هذا البروتوكول مهم من حيث أنه يوفر تقنية شاملة ومنخفضة التكلفة وفعالة من حيث الوقت. وهو يجيب على العناصر الرئيسية للبحث الانتقالي ويصنف بيانات المكونات على المستويين الفردي والجماعي. هذه التقنية مفيدة بسبب إجمالي كمية المعلومات التي يمكن استخراجها فيما يتعلق بالملف العام للحيوان.
ويشمل ذلك مكونات التصنيف والاستنتاجات اللاحقة. يمكن أن توفر هذه التقنية نظرة ثاقبة على مجموعة واسعة من مجالات البحث ، بما في ذلك أمراض القلب والأعصاب والصيدلة. هذه التقنية لا تنطبق فقط على الدراسات الإنجابية.
ابدأ بالتعامل مع الفئران بقبضة مناسبة للعمر ، مثل عقد نمط الضغط للفئران المراهقة ، عن طريق وضع الموضوع على منطقة الصدر العليا مع توجيه أنفه لأسفل على الأرض. كشف القناة المهبلية للموضوع عن طريق ثني الذيل بلطف قبل إدخال المحقنة. أثناء تثبيت المحقنة بإصبع السبابة والإصبع الأوسط ، أدخل طرف المحقنة في القناة المهبلية بزاوية موازية لها ، واطرد كلوريد الصوديوم ببطء إلى القناة عن طريق دفع المكبس إلى الداخل باستخدام الإبهام.
استخرجي كلوريد الصوديوم من القناة المهبلية عن طريق سحب مكبس المحقنة بعيدا عن البطانة الظهارية. استخدم معايير كل نوع من أنواع الخلايا لتوصيف الخلايا الموجودة في العينة وتسجيل النتائج. ستظهر الخلايا الظهارية الكيراتينية النواة أو الخلايا الظهارية الكمية خشنة أو ذات حواف زاوية.
على الرغم من عدم وجود نوى ، فقد تظهر مناطق مستديرة ضوئية داخل الخلية تمثل المكان الذي كانت توجد فيه نواة ذات يوم تسمى نوى الأشباح. عادة ما تكون الخلايا الظهارية الكبيرة ذات النواة ، أو الخلايا LNE ، مستديرة إلى خلايا متعددة الأضلاع مغطاة بحدود خشنة أو زاوية غير منتظمة. يمكن أن تتراوح نواتها من سليمة إلى منحلة أو pyknotic المتعلقة بالتكثيف الذي لا رجعة فيه للكروماتين في نواة خلية تمر بالموت أو التدهور.
تشغل النوى مساحة أقل من السيتوبلازم داخل الخلية ، مع نسبة نووية إلى سيتوبلازمية أقل من الخلايا الظهارية الصغيرة. الكريات البيض هي خلايا كروية مدمجة. الأصغر عند مقارنته بجميع أنواع الخلايا الموصوفة الأخرى.
خلايا SNE هي خلايا غير كيراتينية ذات نوى مستديرة تشغل مساحة أكبر من السيتوبلازم داخل الخلية ، مما يخلق نسبة نواة إلى سيتوبلازم أعلى بالنسبة للخلايا الظهارية الكبيرة. استخدم التجسيد السفلي، مثل أربعة X للحصول على عرض تمثيلي لترتيب الخلايا بشكل عام. سجل ما إذا كانت الخلايا مجمعة معا أو مشتتة بالتساوي أو مشتتة عشوائيا، ولاحظ التنظيم المحدد لكل نوع من أنواع الخلايا.
ثم قم بتقدير وتسجيل إجمالي كمية الخلايا بصريا ، كذرة أو معتدلة أو عديدة ، وكميات الخلايا الفردية كنسبة مئوية من كل نوع خلية موجود. مع هذه المكونات تصنيف مجتمعة، وتحديد أي مرحلة دورة estrous يتم تقديمها. ضمن مرحلة diestrus ، يمكن ملاحظة أن الكريات البيض هي النوع المهيمن أو الوحيد من الخلايا.
عادة ما يتم ترتيبها بطريقة متكتلة في البداية ، ولكنها أكثر تشتتا في المراحل المتأخرة. قد تكون الكمية الإجمالية للخلايا منخفضة نسبيا ، وغالبا في المراحل اللاحقة من فترة الديسترس في اليوم الثاني أو الثالث. يمكن ملاحظة خيوط مركزة من الكريات البيض بسبب الكمية العالية من المخاط التي قد تكون موجودة في هذه المرحلة.
