在肝炎症和纤维化环境中产生的肝细胞癌的致癌肝细胞诱导正交小鼠模型

仅仅使用一个模型来开发一个肝细胞癌质量模型可以帮助人们阐明他们的肿瘤诱导免疫容忍和特定治疗诱导，任何肿瘤免疫反应。肝纤维化技术发展起来的正畸肿瘤模仿了人类肝癌的临床特征。该方法可为肝细胞癌免疫学研究提供有用的工具。

此方法的可视化演示可以说明技术上更具挑战性的步骤，如静脉内注入，这些步骤对于成功执行此协议至关重要。接下来，手动约束一个雄性，六到八周大的C57黑色6鼠标后侧向上。使用备用 70%乙醇和贝塔丁磨砂清洁注射部位三次。

然后通过内丙酮注射将160微升的四氯化碳送到小鼠，然后将动物送回其家笼。在确认对手趾捏缺乏反应后，在一只5个月大的西米安病毒40T抗原转基因小鼠中，将小鼠放在超生位置，用胶带固定四肢。使中线腹腔切除术切口沿线阿尔巴的长度，大到足以提供足够的肝脏暴露，并取代肠道左侧。

在肝脏上方解剖以暴露劣质的维纳卡瓦。诱导动脉夹将容器进行起立。使用蝴蝶针静脉注射入口静脉，并手动固定导管。

仔细切换每个溶液的注射器，成功交付15毫升溶液一，15毫升0.75%胶原酶溶液2，15毫升溶液2，不用导管胶酶，以每分钟约8.9毫升溶液的流量。在灌注结束时，将肿瘤质量收获成含有 10 到 15 毫升 PBS 的 50 毫升锥形管中。正如刚刚证明的，从下一个MTD2小鼠切除肿瘤。

用剪刀把肝脏切成小块。将组织转移到新鲜 PBS 的新容器中，以从组织中去除其余血液，然后再将组织片段转移到含有 5 毫升完整 RPMI 介质的 50 毫升圆锥形管中。切碎洗净的肝脏样本，直到碎片可以很容易地通过五毫升移液器的尖端。

向管子添加足够的介质，以达到30毫升的最终体积。使用五毫升移液器将组织碎片三分液，然后通过 70 微米滤网将溶液过滤到新的 50 毫升管中。用完整的介质清洗过滤器几次。

使用额外的完整介质将最终体积调整为 50 毫升。在停止离心机并 decing 上一代之前，通过离心快速旋转悬架至最大 50 倍 g。然后将颗粒重新在 20 毫升 PBS 中重新暂停，以进行计数。

对于MTD2肝细胞的静脉注射，每只接受动物装一根毫升注射器，每只接受动物装有27针，每只小鼠有220微升的肝细胞。确认麻醉、四氯化碳处理动物对手趾捏缺乏反应。从脊柱肌肉的正下方开始，接下来，在左侧侧翼做一厘米的切口，与背部极端的第十三根肋骨平行，并使用钝点钳将脾脏外化。

在脾动脉和静脉之间用两个中等大小的钛夹住脾脏，将200微升细胞送到脾脏的劣极中。用一个中等大小的夹子夹住小柱的劣质分支，并在两个最初放置的夹子之间切割脾脏。取出直接注射肿瘤细胞的脾脏的劣质极点，使用3-0多糖蛋白910中断，以关闭内肌层。

然后使用灭菌的钢伤口夹关闭外皮层，皮下施用每公斤卡普罗芬5毫克。与T抗原转基因小鼠分离后，可以观察到肝细胞和肿瘤渗透细胞。细胞通常表现出接近100%的可行性后处理。

在静脉接种到野生型碳四氯化处理动物后，移植的肝细胞成功可靠地生长正向细胞癌肿瘤，表达肿瘤特异性西米安病毒40T抗原。从MTD2质量中制备我们可行和纯净的肝细胞，并准确管理宫内注射剂，对于手术的成功至关重要。虽然我们的团队已经通过血管内注射和内腹膜注射对接受小鼠进行了肝细胞接种测试，但这些其他方法无法诱导正交细胞癌。

该模型提供了一个独特的平台，使研究免疫监测和耐受性在其早期和后期的肿瘤进展阶段。使用四氯化碳时请注意，因为四氯化碳有毒。