تستخدم هذه الطريقة ثمار القهوة الخضراء لاختبار سمية المبيدات الحشرية ضد حفار التوت القهوة. يتم تنفيذ تطبيق المبيدات الحشرية قبل أو بعد الإصابة بالحشرات لدراسة طارد وفيات الحشرات وغيرها من الآثار. استخدام القهوة الخضراء الحقيقية مع العناصر الغذائية الكافية لنمو الحشرات هو أنسب طريقة لتقييم سمية المركبات للحشرات في ظل ظروف طبيعية محاكاة.
يسمح البروتوكول بتقييم الآثار السامة للمبيدات الحشرية الكيميائية وتجاه مسببات الأمراض مثل الفطريات أو المواد الطاردة. هذه العدوى من الفواكه والحشرات هي الخطوة الحاسمة لأن التطهير غير السليم يمكن أن يسبب موت الحشرات بسبب التلوث. جودة الحشرات مهمة أيضا لأن الحشرات الضعيفة ستبالغ في تقدير نتائج المنتج السام.
يسمح العرض المرئي بتحديد المرحلة المناسبة من الثمار عملية الإصابة بالحشرات ، وهي اللحظة المناسبة لنشر المادة السامة. وطريقة تشريح الثمار. ستوضح كلاوديا مارتينيز الإجراء ، وهي مساعدة أبحاث من المختبر.
للبدء ، اجمع ثمار البن الخضراء في الصباح الباكر مع عمر النمو التقريبي من 120 إلى 150 يوما بعد الإزهار من مزارع البن. اختر حوالي 300 فاكهة صحية وموحدة الحجم واسحب السيقان. اغمس ثمار القهوة الخضراء في محلول صابون بنسبة 2٪ ونظفها جيدا عن طريق فركها.
ثم شطف الثمار ثلاث مرات بالماء النظيف. اغمرها في محلول هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 0.5٪ وضعها على الخلاط لمدة 10 دقائق بمعدل 110 دورات في الدقيقة. شطف الثمار بالماء النظيف ثلاث مرات وتجفيفها بمناشف ورقية معقمة.
قم بتشعيع الثمار عن طريق وضعها على بعد 55 سم من مصدر الأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة ، داخل محطة تدفق صفيحية أفقية مدعومة بالأشعة فوق البنفسجية. حرك الثمار بعد كل خمس دقائق لضمان التشعيع المناسب للفاكهة بأكملها. لإعداد المقايسات الحيوية ، اغمر حفارات التوت القهوة التي ظهرت في نفس اليوم في محلول هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 0.5٪ وحركها ببطء باستخدام فرشاة لمدة 10 دقائق.
قم بتصفية هذه الحشرات من خلال قطعة قماش من الشاش واغسلها ثلاث مرات بالماء المقطر المعقم. إزالة الماء الزائد مع المناشف الورقية المعقمة. تحضير مجموعة من 30 فاكهة قهوة خضراء لكل وحدة تجريبية ووضعها في صندوق بلاستيكي.
تطبيق تركيزات مختلفة من منتج اختبار للتقييم باستخدام وحدة بخاخ محمولة ، هنا ، تم استخدام مستحلبات قلويد 5٪ و 6٪. كعنصر تحكم ، رش مجموعة من ثمار القهوة الخضراء بالماء. استخدم ثلاث وحدات تجريبية على الأقل لكل علاج ، ورش واحدة تلو الأخرى.
في غطاء محرك السيارة المعقم ، حرر اثنين من البالغين حفاري التوت القهوة لكل فاكهة قهوة خضراء ، وقم بتغطية الصناديق بعد 30 دقيقة. اترك الصناديق البلاستيكية مع ثمار القهوة الخضراء الموبوءة في الظلام داخل غرفة أو حاضنة ، مع ظروف خاضعة للرقابة. بعد 1 و 7 و 15 و 21 يوما ، احسب عدد ثمار الحفار والحشرات الحية والميتة خارج الثمار في كل صندوق.
في 20 يوما بعد الإصابة ، قم بتشريح كل فاكهة قهوة خضراء تحت مجهر ستيريو مع تكبير 10x وحساب عدد البذور الصحية أو البذور التي تضررت من الحشرات في كل فاكهة. عد المراحل البيولوجية المختلفة لحفار التوت القهوة. مراقبة عدد الحشرات الميتة في كل بذرة لتحديد معدل وفيات الحشرات لكل وحدة تجريبية.
