وذكرت الورقة تحديد الجاذب الكيميائي للريزوباكتيريا في إفرازات الجذر باستخدام فحص كيميائي محسن. يعد تشغيل جذر زرع التاكسي الكيميائي مهما لاستعمار الجذر لنمو النبات ، وتعزيز بكتيريا ريزوبيا وتوفير الفصائل المفيدة للتفاعلات بين النبات والميكروبات. تم استخدام العديد من الطرق لتحليل التاكسي الكيميائي البكتيري.
على سبيل المثال ، طريقة لوحة السباحة ، طريقة تشبه Cappilary ، جهاز رقاقة الانزلاق microfluidic. كانت دورة تجربة طريقة لوحة السباحة طويلة. تم إطلاق الخطأ التجريبي لطريقة Cappilary مثل ، جهاز رقاقة الانزلاق microfluidic مكلف للتجربة.
لقد أنشأنا طريقة مباشرة لتحديد الجاذب الكيميائي بسرعة والتي يمكن أن تحفز الحركة الكيميائية للبكتيريا المعززة لنمو الريزوسفير باستخدام شرائح زجاجية معقمة دون خطوات معقدة. قللت الطريقة من خطأ عد الصفائح وقصرت دورة التجربة. وفيما يتعلق بتحديد مادة جاذبة كيميائيا، يمكن للطريقة الجديدة أن توفر 2-3 أيام وأن تقلل أيضا من تكلفة المواد التجريبية.
توزيع بذور الأرز بشكل عشوائي في ثقافة غرفة النمو تنشأ لمدة أسبوع وإضافة الماء المعقم مرتين. اختر شتلات الأرز ذات الحجم المماثل والنبات في 50 ملليلتر من وسط سائل Ms. احتضان لمدة 48 ساعة عند 22 درجة مئوية وظروف الصرف الصحي.
سيتم إطلاق إفرازات جذر الأرز في وسط Ms. تم إجراء تحليل الطيف الكتلي للكروماتوغرافيا السائلة باستخدام نظام UHPLC. تحضير محلول مائي جاذب كيميائي تأكد من أنه معقم.
قم بتصفية محلول الجاذب الكيميائي باستخدام فلتر بكتيريا 0.22 ميكرومتر. كان المحلول المائي الجاذب الكيميائي هو المادة الوحيدة التي تم الحصول عليها من دراسات LCMS المذابة في الماء. تم استخدام محلول حمض Citrix كمثال.
يجب تنفيذ جميع الإجراءات بجانب المصباح. ضع علامة على الموضع الأوسط للشريحة الزجاجية بفاصل زمني قدره 1 سم. تأكد من تعقيم الشريحة الزجاجية عدة مرات على اللهب.
في محلول الجاذب الكيميائي 30 ميكرولتر على يسار الشريحة الزجاجية ، تأكد من أن البكتيريا قد تم استزراعها إلى المرحلة اللوغاريتمية. أضف محلول البكتيريا سعة 30 ميكرولتر على يمين الشريحة الزجاجية. تعقيم حلقة التلقيح عدة مرات على اللهب باستخدام حلقة التلقيح لتوصيل المحلول المائي الجاذب الكيميائي بمحلول البكتيريا والاحتفاظ به في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة على مقعد نظيف.
بعد 20 دقيقة افصل خط التوصيل بورق التصفية. تأكد من أن أنبوب الطرد المركزي سعة 1.5 ملليلتر معقم. جمع المحلول المائي الجاذب الكيميائي على يسار الشريحة الزجاجية.
انقل المحلول إلى أنبوب الطرد المركزي المعقم سعة 1.5 ملليلتر. أضف الحجم المناسب من صبغة الخلية الأمامية إلى أنبوب الطرد المركزي. بعد 2 دقيقة ، قم بجمع السوائل المسموح بها لحساب البكتيريا والمراقبة المجهرية باستخدام غرفة عد الدم.
أوجد عدد الكائنات الحية الدقيقة القابلة للحياة التي تم جذبها باستخدام المعادلة التالية. يشير ارتفاع RCI إلى رد فعل قوي على الجاذب الكيميائي. أشارت النتائج إلى أن حمض الستريك وحمض الكافيين لديهما أعلى مؤشرات التاكسي الكيميائي.
وكتبت نتائج طريقة الفحص الكيميائي الجديدة أن تركيز العلبة البكتيرية لحمض الستريك وحمض الكافيين والجالاكتوز كانت أعلى بكثير من المجموعة الضابطة والتحكم الإيجابي. كتب حمض الستريك أقوى التاكسي الكيميائي. وكانت النتائج التجريبية متفقة مع نتائج الطرق التقليدية.
يمكن تقديم بروتوكول الفيديو هذا كمورد قيم لتوضيح التفاعلات بين النبات والميكروبات.
