber</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>XGI-8-gas Anesthesia System</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Imaging software</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transparent nose cones</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;M. tuberculosis&lt;/em&gt; strain CDC1551</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Female BALB/C mice, 5-7 weeks</td><td>Jackson Laboratory</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

imaging mycobacterium tuberculosis in mice with reporter enzyme fluorescence

Reporter-Enzym-Fluoreszenz (REF) nutzt Substrate, die spezifisch für Enzyme zur Bildgebung oder Aufdeckung von Fluoreszenz und Biolumineszenz in Zielorganismen von Interesse sind. Wir nutzen BlaC, ein Enzym, das konstitutiv durch alle M. Tuberkulose -Stämme ausgedrückt. REF ermöglicht schnelle Quantifizierung von Bakterien in der Lunge von infizierten Mäusen. Die gleiche Gruppe von Mäusen kann abgebildet werden, zu vielen Zeitpunkten, erheblich Kosten reduzieren, Auflisten von Bakterien schneller ermöglicht neuartige Beobachtungen in Wirt-Pathogen Interaktionen und statistische Aussagekraft zu erhöhen, da mehr Tiere pro Gruppe leicht gepflegt werden . REF ist extrem katalytische aufgrund der BlaC enzymatische Reporter sensitiver und spezifischer aufgrund der benutzerdefinierten Flourescence Resonanz Energietransfer (FRET) oder Fluorogenic Substrate verwendet. REF erfordert keine rekombinante Stämme, normale Wirt-Pathogen Interaktionen zu gewährleisten. Wir beschreiben die Bildgebung von M. Tuberkulose -Infektion mit einem Bund Substrat mit maximalen Emission bei 800 nm. Die Wellenlänge des Substrates ermöglicht empfindliche Tiefengewebe-Bildgebung bei Säugetieren. Wir skizzieren Aerosol-Infektion von Mäusen mit M. Tuberculosis, Anästhesie von Mäusen, Verwaltung der REF Substrat und optische Bildgebung. Diese Methode wird erfolgreich angewendet, zur Bewertung von Wirt-Pathogen Interaktionen und Wirksamkeit der Antibiotika gezielt M. Tuberculosis.

