Name: extraction of structural extracellular polymeric substances from aerobic granular sludge
Uploaded: 2016-09-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
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This research was financially supported by the SIAM Gravitation Grant 024.002.002, the Netherlands Organization for Scientific Research and by the Dutch Technology Foundation (STW - Simon Stevin Meester 2013). The authors want to thank Mario Pronk for providing the granular sludge samples.

HINWEIS: AGS wurde aus dem Nereda Pilotreaktor in der Kläranlage Utrecht, Niederlande gesammelt. Der Reaktor wurde mit kommunalem Abwasser zugeführt. Das körnige Schlamm hatte einen Schlammvolumenindex (SVI 5min) von 59,5 ml / g VSS. Der Schlamm wurde im April am Ende eines aeroben Zyklus abgetastet. Nach der Probenentnahme wurde der Schlamm sofort in das Labor transportiert, gesiebt und bei -20 ° C bis zur Verwendung gelagert. 1. EPS-Extraktion HINWEIS: Centrifuge granulare Schlemme bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 Minuten und dekantiert den Überstand. Sammeln Granulat im Pellet für den Extraktionen. Die Gesamtfeststoffe (TS) und flüchtige Feststoffe (VS) der Granulate wurden nach den Standardverfahren 23 bestimmt. Der Umrechnungsfaktor zwischen Granulat Naßgewicht - das Gewicht der direkt aus dem Pellet entnommen granules - und die TS wurde vor der Extraktion bestimmt. Alle Extraktionen wurden in dreifacher Ausführung durchgeführt. HINWEIS: 3 g nass granules wurden für jede Extraktionsverfahren verwendet. Ihre TS und VS-Werte (0,39 g TS und 0,34 g VS), gemessen in dreifacher Ausführung wurden verwendet, um die Extraktionsausbeute zu berechnen. <ol><li> Zentrifugierung Extraktion 11 <ol><li> Übertragung 3 g (Nassgewicht) von Granulat in ein Zentrifugenröhrchen und füllen Sie das Zentrifugenröhrchen auf 50 ml mit demineralisiertem Wasser. </li><li> Leicht schütteln Sie das Zentrifugationsröhrchen von Hand. </li><li> Zentrifuge das Zentrifugationsröhrchen die Mischung bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min enthält. </li><li> Sammeln Sie den Überstand in ein Becherglas, verwerfen das Pellet und weiterhin mit dem Überstand, wie in Abschnitt 1.7 beschrieben. </li></ol></li><li> Ultraschall - Behandlung Extraktion 10 <ol><li> Übertragung 3 g (Nassgewicht) von Granulat in ein Zentrifugenröhrchen und füllen Sie das Zentrifugenröhrchen auf 50 ml mit demineralisiertem Wasser. </li><li> Anwenden gepulste Beschallung auf Eis für 2,5 min bei 40 W auf die Mischung. </li><li> Zentrifugieren Sie die ZentrifugationRohr die Mischung bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min enthält. </li><li> Sammeln Sie den Überstand in ein Becherglas, verwerfen das Pellet und weiterhin mit dem Überstand, wie in Abschnitt 1.7 beschrieben. </li></ol></li><li> Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) Extraktion 11 <ol><li> Übertragung 3 g (Nassgewicht) von Granulat in einer 100 ml Glasflasche und füllen Sie die Flasche zu 50 ml mit 2% (w / v) EDTA-Lösung. </li><li> Leicht schütteln Sie die Flasche mit der Hand und speichern Sie sie im Kühlschrank bei 4 ° C für 3 Stunden. </li><li> Übertragen der Mischung in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifuge das Zentrifugationsröhrchen die Mischung bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min enthält. </li><li> Sammeln Sie den Überstand in ein Becherglas, verwerfen das Pellet und weiterhin mit dem Überstand, wie in Abschnitt 1.7 beschrieben. </li></ol></li><li> Formamid - Natriumhydroxid - Extraktion (NaOH) 13 <ol><li> Übertragung 3 g (Nassgewicht) von Granulat in einen 100ml-Glasflasche und die Flasche zu 50 ml mit demineralisiertem Wasser auffüllen. </li><li> In 0,3 ml 99% Formamid. </li><li> Leicht schütteln Sie die Flasche mit der Hand und speichern Sie sie im Kühlschrank bei 4 ° C für 1 Stunde. </li><li> 20 ml 1 M NaOH zu der Granulatsuspension. </li><li> Leicht schütteln Sie die Flasche mit der Hand und speichern Sie sie im Kühlschrank bei 4 ° C für 3 Stunden. </li><li> Übertragen Sie die Mischung gleichmäßig in zwei 50 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifuge die Zentrifugationsröhrchen die Mischung bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min enthält. </li><li> Sammeln Sie den Überstand in ein Becherglas, verwerfen das Pellet und weiterhin mit dem Überstand, wie in Abschnitt 1.7 beschrieben. </li></ol></li><li> Formaldehyd - NaOH - Extraktion 11 <ol><li> Übertragung 3 g (Nassgewicht) von Granulat in einer 100 ml Glasflasche und füllen Sie die Flasche zu 50 ml mit demineralisiertem Wasser. </li><li> In 0,3 ml 37% Formaldehyd. </li><li> Leicht schütteln Sie die Flasche mit der Hand und speichernim Kühlschrank bei 4 ° C für 1 Stunde. </li><li> 20 ml 1 M NaOH zu der Granulatsuspension. </li><li> Leicht schütteln Sie die Flasche mit der Hand und speichern Sie sie im Kühlschrank bei 4 ° C für 3 Stunden. </li><li> Übertragen Sie die Mischung gleichmäßig in zwei 50 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifuge die Zentrifugationsröhrchen die Mischung bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min enthält. </li><li> Sammeln Sie den Überstand in ein Becherglas, verwerfen das Pellet und weiterhin mit dem Überstand, wie in Abschnitt 1.7 beschrieben. </li></ol></li><li> Hochtemperatur - Natriumcarbonat Extraktion (Na 2 CO 3) 9,22,24 <ol><li> Vorheizen 150 ml Wasser in einem 1000 ml Becherglas auf einem Magnetrührer auf 80 ° C tippen. </li><li> Übertragung 3 g (Nassgewicht) von Granulat in einem 250 ml Schikanekolben und füllen den Kolben auf 50 ml mit demineralisiertem Wasser. </li><li> Zugabe von 0,25 g Na 2 CO 3 oder 0,67 g wasserfreies Na 2 CO 3 • 10H <sub&gt; 2 O in den Kolben um eine 0,5% (w / v) Na 2 CO 3 -Konzentration zu erhalten. </li><li> Setzen Sie den Kolben, der das Gemisch in das Wasserbad enthält. Decken Sie den Kolben und das Becherglas getrennt mit Aluminiumfolie Verdunstung verhindern. </li><li> Rühren Sie die Mischung für 35 min bei 400 rpm und 80 ° C. </li><li> Übertragen der Mischung in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifuge das Zentrifugationsröhrchen die Mischung bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min enthält. </li><li> Sammeln Sie den Überstand und das Pellet verwerfen. </li></ol></li><li> TS und VS Messung aller Extrakte gemäß den Standardverfahren 23. <ol><li> Nehmen Sie den Überstand und dialysiere es für 24 Stunden gegen 1000 ml Reinstwasser (Dialysebeutel mit 3500 Da Molekulargewicht abgeschnitten (MWCO)) 11,12. Ändern des Dialysewasser nach 12 Stunden die Wirkung der Dialyse zu verbessern. </li><li> Übertragen einer angemessenen Anteil (etwa 1/3) des dialysierten Überstandeine Aluminiumschale für TS und VS - Messung 23. HINWEIS: Trocknen Sie die Probe über Nacht bei 105 ° C. Die Gewichtsdifferenz des leeren Aluminiumschale und der Aluminiumschale die getrocknete Probe enthält, ist der TS-Gehalt. Dann brennen die gleiche Aluminiumschale die Probe bei 550 ° C für 2 Stunden enthält. Die Gewichtsdifferenz zwischen dem leeren Aluminiumschale und der Aluminiumschale die verbrannte Probe enthält, ist der Aschegehalt. Der Unterschied zwischen TS und Aschegehalt ist der VS-Gehalt. </li><li> Für jeden Extrakt, übertragen Sie die restliche Fraktion des dialysierten Überstand auf 10 ml Glasbecher. Verdicken den Überstand für 2 Tage bei 60 ° C auf ein Endvolumen von 1-2 ml der Polymerkonzentration im Überstand zu erhöhen. </li></ol></li></ol> 2. Alginate artigen extrazellulären polymeren (ALE) Extraktion <ol><li> Dialysieren des in Schritt erhaltenen Extrakts 1.6.8 gemäß Schritt 1.7.1. </li><li> Übertragen Sie die dialysierte Extrakt in einen 250 ml Glasbecher. Langsamly rühren, die Extraktion bei 100 Umdrehungen pro Minute und Raumtemperatur. Ständig pH-Änderungen mit einer pH-Elektrode überwacht, während auf einen endgültigen pH von 2,2 ± 0,05 Zugabe von 1 M Salzsäure (HCl) ALE in der sauren Form zu erhalten. </li><li> den pH-Wert auf 2,2, übertragen den Extrakt in ein 50 ml Zentrifugenröhrchen und zentrifugiere bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min nach dem Einstellen. </li><li> Überstand verwerfen und sammeln das gelartige Pellet. Die gelartige Pellet ALE in der sauren Form. </li><li> Um die Natrium (oder Kalium) Form ALE erhalten, fügen langsam 0,5 M NaOH (0,5 M oder Kaliumhydroxid) zu dem Gel in Schritt erhaltenen 2,4, während das Gel langsam mit einem Glasstab von Hand Mischen, bis pH 8,5 erreicht ist. </li></ol> 3. Ionic Hydrogelierung-Test HINWEIS: Um zu überprüfen , ob die extrahierten EPS ionische Hydrogelbildungsschritt Eigenschaften hatte, eine Perlenbildungstest mit Ca 2+ -Ionen wurde 25 verwendet. <ol><li> Nach der Eindickung des Extrakts in Schritt 1.7.3 aufein Volumen von 1-2 ml, langsam das Gemisch mit einem Glasstab rühren und deren pH mit 0,5 M NaOH auf 8,5 einstellen. </li><li> Nehmen den Extrakt aus Schritt 3.1 oder dem Natrium ALE aus Schritt 2.5 und tropft langsam des Extrakts mit einer Pasteur - Pipette in eine 2,5% (w / v) Calciumchlorid (CaCl 2) -Lösung. HINWEIS: Wenn das extrahierte EPS ionische Hydrogel gelbildende Eigenschaften aufweist, tropfenförmig (sphärisch) Perlen gebildet werden. Wenn der extrahierte EPS keine ionische Hydrogel gelbildende Eigenschaften aufweist, wird der Extrakt in der Lösung CaCl 2 dispergieren. </li></ol> 4. Stabilitätstest der ionischen Hydrogels ANMERKUNG: Um die Rolle des ionischen EPS Hydrogels in AGS Strukturbildung verstehen, Stabilitätstests wurden an den ionischen Hydrogelperlen des CO 2 Na 3 Extraktion durchgeführt, 3.2 in Schritt gesammelt. <ol><li> Halten Sie die Hydrogel - Kügelchen für 30 Minuten in der CaCl 2 -Lösung. </li><li> Mit einem Löffel die Hydrogel - Kügelchen zu nehmen aus dem CaCl 2 </sub&gt; Lösung und teilen Sie die Perlen in vier gleichen Anteilen. </li><li> Store Fraktion 1 in 10 ml Wasser 4 Stunden lang bei 4ºC demineralisiert. Die folgenden Stabilitätstests wurden in der gleichen Weise durchgeführt, wie in den Extraktionsverfahren beschrieben 1,3-1,5. </li><li> Store Fraktion 2 in 10 ml 2% (w / v) EDTA-Lösung für 3 Stunden bei 4 ° C. </li><li> Store Fraktion 3 in 7,15 ml Wasser mit 60 &amp; mgr; l 99% Formamid für 1 h bei 4ºC demineralisiert. Dann fügen Sie 2,85 ml 1 M NaOH und speichern Fraktion 3 für 3 Stunden bei 4 ° C. </li><li> Store Fraktion 4 in 7,15 ml Wasser mit 60 &amp; mgr; l 37% Formaldehyd für 1 h bei 4ºC demineralisiert. Dann fügen Sie 2,85 ml 1 M NaOH und speichern Fraktion 4 für 3 Stunden bei 4 ° C. </li><li> Überwachen wenn sichtbare Zerfall der Kügelchen während der Lagerung unter den beschriebenen Bedingungen in 4,3-4,6 zu bewerten, wenn die Kügelchen die Extraktionsbedingungen standhalten. </li></ol>

