JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تحدد هذه الدراسة نموذجا للفئران لتكلس الأوعية الدموية الناجم عن اتباع نظام غذائي غني بالدهون (HFD) جنبا إلى جنب مع فيتامين D3 (VD3). تم استخدام النموذج لتقييم الفعالية العلاجية للساليدروسيد في منع وعلاج تكلس الأوعية الدموية ، مما يوفر رؤى حول آليات عمله المحتملة من خلال علم الأدوية الشبكي والتجارب في الجسم الحي .

Abstract

تكلس الأوعية الدموية (VC) هو حالة مرضية حرجة مرتبطة بالمراضة والوفيات الكبيرة. تستخدم هذه الدراسة نهجا هجينا لعلم الأدوية الشبكي والبيولوجيا الجزيئية لتحديد الآليات العلاجية لساليدروسيد (SAL) ، وهو مركب نشط من رهوديولا كرينولاتا ، ضد VC. من خلال التنقيب في قواعد البيانات وتحليل الشبكة ، تم تحديد 388 هدفا من أهداف SAL تتقاطع مع 2871 هدفا مرتبطا برأس المال الاستثماري ، مما أدى إلى 208 أهداف مشتركة. حددت شبكة التفاعل بين البروتين والبروتين (PPI) التي تم إنشاؤها عبر قاعدة بيانات String والتحليل الطوبولوجي في Cytoscape 3.9.1 10 أهداف رئيسية ، بما في ذلك IL6 و TNF و TP53 و IL1B و HIF1A و CASP3 و STAT3 ، من بين أمور أخرى. تركزت الجينات المحددة في مسارات الدهون وتصلب الشرايين ، مما يشير إلى أن تحسين VC بواسطة SAL قد يحدث من خلال تنظيم التعبير غير الطبيعي للدهون والعوامل الالتهابية. وجد أيضا أن SAL يثبط التعبير غير الطبيعي للعوامل الالتهابية ، وبالتالي ينشط مسار JAK2 / STAT3 للتدخل في تطور VC. يعد مسار JAK2 / STAT3 آلية جزيئية رئيسية يمنع من خلالها SAL المزيد من التدهور في VC. كشفت تحليلات التخصيب الوظيفي عن تورط هذه الأهداف في الاستجابات الالتهابية واستقلاب الدهون ، وهي مسارات محورية في VC. أظهرت الدراسات التي أجريت على الفئران في الجسم الحي فعالية SAL في التخفيف من عسر شحميات الدم والتهاب الأوعية الدموية ، مع تحسين ملامح الدهون في الدم وتقليل ترسب الكالسيوم الوعائي. أظهر الاستكشاف الميكانيكي ، الذي يرتكز على تحليل اللطخة الغربية ، قدرة الساليدروسيد على تنظيم مسار إشارات JAK2 / STAT3 ، مما يسلط الضوء على إمكاناته كمغير في هذه الآلية الجزيئية الحرجة وتقديم هدف علاجي محتمل ل VC. تكمن قوة هذا البحث في صرامته المنهجية ، ودمج التنبؤات الحسابية مع عمليات التحقق من الصحة في الجسم الحي . يضع هذا النهج الشامل إطارا قويا لاستكشاف الآليات العلاجية للمركبات الطبيعية في مكافحة رأس المال الاستثماري.

Introduction

يشير تكلس الأوعية الدموية (VC) إلى الترسب غير الطبيعي للكالسيوم داخل جدران الأوعية الدموية ، مما يؤدي إلى تصلب الشرايين وانخفاض المرونة ، مما يؤدي في النهاية إلى إضعاف وظيفة الأوعية الدموية. تقليديا ، تم تقسيم VC إلى نوعين: التكلس الحميمي ، المرتبط بتراكم الدهون ، والتكلس الإنسي. يرتبط الأول ارتباطا وثيقا بالتسلل الالتهابي ، مما يؤدي إلى تحول عظمي في جدار الأوعية الدموية ، والذي يتميز بهجرة وتكاثر وتمايز خلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs) إلى خلايا شبيهة بانياتالعظم 1.

تعد قدرة VSMCs على الخضوع لتمايز العظم ، والتي تتأثر بعوامل مثل الشيخوخة والوراثة والظروف البيئية مثل مرض السكري وأمراض الكلى المزمنة ، مساهما رئيسيا في VC المرتبط بالعمر. يؤدي هذا التحول الشبيه بانيات العظم إلى تفاقم تكلس الشرايين وتنكسالشرايين 1.

VC هي حالة متعددة الأوجه ، مدفوعة بالتغيرات التنكسية والاختلالات الأيضية والحالات الجهازية المختلفة. ما يقرب من 80٪ من إصابات الأوعية الدموية و 90٪ من حالات مرض الشريان التاجي تظهر VC ، مما يزيد بشكل كبير من خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية الشديدة1،2. لذلك ، هناك حاجة ملحة لاكتشاف العلاجات الدوائية التي تخفف أو تعكس هذه الحالة بشكل فعال.

حاليا ، تتضمن استراتيجيات علاج VC تدخلات دوائية مختلفة ، على الرغم من عدم وجود أدوية مصممة خصيصا لهذا الغرض. بالنسبة للمرضى الذين يعانون من تكلس خفيف ، غالبا ما توصف العقاقير المخفضة للكوليسترول لتثبيت اللويحات. ومع ذلك ، في حين أنها قد تقلل من تضيق الشريان التاجي عن طريق خفض مستويات الدهون ، إلا أن تأثيرها على التكلس محدود2.

نظرا لتعقيدات تصلب الشرايين ، يظهر العديد من المرضى تنشيطا محسنا للصفائح الدموية ، مما يستلزم استخدام الأدوية المضادة للصفيحات مثل الأسبرين أو كلوبيدوجريل لتثبيط تراكم الصفائح الدموية وتقليل خطر تجلط الدم. ومع ذلك ، فإن العلاج بالأسبرين مفيد فقط للأفراد الذين لديهم درجة عالية من الكالسيوم في الشريان التاجي وانخفاض خطر النزيف3.

بالإضافة إلى ذلك ، تشير الأبحاث في المكملات الغذائية ، مثل فيتامين K ، إلى إمكانية منع تطور VC4. في الحالات الشديدة ، يمكن النظر في التدخلات الغازية ، على الرغم من أنها غالبا ما تكون غير مناسبة ل VC5 على نطاق واسع. بالنسبة للأفراد الذين ليس لديهم رأس المال الاستثماري الحالي ، تظل إدارة عوامل الخطر ، مثل ضغط الدم ، وملامح الدهون ، وخيارات نمط الحياة ، أمرا بالغ الأهمية6.

