Karin Winterhalter ve Kerstin Semmler için teknik yardım için sana şükrediyoruz. Bu eser küme mükemmellik BrainLinks - BrainTools (hariç 1086) Alman Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntemleri yaşayan hayvanları içeren Regierungspräsidium Freiburg Alman hayvan refah Yasası uyarınca tarafından onaylanmıştır.
1. hazırlıkları
<ol><li>Tasarım ve silikon sonda ve elektrot bağlayıcı implantasyon işlemi sırasında geçici taşıyan bir uygun ekleme aracı inşa. İçin bir örnek özel yapılı ekleme aracı bkz: Şekil 1 .</li>
	<li>Dikkatlice ambalajından seramik uçlu forseps kullanarak silikon sonda ve elektrot konektöründen serbest bırakın.</li>
	<li>Bağlayıcı kartını çıkarın ve güvenli bir şekilde bir stand için bağlı bir timsah kelepçe ile düzeltmek.</li>
	<li>Bir stereoscope kullanarak, sondayı ekleme aracı ile seramik uçlu forseps ile hizalayın. Sonda ekleme aracı için tutkal bir cauterizer ile erimiş parafin bir ~ 2 mm tabaka uygulayın. Bu işlem sırasında sonda shanks dokunmak ilgilen.</li>
	<li>Standart yapışkan bant kullanarak ekleme aracı mili elektrot konektöre düzeltmek. Not üreticiye bağlı olarak, zemin teller implantasyon öncesinde elektrot bağlayıcı kuruluna lehimli gerekebilir. Yalıtım bakır tel vernik izolasyonlu Kalay lehim lehimleme demir (400 ° C) ile uygulanan kullanarak iki kısa parçaları kaldırın. Elektrot bağlayıcı kurulu uygun yuvaları için zemin teller lehim.</li>
	<li>İki ek parça bakır tel izolasyon kaldırın. Üç kez etrafında bir paslanmaz çelik vida (1 mm çapında, 2 mm uzunluk) her çıplak bakır tel sarın. Akı çelik Lehimleme için uygun uygulamak ve vidalı kapak altına bakır tel lehim. Emin olun alt yarısı vida dişi kalıntılarının Kalay lehim ücretsiz.</li>
	<li>Standart bir multimetre tel ve vida arasında elektriksel temas denetlemek için kullanın.</li>
	<li>% 70 etanol daldırma tarafından silikon sonda ve zemin vida shanks dezenfekte (10 s).</li>
	<li>Bir koruyucu kapak sonda implant için bir plastik Pasteur pipet Başkanı ikiye keserek hazırlayın.</li>
</ol>2. implantasyonu ameliyatı
<ol><li>Cerrahi aletler (makas, ince uçlu forseps, cerrahi kelepçeler) sıcak boncuk ısıtıcı ile sterilize. Yüzeylerin % 70 etanol ile silin.</li>
	<li>Anestezi % 3 isoflurane ~ 1 L/dak teslim oksijen ile neden.<ol>
<li>Bakım için 1-%1.5 isoflurane kullanın. İsoflurane konsantrasyon cerrahi tolerans ulaşmak için gereken Not hayvan hayvan değişebilir.</li>
		<li>Hayvan parmak pinching için yanıt vermek başarısız olduğunda istikrarlı cerrahi toleransı elde edilir. Fare solunum hızı izlemek ve isoflurane konsantrasyonu ayarlayın.</li>
		<li>Hayvanın gözleri kurumasını önlemek için merhem uygulamak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Stereotaksik bir çerçeve içinde fare yavaşça belgili tanımlık kulak kanal kulak çubukları ekleyerek bağlayın. Fare Başkanı kulak çubuklarıyla stabil bir kez, bir ağız parçası sürekli isoflurane teslimat için burun üzerine getirin. Fare havlu veya yastık ısıtma yastığını yerleştirin ve buprenorfin subkutan enjekte (ameliyat sonrası analjezi sağlamak için 0,05 - 0,1 mg/kg vücut ağırlığı).</li>
	<li>Standart bir tıraş makinesi ile kafasını tıraş ve cilt % 70 etanol ile dezenfekte. Cerrahi makas kullanarak, kafatasının orta çizgi boyunca deri içine bir kesi yapmak ve deri cerrahi kelepçeler kullanarak açın.</li>
	<li>Hayvan kafasını düzey bregma ve lambda stereotaksik hizalama araç yardımı ile hizalamak. 50'den az µm arasında bregma ve lambda yükseklik uzaklığı olmalıdır. Ayrıca, tanımlanan düzeye, başından bregma kafatası, gelen Derinlik ölçme tarafından medyolateral eksen boyunca yüzeye mesafeler sol ve sağ (Örneğin, 1 mm sol ve sağ tarafında bregma). Baş eğim ayarlayın.</li>
	<li>%3 hidrojen peroksit ile baş temiz ve steril pamuk mendil ile Kuru silin.</li>
	<li>Kranyotomi bir uygun stereotaksik atlas12kullanarak bregma göre konumunu belirler.</li>
	<li>Bir 0.9 mm matkap kafası kullanarak, iki vida kemik zemin ve başvuru vida yerleştirmek için beyincik üzerinde delik. Ayrıca, 1-3 delik ankraj cıvataları için altlık disk implant dengelemek için arzu edilir. Bağlantı vidaları konumunu kranyotomi konumuna bağlıdır. Hipokampüs içine implantasyon için üzerinde kontralateral parietal ve Ipsilateral frontal korteks bağlantı vidaları yerleştirin. Uygun bir tornavida kullanarak kemik vidaları yerleştirin. Beynine nüfuz değil için dikkat ediniz.</li>
	<li>Kranyotomi implantasyon yan etrafında dikdörtgen bir alanda matkap ile yavaş yavaş kafatası incelmesi gerçekleştirin. Sık sık kemik sterilize edilmiş fosfat tampon (PB) ile nemlendirin. Kalan inceltilmiş kafatası yavaşça deldi ve ince (27 G) enjeksiyon iğne ve bir çift cımbız yardımıyla kaldırıldı.</li>
	<li>Dikkatle dura mater bir ince (27 G) enjeksiyon iğneyle delip. İğne ucu cımbız bir çift ile bükme tarafından küçük bir kanca oluşturur ve beyin zarı çıkarılması için çekin. PB beyin yüzey kurumasını önlemek için geçerlidir.</li>
	<li>Stereotaksik bir tutucu elektrot ekleme aracı montaj, bregma tarihinde sonda sıfır ve sonda stereotaksik koordinatları kranyotomi üzerinde taşımak. Yavaş yavaş beyin yüzeye nüfuz. Sonda milleri değil viraj emin olun. Kan damarları Reproduction kaçının.</li>