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	<li>Pronk, M., de Kreuk, M. K., de Bruin, B., Kamminga, P., Kleerebezem, R., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+scale+performance+of+the+aerobic+granular+sludge+process+for+sewage+treatment.">Full scale performance of the aerobic granular sludge process for sewage treatment.</a> Water Res. 84, 207-217 (2015).</li><li>Kreuk, M. K., Kishida, N., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerobic+granular+sludge+-+state+of+the+art.">Aerobic granular sludge - state of the art.</a> Water Sci. Technol. 55 (8-9), 75 (2007).</li><li>Adav, S. S., Lee, D. J., Show, K. Y., Tay, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerobic+granular+sludge:+Recent+advances.">Aerobic granular sludge: Recent advances.</a> Biotechnol. Adv. 26, 411-423 (2008).</li><li>Seviour, T., Pijuan, M., Nicholson, T., Keller, J., Yuan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+properties+of+aerobic+sludge+granules+as+hydrogels.">Understanding the properties of aerobic sludge granules as hydrogels.</a> Biotechnol. Bioeng. 102 (5), 1483-1493 (2009).</li><li>Flemming, H. -. C., Wingender, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biofilm+matrix.">The biofilm matrix.</a> Nat. Rev. Microbiol. 8 (9), 623-633 (2010).</li><li>Seviour, T., Yuan, Z., van Loosdrecht, M. C. M., Lin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerobic+sludge+granulation:+A+tale+of+two+polysaccharides?.">Aerobic sludge granulation: A tale of two polysaccharides?.</a> Water Res. 46 (15), 4803-4813 (2012).</li><li>Wingender, J., Neu, T. R., Flemming, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+Bacterial+Extracellular+Polymeric+Substances.">What are Bacterial Extracellular Polymeric Substances.</a> Microb. Extracell. Polym. Subst. Charact. Struct. Funct. , 27-53 (1999).</li><li>Flemming, H. -. C., Neu, T. R., Wozniak, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EPS+Matrix:+The+&#34;House+of+Biofilm+Cells.&#34;.">The EPS Matrix: The &#34;House of Biofilm Cells.&#34;.</a> J. Bacteriol. 189 (22), 7945-7947 (2007).</li><li>Lin, Y. M., Sharma, P. K., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+and+mechanical+differences+between+alginate-like+exopolysaccharides+isolated+from+aerobic+flocculent+sludge+and+aerobic+granular+sludge.">The chemical and mechanical differences between alginate-like exopolysaccharides isolated from aerobic flocculent sludge and aerobic granular sludge.</a> Water Res. 47 (1), 57-65 (2013).</li><li>Fang, H. H. P., Jia, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymer+from+anaerobic+sludges.">Extraction of extracellular polymer from anaerobic sludges.</a> Biotechnol. Tech. 10 (11), 803-808 (1996).</li><li>Liu, H., Fang, H. H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+of+sludges.">Extraction of extracellular polymeric substances (EPS) of sludges.</a> J. Biotechnol. 95, 249-256 (2002).</li><li>Comte, S., Guibaud, G., Baudu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+extraction+method+on+EPS+from+activated+sludge:+An+HPSEC+investigation.">Effect of extraction method on EPS from activated sludge: An HPSEC investigation.</a> J. Hazard. Mater. 140 (1-2), 129-137 (2007).</li><li>Adav, S. S., Lee, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymeric+substances+from+aerobic+granule+with+compact+interior+structure.">Extraction of extracellular polymeric substances from aerobic granule with compact interior structure.</a> J. Hazard. Mater. 154, 1120-1126 (2008).</li><li>Pan, X., Liu, J., Zhang, D., Chen, X. I., Li, L., Song, W., Yang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+five+extraction+methods+for+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+from+biofilm+by+using+three-dimensional+excitation-emission+matrix+(3DEEM)+fluorescence+spectroscopy.">A comparison of five extraction methods for extracellular polymeric substances (EPS) from biofilm by using three-dimensional excitation-emission matrix (3DEEM) fluorescence spectroscopy.</a> Water SA. 36 (1), 111-116 (2010).</li><li>D'Abzac, P., Bordas, F., Van Hullebusch, E., Lens, P. N. L., Guibaud, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+from+anaerobic+granular+sludges:+Comparison+of+chemical+and+physical+extraction+protocols.">Extraction of extracellular polymeric substances (EPS) from anaerobic granular sludges: Comparison of chemical and physical extraction protocols.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 85 (5), 1589-1599 (2010).</li><li>Comte, S., Guibaud, G., Baudu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relations+between+extraction+protocols+for+activated+sludge+extracellular+polymeric+substances+(EPS)+and+EPS+complexation+properties:+Part+I.+Comparison+of+the+efficiency+of+eight+EPS+extraction+methods.">Relations between extraction protocols for activated sludge extracellular polymeric substances (EPS) and EPS complexation properties: Part I. Comparison of the efficiency of eight EPS extraction methods.</a> Enzyme Microb. Technol. 38 (1-2), 237-245 (2006).</li><li>Adav, S. S., Lee, D. J., Tay, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+polymeric+substances+and+structural+stability+of+aerobic+granule.">Extracellular polymeric substances and structural stability of aerobic granule.</a> Water Res. 42, 1644-1650 (2008).</li><li>Caudan, C., Filali, A., Lefebvre, D., Sp&#233;randio, M., Girbal-Neuhauser, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+polymeric+substances+(EPS)+from+aerobic+granular+sludges:+Extraction,+fractionation,+and+anionic+properties.">Extracellular polymeric substances (EPS) from aerobic granular sludges: Extraction, fractionation, and anionic properties.</a> Appl. Biochem. Biotechnol. 166 (7), 1685-1702 (2012).</li><li>Fr&#248;lund, B., Palmgren, R., Keiding, K., Nielsen, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+extracellular+polymers+from+activated+sludge+using+a+cation+exchange+resin.">Extraction of extracellular polymers from activated sludge using a cation exchange resin.</a> Water Res. 30 (8), 1749-1758 (1996).</li><li>Nielsen, P. H., Jahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+EPS.">Extraction of EPS.</a> Microb. Extracell. Polym. Subst. Charact. Struct. Funct. , 49-72 (1999).</li><li>Lin, Y. M., Nierop, K. G. J., Girbal-Neuhauser, E., Adriaanse, M., van Loosdrecht, M. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustainable+polysaccharide-based+biomaterial+recovered+from+waste+aerobic+granular+sludge+as+a+surface+coating+material.">Sustainable polysaccharide-based biomaterial recovered from waste aerobic granular sludge as a surface coating material.</a> Sustain. Mater. Technol. 4, 24-29 (2015).</li><li>Lin, Y. M., Wang, L., Chi, Z. M., Liu, X. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+Alginate+Role+in+Aerobic+Granular+Bio-particles+Formation+and+Settleability+Improvement.">Bacterial Alginate Role in Aerobic Granular Bio-particles Formation and Settleability Improvement.</a> Sep. Sci. Technol. 43 (7), 1642-1652 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. , (1998).</li><li>Mchugh, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A guide to the seaweed industry. , (2003).</li><li>Lin, Y., de Kreuk, M., van Loosdrecht, M. C. M., Adin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+alginate-like+exopolysaccharides+isolated+from+aerobic+granular+sludge+in+pilot-plant.">Characterization of alginate-like exopolysaccharides isolated from aerobic granular sludge in pilot-plant.</a> Water Res. 44 (11), 3355-3364 (2010).</li><li>Zorel, J. A., Aquino, S. F., Sanson, a. L., Castro-Borges, W., Silva, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+EPS+extraction+protocols+from+anaerobic+sludge+for+gel-based+proteomic+studies.">Evaluation of EPS extraction protocols from anaerobic sludge for gel-based proteomic studies.</a> Water Sci. Technol. 72 (4), 535 (2015).</li><li>Ruiz-Hernando, M., Cabanillas, E., Labanda, J., Llorens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound,+thermal+and+alkali+treatments+affect+extracellular+polymeric+substances+(EPSs)+and+improve+waste+activated+sludge+dewatering.">Ultrasound, thermal and alkali treatments affect extracellular polymeric substances (EPSs) and improve waste activated sludge dewatering.</a> Process Biochem. 50 (3), 438-446 (2015).</li><li>Seviour, T., Pijuan, M., Nicholson, T., Keller, J., Yuan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel-forming+exopolysaccharides+explain+basic+differences+between+structures+of+aerobic+sludge+granules+and+floccular+sludges.">Gel-forming exopolysaccharides explain basic differences between structures of aerobic sludge granules and floccular sludges.</a> Water Res. 43, 4469-4478 (2009).</li><li>de Kerchove, A. J., Elimelech, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+polysaccharide+gel+layers+in+the+presenceof+Ca2++and+K++ions:+Measurements+and+mechanisms.">Formation of polysaccharide gel layers in the presenceof Ca2+ and K+ ions: Measurements and mechanisms.</a> Biomacromolecules. 8 (1), 113-121 (2007).