تستخدم مجموعتنا دليل البرامج المفصلية لدراسة كيفية تأثير الفيروسات المفصلية والعوامل الأخرى على سلوكيات الفحص والابتلاع التي تحدث أثناء تغذية الدم ، حيث أن العديد من مسببات الأمراض ستتلاعب بسلوك النواقل لتعزيز انتقال العدوى. في الأساس ، نحن ندرس ما يحدث أثناء لدغة البعوض وكيف تؤثر هذه السلوكيات على انتقال مسببات الأمراض وأمراض الأمراض. تاريخيا ، كان EPG يستخدم في الغالب لدراسة الحشرات التي تتغذى على النباتات.
يسمح لنا التطوير الأخير لإجراءات AC-DC EPG للمفصليات التي تغذي الدم بدراسة سلوكيات الفحص والابتلاع التي تحدث أثناء تغذية الدم بتفاصيل غير مسبوقة دون الحاجة إلى إجراءات جراحية ، مما قد يسمح بتطوير استراتيجيات إدارة جديدة. يتمثل التحدي الأكبر لاستخدام EPG على المفصليات التي تغذي الدم في ربط الأشكال الموجية بالأنشطة البيولوجية مثل إفراز اللعاب وانتقال مسببات الأمراض. لدينا فرضيات قوية تستند إلى الأصول الكهربائية للأشكال الموجية والأدبيات ، لكننا ما زلنا بحاجة إلى أدلة تجريبية.
للبدء ، مرر طرف ماصة المراعي الزجاجية عبر اللهب ، مع تدوير الماصة قليلا. افحص القطر وكرر العملية لإحضار الماصة إلى الحجم المطلوب. لصنع شفاط الحشرات ، قم بتغطية الطرف الكبير لماصة المراعي المعدلة بناموسية وإدخالها في أنبوب السيليكون المتصل بشفاط المختبر الذي يثبت الوصلة بشريط كهربائي.
بالنسبة لأقطاب التسجيل ، قم بلف كتلة رغوية بغلاف بلاستيكي جديد لحمل بذرة الحشرات المحضرة والبعوض السلكي. اكشط السنتيمتر العلوي من السلك النحاسي بشفرة حلاقة حتى يصبح لامعا من جميع الجوانب. ثم قم بقطع الأسلاك الذهبية بقطر 0.025 ملم إلى قطع بطول أربعة إلى خمسة سنتيمترات.
أمسك السلك في ملقط ذاتي الإغلاق مقنع بشريط لاصق لتجنب انبعاج السلك ، ولف السلك الذهبي برفق ثلاث مرات حول السلك النحاسي لكعب الحشرة بدءا من الطرف النظيف للسلك النحاسي. استخدم مسبار تشريح لتطبيق الغراء الفضي لتثبيت السلك الذهبي في مكانه. بعد التأكد من عدم وجود نهاية فضفاضة ، ضع كعب الحشرة في الرغوة حتى يجف الغراء.
ثم قم بضرب السلك الذهبي المتصل بكعب الحشرات برفق لتشكيله في قوس طويل ولطيف ، وقم بقص السلك إلى حوالي 2.5 إلى 3 سم في الطول. العمل تحت مجهر التشريح ، أمسك كعب الحشرة من المسمار النحاسي باليد غير المهيمنة بينما يلامس السلك الذهبي مرحلة مجهر التشريح وأمسك نهاية السلك الذهبي بملقط دقيق باستخدام اليد المهيمنة ، استخدم ملقط النقطة الدقيقة لعبور طرف السلك الذهبي فوق السلك النحاسي لكعب الحشرة بالقرب من المنطقة الملصقة. ثم اسحب كعب الحشرات برفق حتى يشكل السلك الذهبي حلقة ذهبية صغيرة حول ملقط النقطة الدقيقة.
حرر السلك الذهبي وقم بإزالة الملقط بعناية. أثناء الإمساك بكعب الحشرة في اليد غير المهيمنة ، أمسك الحلقة الذهبية بملقط دقيق. اسحب كعب الحشرة مع تدوير الملقط برفق بعيدا عن كعب الروتين حتى تنحني الحلقة بزاوية 90 درجة على عنق السلك.
