هذا البروتوكول هو واحد من المظاهرات الأولى للتطبيق المباشر للضوضاء الكهربائية إلى الخلايا العصبية الفردية في شرائح الأنسجة. من أجل مراقبة استجابات الخلايا العصبية للمحفزات الكهربائية. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي، أننا قادرون على تقييم مجموعة محددة من المعلمات التحفيز على الخلايا العصبية الفردية.
هذه التقنية تسمح لتحسين المعلمات التحفيز لاستهداف خاصة, أنواع الخلايا العصبية الوظيفية. وهذا له آثار على تطوير علاجات أفضل لتفكك التوازن. قبل البدء في استخراج جذع الدماغ، Equilibry s-ACSF مع CARPOGEN وتبريد الحل في ناقص 80 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة حتى تم تشكيل الطين الجليد.
بعد أن يكون الحل قد بردت، واستخدام عدد 22 شفرة حلاقة مدورة لجعل شق الجلد القوس في الجمجمة من ثلاثة إلى خمسة أسابيع من العمر C-57 أسود ستة ماوس واستخدام نهاية مدببة لزوج من مقص نمط القياسية لجعل شق صغير، بدءا من لامدا، على طول خياطة القوس. باستخدام زوج من الانحناء الضحلة بيرسون فونJours، تعكس بعناية بعيدا إصلاح الجدارية والعظام exoccipital، والاستحمام الدماغ في الجليد البارد s-ACSF. ثم، عزل الدماغ تنبع من forebrain وعظمية لها الرعايه باستخدام عدد 11 شفرة حلاقة مستقيمة لخفض sulcus الجداري exoccipital وفي negula caudal.
قم بتركيب الجزء البطني من جذع الدماغ المعزول لأسفل على كتلة البوليسترين شبه المنحرفة بشكل perviously ، واستخدام قطعة من ورق الأنسجة لإزالة أي سائل زائد من جميع أنحاء الأنسجة التي تم تشريحها. استخدام الغراء سيانوكريلات لإصلاح كتلة البوليسترين إلى مرحلة القطع مع جذع الدماغ المرفقة والمغلقة. استخدام سرعة متقدمة من 0.16 ملليمتر في الثانية واهتزاز سعة ثلاثة ملليمترات للحصول على 200 ميكرومتر شرائح عرضية من MVN.
ثم استخدم ماصة بلاستيكية مشذبة لنقل شرائح الأنسجة إلى قرص ورقي مُنسج من ACSF في درجة حرارة 25 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. لخلية كاملة من التصحيح الكهربائي، أولا سحب ماصات صغيرة مع المقاومة النهائية التي سوف تتراوح بين ثلاثة إلى خمسة أومس ميجا عندما مليئة حل داخلي القائم على البوتاسيوم ووضعها في الحمام. للحصول على تسجيلات المشبك التصحيح الخلية الكاملة من الخلايا العصبية الفردية في MVN، نقل شريحة نسيج واحد من غرفة الحضانة إلى غرفة تسجيل مجموعة الكهربائية القياسية، واستخدام خيط النايلون على الوزن على شكل يو لتأمين شريحة.
باستمرار غمر غرفة التسجيل مع ACSF الغازية في 25 درجة مئوية بمعدل تدفق من ثلاثة ملليلتر في الدقيقة وملء ماصة صغيرة مع الحل الداخلي. تطبيق كمية صغيرة من الضغط الإيجابي باستخدام ماصة لدفع الحطام بعيدا عن تلميح ماصة. باستخدام هدف أقل قوة، حدد موقع MVN قبل التحول إلى قوة عالية لتحديد موقع الخلايا العصبية الفردية داخل MVN.
قبل اختراق الأنسجة مع الماصة، وتطبيق كمية صغيرة من الضغط الإيجابي لدفع الحطام بعيدا عن طرف ماصة، واستخدام المتلاعب الدقيق لتحريك ماص نحو الخلايا العصبية المختارة. وينبغي أن تتشكل غمل صغيرة على غشاء الخلايا العصبية. الافراج عن الضغط الإيجابي، وتطبيق كمية صغيرة من الضغط السلبي.
مرة واحدة وقد تم تحقيق ختم واحد أوم جيجا، وتطبيق ضغط سلبي لطيف قصيرة وحادة على حامل ماصة من خلال منفذ شفط لتمزق الغشاء وخلق تكوين الخلية الكاملة. ثم الحصول على كامل الخلية تسجيلات المشبك الحالي وفقا للبروتوكولات القياسية. لتطبيق الضوضاء الستوكاوية والجيوبيدية على الخلايا العصبية نواة الدهليزية الفردية، تعيين مجموعة من السعات من ثلاثة إلى 24 أمبير بيكو لتحديد عتبة الخلايا العصبية ومعدل اطلاق النار ومجموعة من كثافة التحفيز أعلى وانخفاض لتحديد العتبة الحسية.
بعد ذلك، حساب متوسط معدل إطلاق النار على مدى فترة 10 ثانية، خلالها سيتم حقن الخطوة الحالية النافرة لكل مستوى حالي فردي. استخدم متوسط قيم معدل إطلاق النار لإنشاء معدل إطلاق مقابل مخطط حالي. ثم إجراء تحليل الانحدار الخطي لتحديد تدرج خط تناسب أفضل لتحديد مكاسب الخلايا العصبية.
لا sinusoidal ولا الضوضاء العشوائية التغييرات معدلات الريحان اطلاق النار من الخلايا العصبية MVN بالمقارنة مع السيطرة على أي تسجيلات الضوضاء. في هذه التجربة، فإن مستوى الضوضاء المختارة من 6 أمبير بيكو هو عتبة فرعية، كما يمكن ملاحظة أن متوسط معدل إطلاق النار يبدأ في الزيادة من عتبة تجريبية من 12 أمبير بيكو. وقد تم تحديد هذه العتبة بموضوعية عن طريق تجميع مستويات التحفيز فوق العتبة التجريبية وتحتها.
تم تقييم اكتساب الخلايا العصبية من خلال إخضاع الخلايا العصبية لمجموعة من الخطوات الحالية من الصفر إلى 50 أمبير بيكو في 10 زيادات بيكو أمبير مع وبدون ضوضاء. في الواقع، يمكن أن الضوضاء الجيوب الأنفية والستوكاستيك المطبقة على السعات عتبة فرعية من ستة أمبير بيكو تغيير مكسب الخلايا العصبية MVN. يمكن تطبيق المعلمات التحفيز المنشأة على الأعصاب ابتكار الخلايا العصبية الفردية لتوفير محفزات أكثر طبيعية.