</li><li>Jiang, H. L., Tay, J. H., Liu, Y., Tay, S. T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++augmentation+for+enhancement+of+aerobically+grown+microbial+granules+in+sludge+blanket+reactors.">Ca2+ augmentation for enhancement of aerobically grown microbial granules in sludge blanket reactors.</a> Biotechnol. Lett. 25 (2), 95-99 (2003).</li><li>Liang, Z., Li, W., Yang, S., Du, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+structural+characteristics+of+extracellular+polymeric+substances+(EPS),+pellets+in+autotrophic+nitrifying+biofilm+and+activated+sludge.">Extraction and structural characteristics of extracellular polymeric substances (EPS), pellets in autotrophic nitrifying biofilm and activated sludge.</a> Chemosphere. 81 (5), 626-632 (2010).</li><li>Guo, X., Liu, J., Xiao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+damage+of+cell+wall+and+cell+membrane+for+various+extracellular+polymeric+substance+extractions+of+activated+sludge.">Evaluation of the damage of cell wall and cell membrane for various extracellular polymeric substance extractions of activated sludge.</a> J. Biotechnol. 188, 130-135 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Hinweise für den Protokollabschnitt Die Extraktion von EPS / ALE wird mit einem Volumen von 50 ml und 3 g Granulat beschrieben. Diese Werte werden als Richtlinien beabsichtigt. Extraktionen mit höherer Granulat Konzentrationen können die Ausbeute der extrahierten EPS verringern. Bei der Gewinnung von ALE sollte die Temperatur für 30 min bei 80 ° C konstant gehalten werden. Die Zeit für die Mischung erforderliche aufzuheizen (ca. 5 min) wird in dem Protokoll enthalten. Weiterhin wird die Extraktionseffizienz durch die Verwendung eines magnetischen Rührstabs der gleichen Größe wie der Durchmesser des Kolbens unten erweitert. Dies wird in einem guten Mischeigenschaften und Fräsen Wirkungen führen, die Extraktion von EPS zu fördern. Später im Protokollabschnitt, TS und VS Erträge aller Extraktionen (Überstand gesammelt in Schritten von 1,1 bis 1,6) bestimmt. Dialyse muss vor TS und VS-Messung durchgeführt werden, um mögliche Fehler der Anwesenheit von Chemikalien für Extraktionen verwendet aufgrund verringern. EINMWCO von 3500 Da wird empfohlen, diese Chemikalien zu entfernen, während die EPS-Makromoleküle innerhalb der Dialysebeutel zu halten. Die Tasche Dialyse sollte ein größeres Volumen als das Volumen des Extrakts haben. Dies ist notwendig, weil das Volumen des Extraktes während der Dialyse (zB für EDTA - Extraktion bis zu 40% Volumenerhöhung) zu erhöhen. Das Ausmaß der chemischen Entfernung durch Dialyse kann durch Messung des pH-Wertes in der Probe vor und nach der Dialyse bestimmt. Alternativ zeigen Leitfähigkeitsmessungen des Dialysewasser, das Ausmaß der Ionenentfernung. Um ALE aus der Summe der extrahierten EPS (Schritte 1,6 und 2) die Dialyseschritt ist optional erhalten. Dennoch hat Dialyse drei Vorteile: es reduziert die Menge an HCl zur Fällung erforderlich ist, den Säuremassentransfer im Extrakt erhöht, und verringert den Aschegehalt des erhaltenen ALE. Für die Fällung von ALE wird empfohlen, ein Becherglas mit einem wesentlich größeren Volumen als das extrac verwendent. Na 2 CO 3 ist normalerweise in der Extraktionsüberdosiert. Die hinzugefügte HCl wird zuerst mit dem Na 2 CO 3 reagieren gelassen in dem Extrakt, was zu einer Bildung von Kohlendioxid und, falls die Probe nicht vor dialysiert wurde, in Schäumen. Während der Zugabe von HCl, sollte der Extrakt langsam mit einem magnetischen Rührstab mit der gleichen Größe wie der Boden des Becherglases gerührt werden. Ein Rührstab dieser Größe und langsamem Rühren wird, ohne die Struktur des Niederschlags in noch Mischen zur Folge haben. Wenn saure Gelklumpen in dem Extrakt gebildet werden, sollte das Becherglas von Hand leicht aufgewirbelt werden. Die Fällung wird mit einer Säure-Konzentration von 1 M führten eine große Volumenerhöhung des Extrakts zu vermeiden, während immer noch eine homogene Verteilung der Säure in der Probe zu erhalten. Höhere Säurekonzentrationen können in einem regionalen pH-Abnahme und sauren Gelklumpen Bildung führen. Ein pH-Wert niedriger als 2,0 verringert die Menge der ALE die wiederhergestellt werden können, wahrscheinlich aufgrund der strukturellen Veränderungender Polymere bei niedrigeren pH-Wert. Es ist daher wichtig bei 2,20 ± 0,05 Der End-pH zu halten. Einschränkungen Das ALE-Extraktions-Verfahren zielt darauf ab, strukturelle extrazelluläre Polymere des EPS von AGS oder Biofilmen im Allgemeinen zu extrahieren und nicht alle aktuellen EPS zu extrahieren soll. Um alle EPS extrahieren, eine Kombination von mehr als einem Extraktionsverfahren erforderlich. Außerdem ist , wie mit der Zunahme des VS EPS Ausbeute gezeigt durch eine doppelte und vierfache Extraktion Anwendung einer einzigen Extraktion nicht alle strukturellen EPS extrahieren. ALE-Extraktion ist eine harte EPS-Extraktionsverfahren, ständige Durchmischung mit Wärme und alkalischen Bedingungen zu kombinieren. Aus diesem Grund ist es möglich, dass einige intrazellulärem Material zusammen mit den EPS extrahiert wird. Obwohl Zelllyse kann durch physikalische und chemische Extraktionstechniken (Beschallung 31,32, 31,32 NaOH, EDTA 11,32, CER 32, 32 Wärme und hohen Scherraten von m verursacht werdenixing 19), muss das Vorhandensein von intrazellulärem Material in zurückgewonnen EPS noch verifiziert werden. Die ionische gelbildende Eigenschaft der extrahierten EPS ist der Schwerpunkt dieser Forschung, ob das wiedergewonnene EPS intrazelluläre Material enthält, wurde nicht untersucht. Zukünftige Forschung wird auf die Identifizierung intrazellulären Material in den extrahierten EPS konzentrieren. Die Hydrogelmatrix von AGS Löslichmachende ist entscheidend strukturelle EPS zu extrahieren EPS bildet eine dichte und kompakte Hydrogelmatrix in AGS. Obwohl EPS verschiedenen Klassen von organischen Makromolekülen wie Polysacchariden, Proteinen, Nukleinsäuren enthält, (phospho) Lipiden, Huminstoffe und einige interzellularen Polymere 7,5,8, nicht alle von ihnen ein Gel bilden. Es werden nur die gelbildende Polymere hier als Strukturpolymere in EPS betrachtet. Das Ziel der EPS-Extraktionen ist zum ersten EPS löslich zu machen und dann die solubilisierten EPS zu sammeln. Wenn die Struktur EPS (dh ter EPS ein Hydrogel bildet) ist das Ziel der Extraktion, die Gelmatrix von AGS muss zuerst solubilisiert werden. Nur Methoden, die die Gel-Matrix sind in der Lage zu extrahieren Struktur EPS solubilisieren können. In dieser Forschung verwendet , um einige häufig EPS - Extraktionsverfahren, wie Zentrifugation , 10 - 15 Beschallungs 10,14,15, 10 EDTA - 12,14,15, Formaldehyd + NaOH 10 - 15 und Formamid + NaOH 13 nicht effizient die strukturelle isolieren könnte EPS. Dies ist aufgrund der Tatsache, dass die Hydrogelmatrix der aeroben Granulate mit diesen Verfahren nicht solubilisiert wurde. Aus diesem Grund Stabilitätstests in Abschnitt 4 wurden nur mit Bedingungen in EDTA, Formamid + NaOH und Formaldehyd + NaOH Extraktion durchgeführt. Diese drei Extraktionen waren nicht in der Lage zu isolieren Struktur EPS ; , aber immer noch die höchste VS EPS Ausbeute neben der Na 2 CO 3 Extraktion. Bedingungen of die Na 2 CO 3 Extraktion wurden nicht als dieses Extraktionsverfahren deutlich solubilisiert die AGS Matrix aufgebracht. Daher sind die angewandten Bedingungen während der Stabilitätstest wurden als repräsentativ angesehen. Die Extraktion mit Kationenaustauschharz (CER), einem anderen häufig verwendeten EPS-Extraktionsverfahren wurde nicht für diesen Vergleich betrachtet, da frühere Studien auf EPS-Extraktion mit CER hier nicht bessere Ergebnisse als die chemischen Extraktionen brachte. Gelbildenden EPS in AGS Gelbildenden EPS werden als die Struktur EPS in der Hydrogelmatrix von AGS betrachtet. Es ist erwähnenswert, dass es verschiedene Arten von Hydrogelen, wie ionische Gele, temperaturbedingte Gele und pH-induzierte Gele sind. Diese Studie konzentriert sich nur auf EPS, die ionische Gele bilden. die große Anteil an Struktur Gel-Material extrahiert In Bezug auf, ist dies wahrscheinlich die dominanten strukturellen EPS zu sein. Es gibt sicherlich Möglichkeiten, die andere Arten von EPSdiese Form verschiedene Arten von Hydrogele (beispielsweise pH induzierte gel 28) gibt es in der gleichen oder einer anderen Art von aeroben Granulate. Dennoch, egal welche Art von Hydrogel wird gezielt, Lösungs die EPS-Gel-Matrix ist der wichtigste Schritt ist gelbildenden EPS zu extrahieren. Derzeit hat wenig Forschung über strukturelle EPS von körnigem Schlamm geschehen. Das ALE-Extraktion in diesem Protokoll beschrieben ist in der Lage gelbildenden EPS aus AGS Extrahieren und wird in weiteren Studien verwendet werden, um strukturelle EPS zu charakterisieren. Mehr Forschung muss auf AGS, strukturelle EPS und nicht-strukturellen EPS getan werden, um den Prozess besser und Funktion der Granulation und EPS verstehen. Vor allem müssen die folgenden drei Punkte untersucht werden: warum Mikroorganismen, eine große Menge an EPS produzieren, was ist die genaue Zusammensetzung von EPS und wie wird die Zusammensetzung der EPS auf Umweltveränderungen modifiziert abhängig. Das Erkennen und die Analyse aller beteiligten Verbindungen und ihre interactions helfen Biofilmen und wie nutzen sie zu unserem Vorteil zu verstehen.

