动脉粥样硬化小鼠模型中主动脉弓和根部病变的分离和分析

研究调查了 LDLR 敲除小鼠主动脉弓和根部的动脉粥样硬化病变的发展，为分离、染色和分析提供了一种方案，以评估动脉粥样硬化严重程度斑块组成。除了本研究中使用的组织学检查外，评估动脉粥样硬化的实用技术还包括生化标志物、分子生物学测试和血管超声。解剖程序的精确性构成了在动脉粥样硬化小鼠模型中进行体内主动脉剥离的最大技术障碍。

首先，将安乐死的小鼠仰卧放在覆盖有一到两层吸水纸的泡沫板上。用别针固定四肢以稳定身体。将 75% 乙醇喷洒在小鼠的腹部，以清洁和润湿皮毛。

用镊子抓住小鼠的腹侧皮肤。然后用细剪刀从腹部底部到脖子顶部剪下皮肤。打开腹壁，用镊子抬起胸骨。

切开隔膜和肋骨，露出胸腔。切除食道和气管，以便清洁颈动脉。小心切除器官，包括肝脏、肺、脾脏、胃肠道和胰腺，同时保留肾脏和腹主动脉。

解剖肠系膜动脉时，应提起肠道并在远离主动脉的地方切开以避免损伤。现在，将鼠标置于体视显微镜下，以提供清晰的观察区域，并将冷光源与解剖区域对齐。使用装满 PBS 的 10 毫升注射器，用针头慢慢注射到左心室心尖，观察主动脉的扩张情况。

用纸巾轻轻擦去解剖区域的血液和液体，以充分暴露视野。接下来，用镊子抓住胸主动脉的膈段，用弹簧剪刀剪开主动脉和胸肌壁之间的结缔组织。用镊子轻轻拉动心脏并提起胸主动脉。

观察主动脉弓的分支，并解剖主动脉弓及其分支周围的外膜脂肪和结缔组织，并沿胸主动脉向上。沿胸主动脉向下解剖腹主动脉和髂总动脉。修剪心脏组织，沿平行于心房的平面切割心脏的下半部分，并将修剪后的心脏放入合适的存储介质中。

在解剖主动脉弓之前，在其下方放置一个小的深色垫圈以产生对比。拍摄主动脉弓区域的照片。将髂总动脉切开分叉处下方 1 到 2 毫米，并沿脊柱修剪主动脉的小分支以释放它。

分离肾脏附近的肾动脉后，从远端切断颈部的三个分支血管。最后，切开心脏附近的升主动脉。提前在 1.5 毫升离心管中制备 1 毫升 4% 多聚甲醛溶液。

将主动脉放入准备好的管中，并在室温下固定至少 24 小时。接下来，将主动脉转移到含有 PBS 的培养皿中，以防止其变干。在立体显微镜下，使用镊子和弹簧剪刀小心去除任何残留的外膜脂肪，以减少对斑块定量的干扰。

使用弹簧剪刀，沿主动脉的内纵轴小心地切开主动脉。依次，沿外侧切开主动脉弓的三个分支，直至主动脉弓的曲率水平，使其完全展开。在此阶段，进行油红 O 染色，或将主动脉储存在 4% 多聚甲醛中以备将来分析。

将切开的主动脉放入六孔板中。向每个孔中加入 1 毫升无菌双蒸水，并在摇床上洗涤 5 分钟。将六孔板放入通风橱中，风干 20 分钟，直到没有可见的水印。

向每个孔中加入 1 毫升新鲜制备的 Oil Red O 工作溶液。摇动板 20 分钟后，从孔中取出油红 O 溶液。向每个孔中加入 2 毫升无菌双蒸水，洗涤 5 分钟。

洗涤 3 次后，将主动脉保存在双蒸水中。将主动脉转移到载玻片上，并在载玻片下方放一个黑色橡胶垫以增强对比度。在立体显微镜下观察时将主动脉展开。

现在，将载玻片放在白纸上以进一步增强对比度。将尺子放在幻灯片旁边，然后使用相机获取照片。将处理过的主动脉储存在含有 1 毫升 PBS 的 1.5 毫升离心管中，以保持其湿润。

与用食物喂养的小鼠相比，用西式饮食喂养的 LDLR 敲除小鼠的体重显着增加。西式饮食组的血浆甘油三酯和总胆固醇水平显著高于对照组。主动脉油红 O 染色显示，与食物饮食相比，用西式饮食喂养的 LDLR 敲除小鼠的动脉中脂质严重积聚。

脂质沉积增加与更严重的动脉粥样硬化病变相关。与食物饮食喂养的小鼠相比，西方饮食喂养的小鼠的主动脉根部病变面积和坏死核心显着更大。主动脉根部病变面积和坏死面积的量化证实，西方饮食加剧了 LDLR 敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的形成。