في غطاء محرك السيارة المعقم ، أطلق البالغين حفار التوت على ثمار القهوة الخضراء التي تم تطهيرها سابقا بنسبة اثنين إلى واحد واسمح للإصابة بالاستمرار لمدة ثلاث ساعات عند 21 درجة مئوية. يجب أن تصاب معظم ثمار القهوة الخضراء بعد ثلاث ساعات مع استمرار تعرض بطن حفار التوت للقهوة. اختر 46 فاكهة موبوءة وضعها في رف بلاستيكي بسعة 96 بئرا بحيث يمكن رش العلاج مباشرة على حفار توت القهوة الذي يثقب الفاكهة.
رش ثلاثة رفوف ثلاث مرات على الأقل للعلاج ، واحدة تلو الأخرى وقم بتغطية الرفوف بعد 30 دقيقة. بعد 20 يوما ، قم بتشريح ثمار القهوة الخضراء تحت مجهر ستيريو عند تكبير 10 × وحساب عدد البذور الصحية أو البذور التي تضررت من الحشرات في كل فاكهة. احسب المراحل البيولوجية المختلفة لحفار التوت البن وعدد الحشرات الميتة في كل بذرة لتحديد معدل وفيات الحشرات لكل وحدة تجريبية.
اتبع الخطوات الأولية لتقييم منتج له تأثير وقائي على الثمار وإطلاق ثمار القهوة الخضراء للبالغين في الصناديق البلاستيكية. ثم احسب عدد حفارات التوت القهوة التي تطير بعيدا عن الصناديق والعدد الذي يصيب ثمار القهوة الخضراء. بعد الحضانة ، في ظل ظروف خاضعة للرقابة ، تليها تشريح في 20 يوما بعد الإصابة وحساب البذور والحشرات الميتة ، اتبع الخطوات الموضحة لتقييم المنتج ، بعد الإصابة بحفار التوت القهوة.
احسب عدد ملل التوت القهوة التي انتقلت من ثمار القهوة الخضراء ، أو طارت بعيدا عن الثمار. بعد رش كل علاج ، اتبع الخطوات من الحضانة في ظل ظروف خاضعة للرقابة لتحديد معدل وفيات الحشرات لكل وحدة تجريبية. 5٪ و 6٪ من المبيدات الحشرية المطبقة على حفار التوت القهوة ، تسببت في ارتفاع معدل وفيات الحشرات في اليوم 20 ، وأظهرت اختلافات كبيرة مقارنة بالسيطرة.
وقد لوحظ أن تطبيق المبيد الحشري الثاني أدى إلى 94٪ من البذور الصحية ، والمبيد الحشري الأول أدى إلى 89٪ من البذور الصحية. 37٪ من البذور لم تكن موبوءة في المجموعة الضابطة. في حالة ما بعد الإصابة ، اخترقت المنتجات بشرة الحشرات مما تسبب في وفيات الحشرات.
حدثت أعلى حالة وفاة مع المبيدات الحشرية اثنين. وقد انعكست آثار المبيدات الحشرية في النسبة المئوية للبذور الصحية غير المصابة، في اليوم 20 من التقييم. تم العثور على عدد أقل من الحشرات داخل بذور القهوة مقارنة بعدد الحشرات الموجود في المجموعة الضابطة ، التي تم رشها بالماء.
أدى العمل المشترك بين مسببات الأمراض الحشرية والطارد إلى الحد الأدنى من تلف البذور والحد الأقصى لوفيات الحشرات. هذه العدوى من الفواكه وتطهير الحشرات تضمن نجاح البروتوكول. يمكن أيضا استخدام هذه المنهجية لتقييم تحمل أو مقاومة ثمار القهوة لحفار التوت بالقهوة.
يمكن أيضا ملاحظة تأثير سلبي ضد سكان الحشرات في حالة بذور القهوة المقاومة للحشرات. يمكن استخدام هذه المنهجية ليس فقط في علم الحشرات لتقييم المبيدات الحشرية ذات طرق العمل المختلفة ولكن أيضا في تربية النباتات لتقييم الأصناف المتسامحة وأمراض النبات لدراسة التفاعل بين الفاكهة ومسببات الأمراض.