In den letzten Jahren hat sich die aerobe körniger Schlamm (AGS) Verfahren ein beliebtes biologischen Abwasserbehandlungsverfahren werden, erfolgreich an mehreren Full-Scale Abwasserbehandlung angewandt Pflanzen 1. Im Gegensatz zu dem Prozess herkömmlichen Belebtschlamm, in den AGS verarbeiten die Mikroorganismen bilden Granulat anstelle von Flocken 2. Diese Körner haben eine bessere Absetzbarkeit der Lage sind, höhere organische Raumbelastungen aushalten und haben eine höhere Toleranz gegenüber Toxizität als Belebtschlammflocken 3. Im Gegensatz zu Biofilmen wird AGS 4 spontan , ohne Beteiligung von jedem Trägermaterial gebildet. In AGS, wie in Biofilmen, produzieren Mikroorganismen eine erhebliche Menge an stark hydratisierte extrazellulären polymeren Substanzen (EPS) 5 eine Hydrogelmatrix zu bilden , in dem sie selbst immobilisiert sind 4 - 6. EPS sind eine komplexe Mischung von Polysacchariden, Proteinen, Nukleinsäuren besteht, (phospho) Lipiden, Huminstoffe und einige 5,7,8 interzellularen Polymere. Diese polymeren Substanzen interagieren miteinander durch elektrostatische Kräfte, Wasserstoffbrücken, ionische attraktive Kräfte und / oder biochemischer Reaktionen, etc. 5, eine dichte und kompakte Tertiärnetzwerkstruktur zu bilden. Die Polymere in der Lage sind , die EPS Hydrogele 4,9 zu bilden und zur Bildung des tertiären Netzstruktur sind in diesem Zusammenhang betrachtet als Struktur EPS, eine Teilmenge der Gesamt EPS beitragen. EPS sind für die chemische Struktur und die physikalischen Eigenschaften der Körnchen 5 verantwortlich. Es ist daher entscheidend, um die Funktion der einzelnen EPS Verbindung zu verstehen. Es sind verschiedene Ansätze angewendet zu extrahieren EPS von 10 bis 15. Aufgrund ihrer extremen Komplexität ist es fast unmöglich, alle Komponenten des EPS durch eine einzige Methode zu extrahieren. Bis heute gibt es keine &quot;one size fits all&quot; Verfahren für EPS-Extraktion. Die Wahl des Extraktionsmethode beeinflusst nicht nur die Gesamtmenge, sondern auch die Zusammensetzung der zurückgewonnenen Polymere 13,16 - 20. Je nach Art des Schlammes und die EPS von Interesse verschiedene Methoden erforderlich sind. Extrahieren gelbildende Polymere, ihre Eigenschaften Charakterisierung und Untersuchung von deren Wechselwirkungen untereinander und mit nicht-gelbildenden EPS wird helfen, die Rolle von EPS in aerobe körnige Schlammbildung zu offenbaren. Darüber hinaus sind die gelbildende Polymere auch nützlich Biopolymeren in industriellen Anwendungen. Eine mögliche Anwendung wurde bereits unter Verwendung von gelbildenden Polymeren aus AGS als Beschichtungsmaterial 21 gezeigt , die Wasserfestigkeit von Papier zu erhöhen. Daher Extraktionsverfahren, die spezifisch für gelbildende EPS benötigt. Das Ziel dieser Studie ist es, eine Methodik zu entwickeln, gelbildende EPS von AGS zu extrahieren. Sechs Extraktionsverfahren 10-15,22, die in der Literatur häufig verwendet werden, wurden EPS von AGS zu extrahieren ausgewählt. Die Gesamtmenge und die gelbildende Eigenschaft der extrahierten EPS wurden für jede Methode verglichen.

