إنشاء كيميرا الدماغ الأمامي للطيور لتقييم نمو الوجه

تسمح هذه الطريقة للباحثين بتقييم تفاعلات الأنسجة بين الدماغ الأمامي القاعدي والوجه. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تعزل الدماغ الأمامي القاعدي للتقييم وتمنع التلوث بخلايا القمة العصبية ، مما قد يربك التحليل. الجزء الصعب من هذه التقنية هو إزالة الدماغ الأمامي من المضيف واستبداله بأنسجة المتبرع.

وستقوم ديان هو، عالمة أبحاث من مختبر الدكتور رالف ماركوسيو، بإثبات هذا الإجراء. للبدء ، قم بإعداد وسائط DMEM باللون الأحمر المحايد ، وماصة نقل الزجاج ، والتنغستن الحاد. باستخدام حقنة 10 ملليلتر وإبرة قياس 18 ، قم بإزالة 0.5 ملليلتر من الألبومين من الطرف المدبب لقشر البيض.

اصنع ثقبا صغيرا فوق القشرة باستخدام نقطة المقص. ثم ضع قطعة من الشريط فوق الفتحة واقطع فتحة دائرية لفضح الجنين. وصمة عار الجنين باللون الأحمر المحايد.

حصاد ترقيع الأنسجة من الجانب الأيسر من الدماغ الأمامي القاعدي للمرحلة السابعة أو الثامنة من الأجنة. استخدم إبر التنغستن الحادة المنحنية لشق قطعة من الدماغ الأمامي برفق. من أجل عدم تضمين الأديم الباطن الأساسي ، حرك الإبرة أسفل الدماغ الأمامي وبالتوازي مع محور الأنبوب العصبي.

التقط الطعم من الجنين المتبرع باستخدام ماصة نقل الزجاج ، وانقله إلى DMEM الذي يحتوي على أحمر محايد لمدة دقيقتين لتلطيخه. ثم ضع الكسب غير المشروع الملون في DMEM الذي لا يحتوي على أحمر محايد حتى يصبح جاهزا للنقش. احتضان البيض المخصب من دجاج ليغورن الأبيض عند 37 درجة مئوية في غرفة مرطبة حتى مرحلة هامبرغر هاميلتون من السابعة إلى الثامنة.

كشف الأجنة كما هو موضح سابقا. باستخدام إبر التنغستن الحادة ، قم بإعداد موقع الكسب غير المشروع عن طريق قطع ثم إزالة قطعة 0.3 × 0.2 ملم من الدماغ الأمامي القاعدي لاستيعاب الكسب غير المشروع. تجنب الاضطراب المفرط للأديم الباطن الأساسي ، والذي سيكون واضحا حيث ستبدأ حبيبات صفار البيض في التسرب من خلال أي تمزق يتم إجراؤه.

بعد نقل الكسب غير المشروع إلى المضيف ، ضع الكسب غير المشروع ليحل محل الدماغ الأمامي القاعدي المستأصل للمضيف. ضع الشريط بإحكام فوق الفتحة ، وأعد الأجنة إلى حاضنة 37 درجة مئوية حتى تصبح جاهزة للتحليل. في البداية ، تم إنشاء الوهم عن طريق زرع أنسجة السمان في أجنة الفرخ.

باستخدام الجسم المضاد QCPN ، تم تصور خلايا السمان وتمييزها عن الأنسجة المضيفة. أكد نظام كتكوت السمان أن كل الكسب غير المشروع كان يتألف فقط من الأنسجة العصبية ولم يكن ملوثا بأنواع الخلايا الأخرى. أدى زرع أنسجة السمان في أجنة البط إلى تشويه شديد الوهم بسبب نمو دماغ السمان بشكل أسرع.

لذلك ، تم إجراء زرع أنسجة البط في أجنة الدجاج. تشير الوهم الناتجة عن كتكوت البط إلى أن الدماغ يشارك في تنظيم التشكل. تم استخدام تهجين C2 الجبلي الكامل لتقييم تعبير القنفذ الصوتي في الوهم.

على غرار التشكل ، بدا تعبير القنفذ الصوتي على جانب البطة من الوهم أكثر شبها بالبط. إعداد الموقع المضيف يأخذ الممارسة. لا ينجو عدد كبير من الأجنة ، لذا فإن إنشاء عدد كبير من الوهم يمكن أن يساعد في ضمان عينات مناسبة للتحليل.

جعلت هذه الطريقة من الممكن تقييم كيفية تشكيل الإشارات من الدماغ لمجال تعبير القنفذ الصوتي في منطقة الأديم الظاهر الجبهي الأنفي.