REF Bildgebung von Mäusen zusammen mit nicht infizierten Kontrolle Maus mit M. Tuberculosis infiziert sind in Abbildung 1Adargestellt. Infizierte Mäuse produziert ein signifikant (P = 0,0057) höheren Fluoreszenzsignal aus der Lunge in 6 Wochen nach der Infektion im Vergleich zur Kontrolle auf Substrat Verwaltung. Ein typischen zeitlichen Verlauf der therapeutischen Wirksamkeit gegen M. Tuberculosis mit REF studieren konnte imaging bei Woche, 1, 2, 4, 6, 15, 24 nach der Infektion. Fluoreszenzintensität wird quantifiziert mit Epi-Beleuchtung für Lungengewebe (Abbildung 1B). Das ständig zunehmende Signal von Woche 2 Woche 6 in Lungen von infizierten Mäusen legt nahe, dass REF erfolgreich M. Tuberculosis in-vivoerkennen kann. Ein Tropfen in das Hintergrundsignal des Kontroll-Mäusen zu einem späteren Zeitpunkt (Abbildung 1B) könnte der Anstieg der Körper zugeschrieben werden Masse und Volumen von Mäusen über einen Zeitraum von 6 Wochen, wodurch die Erregung Wellenlänge Eindringen. FLIT 3D-Rekonstruktion von Fluoreszenz Quellen bei Mäusen mit M. Tuberculosis infiziert ist in Abbildung 2Avertreten. Die Bildsequenzen werden an mehreren Punkten der Trans-Beleuchtung in der Maus mit dem gleichen Anregung und Emission Filter-Serie erworben. Diese Bildsequenzen werden dann für FLIT 3D-Rekonstruktion für fluoreszierende Source-Distribution innerhalb der tierischen Thema verwendet. Abbildung 2 A-D zeigt die verschiedenen Richtungen (koronalen, sagittale und 2D-Einzelschicht) der Maus-Tomographie mit Lunge Orgel Registrierung. NTF-Effizienz Karten für die Überprüfung die Wiederaufbau-Qualität sind in Abbildung 2Evertreten. NTF ermöglicht Subtraktion der Hintergrund Lichtverlust von Trans-Beleuchtung Bilder durch ein zusätzliches Bild mit Graufilter eingefangen. Die Aufnahme mit dem spezifischen Erregung Filter (Abbildung 2E gemessen) ist auf das Getriebe Bild gemessen mit der gleichen Emission und eine offene Erregung Filter (Abbildung 2E - simuliert) geben normalisiert. das Signal durch das Substrat allein produziert. Die ähnliche gemessen und simuliert NTF Effizienz Profil sowohl horizontal (Abbildung 2F) und vertikale (Abbildung 2G) Profile mit fast 0 % prozentualen Fehler (Abbildung 2E % Fehler) bietet Hinweise auf eine gute Qualität 3D-Rekonstruktion mit reduzierten Artefakten und verbesserte Signal-Lokalisierung und Empfindlichkeit.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56801/56801fig1.jpg"> Abbildung 1 . Bildgebung des M. Tuberculosis mit ref (A) in-Vivo Bildgebung von Mäusen nicht infizierten und bei 2, 4 und 6 Wochen nach der Infektion mit Mycobacterium Tuberculosis infiziert. Die Farbleiste stellt die Intensität der das Fluoreszenzsignal in Photonen pro Sekunde pro cm2 von Low (gelb), hoch (rot). (B) Quantifizierung der Fluoreszenzintensität von Mäusen mit M. Tuberculosisinfiziert. Fluoreszenz-Werte für beide Kontrolle (schwarz) und infizierte (rot) sind zusammen mit der Standardfehler für jeden Zeitpunkt vertreten. Die Bedeutung der Ergebnisse wurden ermittelt, indem Schüler t-test, p -Werte der < 0,05 wurden als bedeutende. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56801/56801fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56801/56801fig2.jpg"> Abbildung 2 . FLIT 3D-Rekonstruktion von Fluoreszenz Quellen bei Mäusen mit M. Tuberculosisinfiziert. Maus-Tomographie in verschiedene Richtungen vertreten; (A) koronalen, (B) sagittale, und (C) 2D-Einzelschicht mit (D) Lunge Orgel Registrierung. Die 3D Region of Interest (ROI) wird als eine rote Würfel in der Lunge für Quelle Messungen dargestellt. (E) NTF Effizienz Karten der gemessenen und simulierten für die Überprüfung der Wiederaufbau-Qualität. Die gemessenen und simulierte NTF-Effizienz-Profil wurde verglichen, die gute Qualität der 3D-Rekonstruktion (ähnliche gemessenen und simulierten NTF Effizienz). F) Horizontal "und" G) vertikale Signal Profile repräsentieren gemessenen (blau) und simuliert (rot) NTF Effizienzkurve. Die horizontalen und vertikalen roten Balken zeigen die Quellposition. Die Farbleiste stellt die Intensität der das Fluoreszenzsignal in Photonen pro Sekunde pro cm2 von Low (blau) zu hoch (rot). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56801/56801fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

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Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Wir beschreiben die optische Bildgebung von Mäusen mit Mycobacterium Tuberculosis (Mycobacterium Tuberculosis) mit Reporter Enzym Fluoreszenz (REF) infiziert. Dieses Protokoll ermöglicht den sensitiver und spezifischen Nachweis von Mycobacterium Tuberculosis in präklinischen Tiermodellen für die Pathogenese, Therapie und Impfstoff-Forschung.