رهوديولا كرينولاتا ، عشب معمر من عائلة Crassulaceae ، تم استخدامه تقليديا في الطب الصيني. المكون الرئيسي النشط بيولوجيا ، ساليدروسيد ، يحظى باهتمام كبير بسبب أنشطته البيولوجية البارزة. تشتهر ساليدروسيد بقدرتها على تثبيط موت الخلايا المبرمج ، وإظهار خصائص قوية مضادة للأكسدة ، وتمتلك خصائص مضادة للالتهابات7،8. تساهم هذه السمات في قدرتها على تعزيز وظيفة الأوعية الدموية ، وتأخير شيخوخة الأوعية الدموية ، وحماية بطانة الأوعية الدموية. كعامل علاجي محتمل لرأس المال الاستثماري, ساليدروسيد يحمل قيمة كبيرة للبحث. ومع ذلك, الآليات الدقيقة التي من خلالها ساليدروسيد يحسن VC لا تزال لتكون واضحة تماما وتستدعي مزيدا من التحقيق لتسخير إمكاناتها العلاجية في علاج VC.

لاستكشاف هذه الآليات ، تستفيد هذه الدراسة من علم الأدوية الشبكي ، وهي منهجية مبتكرة تجمع بين علم الأدوية والمعلوماتية الحيوية وعلوم الكمبيوتر لتحليل الأنظمة البيولوجية وتوضيح آليات الدواء. بالمقارنة مع أبحاث الأدوية التقليدية أحادية الهدف ، يقدم علم الأدوية الشبكي نهجا أكثر شمولا من خلال تحليل تأثيرات الدواء على أهداف بيولوجية متعددة ومسارات الإشارات. كأداة رئيسية في تطوير الأدوية الحديثة ، فإنه يبني شبكات من الأدوية والأهداف والمسارات للكشف عن الآليات الأساسية لعمل الأدوية9،10. على الرغم من استخدامه المكثف في استكشاف الآليات العلاجية ، فقد كان هناك بحث محدود في الآليات التفاعلية بين ساليدروسيد وVC من منظور المعلوماتية الحيوية وعلم الأدوية الشبكي.

يبني هذا البحث خريطة شبكة جزيئية للتأثير المحتمل لساليدروسيد على رأس المال الاستثماري من خلال تحديد وتحليل الأهداف الرئيسية من خلال التنقيب الشامل في قاعدة البيانات. يتم إنشاء شبكة تفاعل البروتين والبروتين (PPI) ، ويتم تطبيق التحليل الطوبولوجي لتسليط الضوء على العقد الحرجة في عملية التكلس.

لتأكيد التنبؤات الحسابية ، تم تطوير نموذج الفئران من VC عن طريق إدارة نظام غذائي غني بالدهون يحتوي على فيتامين D3 (VD3). يكرر هذا النموذج السمات المرضية ل VC البشري. يتم تقييم إصابة الأوعية الدموية من خلال التقنيات النسيجية ، ويتم تقييم ملامح الدهون في المصل وعلامات الالتهاب للتحقيق في الآثار الجهازية للساليدروسيد ، ويتم قياس التعبير عن البروتينات ذات الصلة ب SAL المضادة للفيرجينيا باستخدام النشاف الغربي لاستكشاف تأثير ساليدروسيد على رأس المال الاستثماري المستحث تجريبيا ، وتهدف هذه الدراسة إلى المساهمة في رؤى قيمة حول إمكانات هذا المركب كاستراتيجية علاجية لمكافحة رأس المال الاستثماري.

Protocol

تمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة التجريبية بجامعة تشانغتشون للطب الصيني (الموافقة رقم 2023091). تلتزم هذه الدراسة بالمبادئ التوجيهية الدولية ، بما في ذلك إرشادات الجماعة الأوروبية وتوجيه الجماعة الاقتصادية الأوروبية لعام 1986 ، مما يضمن المعاملة الأخلاقية للحيوانات طوال فترة الدراسة. تم استخدام ذكور فئران الويستار (8-10 أسابيع ، الوزن 200-220 جم) للدراسة. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. التنبؤ بعلم الأدوية للشبكة لأهداف salidroside-VC المحتملة

ملاحظة: يستخدم علم الأدوية الشبكي طرقا حسابية وتحليل بيانات واسع النطاق للتحقيق في التفاعلات المعقدة بين جزيئات الدواء والأهداف البيولوجية مثل المسارات والجينات والبروتينات داخل الكائنالحي 11،12. يساعد هذا النهج على فك رموز الوظائف والعلاقات البيولوجية للكيانات المدروسة. تشمل المنهجية استخدام قاعدة البيانات ، ومعالجة المعلومات الكيميائية ، والحصول على بيانات النشاط الحيوي ، واسترجاع بيانات البروتين ، وتحليل ملامح التعبير الجيني ، وبناء شبكات التفاعل ، وتحليل إثراء المسارات11. يوضح الشكل 1 شبكة التفاعل للأهداف الأساسية بين ساليدروسيد وتكلس الأوعية الدموية.