<table><tbody><tr><td>250 ml baffled flask</td><td>Kimble</td><td>25630-250</td><td></td></tr><tr><td>1,000 ml glass beaker</td><td>VWR</td><td>213-1128</td><td></td></tr><tr><td>RCT basic, magnetic stirrer with thermometer</td><td>IKA</td><td>3810000</td><td></td></tr><tr><td>sodium carbonate decahydrate</td><td>Merck KGaA</td><td>1063911000</td><td></td></tr><tr><td>50 ml centrifugation tubes</td><td>greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Multifuge 1 S-R, centrifuge</td><td>Heraeus/Thermo Scientific</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>hydrochloric acid, 37%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30721-1L-GL-D</td><td></td></tr><tr><td>250 ml glass beaker</td><td>VWR</td><td>213-1124</td><td></td></tr><tr><td>calcium chloride dihydrate</td><td>Merck KGaA</td><td>1023821000</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Pasteur Pipette</td><td>Copan</td><td>201C</td><td></td></tr></tbody></table>

extraction of structural extracellular polymeric substances from aerobic granular sludge

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) was extracted using six different methods (centrifugation, sonication, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), formamide with sodium hydroxide (NaOH), formaldehyde with NaOH and sodium carbonate (Na2CO3) with heat and constant mixing). AGS was collected from a pilot wastewater treatment reactor. The ionic gel-forming property of the extracted EPS of the six different extraction methods was tested with calcium ions (Ca2+). From the six extraction methods used, only the Na2CO3 extraction could solubilize the hydrogel matrix of AGS. The alginate-like extracellular polymers (ALE) recovered with this method formed ionic gel beads with Ca2+. The Ca2+-ALE beads were stable in EDTA, formamide with NaOH and formaldehyde with NaOH, indicating that ALE are one part of the structural polymers in EPS. It is recommended to use an extraction method that combines physical and chemical treatment to solubilize AGS and extract structural EPS.