	<li>Yavaşça sonda ~ 200 µm yukarıda istenen derinlik kadar indirin. Kranyotomi ve shanks sterilize vazelin ile silikon inceleyebilirsek koruma için kapağı. Diş çimento demir vida için sonda Bankası kafatasında düzeltmek için geçerlidir.</li>
	<li>Şu çimento uygulamadan sonra yavaş yavaş hedef derinlik de sonda taşımak. Sonra uygulama çimento sonda yanal hareketi azaltır ve minimal doku hasarı hedef alan sağlar son ~ 200 µm ilerleyen. Not kullanılan çimento kür zaman bu adımı Protokolü'nün etkileyebilir. Hızlı bir şekilde kür çimento, bu adımı atlayın ve doğrudan zarar görmemesi için silikon sonda için hedef derinlik için sonda implant.</li>
	<li>Çimento tedavi vardır sonra balmumu ile bir cauterizer erime ekleme aracı sonda bırakın.</li>
	<li>Ekleme aygıt bağlayıcı Kurulu yayın ve ekleme işleyiciye bağlı bir timsah kelepçe kullanarak kafatası üzerinde uygun bir yerde konumlandırın. Hipokampüs içine sonda implantasyon durumunda kontralateral paryetal kemik üzerinde bağlayıcı kartını yerleştirin. Diş çimento kullanarak kafatası bağlayıcı kuruluna düzeltmek.</li>
	<li>İki vidayı beyincik üzerinde bağlı kablo bağlayıcı gemide zemin ve başvuru teller lehim.</li>
	<li>Doğru yüksekliği için koruyucu kapak trim ve silikon sonda yerleştirin. Bağlayıcı kartına ve diş çimento, maruz kafatası çevresindeki deri kaçınarak kullanarak Kafatası kapağını düzeltmek. İmplantasyon site çevresindeki deri dikiş genellikle gerekli değildir.</li>
</ol>3. ameliyat sonrası kurtarma
<ol><li>En az 2 gün (Örneğin subkutan enjeksiyonlari buprenorfin her 6 h gündüz sırasında ve içme suyu gecede carprofen (4-5 mg/kg vücut ağırlığı) ile kombine subkutan her 24 h) için uygun analjezik tedavi uygulanır. Tek-konut için implant zarar önlemek için önerilir.</li>
	<li>Kurtarma için en az bir hafta izin. İle yerel hayvan refah genel kurallara bakın.</li>
</ol>4. veri toplama
<ol><li>Kayıt LFPs bir komütatör bağlı bir uygun veri toplama sistemi kullanarak fareler serbestçe hareket. LFPs elde etmek için 1-5 kHz örnekleme sıklığı kullanmak. Tek-unit deşarj LFP ile birlikte kaydedilecek daha yüksek örneklendirme oranı (20-30 kHz) gereklidir.</li>
	<li>Çevrimdışı analiz için tek tek kanalları ham kayıt dosyaları depolar.</li>
</ol>5. Histoloji
<ol><li>Kayıt tamamlandıktan sonra derin hayvan (intraperitoneally enjekteÖrneğin 2 g/kg vücut ağırlığı üretan) anestezi. Anestezik devlet pinching tırnağa yanıt eksikliği onaylayın.</li>
	<li>Fare transcardially standart intracardial perfüzyon yöntemleri13kullanarak % 4 paraformaldehyde tarafından (~ 10 dk) ardından buz gibi fosfat tamponlu tuz (~ 1 dk) ile sıvı. Perfüzyon önce kayıt sitelerin elektrolitik lesioning tarafından gerçekleştirilen (10-20 V sabit voltaj 1 için uygulayarakÖrneğin s). Alternatif olarak, implantasyon kimlik izlemek için kullanılmadan önce floresan boyalar için şaftlı ipuçları uygulanan. Silikon sondalar farklı tipleri ile en iyi sonuçları elde etmek için elektrot pozisyonları tanımlaması için çeşitli yöntemler test tavsiye edilir.</li>
	<li>Beyin bölümleri (~ 100 µm) kesme ve dilimleri 4'-6-diamidino-2-PB (her 10 dakika oda sıcaklığında) üç yıkama adımda takip phenylindole (DAPI, 1 µg/mL) ile leke.</li>
	<li>Bölümleri bir mikroskop slaytta yer, orta katıştırma bir damla uygulamak ve bir kapak notu bölümle kapak. Oda sıcaklığında gömme orta kuru gecede izin.</li>
	<li>Bir epifluorescence veya confocal mikroskop lazer tarama kullanarak kayıt siteleri konumunu belirleyin.</li>
	<li>Daha fazla kullanım için silikon sonda düzeltmeye çalış için sonda bir timsah kelepçe ile tutun ve dikkatli bir havya (400 ° C) ile diş çimento erime sonda gelen kürek bırakın. Bu işlem sırasında sonda shanks dokunmak kendine iyi bak!</li>
	<li>Enzimatik solüsyona tarafından takip sonda (~ 80 ° C, 15 dk) sıcak distile suda yıkayın (%1 Tergazyme distile su, oda sıcaklığında 30 dakika) ve başka bir çamaşır adım distile su (15 dk). Sonda kurtarma başarı oranını düşük olduğuna dikkat edin.</li>
</ol>6. CSD Analizi
<ol><li>Bir uygun analiz ortamı (Örneğin Python), ikinci kayma türevi bıçak boyunca yaklaşıldığıdır tarafından bireysel bir şaft CSD için dönüştürme LFP verileri kullanarak <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57714/57714eq1.jpg"> Burada LFPn, t zaman t nth elektrot LFP İşaretimle, Δz arası elektrot aralığı. N-1 ve n+ 1 işlemleri nedeniyle, bıçağı ilk ve son elektrotlar CSD, sonda yerleştirme sırasında dikkate alınacak olan tahmin edilebilir değil olduğunu unutmayın. Zaman içinde (bakınız ek kod dosyası) yineleme sırasında elektroda CSD işaretimi hesaplar kod kısa bir parçasını kullanarak yaklaşım formül uygulamak.</li>