تأكد من إغلاق الحلقة الذهبية بالكامل قبل إعادة كعب الحشرة إلى كتلة الرغوة. للبدء ، قم بإعداد شفاط الحشرات وأقطاب التسجيل لأسلاك البعوض. ضع البعوض المخدر على ظهوره على وسادة التخدير مع مواجهة بطونها للباحث.
بعد وضع شريط مختبر ، ضع قطرة 0.5 سم من الغراء الفضي المخلوط حديثا على الشريط. ثم استنشق بطن البعوضة المخدرة في الشفاطة. استخدام الشفط لفترة كافية فقط لتثبيت البطن في مكانه وتثبيت البعوض تحت نطاق التشريح فوق الغراء الفضي باستخدام الشفاطة.
بعد غمس دبوس minuchin في الغراء الفضي ، ضع طبقة رقيقة على مقدمة البعوض. قم بغمس الحلقة الذهبية بسرعة عند طرف قطب التسجيل في الغراء الفضي. ضعه على بقعة الغراء الفضي على مقدمة البعوض وهز الحلقة ذهابا وإيابا للتأكد من أنها متدفقة.
بعد ذلك ، استبدل كعب الحشرة في الرغوة بزاوية تسمح للبعوضة السلكية بالوقوف بشكل مريح عند الاستيقاظ. بمجرد توصيل العدد المطلوب من البعوض ، ضع كتلة الرغوة في صندوق تخزين واحتفظ بها. للبدء ، قم بتوصيل أقطاب التسجيل بالبعوض في يوم تجربة تخطيط كهربية البترول أو EPG.
بمجرد أن يكون المضيف في موضعه ، أدر مضخم الرأس إلى الجانب. بعد إزالة البعوضة السلكية ، أدخل الدبوس النحاسي لكعب الحشرة في المنفذ الموجود على مضخم الرأس. ابدأ التسجيل باستخدام برنامج إدارة الأجهزة.
ضع مضخم الرأس فوق اليد حتى تتمكن البعوضة من الوقوف والتحقيق بشكل مريح. قم بتشغيل مضخم الرأس أثناء التأريض. اضبط موضع اليد المضيفة حسب الحاجة للمساعدة في تحقيق النجاح.
استخدم برنامج إدارة الأجهزة لعمل ملاحظات ذات طابع زمني فيما يتعلق باستجابات المضيف وسلوكيات البعوض وتغييرات الاكتساب والأحداث الأخرى ذات الصلة أثناء التسجيل. اضبط موضع الإشارات على الشاشة وكسب البرنامج باستخدام برنامج إدارة الأجهزة لإبقاء كلتا الإشارتين مرئيتين بوضوح. لضبط كسب الأجهزة ، اقلب نطاق واحد للقناة ومفاتيح المضاعف.
إذا لم يكن هذا الضبط كافيا ، فقم بتدوير قرص الكسب للقناة الأولى إلى اليمين أو اليسار لرفع الكسب أو خفضه على التوالي لتجنب الوصول إلى الذروة أو القمم غير الواضحة. لضبط الإزاحة ، اقلب مفتاح الإزاحة الواحد للقناة في مربع التحكم إلى neg. ثم أدر قرص الإزاحة الواحد للقناة حتى تحدث القمم في الإشارات السابقة واللاحقة في نفس الاتجاه على شاشة الكمبيوتر.
إذا كانت البعوضة في منتصف المسبار ، اتركها تنتهي. إذا لم يتم فحصه في غضون 10 دقائق ، فقم بإيقاف تشغيل مضخم الرأس. اطلب من المضيف إزالة يده بعناية ، ثم إزالة البعوض باستخدام كعب الحشرات المرفق.
أخيرا ، استبدل البعوض في صندوق التخزين. أنتجت تسجيلات AC-DC EPG لبعوض Culex tarsalis الذي يتغذى على أيدي الإنسان أشكالا موجية قابلة للتفسير مناسبة للتصنيف إلى عائلات وأنواع وأنواع فرعية.