  1. بناء قاعدة البيانات المستهدفة "المكونات"
    1. استخدم "Salidroside" ككلمة رئيسية للمكونات للبحث في قواعد البيانات13 (انظر الجدول التكميلي 1) ، مثل HERB و TCMSP و PubChem و SwissTargetPrediction و CTD و PharmMapper و SEA و STITCH.
    2. راجع الأدبيات ذات الصلة لتحديد الأهداف المرتبطة بالساليدروسيد ، مع تعيين الأنواع على الإنسان العاقل. بعد إزالة التكرارات ، قم بتوحيد البروتينات المستهدفة باستخدام UniProt (انظر الجدول التكميلي 1) وإنشاء قاعدة بيانات شاملة لهدف Salidroside14.
  2. إنشاء قاعدة بيانات الأهداف "المرض"
    1. استخدم "تكلس الأوعية الدموية" ككلمة رئيسية للبحث في قواعد البيانات15 (انظر الجدول التكميلي 1) ، بما في ذلك GeneCards و OMIM و PharmGkb و DrugBank ، مع تعيين الأنواع على Homo sapiens. بعد إلغاء الازدواجية ، قم بإنشاء قاعدة بيانات مستهدفة لتكلس الأوعية الدموية.
  3. التنبؤ بالأهداف العلاجية المحتملة
    1. أدخل أهداف الساليدروسيد وتكلس الأوعية الدموية (انظر الجدول التكميلي 1) لتحديد الأهداف المشتركة. إنشاء مخطط Venn لتصور الأهداف العلاجية المحتملة للساليدروسيد في علاج تكلس الأوعية الدموية.
  4. بناء شبكة "تكلس ساليدروسيد والأوعية الدموية" للتفاعل بين البروتين والبروتين (PPI)
    1. قم بتجميع الأهداف المحتملة في قائمة بروتينات متعددة وتحليلها باستخدام STRING (انظر الجدول التكميلي 1) ، مع تعيين الكائن الحي على Homo sapiens وتعيين درجة التفاعل على ثقة متوسطة (>0.4) 16. استخراج بيانات PPI بتنسيق TSV لمزيد من التحليل.
      ملاحظة: بالنظر إلى أن 85٪ من جينات الفئران متماثلة مع الجينات البشرية ، وتؤدي وظائف بيولوجية مماثلة ، فقد تم اختيار الفئران كموضوعات تجريبية للتحقق من آثار الساليدروسيد على تكلس الأوعيةالدموية 17.
  5. اختيار وبناء الشبكة للأهداف الرئيسية
    1. قم باستيراد بيانات شبكة PPI إلى Cytoscape 3.9.1 (انظر الجدول التكميلي 1) للتحليل باستخدام المكون الإضافي CytoNCA لتقييم المعلمات مثل الوسط (BC) ، والتقارب (CC) ، والدرجة (DC) ، والمتجه الذاتي (EC) ، والاتصال المتوسط المحلي (LAC) ، ومركزية الشبكة (NC). حدد الأهداف الرئيسية باستخدام CC = 1 لإنشاء خريطة طيف عمل الهدف الأساسية ل "SAL-VC".
    2. استخدم المكون الإضافي CytoHubba لتحديد أفضل 10 جينات محورية بناء على مركزية الزمرة القصوى (MCC) ، ومكون الجوار الأقصى (MNC) ، وحسابات الدرجة ، وإنشاء خريطة طيف جينات المحور.
  6. تحليل تخصيب مسار GO و KEGG
    1. قم بإجراء تحويل معرف الجينات باستخدام DAVID (انظر الجدول التكميلي 1) ، وحدد ENSEMBL_GENE_ID لنوع الجين 9606 للحصول على معلومات الأنواع. قم بتحليل قائمة الجينات المحولة باستخدام Omicshare (انظر الجدول التكميلي 1) لإثراء مسار GO الوظيفي ومسار KEGG ، مع تعيين الأهمية عند قيمة P < 0.0518.
      ملاحظة: يتضمن التحليل الوظيفي GO الوظيفة الجزيئية (MF) والعملية البيولوجية (BP) والمكون الخلوي (CC). يتضمن تحليل مسار KEGG إثراء المسار وإثراء تصنيفالمسار 19. تم تصوير نتائج تحليل التخصيب في الشكل 2.

2. تجربة على

  1. التأقلم
    1. تتأقلم فئران الويستار في ظل ظروف محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) مع دورة ضوء/مظلمة مدتها 12 ساعة. التأكد من حصولهم على الغذاء والماء للحفاظ على صحتهم قبل بدء التجارب. أداء التغذية التكيفية لمدة 1 أسبوع.
  2. إنشاء نموذج
    1. تأقلم الفئران مع الظروف البيئية وقم بتعيينها عشوائيا في خمس مجموعات: المجموعة الضابطة (Ctrl ، ND + Vehicle) ، المجموعة النموذجية (النموذج ، HFD + المركبة) ، مجموعة الجرعات المنخفضة SAL (SAL-L ، HFD + SAL 5 مجم / كجم) ، مجموعة الجرعات العالية SAL (SAL-H ، HFD + SAL 10 مجم / كجم) ، ومجموعة Simvastatin (HFD + SIM 5 مجم / كجم).
    2. قم بإدارة نظام غذائي طبيعي (ND) لمجموعة Ctrl واتباع نظام غذائي غني بالدهون (HFD) للمجموعات المتبقية طوال مدة التجربة. في اليوم الأول من إعطاء HFD ، حقن جرعة واحدة تحت الجلد قدرها 600,000 وحدة دولية / كجم VD3 لجميع المجموعات باستثناء مجموعة Ctrl 20،21. يتبع ذلك بحقن أسبوعية تحت الجلد بمقدار 100,000 وحدة دولية / كجم VD3 لمدة 8 أسابيع التالية (الشكل 3).
    3. مراقبة الحالة الصحية للحيوانات وبقائها على قيد الحياة يوميا. ابدأ التدخلات التجريبية في الأسبوع التاسع.
    4. القتل الرحيم للحيوانات في ختام الدراسة (باتباع البروتوكولات المعتمدة مؤسسيا). جمع عينات المصل ، والسماح لها بالوقوف لمدة 30 دقيقة ، وجهاز الطرد المركزي لعزل المصل (بعد التقارير المنشورةسابقا 20 ، 21). قم بتشريح أنسجة الأوعية الدموية (الشريان الأورطي البطني) ، واشطفها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) لإزالة الدم.
    5. قم بإصلاح جزء واحد من الأنسجة في 4٪ بارافورمالدهيد للفحص النسيجي وتخزين جزء آخر في النيتروجين السائل للتحليل الجزيئي.
      ملاحظة: خفف الساليدروسيد بالماء الدافئ قبل الاستخدام.

3. تقييم إصابة الأنسجة الوعائية باستخدام تلطيخ HE ، VK ، EVG

ملاحظة: قم بإصلاح أنسجة الأوعية الدموية (الشريان الأورطي البطني) في 4٪ بارافورمالدهيد ، والجفاف في الإيثانول بعد 48 ساعة ، ومغموس في البارافين. قم بتقطيع كتل البارافين المدمجة إلى شرائح 5 ميكرومتر لتلوين Hematoxylin-Eosin (HE) و Elastica van Gieson (EVG) و Von Kossa (VK) ، ومراقبة التشكل النسيجي تحت المجهر الضوئي. يستخدم تلطيخ HE لتقييم التغيرات في مورفولوجيا الأنسجة. في أنسجة الأوعية الدموية ، يسلط الضوء على التغيرات الهيكلية في جدار الأوعية الدموية ، بما في ذلك تكاثر خلايا العضلات الملساء ، وترتيب الخلايا غير المنظم ، والالتهاب. يصور تلطيخ EVG ألياف مرنة وكولاجين ، وهو أمر ضروري لتقييم تلف الألياف المرنة أو إعادة تشكيلها في أنسجة الأوعية الدموية ويساعد في فهم تأثير التكلس على مرونة الأوعية الدموية. يكتشف تلطيخ VK رواسب الكالسيوم ، وهي ميزة رئيسية في VC ، مما يجعله ضروريا لتقييم مدى وتوزيع التكلس في أنسجة الأوعية الدموية22،23.

