Üç klinik deney, fekal mikrobiyota transplantasyonunun bir dizi insan hastalığı için terapötik potansiyel taşıdığını göstermiştir. Daha ileri mekanik çalışmalar, FMT'nin tezgahtan başucuna getirilmesine yardımcı olacaktır. Bu yöntem, teslimat yolu için oral gavajı benimseyerek daha hassas hacim dağıtımı ve hızlı emilim sağlar.
Sadece ılımlı teknik beceriler gerektirir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan kıdemli bir araştırma görevlisi olan Xioying Zhong olacak. Steril kağıt havlular, künt uç forsepsler ve 50 mililitrelik konik tüpler hazırlayarak başlayın.
Bazı kağıt havluları ve forsepsleri ayrı otoklav torbalara yerleştirin ve 30 dakika boyunca kuru ısıda 180 santigrat derecede otoklav yapın. Steril konik tüpleri tartın ve ağırlıklarını tüplere yazın. Hayvan odasındaki biyogüvenlik dolabını açın.
Herhangi bir yatak takımı olmadan otoklavlanmış temiz bir fare kafesi alın ve biyogüvenlik kabinine yerleştirin. Kapağı ve yiyecek rafını çıkarın ve kabinin içine yerleştirin. Steril kağıt havluları kafesin altına yerleştirin ve metal rafı kafesin üstüne geri yerleştirin.
Yaşa uygun dışkı donörlerini tanımlayın ve fare kafesini biyogüvenlik kabinine yerleştirin. Kafesi açın ve kuyruğundan bir donör fareyi yavaşça tutun ve temiz kafesin üstündeki metal rafa yerleştirin. Kafes kapağını rafın üstüne yerleştirin ve hayvanın dışkılamasını bekleyin.
Dışkı peletlerini toplayın ve steril 50 mililitrelik konik bir tüpe koyun. Peletleri cinsiyete göre çekin. Tüpü tekrar tartın ve dışkı peletlerinin ağırlığını hesaplayın.
Normal saline% 10 gliserol çözeltisi ekleyerek steril bir çözelti hazırlayın. Her gram dışkı peleti için konik tüpe bu çözeltinin 10 mililitresini ekleyin. Dışkıyı yeniden askıya almak için bir duman davlumbazının içindeki tezgah üstü homojenizatör kullanarak bu karışımı 30 saniye boyunca üç kez düşük hızda homojenize edin.
Dışkı süspansiyonunu iki kat steril pamuklu gazlı bezden süzün. Filtratın geçici olarak buzdolabında altı saate kadar saklanması veya steril kriyojenik şişelere paketlenmesi ve eksi 80 derecelik bir dondurucuda saklanması. Standart bir prosedürü izleyerek homojenizatörü veya karıştırıcıyı iyice temizleyin.
Dondurulmuş numuneler kullanıyorsanız, dondurulmuş dışkı süspansiyonunu buz üzerinde çözün. Çözülmüş dışkı süspansiyonunu vorteks yaparak karıştırın. Taze veya çözülmüş dışkı süspansiyonunu bir mililitrelik şırıngalara aktarın.
Fareleri tartın ve doğru gavage iğne boyutunu ve maksimum dozaj hacmini seçin. Farenin burnunun ucundan sternumun dibine kadar olan uzunluğu ölçerek gavage iğnesini test edin. Şırıngayı tuzlu su veya dışkı süspansiyonunda% 10 gliserol ile doldurun ve şırınga ve iğnenin içindeki hava kabarcıklarını çıkarın.
Biyogüvenlik kabinine bir fare kafesi yerleştirin. Plastik kafes kapağını çıkarın ve metal rafı yerinde bırakın. Metal rafı tek elle açın.
Bir fareyi kuyruğundan tut ve metal rafa koy. Fareyi bir elinizle kuyruğundan tutun ve cildi omuzların üzerinden kavrayarak hayvanı dizginlemek için başka bir elin baş parmağını ve orta parmaklarını kullanın. Hayvanın başını yavaşça geriye doğru uzatın ve kafayı bir elinizle yerinde tutun.
Gavage iğnesini ağzın içindeki dilin üstüne yerleştirin. İğne yemek borusuna ulaşana kadar üst palet boyunca yavaşça ilerleyin. İğneyi tek bir hareketle sorunsuz bir şekilde geçirin.
İğne düzgün bir şekilde yerleştirildikten ve doğrulandıktan sonra, iğneye bağlı şırıngayı iterek malzemeyi yavaşça uygulayın. Dozlamadan sonra, iğneyi yavaşça dışarı çekin. Fareyi işaretleyin ve ev kafesine geri getirin.
Zahmetli solunum veya sıkıntı belirtileri arayarak hayvanı beş ila 10 dakika boyunca izleyin. Fekal mikrobiyota transplantasyonundan 12 ila 24 saat sonra fareleri tekrar izleyin. Enzim immünoassayı, B tipi natriüretik peptidin interlökin 10 eksik farenin plazmasında belirgin şekilde yükseldiğini ortaya koydu.
Sağlıklı bir donör fekal mikrobiyota transplantasyonu, B tipi natriüretik peptid seviyelerindeki artışı önemli ölçüde azaltmıştır. Ekokardiyografi, interlökin 10 eksik farede sol ventrikül ejeksiyon fraksiyonunda, vahşi tip farelere kıyasla anlamlı bir azalma tespit etti. Bu azalma fekal mikrobiyota transplantasyonu ile anlamlı olarak azaltıldı.
Bu bulgular, sağlıklı donör fekal mikrobiyota transplantasyonunun kolite bağlı kardiyak bozukluğu azalttığını göstermektedir. Protokolü denerken, doğru gavage iğnesini seçmek çok önemlidir. Esnek plastik besleme tüpleri yeni başlayanlar için daha iyi bir seçim olabilir.
Gavage'den önce hayvan elleçlemesi uygulamak da önemlidir.