Mycobacterium Tuberculosis in Mäusen mit Reporter Enzym Fluoreszenz Imaging

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

7.3K Aufrufe.  Texas A&M Health Science Center. Wir beschreiben die optische Bildgebung von Mäusen mit Mycobacterium Tuberculosis (Mycobacterium Tuberculosis) mit Reporter Enzym Fluoreszenz (REF) infiziert. Dieses Protokoll ermöglicht den sensitiver und spezifischen Nachweis von Mycobacterium Tuberculosis in präklinischen Tiermodellen für die Pathogenese, Therapie und Impfstoff-Forschung.

Serie: Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes. In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific immune cell types, viral pathogens, parasites and bacteria can be followed in real-time within living animals 1-2. Application of bioluminescence imaging to the study of pathogens has advantages as compared to conventional strategies for analysis of infections in animal models3-4. Infections can be visualized within individual animals over time, without requiring euthanasia to determine the location and quantity of the pathogen. Optical imaging allows comprehensive examination of all tissues and organs, rather than sampling of sites previously known to be infected. In addition, the accuracy of inoculation into specific tissues can be directly determined prior to carrying forward animals that were unsuccessfully inoculated throughout the entire experiment. Variability between animals can be controlled for, since imaging allows each animal to be followed individually. Imaging has the potential to greatly reduce animal numbers needed because of the ability to obtain data from numerous time points without having to sample tissues to determine pathogen load3-4.
This protocol describes methods to visualize infections in live animals using bioluminescence imaging for recombinant strains of bacteria expressing luciferase. The click beetle (CBRLuc) and firefly luciferases (FFluc) utilize luciferin as a substrate5-6. The light produced by both CBRluc and FFluc has a broad wavelength from 500 nm to 700 nm, making these luciferases excellent reporters for the optical imaging in living animal models7-9. This is primarily because wavelengths of light greater than 600 nm are required to avoid absorption by hemoglobin and, thus, travel through mammalian tissue efficiently. Luciferase is genetically introduced into the bacteria to produce light signal10. Mice are pulmonary inoculated with bioluminescent bacteria intratracheally to allow monitoring of infections in real time. After luciferin injection, images are acquired using the IVIS Imaging System. During imaging, mice are anesthetized with isoflurane using an XGI-8 Gas Anethesia System. Images can be analyzed to localize and quantify the signal source, which represents the bacterial infection site(s) and number, respectively. After imaging, CFU determination is carried out on homogenized tissue to confirm the presence of bacteria. Several doses of bacteria are used to correlate bacterial numbers with luminescence. Imaging can be applied to study of pathogenesis and evaluation of the efficacy of antibacterial compounds and vaccines.

Methods for bioluminescence imaging of bacterial infections in living animals are decribed. Pathogens are modified to express luciferase allowing optical whole body imaging of infections in live animals. Animal models can be infected with luciferase expressing pathogens and the resulting course of disease visualized in real-time by bioluminescence imaging.

Mit Luciferase to Image Bakterielle Infektionen bei Mäusen

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

Forschung

Immunologie und Infektion

A Fluorescence-based Method to Study Bacterial Gene Regulation in Infected Tissues

Bacterial virulence genes are often regulated at the transcriptional level by multiple factors that respond to different environmental signals. Some factors act directly on virulence genes; others control pathogenesis by adjusting the expression of downstream regulators or the accumulation of signals that affect regulator activity. While regulation has been studied extensively during in vitro growth, relatively little is known about how gene expression is adjusted during infection. Such information is important when a particular gene product is a candidate for therapeutic intervention. Transcriptional approaches like quantitative, real-time RT-PCR and RNA-Seq are powerful ways to examine gene expression on a global level but suffer from many technical challenges including low abundance of bacterial RNA compared to host RNA, and sample degradation by RNases. Evaluating regulation using fluorescent reporters is relatively easy and can be multiplexed with fluorescent proteins with unique spectral properties. The method allows for single-cell, spatiotemporal analysis of gene expression in tissues that exhibit complex three-dimensional architecture and physiochemical gradients that affect bacterial regulatory networks. Such information is lost when data are averaged over the bulk population. Herein, we describe a method for quantifying gene expression in bacterial pathogens in situ. The method is based on simple tissue processing and direct observation of fluorescence from reporter proteins. We demonstrate the utility of this system by examining the expression of Staphylococcus aureus thermonuclease (nuc), whose gene product is required for immune evasion and full virulence ex vivo and in vivo. We show that nuc-gfp is strongly expressed in renal abscesses and reveal heterogeneous gene expression due in part to apparent spatial regulation of nuc promoter activity in abscesses fully engaged with the immune response. The method can be applied to any bacterium with a manipulatable genetic system and any infection model, providing valuable information for preclinical studies and drug development.