  1. تلطيخ HE للكشف عن تلف أنسجة الأوعية الدموية
    1. إزالة البارافين والجفاف
      1. قم بإزالة المقاطع في تغييرين من الزيلين لمدة 8 دقائق لكل منهما وإعادة الترطيب من خلال سلسلة الإيثانول المتدرجة (100٪ ، 95٪ ، 85٪ ، 75٪) لمدة 3 دقائق لكل خطوة. يتبع ذلك بشطف لمدة دقيقتين بماء الصنبور الجاري.
    2. تلطيخ الهيماتوكسيلين
      1. قم بتلطيخ الأقسام بالهيماتوكسيلين لمدة 5-10 دقائق واغسلها لإزالة البقع الزائدة ، متبوعا بشطف بماء الصنبور الجاري.
        ملاحظة: يوصى باستخدام بقعة خفيفة لمدة 5 دقائق لتجنب البقع الداكنة بشكل مفرط ، والتي يمكن أن تؤثر على اللون السيتوبلازمي.
    3. التمايز
      1. قم بتمييز الأقسام في محلول تمايز لمدة 30 ثانية ، متبوعا بشطفتين في ماء الصنبور لمدة 3 دقائق لكل منهما.
    4. تلطيخ الإيوسين
      1. ضع الأقسام في بقعة اليوزين لمدة 1 دقيقة. بعد إزالة البقعة الزائدة ، قم بإجراء الجفاف السريع.
    5. الجفاف والتوضيح والتركيب
      1. للجفاف السريع ، اغمس الأقسام في 75٪ و 85٪ و 95٪ و 100٪ من الإيثانول لمدة 3 ثوان لكل منها ، متبوعا ب 100٪ إيثانول لمدة دقيقة واحدة.
        ملاحظة: يوصى بالجفاف السريع لأن اليوزين قد يفقد لونه في الماء وتدرجات الإيثانول.
  2. تلطيخ VK للكشف عن الكالسيوم
    1. إزالة البارافين والجفاف
      1. قم بتنفيذ هذه الخطوة باتباع الخطوة 3.1.1.
    2. تفاعل نترات الفضة
      1. جفف الأقسام ، وحددها بفرشاة ناعمة ، وصمة عار باستخدام Von Kossa (انظر جدول المواد). قم بتعريضها للأشعة فوق البنفسجية لمدة 4 ساعات ، ثم اشطفها جيدا بماء الصنبور الجاري.
    3. مكافحة التلوين باستخدام الهيماتوكسيلين
      1. قم بتلطيخ الأقسام بالهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق ، واشطفها بماء الصنبور الجاري ، وقم بتمييزها ، ثم اشطفها مرة أخرى ، متبوعا بشطف ماء الصنبور الجاري.
    4. تلطيخ الإيوسين
      1. قم بتجفيف الأقسام من خلال الإيثانول المتدرج (85٪ و 95٪ لمدة 5 دقائق لكل منهما) ، ثم قم بتلطيخ الإيوزين لمدة 5 دقائق.
    5. الجفاف والتركيب
      1. قم بتجفيف الأقسام في حمامات الإيثانول (100٪ الإيثانول الأول والثاني والثالث لمدة 5 دقائق لكل منهما) وتوضيح في حمامات الزيلين (الزيلين الأول والثاني لمدة 5 دقائق لكل منهما). ثم قم بتركيب الأقسام ببلسم محايد.
    6. الفحص المجهري والتقاط الصور
      1. افحص الأقسام الملطخة تحت المجهر الضوئي والتقط الصور لتحليلها.
        ملاحظة: تأكد من أن رواسب الكالسيوم تظهر بني-أسود إلى أسود داكن ، والنوى زرقاء ، والخلفية حمراء. قم بإعداد محلول نترات الفضة لتلوين VK الطازج مباشرة قبل الاستخدام.
  3. تلطيخ EVG للألياف المرنة والكولاجين
    1. إزالة البارافين والجفاف
      1. عالج أقسام البارافين بالحرارة لمدة 50 دقيقة ، ثم اغمرها في الزيلين لمدة 20 دقيقة لإزالة البارافين. تابع بإخضاع الأقسام لسلسلة الإيثانول المتدرجة (100٪ ، 95٪ ، 85٪ ، 75٪) لمدة 5 دقائق لكل منها ، وتنتهي بشطف في ماء الصنبور الجاري لمدة 5 دقائق.
    2. تلطيخ EVG
      1. ضع محلول تلطيخ EVG (انظر جدول المواد) لمدة 10 دقائق ، ثم اشطفه لفترة وجيزة بماء الصنبور الجاري لمدة 5 ثوان لإزالة البقعة الزائدة.
      2. بعد ذلك ، ضع محلول عمل Verhoeff (انظر جدول المواد) لمدة 5 دقائق ، متبوعا بشطف قصير آخر في ماء الصنبور الجاري لمدة 5 ثوان. ضع محلول Verhoeff المميز لمدة 5 ثوان حتى تظهر ألياف الإيلاستين بوضوح ، ثم اشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة 5 ثوان.
        ملاحظة: امزج المكونات A و B و C (المتوفرة في المجموعة المتوفرة تجاريا) بنسبة 5: 2: 2 لتحضير محلول عمل Verhoeff قبل الاستخدام. استخدم المحلول في غضون 2 ساعة وقم بتجديده حسب الحاجة أثناء عملية التلوين لمنع الأقسام من الجفاف.
    3. الجفاف والتركيب
      1. قم بتجفيف الأقسام من خلال سلسلة إيثانول متدرجة (75٪ و 85٪ و 95٪ و 100٪) لمدة 5 ثوان لكل منهما ، متبوعا بتوضيح في تغييرين من الزيلين لمدة 1 دقيقة لكل منهما. بعد فترة وجيزة من تجفيف الهواء ، قم بتركيب الأقسام ببلسم محايد.
    4. الفحص المجهري وتحليل الصور
      1. افحص الأقسام الملطخة تحت المجهر الضوئي لتصور ألياف المرونة والكولاجين ، والتقاط الصور لتحليلها لاحقا.

4. فحص الفوسفاتيز القلوي (ALP)

ملاحظة: استخدم ALP كمؤشر رئيسي لتقييم فعالية العلاجات المضادة للتكلس.