EPS - Extraktion Das Auftreten von Granulaten nach verschiedenen EPS Extraktionsverfahren Anwendung ist in 1 gezeigt. Die Form und die Gelstruktur von Granulaten waren intakt nach dem Zentrifugieren (1a) und EDTA - Extraktion (Figur 1c). Granulat wurde in Fragmente unterschiedlicher Größen durch Beschallung aufgebrochen. Die Trübung in der flüssigen Phase könnte durch Suspension von kleinen Fragmenten (Abbildung 1b) , da die Trübung hoch nach Zentrifugation verringert. Formamid und Formaldehyd allein keine Auswirkungen hat auf die Form des Körnchens verändern und ihre Gelstruktur (Daten nicht gezeigt). Nach der Zugabe von NaOH, wandte sich die flüssige Phase gelblich. Einige flauschigen Material wurde von der Oberfläche des Granulats gelöst und bildete eine Schicht auf der Oberseite der abgesetzten Granulate (Figur 1d und 1e). Trotzdem ist die Form desGranulat wurde nicht verändert. Die Zugabe von NaOH verbessert anscheinend EPS Solubilisierung, konnte aber die Gelmatrix-Struktur nicht beschädigen. Im Vergleich dazu Granulat nach Na 2 CO 3 Extraktion (1f) vollständig verschwunden. Stattdessen wird eine Mischung aus nach dem Sol-ähnliche Flüssigkeit und kleine gallertartige Teilchen gebildet wurden, wurde die Gelmatrix von Granulaten zeigt tatsächlich solubilisiert. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/54534/54534fig1.jpg" /> Abbildung 1. Aerobic körniger Schlamm EPS - Extraktionen. Zur besseren Visualisierung der Auswirkungen der einzelnen Extraktionsverfahren auf das Granulat, Experimente wurden in 25 ml Glasflaschen durchgeführt. Nach dem Extraktionsverfahren, die Extrakte wurden für 1 Stunde bei Raumtemperatur gehalten, damit Schwebstoffe absetzen. (A) Zentrifugieren Extraktion, (b) Beschallen Extraktion, (c) EDTA - Extraktion, (d) Formamid - NaOH Extraction, (e) Formaldehyd - NaOH - Extraktion, (f) Hochtemperatur -. Na 2 CO 3 Extraktion <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/54534/54534fig1large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/54534/54534fig1large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> EPS - Ausbeute für jede Methode zur VS - Fraktion mit Bezug ist in Figur 2 veranschaulicht. Die Ausbeute ist in mg pro g VS EPS anfänglichen VS Granulat vorgelegt. Die Menge an EPS von Formaldehyd + NaOH, Formamid + NaOH und Na 2 CO 3 + Heizen + war höher als die der Zentrifugation, Ultrabeschallung und EDTA - Extraktion gemischt wird . 13,15 darauf hinweist , dass alkalischen Bedingungen EPS Löslichkeit 26,27 verbessern - Ähnliche Ergebnisse für diese Extraktionstechniken wurden auch von früheren Studien 11 gezeigt. Die Menge an EPS gewonnen durch Na 2 CO 3<html> die höchste war, mehr als 20-fache der nur durch Zentrifugation erhalten. Zusätzlich kann die Gesamtausbeute des EPS Na 2 CO 3 Extraktion weiter durch mehrere Extraktionen verbessert werden. Eine zweite Extraktion das Pellet verworfen in Schritt 1.6.8 (Protokollabschnitt) der ersten Extraktion erhöht die Gesamtausbeute von 28%, eine vierfache Extraktion erhöht auch die Gesamtausbeute von 46% verwendet wird. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/54534/54534fig2.jpg" /> Abbildung 2. Ergebnisse aller Extraktionsmethoden in Bezug auf VS - Ausbeute und Aschegehalt. Für jede Extraktion der erste Takt des VS - Ausbeute in mg stellt VS EPS pro g Anfangs VS Granulat. Der zweite Balken stellt den Gewichtsprozentsatz der Asche in den extrahierten TS. Die Fehlerbalken zeigen die Standardabweichung der drei Extraktionen für jede Extraktionstechnik durchgeführt.&quot;_blank&quot;&gt; Bitte hier klicken, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. Alginate artigen extrazellulären Polymer (ALE) Extraktion Nachdem der pH - Wert der durch die Na 2 CO 3 Extraktion extrahiert EPS auf 2,2 eingestellt war, wurde 63% des gesamten VS ausgefällt. Der Niederschlag ist sauer ALE 25. Die Restfraktion war wahrscheinlich EPS, die unter den Extraktionsbedingungen löslich gemacht werden kann, aber keinen Niederschlag bei pH 2,2 bilden. Ionic Hydrogelbildungsschritt Test Aerobic Granula wurden als ähnlich zu einem Hydrogel beschrieben. Das Granulierungsverfahren wurde als gelbildende Phänomen mit Glycosiden als Geliermittel 4,9,25,28 angesehen worden. Normalerweise Ca 2+ ist eines der am häufigsten verwendeten Kationen im Abwasser. Außerdem bindet es leicht mit sauren Polysacchariden (zBAlginate und Poly-Galacturonsäure), vermutlich als Gegenion zu vermitteln Gelierung 29. resultierende somit in einem ionisch vernetzten Hydrogels. Es wurde beobachtet , daß die Zugabe von Ca 2+ -Ionen aerobe Schlamm Granulation 30 beschleunigen kann. Daher Ca 2+ -EPS (ionische Hydrogel) könnte eine wichtige Rolle spielen , um die Gel - Matrix - Struktur in aeroben körniger Schlamm in den Aufbau. In diesem Zusammenhang , ob die extrahierten EPS bildet ein ionisches Hydrogel mit Ca 2+ -Ionen als Test verwendet werden könnte , um zu überprüfen , ob die extrahierte EPS zur Bildung einer strukturellen Polymer des Gels beitragen Matrix in aerobe körnige Schlämme 9. In dieser Forschung für die EPS aus AGS (Abbildung 3a) durch verschiedene Verfahren extrahiert werden , nur die von Na 2 CO 3 extrahiert EPS gehalten , die Form eines Tropfens in 2,5% (w / v) CaCl &amp; sub2 ; -Lösung und bildeten stabile ionische Hydrogelperlen .Außerdem EPS das Natrium ALE daraus erhalten durch zusätzliche Schritte (ALE Polymer - Extraktion, 3b) angezeigt und die gleiche Eigenschaft. Die Farbe und die Morphologie der Ca 2+ -ALE Gelkügelchen (Abbildung 3c) sind ähnlich aeroben granulare Schlamm (Abbildung 3a). Offenbar ist die durch die Na 2 CO 3 Verfahren extrahiert EPS trägt zur Bildung der Gelmatrix in aerobe körnige Schlämme. ALE, das eine Hauptkomponente dieses EPS ist es strukturelle Polymere können ein ionisches Hydrogel zu bilden. Stabilitätstest des ionischen Hydrogel Es wurde während der EPS - Extraktion, aerobe Granulat behielten ihre sphärische Form in EDTA, Formaldehyd und Formamid + NaOH + NaOH (1) festgestellt , daß. Um herauszufinden, ob die extrahierten Strukturpolymere zu verstehen , eine Rolle bei der Stabilität der Granulate, Ca 2+ -ALE Perlen spielen warengenau die gleiche Weise wie aerobe Granulat bei der Extraktion behandelt. Interessanterweise angezeigt Ca 2+ -ALE beads die ähnliche Stabilitäten wie der AGS (Abbildung 3d - 3f), dh Ca 2+ -ALE beads in EDTA äußerst stabil waren. Es gab wenig Menge an ALE von der Oberfläche des Ca 2+ freistehend -ALE Perlen (winzige bräunlich Flocke in Abbildung 3e und 3f), wenn die Ca 2+ -ALE Perlen waren in Formaldehyd + NaOH und Formamid + NaOH drei Stunden lang getränkt , beziehungsweise. Diese Ähnlichkeit in Bezug auf die Stabilität zwischen Ca 2+ -ALE Perlen und aerobe Granulat zeigt an, dass ALE ein Teil der wichtigen strukturellen Polymere bilden die AGS Gel - Matrix sind. <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/54534/54534fig3.jpg" /> Abbildung 3. Aerobic - Granulat und extrahiert ALE. (A) Ein Granulat in demineralisiertem Wasser prIOR-Extraktion. (B) Saure ALE (extrahiert gemäß den Absätzen 1.6 und 2) nach der Zentrifugation bei 4.000 × g und 4 ° C für 20 min. Ergebnisse der Stabilitätstests der ionischen Hydrogel. (C) Ca 2+ -ALE Perlen in demineralisiertes Wasser für 4 Stunden bei 4 ° C gelagert. (D) Ca 2+ -ALE-beads für 3 h bei 4 ° C in 2% EDTA, gespeichert. (E) Ca 2+ -ALE-beads in Formamid gespeichert + NaOH 4 h bei 4 ° C. (F) Ca 2+ gespeichert -ALE-Perlen in Formaldehyd + NaOH 4 h bei 4 ° C. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/54534/54534fig3large.jpg" target="_blank">Bitte hier klicken</a> , um <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/54534/54534fig3large.jpg" target="_blank">eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a>

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Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

Das Protokoll sieht eine Methodik aerobe granulare Schlamm löslich zu machen, um Alginat-ähnliche extrazelluläre Polymere (ALE) zu extrahieren.

Die Extraktion von Strukturextrazellulären polymeren Substanzen aus Aerobic Granular Sludge

To evaluate and develop methodologies for the extraction of gel-forming extracellular polymeric substances (EPS), EPS from aerobic granular sludge (AGS) ...

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Serie: Extraction of Structural Extracellular Polymeric Substances from Aerobic Granular Sludge

Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high quality paper. Black liquor is a pulping waste generated by the kraft process that has potential for downstream bioconversion. However, the recalcitrant nature of the lignocellulose resources, its chemical derivatives that constitute the majority of available organic carbon within black liquor, and its basic pH present challenges to microbial biodegradation of this waste material. Methods for the collection and modification of black liquor for microbial growth are aimed at utilization of this pulp waste to convert the lignin, organic acids, and polysaccharide degradation byproducts into valuable chemicals. The lignocellulose extraction techniques presented provide a reproducible method for preparation of lignocellulose growth substrates for understanding metabolic capacities of cultured microorganisms. Use of gas chromatography-mass spectrometry enables the identification and quantification of the fermentation products resulting from the growth of microorganisms on pulping waste. These methods when used together can facilitate the determination of the metabolic activity of microorganisms with potential to produce fermentation products that would provide greater value to the pulping system and reduce effluent waste, thereby increasing potential paper milling profits and offering additional uses for black liquor.

Industrial wastes can be collected and modified to analyze microbial growth. Lignocellulose extraction techniques provide components to analyze specific biodegradation ability. Gas chromatography-mass spectrometry identifies fermentation products of microorganisms grown on pulping waste. These methods determine the metabolic capacity of microorganisms to degrade pulping waste.

