具有腐蚀性烟气的台式光生物反应器中的微藻培养和生物量定量

该协议详细介绍了培养腐蚀性气体微藻所需的光生物反应器设备适应情况，并讨论了光生物反应器的安全操作和采样。光生物反应器为可靠且可重复的微藻实验提供必要的控制。该台秤系统可用于研究模拟燃烧排放培养的微藻的特性和生产率。

此方法可与其他经过精心调整的生物反应器一起使用，或用于培养其他光自动营养微生物。这种方法的视觉演示至关重要，因为它是一种复杂的协议，可防止人类接触用于微藻养殖的有毒模拟燃烧排放物。首先，对烟雾罩发生故障时室内可能累积的有毒气体浓度进行建模。

使用美国工业卫生协会的数学建模电子表格 IH Mod 每种气体。从建筑 HVAC 维护人员或 HVAC 技术人员那里，获取 Q、房间供应或排气率（以立方米/分钟为单位）。计算实验室的体积，V，以立方米为单位。

使用理想气体定律改编的方程计算每种类型的有毒气体的污染物排放速率，G，其中 P 是一个 ATM 中有毒气体施加的压力的分数，Q 气体是气体的流速（以升/分钟为单位，R 是通用气体常数，T 是开尔文的温度），MW 是气体分子重量（以克为单位）。在 IH Mod 电子表格中，对混合室模型中的每个气体使用 V、Q 和 G 的值，并可以选择停止生成和建模房间净化算法，以计算 24 小时模拟期内每个气体的累积室内气体浓度。将这些值与曝光限制进行比较。

设置有毒气体监测系统，为使用的每个有毒气体设置传感器。根据制造商的说明校准传感器。经常进行凹凸测试。

找到烟气罩外的气体监测器。在实验之前，确保所有人员都被告知对有毒气体警报做出适当反应。现在，在两个250毫升输入溶液瓶中，每瓶准备100毫升的正常氢氧化钠和一个普通盐酸。

将计量输入溶液存放在装有浸管的可清洁封盖瓶和带无菌内线空气过滤器的通风管中。使用可 <3>性管将浸管连接到光生物反应器的四个输入端口中的两个。在光生物反应器头板上插入并拧紧冷指和排气冷凝器。

插入接种端口并拧紧到位。在光生物反应器头板上方的接种口部分添加一段可 <3>性管。在高压灭菌前，用可高压灭菌主机夹紧管。

将带无菌过滤器的管子连接到任何未使用的光生物反应器端口。添加 1.5 升的培养介质。在121摄氏度下，在30至45分钟内自动保存反应堆和相关输入解决方案。

通过单独的近源泵将 1.6 毫米内径可高压管在输入解决方案与其端口之间传递。将叶轮电机连接到叶轮轴并拧紧接头。根据照明要求，在生物反应器外对称地排列 LED 灯面板。

将具有 20 PSI 出口压力的适当调节器连接到气瓶上。将六毫米内径耐压管连接到调节器出口软管杆上，用软管夹固定。使用软管棒将耐压管的另一端连接到气体调节塔气体入口，使用软管棒连接到用软管夹固定的安全装置的六毫米茎快速连接接头。

使用 6 毫米快速连接接头将 3.2 毫米内径管连接到气体调节塔气体出口，并连接出口管的另一端到光生物反应器头板处的散热环端口。在每个气体调节器上将出口压力设置为 20 PSI。在生物反应器接口上，设定实验气体流速。

使用 STIRR 函数设置叶轮旋转速率，该速率足够快，使培养基能够吸收气泡。高压灭菌后，将光生物反应器和气瓶组装在步入式烟气罩内。将光生物反应器放在二次容器内的桌子上，将气瓶放在独立式气瓶或气瓶架中。

启动气流后，使用装满 1:100 洗碗液的洗涤瓶将洗碗液水冲刷，用少量肥皂溶液覆盖气瓶和生物反应器之间的连接。检查冒泡指示的气体泄漏。启动微藻实验时，开始对气体进行分量，然后在接种前调整pH值。

通过将准备好的微藻接种器吸进无菌注射器，将注射器安装到连接到接种口的管子上，打开接种管夹并压住注射器，为光生物反应器接种。每天检查两次气体监测仪、气瓶压力和光生物反应器，以查到有毒气体水平升高或泄漏迹象。将烟罩窗框开口限制在允许达到生物反应器和气瓶调节器的宽度。

采样时，将气瓶调节器转动到关闭位置，以停止气体流向反应器。关闭烟罩窗框，让烟罩留出五分钟时间，以疏散腐蚀性气体。通过打开头板端口并使用无菌血清移液器或通过接种或取样口将培养装置绘制到注射器中，在烟气罩内取样。

在这项研究中，利用OD750测量和干生物质浓度，建立了在指数阶段收获的绿色微藻S现场藻的校准曲线。从校准曲线计算生物量浓度，然后用逻辑曲线建模，其中L为最大生物量浓度，k是指数相的相对陡度，x0是曲线中点的时间，x是时间。一项有希望的模拟烟气初步试验实现了最大微藻生物质生产率，每天为690毫克/升，高于12%二氧化碳和超零空气，每天510毫克。

系统的正确组装对于微藻栽培和人体安全过程最重要。系统需要不断使用气体传感器进行监控。输送管路必须紧固气体，并且必须适当使用烟气罩。

含有有毒气体的加压气缸是危险的。建立有毒气体监测系统后，始终确保气瓶安全且仅在烟气罩内使用。