  1. تحضير الكاشف
    1. قم بإذابة الركيزة النامية للون في محلول كربونات مثلج 0.05 م درجة حموضة 9.6 إلى حجم نهائي يبلغ 2.5 مل.
      ملاحظة: قم بإعداد المخزن المؤقت عن طريق إذابة 1.59 جم من كربونات الصوديوم و 2.93 جم من بيكربونات الصوديوم في 1,000 مل من الماء المقطر المزدوج.
  2. تخفيف الركيزة
    1. قم بتخفيف 10 ميكرولتر من محلول p-nitrophenol (10 ملليمتر) مع 0.05 M pH 9.6 كربونات إلى حجم نهائي قدره 0.2 مل لتحقيق تركيز نهائي قدره 0.5 مل.
  3. تحضير العينة
    1. تجانس الشريان الأورطي البطني في عازلة التحلل. جهاز الطرد المركزي المتجانس (~ 12,000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية) وجمع المادة الطافية للكشف عن نشاط ALP.
      ملاحظة: تأكد من خلو المخزن المؤقت للتحلل من مثبطات الفوسفاتيز. قم بتخزين عينات الاختبار المعلقة عند -80 درجة مئوية ، وتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة.
  4. تحضير الصفيحة الدقيقة للفحص
    1. قم بإعداد صفيحة سعة 96 بئرا مع آبار فارغة وقياسية وعينات. أضف 50 ميكرولتر من المحلول القياسي إلى الآبار القياسية و 50 ميكرولتر من عينات الاختبار المعلقة لأخذ عينات من الآبار. احتضن الطبق عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
  5. إنهاء التفاعل وقياس الامتصاص
    1. أضف 100 ميكرولتر من محلول التوقف إلى كل بئر لإنهاء التفاعل. قم بقياس الامتصاص عند 405 نانومتر واحسب نشاط ALP بناء على قيم الامتصاص (باتباع تعليمات الشركة المصنعة ، انظر جدول المواد).
      ملاحظة: ستظهر الآبار التي تحتوي على المعيار أو العينات ذات نشاط ALP ظلالا متفاوتة من اللون الأصفر. اللون مستقر لمدة تصل إلى 2 ساعة.

5. تحديد محتوى الكالسيوم

ملاحظة: يعد تحديد محتوى الكالسيوم أمرا بالغ الأهمية لتقييم مدى التمعدن في الأنسجة البيولوجية.

  1. تحضير الأنسجة
    1. افرم الأنسجة إلى قطع صغيرة وتجانس في محلول التحلل.
  2. تخفيف العينة والطرد المركزي
    1. تمييع الأنسجة في محلول التحلل بنسبة 1:10. قم بتجانس الخليط وجهاز الطرد المركزي عند 4 درجات مئوية ، 12,000 × جم لمدة 5 دقائق. اجمع المادة الطافية للتحليل.
      ملاحظة: قم بإعداد التخفيفات القياسية للكالسيوم (0-1.0 ملم) باستخدام محلول قياسي للكالسيوم 5 ملي مولار (انظر جدول المواد).
  3. إعداد اللوحة وحضانة
    1. أضف 50 ميكرولتر من العينات القياسية أو الاختبارية إلى كل بئر من صفيحة 96 بئرا. أضف 150 ميكرولتر من محلول عمل الفحص ، واخلطه جيدا ، واحتضن اللوحة في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. قم بقياس الامتصاص عند 575 نانومتر وقم ببناء منحنى قياسي.
  4. حساب محتوى الكالسيوم
    1. احسب محتوى الكالسيوم باستخدام المنحنى القياسي ، مع دمج عامل التخفيف وحجم العينة والوزن الذري للكالسيوم.

6. مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) للسيتوكينات الالتهابية (IL-6 ، TNF-α ، IL-1β)

ملاحظة: IL-6 و IL-1β و TNF-α هي السيتوكينات الرئيسية المؤيدة للالتهابات التي تشير إلى وجود وشدة الاستجابة الالتهابية. يعد قياس هذه السيتوكينات أمرا ضروريا لفهم العملية الالتهابية وتقييم فعالية العلاجات المضادة للالتهابات.

  1. جمع العينات
    1. اجمع المصل من الشريان الأورطي البطني للفئران. اتركه يتخثر في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة. قم بالطرد المركزي للعينة عند 3,000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية وجمع المادة الطافية.
  2. تحضير الصفيحة الدقيقة للفحص
    1. قم بإعداد صفيحة سعة 96 بئرا مع آبار مخصصة للمعايير وعينات الاختبار. أضف 50 ميكرولتر من المعايير (انظر جدول المواد) بتركيزات متفاوتة إلى الآبار المناسبة.
  3. تحضير العينة
    1. أضف 40 ميكرولتر من مخفف العينة إلى كل بئر مخصص لعينات الاختبار. أضف 10 ميكرولتر من العينة إلى نفس الآبار ، مما ينتج عنه تخفيف 5 أضعاف.
  4. حضانة الكواشف المسماة بالإنزيم
    1. أضف 100 ميكرولتر من الكواشف المسماة بالإنزيم الخاصة ب IL-6 أو TNF-α أو IL-1β إلى جميع الآبار باستثناء الفراغ. احتضان الطبق عند 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة.
  5. غسل
    1. تخلص من السائل من جميع الآبار باستثناء الفراغ. اغسل الآبار بمحلول غسيل 1x (محضر على شكل تخفيف 20 ضعفا في الماء المقطر). كرر خطوة الغسيل هذه خمس مرات وجفف الآبار.
  6. تطوير اللون وإنهاؤه
    1. أضف 50 ميكرولتر من محاليل الركيزة A و B (من المجموعة المتاحة تجاريا ، انظر جدول المواد) إلى كل بئر. تخلط برفق وتحتضن الطبق عند 37 درجة مئوية في الظلام لمدة 15 دقيقة. أضف 50 ميكرولتر من محلول التوقف إلى كل بئر لإنهاء التفاعل.
  7. قياس الامتصاص وتحليل البيانات
    1. اضبط الفراغ جيدا على الصفر. قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة. قم بإنشاء منحنى قياسي بناء على قيم OD والتركيزات القياسية. احسب تركيزات العينة باستخدام الاستيفاء واضبط عامل التخفيف.

7. فحص ملف تعريف الدهون

ملاحظة: يكتشف اختبار ملف الدهون مستويات الدهون غير الطبيعية ، حيث يمكن أن تؤدي مستويات الدهون المرتفعة أو غير المتوازنة إلى تسريع خطر تكلس الأوعية الدموية.