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

Forschung

Umwelt

Development of Sulfidogenic Sludge from Marine Sediments and Trichloroethylene Reduction in an Upflow Anaerobic Sludge Blanket Reactor

The importance of microbial sulfate reduction relies on the various applications that it offers in environmental biotechnology. Engineered sulfate reduction is used in industrial wastewater treatment to remove large concentrations of sulfate along with the chemical oxygen demand (COD) and heavy metals. The most common approach to the process is with anaerobic bioreactors in which sulfidogenic sludge is obtained through adaptation of predominantly methanogenic granular sludge to sulfidogenesis. This process may take a long time and does not always eliminate the competition for substrate due to the presence of methanogens in the sludge. In this work, we propose a novel approach to obtain sulfidogenic sludge in which hydrothermal vents sediments are the original source of microorganisms. The microbial community developed in the presence of sulfate and volatile fatty acids is wide enough to sustain sulfate reduction over a long period of time without exhibiting inhibition due to sulfide. 
This protocol describes the procedure to generate the sludge from the sediments in an upflow anaerobic sludge blanket (UASB) type of reactor. Furthermore, the protocol presents the procedure to demonstrate the capability of the sludge to remove by reductive dechlorination a model of a highly toxic organic pollutant such as trichloroethylene (TCE). The protocol is divided in three stages: (1) the formation of the sludge and the determination of its sulfate reducing activity in the UASB, (2) the experiment to remove the TCE by the sludge, and (3) the identification of microorganisms in the sludge after the TCE reduction. Although in this case the sediments were taken from a site located in Mexico, the generation of a sulfidogenic sludge by using this procedure may work if a different source of sediments is taken since marine sediments are a natural pool of microorganisms that may be enriched in sulfate reducing bacteria.

Microbial sulfate reduction is a process of great importance in environmental biotechnology. The success of the sulfidogenic reactors depends among other factors on the microbial composition of the sludge. Here, we present a protocol to develop sulfidogenic sludge from hydrothermal vents sediments in a UASB reactor for reductive dechlorination purposes.

Entwicklung sulfidogenen Schlamm aus marinen Sedimenten und Trichlorethylen Reduction in einer Upflow Anaerobic Sludge Blanket Reactor

The importance of microbial sulfate reduction relies on the various applications that it offers in environmental biotechnology. Engineered sulfate ...

Au-Interaction of Slp1 Polymers and Monolayer from Lysinibacillus sphaericus JG-B53 - QCM-D, ICP-MS and AFM as Tools for Biomolecule-metal Studies

In this publication the gold sorption behavior of surface layer (S-layer) proteins (Slp1) of Lysinibacillus sphaericus JG-B53 is described. These biomolecules arrange in paracrystalline two-dimensional arrays on surfaces, bind metals, and are thus interesting for several biotechnical applications, such as biosorptive materials for the removal or recovery of different elements from the environment and industrial processes. The deposition of Au(0) nanoparticles on S-layers, either by S-layer directed synthesis 1 or adsorption of nanoparticles, opens new possibilities for diverse sensory applications. Although numerous studies have described the biosorptive properties of S-layers 2-5, a deeper understanding of protein-protein and protein-metal interaction still remains challenging. In the following study, inductively coupled mass spectrometry (ICP-MS) was used for the detection of metal sorption by suspended S-layers. This was correlated to measurements of quartz crystal microbalance with dissipation monitoring (QCM-D), which allows the online detection of proteinaceous monolayer formation and metal deposition, and thus, a more detailed understanding on metal binding.
The ICP-MS results indicated that the binding of Au(III) to the suspended S-layer polymers is pH dependent. The maximum binding of Au(III) was obtained at pH 4.0. The QCM-D investigations enabled the detection of Au(III) sorption as well as the deposition of Au(0)-NPs in real-time during the in situ experiments. Further, this method allowed studying the influence of metal binding on the protein lattice stability of Slp1. Structural properties and protein layer stability could be visualized directly after QCM-D experiment using atomic force microscopy (AFM). In conclusion, the combination of these different methods provides a deeper understanding of metal binding by bacterial S-layer proteins in suspension or as monolayers on either bacterial cells or recrystallized surfaces.

Au-Interaction of Slp1 Polymers and Monolayer from Lysinibacillus sphaericus JG-B53 - QCM-D, ICP-MS and AFM as Tools for Biomolecule-metal Studies

To obtain basic information on the sorption and recycling of gold from aqueous systems the interaction of Au(III) and Au(0) nanoparticles on S-layer proteins were investigated. The sorption of protein polymers was investigated by ICP-MS and that of proteinaceous monolayers by QCM-D. Subsequent AFM enables the imaging of the nanostructures.

Au-Wechselwirkung von SLP1 Polymere und Monolayer aus<em&gt; Lysinibacillus sphaericus</em&gt; JG-B53 - QCM-D, ICP-MS und AFM als Werkzeuge für Biomolekül-Metallforschung

In this publication the gold sorption behavior of surface layer (S-layer) proteins (Slp1) of Lysinibacillus sphaericus JG-B53 is described. These ...

Chemie

Looking Outwards: Isolation of Cyanobacterial Released Carbohydrate Polymers and Proteins

Cyanobacteria can actively secrete a wide range of biomolecules into the extracellular environment, such as heteropolysaccharides and proteins. The identification and characterization of these biomolecules can improve knowledge about their secretion pathways and help to manipulate them. Furthermore, some of these biomolecules are also interesting in terms of biotechnological applications. Described here are two protocols for easy and rapid isolation of cyanobacterial released carbohydrate polymers and proteins. The method for isolation of released carbohydrate polymers is based on conventional precipitation techniques of polysaccharides in aqueous solutions using organic solvents. This method preserves the characteristics of the polymer and simultaneously avoids the presence of contaminants from cell debris and culture medium. At the end of the process, the lyophilized polymer is ready to be used or characterized or can be subjected to further rounds of purification, depending on the final intended use. Regarding the isolation of the cyanobacterial exoproteome, the technique is based on the concentration of the cell-free medium after removal of the major contaminants by centrifugation and filtration. This strategy allows for reliable isolation of proteins that reach the extracellular milieu via membrane transporters or outer membrane vesicles. These proteins can be subsequently identified using standard mass spectrometry techniques. The protocols presented here can be applied not only to a wide range of cyanobacteria, but also to other bacterial strains. Furthermore, these procedures can be easily tailored according to the final use of the products, purity degree required, and bacterial strain.

Here, protocols for the isolation of cyanobacterial released carbohydrate polymers and isolation of their exoproteomes are described. Both procedures embody key steps to obtain polymers or proteins with high purity degrees that can be used for further analysis or applications. They can also be easily adapted according to specific user needs.

Blick nach außen: Isolierung von cyanobakteriellen freigesetzten Kohlenhydratpolymeren und Proteinen

Cyanobacteria can actively secrete a wide range of biomolecules into the extracellular environment, such as heteropolysaccharides and proteins. The ...

Biochemie

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell number. While researchers commonly reference their seeding density this does not necessarily indicate the actual number of cells that have adhered to the material in question. This is particularly the case for materials, or scaffolds, that do not cover the base of standard cell culture well plates. This study investigates the initial attachment of human mesenchymal stem cells seeded at a known number onto electrospun poly(&#949;-caprolactone) yarn after 4 hr in culture. Electrospun yarns were held within several different set-ups, including bioreactor vessels rotating at 9 rpm, cell culture inserts positioned in low binding well plates and polytetrafluoroethylene (PTFE) troughs placed within petri dishes. The latter two were subjected to either static conditions or positioned on a shaker plate (30 rpm). After 4 hr incubation at 37&#160;oC, 5% CO2, the location of seeded cells was determined by cell DNA assay. Scaffolds were removed from their containers and placed in lysis buffer. The media fraction was similarly removed and centrifuged &#8211; the supernatant discarded and pellet broken up with lysis buffer. Lysis buffer was added to each receptacle, or well, and scraped to free any cells that may be present. The cell DNA assay determined the percentage of cells present within the scaffold, media and well fractions. Cell attachment was low for all experimental set-ups, with greatest attachment (30%) for yarns held within cell culture inserts and subjected to shaking motion. This study raises awareness to the actual number of cells attaching to scaffolds irrespective of the stated cell seeding density.