	<li>Elde edilen CSD sinyal daha fazla analiz (bant geçiren filtre uygulayarak belirli frekans bantlarında beyin titreşimler, eğitimÖrneğin, ) kullanın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Buzs&#225;ki, G., Draguhn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+oscillations+in+cortical+networks.">Neuronal oscillations in cortical networks.</a> Science. 304 (5679), 1926-1929 (2004).</li><li>Keefe, J., Recce, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+relationship+between+hippocampal+place+units+and+the+EEG+theta+rhythm.">Phase relationship between hippocampal place units and the EEG theta rhythm.</a> Hippocampus. 3 (3), 317-330 (1993).</li><li>Benchenane, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coherent+theta+oscillations+and+reorganization+of+spike+timing+in+the+hippocampal-prefrontal+network+upon+learning.">Coherent theta oscillations and reorganization of spike timing in the hippocampal-prefrontal network upon learning.</a> Neuron. 66 (6), 921-936 (2010).</li><li>Jadhav, S. P., Kemere, C., German, P. W., Frank, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Awake+hippocampal+sharp-wave+ripples+support+spatial+memory.">Awake hippocampal sharp-wave ripples support spatial memory.</a> Science. 336 (6087), 1454-1458 (2012).</li><li>Yamamoto, J., Suh, J., Takeuchi, D., Tonegawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+execution+of+working+memory+linked+to+synchronized+high-frequency+gamma+oscillations.">Successful execution of working memory linked to synchronized high-frequency gamma oscillations.</a> Cell. 157 (4), 845-857 (2014).</li><li>Karalis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=4-Hz+oscillations+synchronize+prefrontal-amygdala+circuits+during+fear+behavior.">4-Hz oscillations synchronize prefrontal-amygdala circuits during fear behavior.</a> Nature Neuroscience. 19 (4), 605-612 (2016).</li><li>Khodagholy, D., Gelinas, J. N., Buzs&#225;ki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning-enhanced+coupling+between+ripple+oscillations+in+association+cortices+and+hippocampus.">Learning-enhanced coupling between ripple oscillations in association cortices and hippocampus.</a> Science. 358 (6361), 369-372 (2017).</li><li>Buzs&#225;ki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+of+extracellular+fields+and+currents--EEG,+ECoG,+LFP+and+spikes.">The origin of extracellular fields and currents--EEG, ECoG, LFP and spikes.</a> Nature Reviews Neuroscience. 13 (6), 407-420 (2012).</li><li>Mitzdorf, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+source-density+method+and+application+in+cat+cerebral+cortex:+investigation+of+evoked+potentials+and+EEG+phenomena.">Current source-density method and application in cat cerebral cortex: investigation of evoked potentials and EEG phenomena.</a> Physiological Reviews. 65 (1), 37-100 (1985).</li><li>Laszt&#243;czi, B., Klausberger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Layer-specific+GABAergic+control+of+distinct+gamma+oscillations+in+the+CA1+hippocampus.">Layer-specific GABAergic control of distinct gamma oscillations in the CA1 hippocampus.</a> Neuron. 81 (5), 1126-1139 (2014).</li><li>Str&#252;ber, M., Sauer, J. -. F., Jonas, P., Bartos, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distance-dependent+inhibition+facilitates+focality+of+gamma+oscillations+in+the+dentate+gyrus.">Distance-dependent inhibition facilitates focality of gamma oscillations in the dentate gyrus.</a> Nature Communications. 8 (1), 758 (2017).</li><li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2007).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Kajikawa, Y., Schroeder, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+local+is+the+local+field+potential?.">How local is the local field potential?.</a> Neuron. 72 (5), 847-858 (2011).</li><li>Berens, P., Keliris, G. A., Ecker, A. S., Logothetis, N. K., Tolias, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feature+selectivity+of+the+gamma-band+of+the+local+field+potential+in+primate+primary+visual+cortex.">Feature selectivity of the gamma-band of the local field potential in primate primary visual cortex.</a> Frontiers in Neuroscience. 2 (2), 199-207 (2008).</li><li>Last&#243;czi, B., Klausberger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+gamma+oscillations+in+the+distal+dendritic+field+of+the+dentate+gyrus+and+the+CA1+area+of+mouse+hippocampus.">Distinct gamma oscillations in the distal dendritic field of the dentate gyrus and the CA1 area of mouse hippocampus.</a> Brain Structure and Function. 222 (7), 3355-3365 (2017).</li><li>Nguyen Chi, V., M&#252;ller, C., Wolfenstetter, T., Yanovsky, Y., Draguhn, A., Tort, A. B. L., Branka&#269;k, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+respiration-driven+rhythm+distinct+from+theta+oscillations+in+awake+mice.">Hippocampal respiration-driven rhythm distinct from theta oscillations in awake mice.</a> Journal of Neuroscience. 36 (1), 162-177 (2016).</li><li>Chung, J., Sharif, F., Jung, D., Kim, S., Royer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-drive+and+headgear+for+chronic+implant+and+recovery+of+optoelectronic+probes.">Micro-drive and headgear for chronic implant and recovery of optoelectronic probes.</a> Scientific Reports. 7 (1), 2773 (2017).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Artan kanıtlar beyin salınım içinde hipokampal nöronal devreler ayrık mekansal etki10,11,16' meydana gösterir. CSD analiz cilt ve tel, yerel salınım olaylar çalışma için çok önemli bir önkoşul etkisi önemli ölçüde azaltır. Bu video ile biz silikon sondalar CSD veri analizi için farenin hipokampus içine yerleştirilmesi için bir kılavuz sağlar. CA1 ve dentat gyrus yerelleştirilmiş gama salınım keski...

