يوفر هذا البروتوكول طريقة لتقييم تلف الأوعية الدموية نتيجة لحفر نافذة الجمجمة. يوفر الروبوت الجراحي اتساقا محسنا عبر الإجراءات مع تقليل مقدار التدريب لتعلم التقنية. خلال هذا الإجراء ، استخدمنا حقن الجمجمة التي يمكن أن تكون صعبة للغاية.
نوصي بتدريب مكثف لأولئك الجدد في هذه التقنية. للبدء ، قم بإعداد النظام كما هو موضح في المخطوطة وقم بإجراء معايرة الإطار باتباع دليل الروبوت الجراحي. انتقل إلى البرنامج الجراحي وأنشئ مشروعا جديدا عن طريق تحديد البدء بمشروع نظيف.
ثم قم بتعيين الموضوع كماوس في الأعلى لتعيين أطلس إحداثيات الحفر المراد استخدامه. بعد ذلك ، حدد بدء مشروع جديد ، وانقر فوق التخطيط في الزاوية اليسرى السفلية للانتقال إلى شاشة تخطيط إحداثيات الحفر. قم بإنشاء مخطط الحفر لتقنية نافذة الجمجمة التي سيتم تنفيذها عن طريق النقر في أي مكان على الأطلس المجسم.
استخدم bregma كمرجع وأدخل إحداثيات القشرة الحركية كما هو موضح في المخطوطة. اضغط على Enter على لوحة المفاتيح لتحديث الإحداثيات المحددة. انقر فوق هدف المتجر لحفظ هذه الإحداثيات وإدخال اسم مناسب.
ثم انقر فوق زر النقل في أسفل اليسار للانتقال مرة أخرى إلى شاشة الحفر الرئيسية. انقر فوق الأدوات ، ثم العرض ، واحفظ كخيار لإعادة استخدام مشروع القالب هذا للمشاريع اللاحقة ، حيث سيحتفظ تلقائيا بإحداثيات الحفر. أولا ، يتم إعطاء الحقن تحت الجلد للمضادات الحيوية ، سيفازولين ، مسكن ، كاربروفين ، وبوبرينورفين للفأر المخدر.
بعد ذلك ، ضع الماوس على وسادة التدفئة وحافظ على التخدير بنسبة 0.5٪ إلى 2٪ إيزوفلوران عن طريق الاستنشاق من خلال مخروط الأنف. قم بتركيب الحيوان على إطار الروبوت الجراحي التجسيمي باستخدام قضبان الأذن المرفقة وقم بتقييم العناصر الحيوية وعمق التخدير بشكل روتيني عبر قرصة إصبع القدم. ثم فرك المنطقة الجراحية مع غلوكونات الكلورهيكسيدين و 70 ٪ الأيزوبروبانول للتعقيم.
ووضع غلاف بلاستيكي معقم على الفأر وإطار التجسيم للحفاظ على العقم أثناء الجراحة. باستخدام شفرة مشرط ، قم بإجراء شق بوصة واحدة على خط الوسط من الجمجمة ، بدءا من الجزء الخلفي من العينين ، وجفف ونظف الجمجمة باستخدام 3٪ بيروكسيد الهيدروجين مع أدوات تطبيق ذات رؤوس قطنية. لتحضير الذيل لسهولة الحقن ، امسح بالكحول.
باستخدام الإبهام والسبابة ، ثني الذيل لفضح الوريد الذيل أعلى منحنى الذيل. أدخل المحقنة بالتوازي مع الوريد ، وقم بحقن حجم إيفانز الأزرق ببطء. بمجرد الحقن ، انتظر لمدة خمس دقائق للسماح لإيفانز الأزرق بالدوران.
يتم التحقق من الحقن الناجح على الفور حيث تتحول أطراف الفأر والنافذة الجراحية إلى اللون الأزرق. بمجرد إعداد الجمجمة للحفر ، انتقل مرة أخرى إلى البرنامج الجراحي وانقر على الأدوات. ثم حدد المشروع ، متبوعا بمشروع جديد ، وحدد مشروع قالب من القائمة المنسدلة لاختيار مشروع قالب.
حدد نفس عناصر البروتوكول. انقر فوق التخطيط ، ثم حدد معلمات الحفر للانتقال إلى هذا المشروع الجديد وانقر فوق بدء مشروع جديد. بعد ذلك ، قم بتصحيح المثقاب والإطار لحساب إمالة وقياس جمجمة الماوس للحيوان الحالي بالنقر فوق الأدوات ، وحدد تصحيح للإمالة والقياس لفتح شاشة التصحيحات.