  1. الكوليسترول الكلي والدهون الثلاثية (TC و TG)
    1. اجمع المصل وقم بإعداد صفيحة مكونة من 96 بئرا مع آبار مخصصة لعينات الاختبار الفارغة والمعايرة والاختبار المعلقة. أضف 2.5 ميكرولتر من المصل أو معيار المعايرة أو المحلول الفارغ لكل بئر.
    2. أضف 250 ميكرولتر من محلول العمل لكل بئر. تخلط برفق وتحتضن الطبق عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. قم بقياس الامتصاص عند 500 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة.
  2. البروتين الدهني منخفض الكثافة والبروتين الدهني عالي الكثافة (LDL-C و HDL-C)
    1. اجمع المصل وقم بإعداد صفيحة مكونة من 96 بئرا مع آبار مخصصة لعينات الاختبار الفارغة والمعايرة والاختبار المعلقة. أضف 2.5 ميكرولتر من المصل أو معيار المعايرة أو المحلول الفارغ إلى الآبار المعنية.
    2. أضف الكاشف المناسب (الكاشف الأول ل 180 ميكرولتر أو الكاشف الثاني ل 60 ميكرولتر ، انظر جدول المواد) إلى كل بئر كما هو محدد في تعليمات مجموعة الفحص. احتضان عند درجة الحرارة (37 درجة مئوية) وللوقت (الكاشف الأول لمدة 5 دقائق أو الكاشف الثاني لمدة 10 دقائق) الموصى به لكل كاشف.
    3. قم بقياس الامتصاص عند الطول الموجي المحدد (600 نانومتر) الموضح ل LDL-C أو HDL-C باستخدام قارئ صفيحة دقيقة.

8. النشاف الغربي

ملاحظة: تعتبر اللطخة الغربية (WB) مفيدة في تقييم مستويات التعبير عن البروتينات الرئيسية ، مما يسمح باكتشاف كل من الأشكال الكلية والفسفرة.

  1. تحضير الأنسجة
    1. تزن 0.05 غرام من المناديل واشطفها جيدا باستخدام PBS لإزالة الحطام الزائد. أضف 500 ميكرولتر من محلول التحلل الذي يحتوي على 1x مثبطات الفوسفاتيز والبروتياز. احتضان الأنسجة عند 4 درجات مئوية لمدة 10 دقائق وقم بتجانسها باستخدام مطحنة الأنسجة.
  2. استخراج البروتين
    1. اترك العينة المتجانسة تقف لمدة دقيقة واحدة ، ثم جهاز الطرد المركزي عند 4 درجات مئوية و 12,000 × جم لمدة 15 دقيقة. اجمع المادة الطافية لتحليل البروتين. حدد تركيز البروتين باستخدام طريقة BCA باتباع تعليمات الشركة المصنعة (انظر جدول المواد). استخدم منحنى قياسيا لحساب التركيز.
      ملاحظة: قم بتبريد جهاز الطرد المركزي مسبقا إلى 4 درجات مئوية قبل الاستخدام. قم بقياس تركيز البروتين عند 562 نانومتر.
  3. تحضير العينة
    1. امزج عينة البروتين مع 5x تحميل المخزن المؤقت الذي يحتوي على β-mercaptoethanol و SDS بنسبة 4: 1. سخني الخليط على حرارة 100 درجة مئوية لمدة 5 دقائق لتغيير طبيعة البروتينات.
      ملاحظة: إذا كان المخزن المؤقت للتحميل 1x مطلوبا، فقم بتخفيف المخزن المؤقت 5x باستخدام المخزن المؤقت للتحلل.
  4. تحضير جل SDS-PAGE
    1. قم بإعداد جل SDS-PAGE بنسبة 12٪ وضعه في جهاز الرحلان الكهربائي. أضف 1x مخزن مؤقت للرحلان الكهربائي حتى علامة منتصف الطريق وفقا للتعليمات (انظر الجدول التكميلي 2).
  5. الرحلان الكهربائي
    1. استرجع عينات البروتين من -20 درجة مئوية. قم بتحميل 60 ميكروغرام من البروتين لكل بئر وقم بتشغيل الجل.
    2. اضبط التيار على 50 مللي أمبير لمدة 20 دقيقة لجل التكديس ، ثم قم بزيادة إلى 100 مللي أمبير لمدة 60 دقيقة للجل المنفصل حتى تصل مقدمة الصبغة إلى القاع.
  6. نقل الغشاء
    1. قم بتنشيط غشاء PVDF في الميثانول لمدة 5 دقائق.
    2. قم بتجميع شطيرة النقل بالترتيب التالي: ورق الترشيح → جل SDS-PAGE → غشاء PVDF → ورق الترشيح. نقل البروتينات عند 300 مللي أمبير لمدة 60 دقيقة.
      ملاحظة: تأكد من عدم وجود فقاعات هواء محاصرة بين جل SDS-PAGE وغشاء PVDF.
  7. حظر
    1. احتضان غشاء PVDF في 5٪ BSA (محضر في 1x TBST) في درجة حرارة الغرفة مع رج لطيف لمدة 60 دقيقة. اغسل الغشاء ب 1x TBST ثلاث مرات لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  8. حضانة الأجسام المضادة الأولية
    1. احتضان الغشاء في 5 مل من الجسم المضاد الأولي المناسب (على سبيل المثال ، p-JAK2 ، JAK2 ، p-STAT3 ، STAT3 ، p-NF-κB p65 ، NF-κB p65 ، IκBα) المخفف في مانع المخزن المؤقت في درجة حرارة الغرفة لمدة 2.5 ساعة.
  9. حضانة الأجسام المضادة الثانوية
    1. اغسل الغشاء ب 1x TBST ثلاث مرات لمدة 5 دقائق لكل منها بعد حضانة الأجسام المضادة الأولية. احتضان بالجسم المضاد الثانوي المناسب في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. اغسل الغشاء مرة أخرى باستخدام 1x TBST ثلاث مرات لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  10. الكشف
    1. تصور نطاقات البروتين باستخدام اكتشاف التلألؤ الكيميائي ECL24 (انظر جدول المواد).
  11. تحليل قياس الكثافة
    1. تحديد نطاقات البروتين باستخدام برنامج ImageJ. اتبع سير العمل هذا في ImageJ: Image → 8 بت → Process → Subtract Background. تحليل القياسات → تعيينها → تحليل → تعيين المقياس. تحرير → عكس → تحليل → قياس → النتائج. → الملف حفظ باسم → intDen.
    2. إنشاء الرسوم البيانية الإحصائية باستخدام الرسوم البيانية وبرامج التحليل الإحصائي.
      ملاحظة: تأكد من أن النتائج متسقة عبر النسخ المتماثلة للتحقق من صحة النتائج.