LFP salınımlarını kritik bilgi işlem tarafından nöronal devreler katılmaktadırlar. Bunlar frekanslar, yavaş dalgalar (~ 1 Hz) hızlı dalgalanma salınımları (~ 200 Hz)1' e kadar geniş bir yelpazede kapsar. Farklı frekans bantlarında bellek, duygusal işleme ve gezinti2,3,4,5,6,7gibi bilişsel fonksiyonları ile ilişkilidir. Nöronal membranların genelinde geçerli akış LFP sinyal8en büyük bölümünü oluşturmaktadır. (Şarj hücre dışı ortama bırakır gibi) hücre (Örneğin glutamatergic eksitatör sinapslarda aktivasyonu üzerinden) girerek Özellikler etkin bir geçerli alıcıyı temsil eder. Buna ek olarak, örneğin tarafından GABAergic inhibitör sinapslarda, aktivasyonu hücre dışı ortama olarak pozitif net akışı etkin bir geçerli kaynak bu konumda gösteriyor. Nöronal dipoller içinde geçerli lavabolar ve tersi pasif kaynakları ile membran şarj uzak sitelerdeki etkileyen akımlar dengelemesi nedeniyle eşleştirilmiş.
Uzaktan nöral işlemler tarafından üretilen elektrik alanı da önemli voltaj deplasmanlar kayıt elektrot üzerinde neden olabilir ve böylece yanlışlıkla yerel bir olay olarak kabul olabilir. Bu ses iletim LFP sinyalleri yorumlanması için ciddi bir meydan okuma teşkil etmektedir. CSD analiz sinyalleri ve bu nedenle cilt ve tel8etkisini azaltmak için bir araç oluşur yerel geçerli lavabo ve LFP temel kaynakları hakkında bilgi sağlar. Lamine yapılarda oluşur gibi tek boyutlu CSD sinyalleri tarafından düzenlenmiş eşit uzaklıkta Elektrotlar dikey laminer uçak9' a kaydedilen LFP ikinci kayma türevi alınabilir. Piyasada bulunan doğrusal silikon sondalar gelişiyle araştırmacılar eğitim hipokampüs faaliyete yerel salınım CSD yöntem kullanmak için izin verdi. Örneğin, farklı gama salınımlarını CA1 alan10katman özgü şekilde ortaya kanıtlanmıştır. Ayrıca, CSD analiz dentat gyrus11asıl hücre tabakası faaliyete gama bağımsız sıcak noktalar tespit etti. Önemlisi, bu bulgular sadece yerel CSD ama değil LFP sinyalleri belirgin değildi. CSD analiz böylece hipokampüs microcircuit operasyonlarında anlayış kazanmak için güçlü bir araç sağlar.
Bu protokol için silikon sondalar ile tek boyutlu CSD sinyalleri almak için kapsamlı bir rehber sağlar. Bu yöntemler davranıyor fareler hipokampus yerelleştirilmiş salınım olayları araştırmak kullanıcıların olanak tanır.