This article describes a range of set-ups for seeding human mesenchymal stem cells onto materials, in this case electrospun yarns, that do not cover the base of standard culture well plates in order to maximize and quantify the number of cells that initially attach compared to the known seeding density.

Optimierung der Befestigung der humanen mesenchymalen Stammzellen auf Poly (ε-caprolacton) Elektrogesponnene Garne

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Biotechnik

A Novel Bioreactor for High Density Cultivation of Diverse Microbial Communities

A novel reactor design, coined a high density bioreactor (HDBR), is presented for the cultivation and study of high density microbial communities. Past studies have evaluated the performance of the reactor for the removal of COD1 and nitrogen species2-4 by heterotrophic and chemoautotrophic bacteria, respectively. The HDBR design eliminates the requirement for external flocculation/sedimentation processes while still yielding effluent containing low suspended solids. In this study, the HDBR is applied as a photobioreactor (PBR) in order to characterize the nitrogen removal characteristics of an algae-based photosynthetic microbial community. As previously reported for this HDBR design, a stable biomass zone was established with a clear delineation between the biologically active portion of the reactor and the recycling reactor fluid, which resulted in a low suspended solid effluent. The algal community in the HDBR was observed to remove 18.4% of total nitrogen species in the influent. Varying NH4+ and NO3- concentrations in the feed did not have an effect on NH4+ removal (n=44, p=0.993 and n=44, p=0.610 respectively) while NH4+ feed concentration was found to be negatively related with NO3- removal (n=44, p=0.000) and NO3- feed concentration was found to be positively correlated with NO3- removal (n=44, p=0.000). Consistent removal of NH4+, combined with the accumulation of oxidized nitrogen species at high NH4+ fluxes indicates the presence of ammonia- and nitrite-oxidizing bacteria within the microbial community.

A novel reactor design, coined a high density bioreactor (HDBR), is presented for the cultivation and study of high density microbial communities. Here, the HDBR is successfully applied in a photobioreactor (PBR) configuration for the study of nitrogen metabolism by a mixed high density algal community.

A Novel Bioreaktor für High Density Anbau von Diverse mikrobiellen Gemeinschaften

A novel reactor design, coined a high density bioreactor (HDBR), is presented for the cultivation and study of high density microbial communities. Past ...

<meta charset="utf8"></head><body>Modellierung methanotropher Nischen – Das Modell-Ökosystem für Gradientenspritzen

Agarose-Based Model Ecosystem for Cultivating Methanotrophs in a Methane-Oxygen Counter Gradient

Aerobic methane-oxidizing bacteria, known as methanotrophs, serve important roles in biogeochemical cycling. Methanotrophs occupy a specific environmental niche within methane-oxygen counter gradients found in soils and sediments, which influences their behavior on an individual and community level. However, conventional methods to study the physiology of these greenhouse gas-mitigating microorganisms often use homogeneous planktonic cultures, which do not accurately represent the spatial and chemical gradients found in the environment. This hinders scientists' understanding of how these bacteria behave in situ. Here, a simple, inexpensive model ecosystem called the gradient syringe is described, which uses semi-solid agarose to recreate the steep methane-oxygen counter gradients characteristic of methanotrophs' natural habitats. The gradient syringe allows for the cultivation of methanotrophic strains and the enrichment of mixed methane-oxidizing consortia from environmental samples, revealing phenotypes only visible in this spatially resolved context. This protocol also reports various biochemical assays that have been modified to be compatible with the semi-solid agarose matrix, which may be valuable to researchers culturing microorganisms within other agarose-based systems.

<meta charset="utf8"></head><body>Autor im Rampenlicht: Entwicklung einfacher und kostengünstiger Techniken zur Züchtung von Methan-oxidierenden Bakterien im Labor

A protocol is described for preparing a simple model ecosystem that recreates the methane-oxygen counter gradient found in the natural habitat of aerobic methane-oxidizing bacteria, enabling the study of their physiology in a spatially resolved context. Modifications to common biochemical assays for use with the agarose-based model ecosystem are also described.

Agarose-basiertes Modellökosystem für die Kultivierung von Methanotrophen in einem Methan-Sauerstoff-Gegengradienten

Aerobic methane-oxidizing bacteria, known as methanotrophs, serve important roles in biogeochemical cycling. Methanotrophs occupy a specific environmental ...

OLIgo Mass Profiling (OLIMP) of Extracellular Polysaccharides

The direct contact of cells to the environment is mediated in many organisms by an extracellular matrix. One common aspect of extracellular matrices is that they contain complex sugar moieties in form of glycoproteins, proteoglycans, and/or polysaccharides. Examples include the extracellular matrix of humans and animal cells consisting mainly of fibrillar proteins and proteoglycans or the polysaccharide based cell walls of plants and fungi, and the proteoglycan/glycolipid based cell walls of bacteria. All these glycostructures play vital roles in cell-to-cell and cell-to-environment communication and signalling.
An extraordinary complex example of an extracellular matrix is present in the walls of higher plant cells. Their wall is made almost entirely of sugars, up to 75% dry weight, and consists of the most abundant biopolymers present on this planet. Therefore, research is conducted how to utilize these materials best as a carbon-neutral renewable resource to replace petrochemicals derived from fossil fuel. The main challenge for fuel conversion remains the recalcitrance of walls to enzymatic or chemical degradation due to the unique glycostructures present in this unique biocomposite.
Here, we present a method for the rapid and sensitive analysis of plant cell wall glycostructures. This method OLIgo Mass Profiling (OLIMP) is based the enzymatic release of oligosaccharides from wall materials facilitating specific glycosylhydrolases and subsequent analysis of the solubilized oligosaccharide mixtures using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF/MS)1 (Figure 1). OLIMP requires walls of only 5000 cells for a complete analysis, can be performed on the tissue itself2, and is amenable to high-throughput analyses3. While the absolute amount of the solubilized oligosaccharides cannot be determined by OLIMP the relative abundance of the various oligosaccharide ions can be delineated from the mass spectra giving insights about the substitution-pattern of the native polysaccharide present in the wall.
OLIMP can be used to analyze a wide variety of wall polymers, limited only by the availability of specific enzymes4. For example, for the analysis of polymers present in the plant cell wall enzymes are available to analyse the hemicelluloses xyloglucan using a xyloglucanase5, 11, 12, 13, xylan using an endo-&beta;-(1-4)-xylanase 6,7, or for pectic polysaccharides using a combination of a polygalacturonase and a methylesterase 8. Furthermore, using the same principles of OLIMP glycosylhydrolase and even glycosyltransferase activities can be monitored and determined 9.

OLIgo Mass Profiling OLIMP of Extracellular Polysaccharides

A rapid way is described to gain insights into the structure of polysaccharides in an extracellular matrix. The method takes advantage of the specificity of glycosylhydrolases and the sensitivity of mass spectrometry allowing minute amounts of materials to be analyzed. This technique is adaptable to be used directly on tissue itself.

Oligo Messe Profiling (OLIMP) der extrazellulären Polysacchariden

The direct contact of cells to the environment is mediated in many organisms by an extracellular matrix. One common aspect of extracellular matrices is ...

Die Extraktion von Strukturextrazellulären polymeren Substanzen aus Aerobic Granular Sludge

Zusammenfassung

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Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

Entwicklung sulfidogenen Schlamm aus marinen Sedimenten und Trichlorethylen Reduction in einer Upflow Anaerobic Sludge Blanket Reactor

Au-Wechselwirkung von SLP1 Polymere und Monolayer aus

Blick nach außen: Isolierung von cyanobakteriellen freigesetzten Kohlenhydratpolymeren und Proteinen

Optimierung der Befestigung der humanen mesenchymalen Stammzellen auf Poly (ε-caprolacton) Elektrogesponnene Garne

A Novel Bioreaktor für High Density Anbau von Diverse mikrobiellen Gemeinschaften

Agarose-basiertes Modellökosystem für die Kultivierung von Methanotrophen in einem Methan-Sauerstoff-Gegengradienten

Agarose-basiertes Modellökosystem für die Kultivierung von Methanotrophen in einem Methan-Sauerstoff-Gegengradienten

Agarose-basiertes Modellökosystem für die Kultivierung von Methanotrophen in einem Methan-Sauerstoff-Gegengradienten

Oligo Messe Profiling (OLIMP) der extrazellulären Polysacchariden