في الجزء العلوي من الشاشة ، تأكد من أن المثقاب نشط من خلال النقر على زر الحفر الأحمر الفاتح بعد إجراء التصحيح ، اخرج من نافذة التصحيح بالنقر فوق إغلاق في منتصف الشاشة السفلي وانتقل إلى شاشة الحفر بالنقر فوق أدوات ثم تحديد الحفر لبدء إجراء الحفر. قم بتأكيد موقع الحفر عن طريق تحديد نافذة شكل حج القحف في الجزء العلوي من الشاشة ، متبوعا بعرض تفاصيل هدف الحفر في القائمة المنسدلة أدناه. لتنفيذ الحفر اليدوي بالنبض ، قم بإيقاف تشغيل ميزة الإيقاف التلقائي عن طريق إلغاء تحديد مربع الاختيار بجوار خيار التوقف التلقائي في قائمة الحفر ، والتي تسمح بالتحكم في وقت إيقاف تشغيل المثقاب للنبض.
في قائمة الحفر ، حدد 100 ميكرومتر كتقدم عمق الحفر. افتح قائمة موقع الحفر وانتقل إلى موقع الحفر الأول. استخدم زر التقدم أو أدوات التحكم اليدوية لخفض المثقاب حتى يلامس الجمجمة واضغط على سطح المجموعة بمجرد وصول لقمة الثقب إلى الجمجمة.
بمجرد أن تصبح جاهزا ، انقر فوق تقدم لبدء الحفر. وبعد أن يتقدم المثقاب 100 ميكرومتر ، اضغط على Escape مرتين لإيقاف التمرين. بعد ثانيتين ، كرر هذه الدورة لعمق الجمجمة.
لكل بذرة ونقطة حافة أثناء الحفر ، تأكد من ضبط الجافية باستخدام الزر الموجود في قائمة الحفر بمجرد الوصول إلى الجافية. قم بقياس التغيرات في درجة حرارة الجمجمة والدماغ باستخدام مزدوج حراري مع مخططات الحفر الثلاثة المختلفة المتصلة بنظام الحصول على البيانات ، والذي يسمح بقراءة القياس في MATLAB. قم بتركيب ماوس جثة على الإطار التجسيمي وإعداد المثقاب الآلي.
قم بحفر حفرة صغيرة يدويا على بعد حوالي مليمترين من المكان الذي سيتم فيه عمل نافذة الجمجمة في جانب الجمجمة ، مما يسمح بانزلاق المزدوجة الحرارية إلى موضعها تحت مكان حدوث حفر نافذة الجمجمة. ابدأ عملية الحفر لكل من المخططات الثلاثة كما هو موضح سابقا ، مما يؤدي إلى حدوث طفرات بسبب تغير درجة الحرارة ، مما يشير إلى حدوث حرارة بالقرب من الدماغ أثناء مرور المثقاب عبر الجمجمة. تم تقييم احتمالية حدوث ضرر حراري عن طريق قياس التغير في درجة الحرارة من خط الأساس بسبب الحفر باستخدام الطرق الأفقية ونقطة تلو الأخرى والنبضية نقطة بنقطة.
تظهر كل من مخططات الحفر الأفقية ونقطة بنقطة اختلافات غير ذات دلالة إحصائية في التغيرات الحرارية. ومع ذلك ، فإن التغيير إلى طريقة نقطة نبضية بنقطة أدى إلى تسخين أقل بكثير للدماغ من الحفر الأفقي ونقطة تلو الأخرى. استغرق حفر الحافة الأفقية 300 ثانية ، بينما استغرق حفر الحافة نقطة تلو الأخرى 200 ثانية.
استغرقت طريقة النبض الأطول مع حفر البذور والحواف ، حيث استغرق كل منهما حوالي 500 ثانية. لمراقبة العلاقة بين مخطط الحفر وتلف الأوعية الدموية ، تم إجراء تصوير الفلورسنت الأزرق إيفانز. كان ينظر إلى الحفر عبر القطع الأفقي ونقطة تلو الأخرى على أنه يضر بالأوعية الدموية في الدماغ.
بالمقارنة مع المجموعات الضابطة ، كان لطريقة النبض نقطة بنقطة ضرر موضعي أقل عند نقطة البذور والحافة ، ولكن لا يزال لها وجود أزرق مرئي لإيفانز داخل نافذة الجمجمة. عند الحفر يدويا ، من الضروري التحقق من حج القحف بعد تقدم المثقاب لضمان عدم اختراق الجافية. بالإضافة إلى نوافذ الجمجمة ، يمكن استخدام روبوت جراحي لحج القحف القياسي لتحسين النتائج الجراحية.