<table><tbody><tr><td>Crocodile clamp with stand</td><td>Reichelt Elektronik</td><td>HALTER ZD-10D</td><td></td></tr><tr><td>Silicon probe</td><td>Cambridge Neurotech</td><td>P-series 32</td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Olympus</td><td>SZ51</td><td></td></tr><tr><td>Varnish-insulated copper wire</td><td>B&amp;uuml;rklin Elektronik</td><td>89 F 232</td><td></td></tr><tr><td>Ground screws</td><td>Screws &amp;amp; More GmbH (screwsandmore.de)</td><td>DIN 84 A2 M1x2</td><td></td></tr><tr><td>Flux</td><td>Stannol</td><td>114018</td><td></td></tr><tr><td>Ceramic-tipped forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11210-60</td><td></td></tr><tr><td>Paraffine Wax</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>327204</td><td></td></tr><tr><td>Cauterizer</td><td>Fine Science Tools</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Soldering iron</td><td>Kurtz Ersa</td><td>OIC1300</td><td></td></tr><tr><td>Multimeter</td><td>Uni-T</td><td>UT61C</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Carl Roth</td><td>9065.1</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipettes</td><td>Carl Roth</td><td>EA65.1</td><td></td></tr><tr><td>Heat sterilizer</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic frame</td><td>David Kopf</td><td>Model 1900</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic electrode holder</td><td>David Kopf</td><td>Model 1900</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbvie</td><td>B506</td><td></td></tr><tr><td>Oxygen concentrator</td><td>Respironix</td><td>1020007</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Indivior UK Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Electrical shaver</td><td>Tondeo</td><td>Eco-XS</td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Thermolux</td><td>463265/-67</td><td></td></tr><tr><td>Surgical clamps</td><td>Fine Science Tools</td><td>18050-28</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogen peroxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Sterile cotton wipes</td><td>Carl Roth</td><td>EH12.1</td><td></td></tr><tr><td>Drill</td><td>Proxxon</td><td>Micromot 230/E</td><td></td></tr><tr><td>21G injection needle</td><td>B. Braun</td><td>4657527</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffer/phosphate buffered saline</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic atlas</td><td>Elsevier</td><td>9.78012E+12</td><td></td></tr><tr><td>Surgical scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Surgical forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11272-40</td><td></td></tr><tr><td>27G injection needles</td><td>B. Braun</td><td>4657705</td><td></td></tr><tr><td>Vaseline</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dental cement</td><td>Sun Medical</td><td>SuperBond T&amp;amp;M</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis</td><td>Rimadyl 50mg/ml</td><td></td></tr><tr><td>Recording amplifier</td><td>Intan Technologies</td><td>C3323</td><td></td></tr><tr><td>USB acquisition board</td><td>Intan Technologies</td><td>C3004</td><td></td></tr><tr><td>Recording cables</td><td>Intan Technologies</td><td>C3216</td><td></td></tr><tr><td>Electrical commutator</td><td>Doric lenses</td><td>HRJ-OE_FC_12_HARW</td><td></td></tr><tr><td>Acquisition software</td><td>OpenEphys (www.open-ephys.org)</td><td>GUI</td><td>allows platform-independent data acquisition</td></tr><tr><td>Computer for data acquisition</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analysis environment</td><td>Python (www.python.org)</td><td></td><td>allows platform-independent data analysis</td></tr><tr><td>Urethane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000</td><td></td></tr><tr><td>Microscope slides</td><td>Carl Roth</td><td>H868.1</td><td></td></tr><tr><td>Cover slips</td><td>Carl Roth</td><td>H878.2</td><td></td></tr><tr><td>Embedding medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81381-50G</td><td></td></tr><tr><td>Distilled water</td><td>Millipore</td><td>Milli Q</td><td>Table-top machine for the production of distilled water</td></tr><tr><td>Tergazyme</td><td>Alconox</td><td>Tergazyme</td><td></td></tr></tbody></table>

