生物样品中赤子酶活性的测定

这种方法允许一种更有效的方法来量化生物样品中的奇丁酶活性。奇丁酶活性已被证明在多种疾病中是诊断和治疗疗效的一个很好的标志。早期测量奇丁酶活性的方法往往耗时且难以执行，这两个问题都通过此处所示的测定解决了。

这项技术将帮助实现潜在的奇蒂纳斯作为诊断和治疗标记，使其更容易测量奇丁酶活性;例如，它可以用来监测高彻病的治疗，因为奇丁酶活性已被证明在有效治疗期间减少。首先为测定准备基板、标准和解决方案。根据手稿方向准备 1x McIlvain 缓冲液，并用它来稀释甲酸素基材至 500 微摩尔。

将标准 4-甲基苯甲酸酯溶解到止损缓冲液中浓度为 0.1 毫摩尔，以创建标准曲线库存溶液。对于每 10 个样品，将 2.17 毫升 1x McIlvain 缓冲液与 100 微升的奇汀基材混合，以创建工作溶液，然后将工作溶液的 95 微升移液器放入 96 井板的每个井中。将测试样品的五微升添加到每个井中，并将其混合到工作溶液中。

盖上盘子并摇动5秒钟，然后在37摄氏度下孵育板15分钟，使酶反应发生。同时，稀释4-甲基甲基苯甲酸酯的库存溶液，形成5微摩尔工作标准溶液，根据手稿制备一系列稀释，形成标准曲线。从五微摩尔浓度开始，混合每个稀释井。

孵育后，在每一个井中加入200微升停止缓冲液，以停止反应。将每个标准的 300 微升重复物添加到同一个板中，然后在 360 纳米的激发和 455 纳米的发射时读取板。该协议被成功地用于测量支气管和野生类型的血清流体和野生的血清液体和奇托特里奥西达酶过度表达转基因小鼠的奇丁酶活性。

该检测证实，小鼠中CHIT-1基因的超量表达会导致奇丁酶活性增加。标准曲线用于根据样品的荧光确定奇丁酶。首次尝试协议时，要记住的最重要的事情是尽可能快速高效地添加样本，同时仍要彻底混合。

首次开始时，由于潜伏期较短，每次运行样本数较少，以确保测量精度可能是有益的。