Described here is a method for analyzing bacterial gene expression in animal tissues at a cellular level. This method provides a resource for studying the phenotypic diversity occurring within a bacterial population in response to the tissue environment during an infection.

Eine Fluoreszenz basierende Methode, bakterielle Genregulation in infizierten Gewebe zu studieren

Bacterial virulence genes are often regulated at the transcriptional level by multiple factors that respond to different environmental signals. Some ...

Genetik

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

This protocol outlines the steps required to longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging tomography with integrated &mu;CT (DLIT-&mu;CT) and the subsequent use of this data to generate a four dimensional (4D) movie of the infection cycle. To develop the 4D infection movies and to validate the DLIT-&mu;CT imaging for bacterial infection studies using an IVIS Spectrum CT, we used infection with bioluminescent C. rodentium, which causes self-limiting colitis in mice. In this protocol, we outline the infection of mice with bioluminescent C. rodentium and non-invasive monitoring of colonization by daily DLIT-&mu;CT imaging and bacterial enumeration from feces for 8 days.
The use of the IVIS Spectrum CT facilitates seamless co-registration of optical and &mu;CT scans using a single imaging platform. The low dose &mu;CT modality enables the imaging of mice at multiple time points during infection, providing detailed anatomical localization of bioluminescent bacterial foci in 3D without causing artifacts from the cumulative radiation. Importantly, the 4D movies of infected mice provide a powerful analytical tool to monitor bacterial colonization dynamics in vivo.

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Multi-modality imaging is a valuable approach for studying bacterial colonization in small animal models. This protocol outlines infection of mice with bioluminescent Citrobacter rodentium and the longitudinal monitoring of bacterial colonization using composite 3D diffuse light imaging tomography with &mu;CT imaging to create a 4D movie of C. rodentium infection.

4D Imaging von Multimodalität<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektionen bei Mäusen

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new transgenic reporter mouse model. We chose to visualize interleukin (IL) 22 gene expression because this cytokine has important activities in the intestine, where it contributes to repair tissues damaged by inflammation. Reporter systems offer considerable advantages over other methods of identifying products in vivo. In the case of IL-22, other studies had first isolated cells from tissues and then re-stimulated the cells in vitro. IL-22, which is normally secreted, was trapped inside cells using a drug, and intracellular staining was used to visualize it. This method identifies cells capable of producing IL-22, but it does not determine whether they were doing so in vivo. The reporter design includes inserting a gene for a fluorescent protein (tdTomato) into the IL-22 gene in such a way that the fluorescent protein cannot be secreted and therefore remains trapped inside the producing cells in vivo. Fluorescent producers can then be visualized in tissue sections or by ex vivo analysis through flow cytometry. The actual construction process for the reporter included recombineering a bacterial artificial chromosome that contained the IL-22 gene. This engineered chromosome was then introduced into the mouse genome. Homeostatic IL-22 reporter expression was observed in different mouse tissues, including the spleen, thymus, lymph nodes, Peyer&#39;s patch, and intestine, by flow cytometry analysis. Colitis was induced by T-cell (CD4+CD45RBhigh) transfer, and reporter expression was visualized. Positive T cells were first present in the mesenteric lymph nodes, and then they accumulated inside the lamina propria of the distal small intestine and colon tissues. The strategy using BACs gave good-fidelity reporter expression compared to IL-22 expression, and it is simpler than knock-in procedures.

