نمط الزناد الاندفاع التأكسدي والشتلات تسرب النمو تثبيط الاختبارات في تاليانا العربيدوبسي

يمكن استخدام هذه المقايسات لتقييم ومقارنة النواتج المناعية للنمط الجيني النباتي المختلف. الميزة الرئيسية لهذه التقنيات هي أنها سريعة وموثوقة، واستخدام معدات المختبرات المشتركة. بالنسبة لمقايسة تثبيط النمو ، يجب زرع الشتلات من نفس الحجم والعمر وتجفيفها بالكامل قبل وزنها للحد من الاختلاف.

في أربعة إلى خمسة أسابيع بعد الإنبات، واستخدام لكمة خزعة حادة من أربعة ملليمتر لإزالة قرص ورقة واحدة لكل نبات Arabidopsis، وتجنب midvein والحرص على الحد من الجرح. جمع الأقراص في آبار فردية من لوحة مضيئة 96-well غير المستخدمة التي تحتوي على 100 ميكرولترات من المياه المقطرة المزدوجة في البئر، الجانب adaxial حتى، لمنع desiccation. إذا تقييم المحفزات متعددة، وإزالة قرص ورقة ثانية من نفس الورقة لكل علاج الإثارة، وتغطية لوحة مع غطاء للسماح لأقراص ورقة لاسترداد بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.

في صباح اليوم التالي، تعيين المعلمات القارئ microplate إلى 1، 000 ميلي ثانية وقت التكامل في فترات لمدة دقيقتين على مدى فترة 40 إلى 60 دقيقة لالتقاط انفجار الأكسدة الديناميكية. بعد ذلك، استخدم ماصة متعددة القنوات لاستبدال المياه في كل بئر بـ 100 ميكرولترات من محلول التفاعل الطازج، بما في ذلك التحكم، ولا تفاعل مُثير لكل نوع جيني لتقييم مستويات أنواع الأكسجين رد الفعل القاعدي في غياب الإثارة. ثم، وقياس فورا انبعاث الضوء لجميع الأطوال الموجية في الطيف المرئي على قارئ microplate.

في أربعة أيام بعد الإنبات، تحميل كل بئر من لوحة 48-جيدا مع 500 ميكرولترات من المتوسط MS تستكمل مع تخفيف الببتيد ينزبيب. بعد ذلك ، استخدم ملقطًا معقمة لزرع 6 إلى 8 شتلات من نفس الحجم والعمر والنمط الجيني لكل تخفيف الببتيد ، مع الحرص على عدم وجود ضرر على الشتلات أو الكسر في الجذر وأن الجذر مغمور في الوسط. عندما تم مطلي جميع الشتلات، ختم لوحات مع الشريط Micropore، ووضع النباتات في ظل ظروف قياسية لمدة يوم قصير لمدة ثمانية إلى 12 يوما.

لتحديد تثبيط النمو في المئة، التقاط صورة لتسجيل بصريا تثبيط النمو قبل إزالة بعناية الشتلات من كل بئر. ثم، الداب الجذور على منشفة ورقية لتجف، وتزن كل شتلة على مقياس تحليلي. في هذه التجربة التمثيلية، أظهرت النباتات المتحولة ذات الإشارات المناعية المفرطة النشاط انفجارًا مؤكسدًا أعلى ومتوسطًا مقارنة بالنباتات العربية من النوع البري، في حين أن النباتات المتحولة ذات الإشارات المناعية الضعيفة أظهرت انفجارًا مؤكسدًا مخفضًا عند تركيزات تتراوح بين 10 و1000 نانومولر.

ويمكن أيضا تمييز الاختلافات المتوقعة في تثبيط نمو الشتلات بين جميع الأنماط الجينية التي نمت في تركيزات الببتيد النانومولر 100 و 000 1 نانومولر. عندما نمت في 1000 نانومولر ببتيد تخفيف، كانت المسوخ مع إشارات المناعة مفرطة النشاط أصغر بشكل ملحوظ من النباتات من النوع البري التي تزرع في ظل نفس الظروف، في حين أن المسوخ مع ضعف إشارة المناعة عرض تثبيط ضعيف للنمو نسبة إلى النباتات من النوع البري. توفر هذه الطرق أدلة على الاستجابات المناعية المبكرة والمتأخرة.

ويمكن استخدام العديد من التقنيات الأخرى، بما في ذلك مقايسات كيناز MAP، والتعبير الجيني الناجم عن مسببات الأمراض، وم مقايسات العدوى، لتحديد هذه المسارات. وقد تم تعديل هذه التقنيات لاستخدامها في الشاشات الكبيرة، التي نجحت في تحديد البروتينات مستقبلات الممرض والعديد من المكونات الأخرى إشارة.