阴道成形术中的腹腔镜卵母细胞提取和冷冻保存治疗Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser综合征

我们的方法允许通过将腹腔镜阴道成形术和卵母细胞提取相结合来治疗Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser综合征，从而最大限度地减少治疗Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser综合征的侵入性疾病，以进行未来的生育治疗。我们方法的主要优点是需要单次麻醉，并克服了年轻Rokitansky患者经阴道取卵的不可行性。该程序将由我们不孕症部门的高级妇科医生Diana Delprato以及我们辅助生殖实验室的两位高级临床胚胎学家Alessandra Alteri和Greta Cermisoni演示。

从手术当天开始在第14天开始控制卵巢刺激。通过连续经腹超声监测卵巢反应，并同时测量雌二醇和孕酮。使用开放技术建立气腹。

放置一个 10 毫米脐带穿刺器以插入腹腔镜，在中央、右和左下腹放置三个 5 毫米穿刺器。在腹腔镜视力下，使用连接到抽吸泵的 17 号单腔针，通常用于通过中央和左侧套管经阴道取出，分别穿刺右卵巢和左卵巢。用腹腔镜镊子抬起并握住卵巢，以促进卵泡暴露。

当吸出多个靠近另一个的卵泡时，将针尖保留在卵巢中，以减少卵巢皮层被固定的次数和固有的出血风险。通过在两个基本的子宫角之间横向提起和切开腹膜链来解剖腹膜，然后横向、前部和后部扩展切口。在会阴入路暴露阴道酒窝并进行H形切口，并通过尖锐和钝切膀胱直肠间隙来创建新阴道空间。

然后，将解剖的腹膜边缘拉到阴道前庭的边缘。位置中断缝合在聚二恶烷酮合成可吸收3-0用于腹膜前庭吻合术。从膀胱上方的动员腹膜开始在每个半骨盆中用聚二恶烷酮合成可吸收 2-0 单丝缝合钱包绳，对圆韧带、输卵管峡部、子宫-卵巢韧带和外侧腹膜叶进行结缔转固定。

然后，在两条缝合线中包括直肠系膜的外侧和直肠乙状结肠连接处正下方的直肠浆膜的前侧。最后，将石蜡涂层纱布放入腹膜涂层的新阴道中。将卵泡抽吸物收集在便携式培养箱中保温的10毫米圆底管中，并立即将它们运送到胚胎学实验室，运输时间约为10分钟。

收集所有卵丘卵母细胞复合物后，将它们放入含有受精培养基的四孔培养皿中，并用与患者身份相关的数据标记盖子和底部。将它们在含有6%二氧化碳和5%氧气的受控气氛中以37摄氏度的温度孵育。确保由实验室的第二名工作人员对程序进行双重检查。

在排卵触发后 38 小时内进行卵丘电晕细胞去除。将卵丘卵母细胞复合物置于含有酶的中央孔中，用玻璃巴斯德移液管分散卵丘细胞，轻轻上下移取含有卵丘卵母细胞复合物的溶液长达30秒。将卵母细胞移动到仅包含HEPES缓冲培养基的第二个中心孔培养皿中，确保置换最少量的酶。

使用内径减小的剥落移液器去除剩余的电晕细胞。评估卵母细胞成熟的阶段，分离中期II卵母细胞。将中期II卵母细胞转移到IVF培养物60毫米培养皿中，培养皿中含有9滴连续的单培养基，覆盖有6毫米的矿物油。

将它们在含有6%二氧化碳和5%氧气的受控气氛中以37摄氏度的温度孵育。用新鲜液氮填充冷却箱顶部并盖上盖子，直到使用以尽量减少分散和蒸发。使用内径为170微米的剥离移液器，以避免在操作过程中损坏卵母细胞。

使用前轻轻摇动每瓶平衡溶液、玻璃化溶液和洗涤溶液以混合内容物。用一滴50微升洗涤溶液准备60毫升培养皿的盖子。使用前滴剂以限制介质蒸发。

从培养箱中取出卵母细胞培养皿，并将具有最小体积培养基的中期II卵母细胞从培养皿中转移到50微升洗涤溶液中。在附近分配50微升洗涤溶液二，平衡溶液一和平衡溶液二，并将卵母细胞从滴洗溶液一转移到滴洗溶液二中。将平衡溶液一滴合并到洗涤溶液二中，等待两分钟，使两种溶液自发混合。

然后，将平衡溶液的两滴合并到先前合并的滴液中，再放置两分钟。最后，将一滴新的 100 微升平衡溶液三滴合并到先前合并的滴液中，再放置一分钟。将卵母细胞放入100微升四滴平衡溶液中10分钟。

分配两滴 50 微升的玻璃化溶液和一滴 100 微升的玻璃化溶液。将卵母细胞依次移动到三滴玻璃化溶液中60秒，使卵母细胞在每滴中保留约20秒。当在60秒的孵育结束前大约10秒时，将冷冻装置放在显微镜下。

将卵母细胞携带在移液管的尖端，并将它们放在具有最少量的玻璃化溶液的冷冻装置上。吸出多余的玻璃化溶液，使卵母细胞被一层薄薄的玻璃化溶液覆盖。将冷冻设备直接放入液氮中并快速移动。

将设备保存在液氮中，并用保护盖盖住。所有患者均成功联合腹腔镜取卵和阴道成形术。平均回收11.4 5.4个卵母细胞，冷冻保存9.6 4.3 M2卵母细胞。

总平均手术时间为114 17分钟。所有患者术中失血量均不显著，未观察到术中不良事件。术后第3天，患者开始每日使用扩张器，并于第6.0 1.0天出院。

建议谨慎抽吸卵巢内的卵泡，并适当注意卵巢的自动动员，以确保最佳的访问和检索。