We describe here a transgenic reporter mouse model to visualize the IL-22-producing cells inside different mouse tissues. This method can be used to track the location of other cytokines or secretary proteins in the mouse.

Visualisierung von IL-22-exprimierenden Lymphozyten unter Verwendung Reporter Mäuse

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...

A Custom Multiphoton Microscopy Platform for Live Imaging of Mouse Cornea and Conjunctiva

Conventional histological analysis and cell culture systems are insufficient to simulate in vivo physiological and pathological dynamics completely. Multiphoton microscopy (MPM) has become one of the most popular imaging modalities for biomedical study at cellular levels in vivo, advantages include high resolution, deep tissue penetration and minimal phototoxicity. We have designed an MPM imaging platform with a customized mouse eye holder and a stereotaxic stage for imaging ocular surface in vivo. Dual fluorescent protein reporter mouse enables visualization of cell nuclei, cell membranes, nerve fibers, and capillaries within the ocular surface. In addition to multiphoton fluorescence signals, acquiring second harmonic generation (SHG) simultaneously allows for the characterization of collagenous stromal architecture. This platform can be employed for intravital imaging with accurate positioning across the entire ocular surface, including cornea and conjunctiva.

Presented here is a multiphoton microscopic platform for live mouse ocular surface imaging. Fluorescent transgenic mouse enables the visualization of cell nuclei, cell membranes, nerve fibers and capillaries within the ocular surface. Non-linear second harmonic generation signals derived from collagenous structures provide label-free imaging for stromal architectures.

Eine benutzerdefinierte Multiphotonen-Mikroskopie-Plattform für Live-Bildgebung von Maus-Cornea und Konjunktiva

Conventional histological analysis and cell culture systems are insufficient to simulate in vivo physiological and pathological dynamics completely. ...

Biotechnik

Measurement of Specific Mycobacterial Mistranslation Rates with Gain-of-function Reporter Systems

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 per codon, the actual error rates vary widely, depending on the species, environment, and codons being studied. We have previously shown that mycobacteria use a two-step pathway for the generation of aminoacylated glutamine and asparagine tRNAs and that this is specifically associated with relatively high error rates due to the modulation of mistranslation rates by an essential component of the pathway, the amidotransferase GatCAB. We modified a previously employed Renilla-Firefly dual-luciferase system that had been used to measure mistranslation rates in Escherichia coli for use in mycobacteria to measure specific mistranslation rates of glutamate at glutamine codons and aspartate for asparagine codons. Although this reporter system was suitable for the accurate estimation of specific error rates, lack of sensitivity and requirements for excessive manipulation steps made it unsuitable for high-throughput applications. Therefore, we developed a second gain-of-function reporter system, using Nluc luciferase and green fluorescent protein (GFP), which is more amenable to medium/high-throughput settings. We used this system to identify kasugamycin as a small molecule that can decrease mycobacterial mistranslation. Although the reporters that we describe here have been used to measure specific types of mycobacterial mistranslation, they may be modified to measure other types of mistranslation in a number of model systems.

In this article, we present two complementary methods to measure specific rates of translational error and mistranslation in the model mycobacterium, Mycobacterium smegmatis, using gain-of-function reporter systems. The methods can be employed to measure accurate error rates in low throughput or relative error rates in a more high-throughput setting.

