Bu protokol, tümör debulking cerrahisi sonrası kalıntı hastalığın klinik ayarı taklit etmeyi amaçlamaktadır ve bu nedenle postoperatif yara iyileşmesi bağlamında yeni kanser tedavilerini test etmemizi sağlar. Bu tekniğin avantajı, oluşan yara miktarının standardizasyonuna ve tümör miktarının kalmasını sağlamasıdır. Bu teknik özellikle kanserler için yeni tedavilerin belirlenmesinde klinik öncesi çalışmalar için önemlidir, bu yerel olarak nüks hangi yumuşak doku sarkomu bir örnek.
Bu görsel gösteri, deri tarafına bağlı tümörü ortaya çıkarmamızı sağlayan ters çevirme tekniğini göstermek için çok önemlidir. Metin protokolünde açıklandığı gibi, farelerde hazırlanmış kanser hücrelerinin deri altı aşısı ile bu prosedüre başlayın. 12. günde, post inoculation, tümörler yaklaşık 50 milimetre boyutuna ulaştığında, boyun scruffand buprenorfin 100 mikrolitre ile doz fareler, ameliyattan 30 dakika önce.
Tezgah kat ile kaplı ısı yastığı ile cerrahi alan kurmak ve anestezi için bir burun konisi kurmak. Klorhekzadin, bez, gazlı bez, göz jeli, iki kavisli ençes, makas, klip aplikatör, klip sökücü ve klips dolumları da dahil olmak üzere kolay ulaşılabilecek şekilde temiz cerrahi ekipmanlar düzenleyin. Isıtma odasını 37 dereceye ısıtın ve geri kazanım için başka bir ısı yastığı ayarlayın.
Bu yordamın iki kişi gerektirdiğini unutmayın. Bir asistan işlem sırasında farenin nefesini yakından izlemelidir. Metin protokolünde açıklandığı gibi fareyi anestezi ettikten sonra, ameliyata başlamadan önce farenin tamamen anestezi li olduğundan emin olmak için bir tutam testi ve kornea refleks testi yapın.
Göz kuruluğu önlemek için göz kuruluğu az miktarda göz ile farenin gözlerini kaplayın. Klorhekzadin ile cerrahi alanı temizleyerek bu cerrahi başlayın. Perifre ve makas kullanarak tümörden üç milimetre uzakta, dorsal tarafı boyunca bir santimetre düz kesi yapar.
Iyi iyileşmez gibi doğrudan tümör kapsayan deri kesmeyin. Tümörü kesmek için bir neşter kullanmaktan kaçının ve parçaları kepçe cımbız kullanın. Cımbız kullanarak, tümör ve periton arasında fasya ve deri altı yağ dokusu çekin.
Deri altı tümör normalde deri tarafına takılır. Yarayı, cımbızkullanarak tümörün yan tarafındaki deriyi hafifçe tutarak açın ve tümörü dışarıda görülebilmesi için ters çevirin. Makas bir çift kullanarak, kaldırmak için yarısından tümör kapsülü kesip, açılışa en yakın tümörün tabanından başlayarak.
%50 debulk cerrahisi için, tümörün ortasından kes. Kavisli forceps kullanarak çıkarılacak tümör bölümünü kepçe. Debulk bölgesinden kalan tüm kalıntıları topla.
%75 debulk için, %50 tümör debulk yaparak başlayın ve tümörün kalan %50'sinin yarısını kesin. Kavisli forceps kullanarak tümörün%25'ini kepçeyle toplayıp. Cerrahi bölgeyi kapatmak için, kalan tümörü derinin altına geri yerleştirin ve forceps kullanarak, deri fleplerini bir araya getirin ve yara boyunca deriyi hizalayın.
Yaranın kenarından beş milimetre uzakta deriyi bir arada tutun ve çersepse en yakın olan yan taraftaki yarayı kapatmak için cerrahi klipsler kullanın. Hiçbir altta yatan doku maruz olduğundan emin olmak için gerektiği kadar klips uygulayın. Genellikle, klipler arasında iki milimetrelik boşluklar ile üç ila dört klips uygulanır.
Farelerin sıcak ısıtma odasına koyarak kurtarmak için izin verin. Farenin kafesini ısı yastığına yerleştirin. Fareleri anesteziden iyileşene kadar ısıtma odasında izleyin.
Daha sonra, fareleri kafese geri koyun, fareler daha aktif hale gelene kadar 10 dakika daha ısı yastığı üzerinde kafes bırakın. Farelere ıslak ve yumuşak yiyecekler verin. İyileşmek için ameliyattan bir saat sonra fareleri izleyin.
Günün sonunda ve ertesi sabah fareleri tekrar izleyin ve klipslerin yerinde kalmasını sağlayın. Fareleri herhangi bir zamanda gelişi veya neoadjuvan tedavi ile perioperatif olarak tedavi edin, ilgi tedavisine bağlı olarak. Örneğin, aşıdan sonra 15.
Alternatif olarak, fareleri aşılamadan sonra günde 200 mikrogram anti-PD-1 intraperitoneal, 15, 17 ve 19 dozile tedavi edin. 50 milimetrekarelik tümörlerin tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonu, burada noktalı çizgi ile gösterilen adjuvan immünoterapi yokluğunda tümörlerin %100 tekrarlanabilir rebüyüme ile sonuçlanır. Bu nedenle, 50 milimetre lik bir boyuta tümör büyüme kısmi debulk için ideal bir boyut.
Model daha sonra kontrol noktası modüllerine karşı antikorlar kullanılarak adjuvan immünoterapileri test etmek için kullanıldı, sitotoksik T lenfosit ilişkili protein dört ve programlanmış ölüm reseptörü bir. Anti-CTLA-4 ile farelerin tedavisi, %80'lik bir kür oranı ile sonuçlanırken, anti-PD-1 ile farelerin tedavisi %25'lik bir kür oranıile sonuçlanırAnti-PD-1 ile yanıt, yanıt oranını daha da artırmak için yeni kombinasyonları test etme fırsatı sağlar. Kalan tümörün cilde bağlı kalması önemlidir, aksi takdirde kan akımı kesilir ve tümör nekrotik olur.
Bu işlemden sonra tümörler, cerrahinin tümör emzme hücreleri nasıl etkilediğini değerlendirmek için akış sitometrisi gibi çeşitli yöntemlerle analiz edilebilir. Bu fare modeli bize nasıl yara iyileşmesi kanser immünoterapiler etkiler keşfetmek için izin verdi.