9. التحليل الإحصائي

  1. جمع البيانات وتنظيمها باستخدام GraphPad Prism 9.0.
  2. احسب ورسمها أشرطة الخطأ باستخدام متوسط ± SD من البيانات الأولية.
  3. قم بإجراء التحليل الإحصائي باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه ، متبوعا باختبار Tukey اللاحق للمقارنات المتعددة.
  4. حدد الدلالة الإحصائية عند P < 0.05 ، مع وجود قيم P أصغر تشير إلى اختلافات أكبر في النتائج.

النتائج

تحليل الصيدلة الشبكية

باستخدام قواعد بيانات مثل HERB و TCMSP و Pubmed و SwissTargetPrediction و CTD و PharmMapper و SEA و STITCH ، تم تحديد 388 جينا مستهدفا محتملا لساليدروسيد. بالإضافة إلى ذلك ، تم استرداد 2871 جينا مستهدفا محتملا متعلقا ب VC من قواعد بيانات مثل GeneCards و OMIM و PharmGkb و Dr...

Discussion

يتميز VC بالتغيرات التنكسية في خلايا الأوعية الدموية والأنسجة ، مع وجود رواسب معدنية مرضية داخل الأوعية الدموية تؤدي إلى تصلب جدران الأوعية الدموية أو تكوين لويحات تصلب الشرايين ، والتي يمكن أن تؤدي إلى أمراض الأوعية الدمويةالانسدادية 25. تشير الدراسات إلى ?...

Disclosures

تأكد من أن جميع المؤلفين قد كشفوا عن أي وجميع تضارب المصالح.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل ماليا من قبل مشروع إدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة جيلين (YDZJ202301ZYTS460) ، ومشروع إدارة التعليم في مقاطعة جيلين (JJKH20230991KJ).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
30% (29:1) Acrylamide/Bis SolutionBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd ,ChinaA1010
4% Paraformaldehyde Fix SolutionBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaP0099
5*loading bufferBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd ,ChinaP1040
Alkaline Phosphatase Assay KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaP0321S
AlphaView SoftwareProteinsimple Inc.USAAlphaView SA
BCA Protein Assay KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaP0012
Bluing SolutionBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd ,ChinaG1866
Calcium Colorimetric Assay KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaS1063S
Collagen Fiber And Elastic Fiber Staining Kit(EVG-Verh eff Method)Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd ,ChinaG1597
Dewatering machineDiapath Biosciences  Ltd, ItalyDonatello
Embedding machineWuhan Junjie Electronics Co., Ltd,ChinaJB-P5
Enzyme-labeled instrument Biotek Co., Ltd,USAEpoch
Ethanol absoluteGHTECH  Co., Ltd, China64-17-5
Goat Anti-Mouse IgG (H+L) HRPBioworld technology, co, Ltd.,ChinaBS20242-Y
GraphPad Prism SoftwareGraphPad Software.,USAGraphPad Prism 9.0
Hematoxylin-Eosin Stain KitBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd ,ChinaG1120
High-density lipoprotein cholesterol assay kitNanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd,ChinaA112
HRP-labeled Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)Guangzhou saiguo biotech Co.,LTDA0208
Image J SoftwareNational Institutes of Health(NIH),USAImage J 
IκB Alpha Polyclonal antibodyProteintech Group, Inc.A,USA10268-1-AP
JAK2 AntibodyAffinity Biosciences Co., Ltd,ChinaAF6022
Low-density lipoprotein cholesterol assay kitNanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd,ChinaA113
NF-κB p65 AntibodyProteintech Group, Inc.A,USA10745-1-AP
Pathological microtomeLeica Biosystems,USARM2016
Phosphatase Inhibitor Cocktail TablesF. Hoffmann-La Roche, Ltd,Switzerland04906845001
Phospho-JAK2 (Tyr931) AntibodyAffinity Biosciences Co., Ltd,ChinaAF3024
Phospho-NF-κB p65(Ser276) AntibodyAffinity Biosciences Co., Ltd,ChinaAF2006
Phospho-STAT3(S727) AntibodyAbways  Science & Technology Co., Ltd ,ChinaCY5291
Protease Inhibitor Cocktail F. Hoffmann-La Roche, Ltd,Switzerland11873580001
PVDF membraneF. Hoffmann-La Roche, Ltd,Switzerland3010040001
Rat IL-1β ELISA KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaPI303
Rat IL-6 ELISA KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaPI328
Rat TNF-α ELISA KitBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaPT516
RIPA Lysis BufferBeyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaP0013B
SalisorosideShanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd,ChinaS25475
SDSGuangzhou saiguo biotech Co.,LTD,China3250KG001
Sodium carbonateChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , China1001921933
Sodium hydrogen carbonateChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , China10018960
Sodium thiosulfateChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , China20042518
STAT3 AntibodyProteintech Group, Inc.A,USA10253-2-AP
TBST (10×)Beyotime Biotech Inc (Beyotime) , ChinaST673
Total cholesterol assay kitNanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd,ChinaA111
Triglyceride assay kitNanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd,ChinaA110
Tris BaseGuangzhou saiguo biotech Co.,LTD1115GR500
Upright optical microscopeNikon Corporation,JapanEclipse E100
Von Kossa Solution Wuhan servicebio technology CO.,LTD,ChinaG1043
Western Blotting Luminol ReagentSanta Cruz Biotechnology, Inc. ,USASC-2048
β-Actin antibody Cell Signaling Technology, Inc.,USAE4967