recording spatially restricted oscillations in the hippocampus of behaving mice

Yerel alan potansiyel (LFP) den iyon hareketleri sinirsel membranlar arasında çıkar. Beyin dokusu büyük miktarda toplam elektrik alanı LFP elektrotlar tarafından kaydedilen gerilim yansıtır beri yerel etkinlik hakkında bilgi ayıklama meydan okuyor. Nöronal Mikri şemalar okuyan, ancak, gerçekten yerel etkinlikler ve uzak beyin alanlarında kaynaklanan cilt yürütülen sinyalleri arasında güvenilir bir ayrım gerektirir. Geçerli kaynak yoğunluğu (CSD) analiz geçerli lavabolar ve elektrotlar civarında kaynakları hakkında bilgi sağlayarak bu sorunu için bir çözüm sunuyor. Beyin alanlarda laminer cytoarchitecture hipokampus gibi tek boyutlu CSD LFP ikinci kayma türevi hesaplanıyor tarafından elde edilebilir. Burada, dorsal hipokampus implante doğrusal silikon sondalar kullanarak kayıt multilaminar LFPs için bir yöntemi açıklanmaktadır. CSD izlemeler sonda bireysel shanks hesaplanır. Bu iletişim kuralı böylece serbestçe fare hareket dağınık şekilde sınırlı nöronal ağ salınım oluşur içinde çözmek için bir yordam açıklanır.

Şekil 1 ekleme aracı silikon sondalar implantasyon için kullanılan göstermektedir. Kayıtları kronik implante silikon sondalar CA1 alan hedefleme ve dentat gyrus granül hücre tabakası Şekil 2' de gösterilmiştir. LFPs sonda shanks--dan homecage içinde serbest dolaşımı sırasında kaydettik. Cilt ve tel etkisini en aza indirmek için elde edilen sinyalleri sonda (Şekil 2BD</str...

Watch this Scientific Journal Video about Recording Spatially Restricted Oscillations in the Hippocampus of Behaving Mice at JoVE.com

Recording Spatially Restricted Oscillations in the Hippocampus of Behaving Mice

Bu iletişim kuralı yerel alan potansiyelleri ile çoklu şaftlı doğrusal silikon sondalar kayıt açıklar. Geçerli kaynak yoğunluk analiz kullanarak sinyalleri dönüşüm yerel elektrik etkinlik yeniden inşası farenin hipokampus sağlar. Bu teknik ile dağınık şekilde kısıtlı beyin salınımlarını serbestçe fare hareket okudu olabilir.

Dağınık şekilde kayıt sınırlı salınım oluşur içinde fareler davranmak

The local field potential (LFP) emerges from ion movements across neural membranes. Since the voltage recorded by LFP electrodes reflects the summed ...

recording-spatially-restricted-oscillations-hippocampus-behaving

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Neuroscience

8.7K Görüntüleme.  University of Freiburg. Bu iletişim kuralı yerel alan potansiyelleri ile çoklu şaftlı doğrusal silikon sondalar kayıt açıklar. Geçerli kaynak yoğunluk analiz kullanarak sinyalleri dönüşüm yerel elektrik etkinlik yeniden inşası farenin hipokampus sağlar. Bu teknik ile dağınık şekilde kısıtlı beyin salınımlarını serbestçe fare hareket okudu olabilir.

Video: Recording Spatially Restricted Oscillations in the Hippocampus of Behaving Mice

Tuning in the Hippocampal Theta Band In Vitro: Methodologies for Recording from the Isolated Rodent Septohippocampal Circuit

This protocol outlines the procedures for preparing and recording from the isolated whole hippocampus, of WT and transgenic mice, along with recent improvements in methodologies and applications for the study of theta oscillations. A simple characterization of the isolated hippocampal preparation is presented whereby the relationship between internal hippocampal theta oscillators is examined together with the activity of pyramidal cells, and GABAergic interneurons, of the cornu ammonis-1 (CA1) and subiculum (SUB) areas. Overall, we show that the isolated hippocampus is capable of generating intrinsic theta oscillations in vitro and that rhythmicity generated within the hippocampus can be precisely manipulated by optogenetic stimulation of parvalbumin-positive (PV) interneurons. The in vitro isolated hippocampal preparation offers a unique opportunity to use simultaneous field and intracellular patch-clamp recordings from visually-identified neurons to better understand the mechanisms underlying theta rhythm generation.