يمكن رؤية كتل صغيرة من الخيوط الخلوية لخلايا SNE المصاحبة لكريات الدم البيضاء خلال المراحل المتأخرة في الانتقال إلى proestrus. يبدو السائل المهبلي ، عند الانتقال إليه ، والانتقال الكامل إليه ، والانتقال منه ، لزجا وغير شفاف. خلال مرحلة proestrus ، خلايا SNE هي الخلايا المهيمنة بينما يمكن العثور على خلايا الكريات البيض و LNE و AKE بأعداد منخفضة.
عادة ما يتم ترتيب خلايا SNE في مجموعات أو صفائح أو خيوط خلال هذه المرحلة ولها مظهر حبيبي يمكن ملاحظته عند تكبير أعلى. يصبح السائل المهبلي غير لزج وشفاف بمجرد انتقال الموضوع بالكامل إلى مرحلة البروستروس. خلايا AKE هي المهيمنة خلال مرحلة estrous ، مع انخفاض في خلايا SNE ، وزيادة عامة في عدد وحجم الخلايا مع استمرار estrous.
غالبا ما تتجمع خلايا AKE في شكل قضبان الكيراتين. قد تحتوي أيضا على نوى أشباح يمكن أن تصبح أكثر تشتتا في الانتقال من proestrus إلى metestrus. السائل المهبلي غير لزج وشفاف لأن الفئران تنتقل إلى ، وتنتقل بالكامل ، وتنتقل من استروس.
مع انتقال الفئران إلى metestrus ، ابحث عن جميع أنواع الخلايا ، على الرغم من أنه غالبا ما يكون هناك كمية أعلى من خلايا SNE و LNE مقارنة ب LEUs. لوحظ وجود كمية أكبر من الحطام أثناء metestrus والتحولات بسبب اضمحلال الخلايا الظهارية بعد estrous. خلال هذه المرحلة ، هناك نقص في الترتيب المتسق حيث يتم رؤية جميع أنواع الخلايا وبكميات مختلفة.
ومع ذلك ، فإن الكريات البيض التي يتم تعبئتها بالقرب من الخلايا الظهارية في المراحل الأولى قد تعود إلى الترتيب المتكتل عند الانتقال إلى diestrus. يظهر السائل المهبلي غير لزج وشفاف في المرحلة. ويتغير إلى مظهر أكثر لزوجة وغير شفاف أثناء الانتقال إلى diestrus.
داخل كل مرحلة ، يمكن رؤية العديد من الاختلافات ، على سبيل المثال داخل مرحلة diestrus ، لوحظت كل من الخلايا الظهارية والكريات البيض. في الترتيبات ، شوهدت أيضا خيوط مخاطية متكتلة ، تتكون من الكريات البيض ، والتكتل الأولي لكريات الدم البيضاء ، وصرف عشوائي أو حتى في وقت لاحق. عند جمع عينة السائل المهبلي ، كانت هناك مجموعات غير ممثلة تبرر تكرار عمليات الغسل ، والتي شملت استخراج الخلايا الحرشفية من جدار القناة المهبلية بسبب إدخال حقنة غير سليمة.
مجموعة من الحطام فقط، وعدد الخلايا الذي كان منخفضا جدا بحيث لا يمكن تصنيفه، وتلك التي كانت خارج نطاق التركيز. من الشائع رسم تقدم المرحلة على الرسوم البيانية الشريطية ، مما يسمح للباحثين بفحص نمط الدورة الكلي وتحديد الدورية. ويمكن بعد ذلك تحليل العينات حسب طول الدورة ونمط تقدم المرحلة.
يمكن إنشاء ملفات تعريف دورة Estrous باستخدام رسم بياني شريطي مكدس ، إما تتبع تقدم المرحلة لكل فأر أو لكل مجموعة. حيث يتم رسم مكونات التصنيف لكل يوم إما في اليوم الواحد أو في كل مرحلة. يمكن أيضا تنظيم بيانات مكونات التصنيف رقميا لإنشاء نطاقات موحدة وجمع الإحصاءات.
مارس هذه التقنية بحيث تكون طفيفة التوغل ومسح شريحة المجهر بحثا عن عينات تمثيلية لتقليل تحيز الاختيار. بشكل عام ، تذكر أنه لا يوجد شيء اسمه دورة طبيعية. بعد هذا الإجراء ، يمكن إدخال المتغيرات التجريبية ، مثل التمرين والنماذج السلوكية.
وهذا من شأنه أن يسمح للبحوث بإنشاء خط الأساس لتدوير الحيوانات مسبقا والكشف عن الاستجابات الهرمونية لتدخلات محددة بعد ذلك. تسمح هذه الطريقة للباحثين باستكشاف العلاقة بين هرمونات الستيرويد الجنسية والأنظمة الجسدية الأخرى. مثال على ذلك هو كيف ترتبط مستقبلات القلب لهرمونات الستيرويد الجنسية بوظائف النظام.
