Farelerde Alt Karın Organları nın ve Arka Ekstremitelerin Situ Kapalı Devre Perfüzyonunun Oluşturulması

Bu protokol, devremizde yer alan organlarda ilaç dağıtımı ve bağışıklık etkileşimleri ile ilgili soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu teknik, ana açıklık organlarından kaçınırken, geleneksel ex-vivo yöntemleri ile perfüzyon mümkün değildir organların perfüzyon sağlar. Ameliyata başlamadan önce, bir sirkülasyon su banyosu ve tüm su ceketli bileşenleri ayarlayın, 37 santigrat derece.

Tüpün temizlendiğini onaylayın ve perfusate hacmini sınırlamak için perfusate rezervuarı olarak nemli bir hazne içinde bir kabarcık tuzağı kullanın. Kateterizasyon işlemini gerçekleştirmek için, pedal refleks yanıt eksikliği onaylamak, bir sekiz ila 10 haftalık erkek anestezili ampul fare bakın. Ve fareyi bir strafor tahtasıüzerinde supine pozisyonunda yerleştirin, saat altıda kafası yla.

Bant ile hayvanların uzuvları immobilize ve isopropil alkol ile karın silin. Kesi kenarında ki kanamayı durdurmak için elektro koagülasyonu kullanarak karında T şeklinde bir kesi yapın. Karın aort, vena kava ve yaygın iliak ve iliolombbar arterler ve damarlar ortaya çıkarmak için, karın sağ tarafına mide, jejunum ve kolon itin.

Bir diseksiyon mikroskobu altında, bulmak ve yumurtalık ve iliolombbar arterler ve damarlar 4-Oipek sütür ile ligate. Loop iki 4-O ipek sütür karın aort altında ve inferior vena kava iliak arter ve ven üzerinde yaklaşık bir santimetre yukarıda, bir milimetre arayla. Sonra iliak damarlara en yakın dikiş gevşek bir başını saçık olun.

Hem inferior vena kava ve abdominal aort yatay hizalamak ve germek için bir iğne tutucu kullanın. Ve damarları uzatarak, karın aortuna delik yapmak için 24 kalibrelik kanatlı kalkan IV kateter kullanın. İğne damara yaklaşık bir milimetre girer girmez, iğne çekirdeğini geri çekmek için düğmeye basın ve kateteri yaklaşık beş milimetrelik bir damariçine yerleştirin.

Aynı şekilde, inferior vena kava içine beş milimetre bir kateter yerleştirin. Ve her iki sütüde kateterize damarların etrafına bağlayın. Sonra erector spin a kateterleri hareketsizleştirmek için anlık tutkal uygulayın ve karın organları değiştirin.

Perfüzyon sistemini kurmak için fareyi su ceketli nemli haznedeki silikon pedin üzerine yerleştirin ve kateter kanatlarını 19 kalibrelik iğnelerle pede hareketsiz hale getirin. Arteriyel kateter girişini önceden ısıtılmış perfüzyon tamponuyla doldurun. Kateter girişini boruya takmak için hemostatik forceps ve vidalı konektör kullanın ve giriş perfüzyon tüpünü bantla hareketsiz hale getirin.

Peristaltik akış hızını dakikada 0,6 mililitreye ayarlayın ve perfüzyon çıkışını beş ila 10 dakika boyunca açık tutun ve venöz kateterden kanı yıkayın. Bazı pıhtılar çıkış kateterinde bulunacak, pıhtıları perfusate tamponuyla dışarı atacaktır ve devreyi kapatmak için venöz kateterin ucuna takmak için konektörüzerinde bir vida kullanır. Daha sonra nemli hazneyi, perfüzyon un seviyesini periyodik olarak kontrol etmek üzere iki saate kadar önceden ısıtılmış bir kapakla kapatın.

Burada Hoechst 33342 ve DyLight-649 lektin içeren ringer solüsyonu ile perfüzyon sonrası konfokal görüntüler gösterilmiştir. Kas, kemik iliği, testisler, mesane, prostat ve ayak derisi genellikle etkili bir nükleer ve vasküler boyama göstermektedir. Normal termik perfüzyon üç saat sonra bu dokuların Hematoksilin ve eozin boyama, organların başarılı bir kızarma ortaya koymaktadır, belirgin doku yaralanması ile.

Bu model ilaç alım yollarını anlamak için kullanılabilir, fizyolojik alakasız ortamda. Örneğin, ilaç birikiminde serum bileşenlerinin rolünü anlamak için. Sistemi kullanıyoruz, derideki lipozom birikiminin mekanizmasını anlamak için.