Tuning in the Hippocampal Theta Band In Vitro: Methodologies for Recording from the Isolated Rodent Septohippocampal Circuit

Here, we present a protocol for recording rhythmic neuronal network theta and gamma oscillations from an isolated whole hippocampal preparation. We describe the experimental steps from extraction of the hippocampus to details of field, unitary and whole-cell patch clamp recordings as well as optogenetic pacing of the theta rhythm.

Hipokampal Theta Bandında Tuning<em&gt; In vitro</em&gt;: İzole edilmiş Kemirgen Protokokal Circüse Kayıt için Metodolojiler

This protocol outlines the procedures for preparing and recording from the isolated whole hippocampus, of WT and transgenic mice, along with recent ...

Nörobilim

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools to selectively manipulate brain rhythms. Here we describe an approach combining projection-specific optogenetics with extracellular electrophysiology for high-fidelity control of hippocampal theta oscillations (5-10 Hz) in behaving mice. The specificity of the optogenetic entrainment is achieved by targeting channelrhodopsin-2 (ChR2) to the GABAergic population of medial septal cells, crucially involved in the generation of hippocampal theta oscillations, and a local synchronized activation of a subset of inhibitory septal afferents in the hippocampus. The efficacy of the optogenetic rhythm control is verified by a simultaneous monitoring of the local field potential (LFP) across lamina of the CA1 area and/or of neuronal discharge. Using this readily implementable preparation we show efficacy of various optogenetic stimulation protocols for induction of theta oscillations and for the manipulation of their frequency and regularity. Finally, a combination of the theta rhythm control with projection-specific inhibition addresses the readout of particular aspects of the hippocampal synchronization by efferent regions.

We describe the use of optogenetics and electrophysiological recordings for selective manipulations of hippocampal theta oscillations (5-10 Hz) in behaving mice. The efficacy of the rhythm entrainment is monitored using local field potential. A combination of opto- and pharmacogenetic inhibition addresses the efferent readout of hippocampal synchronization.

Hipokampal teta salınımlarını fareler davranışlar içinde Optogenetic sürüklenme

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...

Acute Mouse Brain Slicing to Investigate Spontaneous Hippocampal Network Activity

Acute rodent brain slicing offers a tractable experimental approach to gain insight into the organization and function of neural circuits with single-cell resolution using electrophysiology, microscopy, and pharmacology. However, a major consideration in the design of in vitro experiments is the extent to which different slice preparations recapitulate naturalistic patterns of neural activity as observed in vivo. In the intact brain, the hippocampal network generates highly synchronized population activity reflective of the behavioral state of the animal, as exemplified by the sharp-wave ripple complexes (SWRs) that occur during waking consummatory states or non-REM sleep. SWRs and other forms of network activity can emerge spontaneously in isolated hippocampal slices under appropriate conditions. In order to apply the powerful brain slice toolkit to the investigation of hippocampal network activity, it is necessary to utilize an approach that optimizes tissue health and the preservation of functional connectivity within the hippocampal network. Mice are transcardially perfused with cold sucrose-based artificial cerebrospinal fluid. Horizontal slices containing the hippocampus are cut at a thickness of 450 &#956;m to preserve synaptic connectivity. Slices recover in an interface-style chamber and are transferred to a submerged chamber for recordings. The recording chamber is designed for dual surface superfusion of artificial cerebrospinal fluid at a high flow rate to improve oxygenation of the slice. This protocol yields healthy tissue suitable for the investigation of complex and spontaneous network activity in vitro.

This protocol describes the preparation of horizontal hippocampal-entorhinal cortex (HEC) slices from mice exhibiting spontaneous sharp-wave ripple activity. Slices are incubated in a simplified interface holding chamber and recordings are performed under submerged conditions with fast-flowing artificial cerebrospinal fluid to promote tissue oxygenation and the spontaneous emergence of network-level activity.

Spontan Hipokampal Ağ Aktivitesini Araştırmak için Akut Fare Beyin Dilimlemeyi

Acute rodent brain slicing offers a tractable experimental approach to gain insight into the organization and function of neural circuits with single-cell ...

Craniotomy Procedure for Visualizing Neuronal Activities in Hippocampus of Behaving Mice

Imaging neuronal activities at single-cell resolution in awake behaving animals is a very powerful approach for the investigation of neural circuit functions in systems neuroscience. However, high absorbance and scattering of light in mammalian tissue limit intravital imaging mostly to superficial brain regions, leaving deep-brain areas, such as the hippocampus, out of reach for optical microscopy. In this video, we show the preparation and implantation of the custom-made imaging window to enable chronic in vivo imaging of the dorsal hippocampal CA1 region in head-fixed behaving mice. The custom-made window is supplemented with an infusion cannula that allows targeted delivery of viral vectors and drugs to the imaging area. By combining this preparation with wide-field imaging, we performed a long-term recording of neuronal activity using a fluorescent calcium indicator from large subsets of neurons in behaving mice over several weeks. We also demonstrated the applicability of this preparation for voltage imaging with single-spike resolution. High-performance genetically encoded indicators of neuronal activity and scientific CMOS cameras allowed the recurrent visualization of subcellular morphological details of single neurons at high temporal resolution. We also discuss the advantages and potential limitations of the described method and its compatibility with other imaging techniques.

