在色谱分析中,溶质通过色谱柱移动并趋于扩散,形成高斯形谱带。溶质在色谱柱中停留的时间越长,谱带越宽。谱带的增宽会导致色谱柱内出现重叠,从而影响分离效果。
分离效果可以通过确定色谱图中两个相邻峰之间的分离程度来评估,这些峰代表了样品的各个成分。
在色谱分析中,分辨率表示为两个相邻峰之间的保留时间或体积差与其平均峰宽之比。分辨率越高,峰间分离效果越好。
分辨率值是色谱柱分离两种分析物能力的定量指标。它表示两个峰相对于其宽度的距离。分辨率为 1.0 时,两个等宽峰的重叠度为 2.3%,这是准确定量所需的最小分离度。 而分辨率为1.5时,等宽峰的重叠度仅为0.1%,这被认为足以实现等高峰的基线分辨率。
在较低的分辨率下,两个相邻峰之间的洗脱时间和体积重叠较高,这意味着两种溶质存在显著的共洗脱现象。随着分辨率的提高,重叠面积会逐渐减小。
由于高斯曲线具有可预测的形状,因此如果测量基线宽度具有挑战性,则可以将方程调整为最大峰高一半处的宽度。此外,可以使用分离因子(也称为选择性)计算分辨率。这是两种溶质相对保留的热力学度量,表示为其保留因子的比率。
主分辨率方程或 Purnell 方程将分辨率与效率联系起来。可以通过延长保留时间或减少溶质的基线宽度来提高分辨率。可以通过增强溶质与色谱柱的相互作用或提高色谱柱对其中一种溶质的选择性来增加保留时间。通过增加理论塔板数来增加分离级数,也可以通过增加色谱柱长度来提高分离度。但是,这也会增加分离所需的时间。
在填料柱中,带宽随迁移距离的平方根递增。同时,峰中心之间的距离随行进距离线性增加。这意味着,随着谱带或峰的移动速度快于增宽速度,分离效果会得到改善。
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