References

  1. Sutton, N. R., et al. Molecular mechanisms of vascular health: Insights from vascular aging and calcification. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 43 (1), 15-29 (2023).
  2. Henein, M. Y., Owen, A. Statins moderate coronary stenoses but not coronary calcification: Results from meta-analyses. Int J Cardiol. 153 (1), 31-35 (2011).
  3. Ajufo, E., et al. Value of coronary artery calcium scanning in association with the net benefit of aspirin in primary prevention of atherosclerotic cardiovascular disease. JAMA Cardiol. 6 (2), 179-187 (2021).
  4. Vossen, L. M., Kroon, A. A., Schurgers, L. J., De Leeuw, P. W. Pharmacological and nutritional modulation of vascular calcification. Nutrients. 12 (1), 100 (2019).
  5. Kereiakes, D. J., et al. Principles of intravascular lithotripsy for calcific plaque modification. JACC Cardiovasc Interv. 14 (12), 1275-1292 (2021).
  6. Demer, L. L., Watson, K. E., Boström, K. Mechanism of calcification in atherosclerosis. Trends Cardiovasc Med. 4 (1), 45-49 (1994).
  7. Chen, F., et al. Network pharmacology analysis combined with experimental validation to explore the therapeutic mechanism of salidroside on intestine ischemia-reperfusion. Biosci Rep. 43 (8), BSR20230539 (2023).
  8. Rong, L., et al. Salidroside induces apoptosis and protective autophagy in human gastric cancer ags cells through the pi3k/akt/MTOR pathway. Biomed Pharmacother. 122, 109726 (2020).
  9. Zhang, P., et al. Network pharmacology: Towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518 (2023).
  10. Jiao, X., et al. A comprehensive application: Molecular docking and network pharmacology for the prediction of bioactive constituents and elucidation of mechanisms of action in component-based Chinese medicine. Comput Biol Chem. 90, 107402 (2021).
  11. Li, S., Zhang, B. Traditional Chinese medicine network pharmacology: Theory, methodology and application. Chin J Nat Med. 11 (2), 110-120 (2013).
  12. Wang, X., Hu, Y., Zhou, X., Li, S. Editorial: Network pharmacology and traditional medicine: Setting the new standards by combining in silico and experimental work. Front Pharmacol. 13, 1002537 (2022).
  13. Huang, Z., Yang, Y., Fan, X., Ma, W. Network pharmacology-based investigation and experimental validation of the mechanism of scutellarin in the treatment of acute myeloid leukemia. Front Pharmacol. 13, 952677 (2022).
  14. Zhang, R., Zhu, X., Bai, H., Ning, K. Network pharmacology databases for traditional Chinese medicine: Review and assessment. Front Pharmacol. 10, 123 (2019).
  15. Wang, C., Liu, X., Guo, S. Network pharmacology-based strategy to investigate the effect and mechanism of alpha-solanine against glioma. BMC Complement Med Ther. 23 (1), 371 (2023).
  16. Li, X., et al. Network pharmacology prediction and molecular docking-based strategy to explore the potential mechanism of Huang Lian jiedu decoction against sepsis. Comput Biol Med. 144, 105389 (2022).
  17. Holmes, R. S., et al. Recommended nomenclature for five mammalian carboxylesterase gene families: Human, mouse, and rat genes and proteins. Mamm Genome. 21 (9-10), 427-441 (2010).
  18. Geng, J., Zhou, G., Guo, S., Ma, C., Ma, J. Underlying mechanism of traditional herbal formula Chuang-ling-ye in the treatment of diabetic foot ulcer through network pharmacology and molecular docking. Curr Pharm Des. 30 (6), 448-467 (2024).
  19. Chen, X., et al. Puerarin inhibits emt induced by oxaliplatin via targeting carbonic anhydrase xii. Front Pharmacol. 13, 969422 (2022).
  20. Herrmann, J., Babic, M., Tolle, M., Van Der Giet, M., Schuchardt, M. Research models for studying vascular calcification. Int J Mol Sci. 21 (6), 2204 (2020).
  21. Zhou, H., X, W., Yuan, Y., Qi, X. Comparison of methods for establishing a rat model of atherosclerosis using three doses of vitamin D3 and atherogenic diet. Chin J Arterioscler. 20 (11), 995-998 (2012).
  22. Zhang, Y., et al. Il-18 mediates vascular calcification induced by high-fat diet in rats with chronic renal failure. Front Cardiovasc Med. 8, 724233 (2021).
  23. Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic verhoeff-van gieson staining in dermatopathology. J Cutan Pathol. 40 (2), 211-225 (2013).
  24. Tang, X., et al. Underlying mechanism and active ingredients of tianma gouteng acting on cerebral infarction as determined via network pharmacology analysis combined with experimental validation. Front Pharmacol. 12, 760503 (2021).
  25. Lee, S. J., Lee, I. K., Jeon, J. H. Vascular calcification-new insights into its mechanism. Int J Mol Sci. 21 (8), 2685 (2020).
  26. Magdic, J., et al. Intracranial vertebrobasilar calcification in patients with ischemic stroke is a predictor of recurrent stroke, vascular disease, and death: A case-control study. Int J Environ Res Public Health. 17 (6), 2013 (2013).
  27. Zhou, L., et al. Salidroside-pretreated mesenchymal stem cells contribute to neuroprotection in cerebral ischemic injury in vitro and in vivo. J Mol Histol. 52 (6), 1145-1154 (2021).
  28. Hutcheson, J. D., Goettsch, C. Cardiovascular calcification heterogeneity in chronic kidney disease. Circ Res. 132 (8), 993-1012 (2023).
  29. Zhang, X., et al. Salidroside: A review of its recent advances in synthetic pathways and pharmacological properties. Chem Biol Interact. 339, 109268 (2021).
  30. Zhang, P., Li, Y., Guo, R., Zang, W. Salidroside protects against advanced glycation end products-induced vascular endothelial dysfunction. Med Sci Monit. 24, 2420-2428 (2018).
  31. Li, Y., et al. Salidroside promotes angiogenesis after cerebral ischemia in mice through shh signaling pathway. Biomed Pharmacother. 174, 116625 (2024).
  32. Gao, X. F., Shi, H. M., Sun, T., Ao, H. Effects of radix et rhizoma Rhodiolae kirilowii on expressions of von Willebrand factor, hypoxia-inducible factor 1 and vascular endothelial growth factor in myocardium of rats with acute myocardial infarction. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 7 (5), 434-440 (2009).
  33. Li, X., Liu, C., Li, Y., Xiong, W., Zuo, D. Inflammation promotes erythropoietin induced vascular calcification by activating p38 pathway. Bioengineered. 13 (3), 5277-5291 (2022).
  34. Bessueille, L., Magne, D. Inflammation: A culprit for vascular calcification in atherosclerosis and diabetes. Cell Mol Life Sci. 72 (13), 2475-2489 (2015).
  35. Li, R., et al. Salidroside prevents tumor necrosis factor-alpha-induced vascular inflammation by blocking mitogen-activated protein kinase and nf-kappa B signaling activation. Exp Ther Med. 18 (5), 4137-4143 (2019).
  36. Xing, S. S., et al. Salidroside attenuates endothelial cellular senescence via decreasing the expression of inflammatory cytokines and increasing the expression of sirt3. Mech Ageing Dev. 175, 1-6 (2018).
  37. Hopkins, A. L. Network pharmacology. Nat Biotechnol. 25 (10), 1110-1111 (2007).
  38. Xin, P., et al. The role of jak/stat signaling pathway and its inhibitors in diseases. Int Immunopharmacol. 80, 106210 (2020).
  39. Fu, X., et al. Glycosides from buyang huanwu decoction inhibit atherosclerotic inflammation via jak/stat signaling pathway. Phytomedicine. 105, 154385 (2022).
  40. Macri, F., et al. High phosphate-induced jak-stat signalling sustains vascular smooth muscle cell inflammation and limits calcification. Biomolecules. 14 (1), 107328 (2023).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JAK2 STAT3

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved