西瓜与瓶装葫芦之间的同源和异种移植在冷反应微 rna 研究中的应用

这种方法可以帮助回答miRNA对植物嫁接中压力能力的反应中的关键问题，例如在西瓜瓶葫芦嫁接中，miRNA在冷应力下是如何调节的。该技术的主要优点是，它是高效和可重复的方法，使同质和异质。它不需要特定的设备，它很容易执行，通常导致非常高的嫁接存活率。

通过这种方法，可以深入了解西瓜瓶葫芦嫁接系统中miRNA对冷应力的反应。它也可以应用于其他现代生物，以揭示本地和长距离miRNA运输的机制。这种方法的视觉演示至关重要，因为嫁接步骤很难学习。

这一步需要高级技能，是嫁接植物生存的关键。首先，将瓶葫芦种子浸泡在500毫升的烧杯中，水为58摄氏度。偶尔搅拌种子，直到水温降至40摄氏度。

当水冷却时，将三公斤泥炭土放入尼龙袋中，然后进行自动处理。一旦水达到室温，用蒸馏水冲洗种子两到三次，然后排干多余的水。让种子在28摄氏度的纱布袋中发芽，在黑暗的生长室。

发芽后，将种子播种到装满灭菌泥炭土壤的塑料锅中。当瓶葫芦幼苗发展出两个扁平的瓜子，用西瓜种子重复这个过程。在生长室中种植瓶葫芦和西瓜苗。

下午每天给幼苗加一次水。接下来，将西瓜幼苗的低小三厘米切成两到三厘米。切在一边的瓶子葫芦幼苗的顶部， 就在上面的鳕子。

然后用牙签在修剪过的瓶子葫芦幼苗的顶部打个洞。将修剪过的西瓜苗插入孔中，使异质。在此之后，使用前面描述的方法准备同质。

首先，将嫁接的幼苗包裹在透明聚乙烯袋中，以保持较高的湿度。然后在生长室中保持包裹的幼苗七天。第七天后，取出袋子，让植物在相同的条件下生长7至10天。

将幼苗分成两组，一组用于冷处理，另一组用于控制。将控制幼苗返回到相同的环境条件。将经过冷处理的幼苗放入设定为摄氏六度的生长室中，其暗照条件与对照组相同。

48小时后，从嫁接中留下丝骨和根茎的样品。立即将样品冷冻在液氮中，并将其储存在零下70摄氏度。将冷冻样品转移到液氮中的两毫升微离心管中。

在每个样品管中加入一个不锈钢珠，将组织均匀化为细粉。对于每个嫁接组合，从 10 株幼苗中提取等量的地面样品，并混合在 10 毫升离心管中。加入适当量的盐酸钠试剂。

接下来，在37摄氏度下每毫升加入无RNADNase1至150个单位，一小时。然后确定微胶囊电泳系统的总RNA数量。在此之后，解冻库规范化试剂和适配器。

然后用五个质和三个质适配器将小 RNase 开，并进行和纯化。按照制造商的准则，反向转录五个原和三个原色连接小 RNase。接下来，按照制造商的协议执行 PCR 扩增。

然后使用微血管电泳系统确保RNA完整性数大于7。在微胶囊电泳系统上加载RNA库的一微升，以确保RNA完整性数大于7。最后，对高通量测序仪器上的小型RNA库进行测序。

利用本协议，获得98%的嫁接成活率和室温和冷应力条件的表型。24种核苷酸的sRNA在所有嫁接组合中是最大的sRNA类，无论温度处理如何。经过48小时的冷处理，30个和268个微RNA分别上下调节。

相反，在异质的叶子中，在根茎的叶子中，分别有31个和12个微RNA被向上和向下调节。在西瓜-西瓜同种，64和83微RNA分别向上和向下调节。这表明异质引起微RNA表达的深刻重新编程。

在尝试此过程时，重要的是要记住女儿茎的相对大小和年龄，而 sion 对于成功移植至关重要。按照这个程序，可以执行其他方法，如lncRNA测序，蛋白质组分析，以研究lncRNA和蛋白质的调控和编码系统在嫁接系统中。该技术开发后，为植物非生物耐受性领域的研究铺平了道路，探索了库库比赛及以后植物嫁接优势的机制。

不要忘记，使用沙尼丁盐酸可能是极其危险的，在执行此程序时应始终采取适当的预防措施。