Messung spezieller mycobakterieller Mistranslation-Raten mit Funktionsfunktionen

The translation of genes into proteins is prone to errors. Although the average rate of translational error in model systems is estimated to be 1/10,000 ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, studying IAV requires the use of laborious secondary approaches to detect the presence of the virus in infected cells and/or in animal models of infection. This limitation has been recently circumvented with the generation of recombinant IAVs expressing easily traceable fluorescent or bioluminescent (luciferase) reporter proteins. However, researchers have been forced to select fluorescent or luciferase reporter genes due to the restricted capacity of the IAV genome for including foreign sequences. To overcome this limitation, we have generated a recombinant replication-competent bi-reporter IAV (BIRFLU) stably expressing both a fluorescent and a luciferase reporter gene to easily track IAV infections in vitro and in vivo. To this end, the viral non-structural (NS) and hemagglutinin (HA) viral segments of influenza A/Puerto Rico/8/34 H1N1 (PR8) were modified to encode the fluorescent Venus and the bioluminescent Nanoluc luciferase proteins, respectively. Here, we describe the use of BIRFLU in a mouse model of IAV infection and the detection of both reporter genes using an in vivo imaging system. Notably, we have observed a good correlation between the expressions of both reporters and viral replication. The combination of cutting-edge techniques in molecular biology, animal research and imaging technologies, provides researchers the unique opportunity to use this tool for influenza research, including the study of virus-host interactions and dynamics of viral infections. Importantly, the feasibility to genetically alter the viral genome to express two foreign genes from different viral segments opens up opportunities to use this approach for: (i) the development of novel IAV vaccines, (ii) the generation of recombinant IAVs that can be used as vaccine vectors for the treatment of other human pathogen infections.

Influenza A viruses (IAVs) are contagious respiratory pathogens that cause annual epidemics and occasional pandemics. Here, we describe a protocol to track viral infections in vivo using a novel recombinant luciferase and fluorescence-expressing bi-reporter IAV (BIRFLU). This approach provides researchers with an excellent tool to study IAV in vivo.

Ein luziferasefluoreszierendes Reporter-Influenzavirus zur Live-Bildgebung und Quantifizierung von Virusinfektionen

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...

Reporter Enzyme Fluorescence Imaging for In Vivo Tracking of Bacterial Infection

Source: Sharan, R., et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/56801">Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence.</a> J. Vis. Exp. (2018).
This video demonstrates the reporter enzyme fluorescence (REF) imaging for in vivo detection of Mycobacterium tuberculosis infection. The infected mice are intraperitoneally injected with a substrate for REF imaging. Upon being hydrolyzed by bacterial &#946;-lactamase enzyme, the substrate emits fluorescence, the detection of which aids evaluation of infection.

Reporter-Enzym-Fluoreszenz-Bildgebung für die In-vivo-Verfolgung bakterieller Infektionen

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunology

Immunodiagnostics

Imaging and Visualization Techniques

Fluorescence Molecular Tomography: An Imaging Technique for In Vivo Imaging of Fluorescent Protein-tagged Glioblastoma Xenografts in Mouse Model

Source: Benitez, J. A. et al., <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/57448" target="_blank">Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe fluorescence molecular tomography or FMT for in vivo imaging of fluorescent protein-tagged glioblastoma xenografts in mouse models. The technique is useful for elucidating the effects of anti-tumor therapeutics at the molecular level.

Fluoreszenz-Molekulartomographie: Ein bildgebendes Verfahren für die In-vivo-Bildgebung von fluoreszierenden Protein-markierten Glioblastom-Xenotransplantaten im Mausmodell

Source: Benitez, J. A. et al., Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we ...

Krebsforschung

Cancers of the Nervous System

In vivo studies

A Technique to Detect Extrapulmonary Tuberculosis via Superparamagnetic Nanoprobes

Source: Lee, C., et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/58227">Synthesis, Characterization, and Application of Superparamagnetic Iron Oxide Nanoprobes for Extrapulmonary Tuberculosis Detection.</a> J. Vis. Exp. (2020).
This video demonstrates a technique for the detection of extrapulmonary tuberculosis. Superparamagnetic iron oxide (SPIO) nanoprobes, conjugated to Mycobacterium-specific antibodies, are injected into a mouse previously infected with Mycobacterium bovis BCG, labeling the granuloma and providing a better imaging contrast for its detection.

Mycobacterium Tuberculosis in Mäusen mit Reporter Enzym Fluoreszenz Imaging

Zusammenfassung

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