This article demonstrates the preparation of a custom-made imaging window supplemented with infusion cannula and its implantation onto the CA1 region of the hippocampus in mice.

Behaving Farelerinin Hipokampusunda Nöronal Aktiviteleri Görselleştirmek için Kraniyotomi Prosedürü

Imaging neuronal activities at single-cell resolution in awake behaving animals is a very powerful approach for the investigation of neural circuit ...

Bilişsel Araştırma ve İlaç Analizi için Fare Beyninde LFP Kaydı

Dual Extracellular Recordings in the Mouse Hippocampus and Prefrontal Cortex

The technique of recording local field potentials (LFPs) is an electrophysiological method used to measure the electrical activity of localized neuronal populations. It serves as a crucial tool in cognitive research, particularly in brain regions like the hippocampus and prefrontal cortex. Dual LFP recordings between these areas are of particular interest as they allow the exploration of interregional signal communication. However, methods for performing these recordings are rarely described, and most commercial recording devices are either expensive or lack adaptability to accommodate specific experimental designs. This study presents a comprehensive protocol for performing dual-electrode LFP recordings in the mouse hippocampus and the prefrontal cortex to investigate the effects of antipsychotic drugs and potassium channel modulators on LFP properties in these areas. The technique enables the measurement of LFP properties, including power spectra within each brain region and coherence between the two. Additionally, a low-cost, custom-designed recording device has been developed for these experiments. In summary, this protocol provides a means to record signals with high signal-to-noise ratios in different brain regions, facilitating the investigation of interregional information communication within the brain.

Yazar Spotlight: Farelerde Çift LFP Kayıt Protokolü Kullanarak Beyin Sinyalleri Üzerindeki İlaç Etkilerinin İncelenmesi

This protocol outlines the use of a custom-designed recording device and electrodes to record local field potentials and investigate information flow in the mouse hippocampus and prefrontal cortex.

Fare Hipokampusu ve Prefrontal korteksinde ikili hücre dışı kayıtlar

The technique of recording local field potentials (LFPs) is an electrophysiological method used to measure the electrical activity of localized neuronal ...

<meta charset="utf8"></head><body>Miniscope Görüntüleme ile Koku Tüyü Navigasyonu Sırasında Nöronal Aktivitenin Kaydedilmesi

Miniscope Recording Calcium Signals at Hippocampus of Mice Navigating an Odor Plume

Mice navigate an odor plume with a complex spatiotemporal structure in the dark to find the source of odorants. This article describes a protocol to monitor behavior and record Ca2+ transients in dorsal CA1 stratum pyramidale neurons in the hippocampus (dCA1) in mice navigating an odor plume in a 50 cm x 50 cm x 25 cm odor arena. An epifluorescence miniscope focused through a gradient-index (GRIN) lens imaged Ca2+ transients in dCA1 neurons expressing the calcium sensor GCaMP6f in Thy1-GCaMP6f mice. The paper describes the behavioral protocol to train the mice to perform this odor plume navigation task in an automated odor arena. The methods include a step-by-step procedure for the surgery for GRIN lens implantation and baseplate placement for imaging GCaMP6f in CA1. The article provides information on real-time tracking of the mouse position to automate the start of the trials and delivery of a water reward. In addition, the protocol includes information on using an interface board to synchronize metadata describing the automation of the odor navigation task and frame times for the miniscope and a digital camera tracking mouse position. Moreover, the methods delineate the pipeline used to process GCaMP6f fluorescence movies by motion correction using the NorMCorre algorithm followed by identification of regions of interest with EXTRACT. Finally, the paper describes an artificial neural network approach to decode spatial paths from CA1 neural ensemble activity to predict mouse navigation of the odor plume.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Gerçek Zamanlı Davranış Analizi ile Koku Alma ve Mekansal Bilgilerin Beyin Tarafından İşlenmesini Anlama

This protocol investigates the brain-behavior relationship in hippocampal CA1 in mice navigating an odor plume. We provide a step-by-step protocol, including surgery to access imaging of the hippocampus, behavioral training, miniscope GCaMP6f recording and processing of the brain, and behavioral data to decode the mouse position from ROI neural activity.

Bir koku bulutunda gezinen farelerin hipokampusunda kalsiyum sinyallerini kaydeden miniskop

Mice navigate an odor plume with a complex spatiotemporal structure in the dark to find the source of odorants. This article describes a protocol to ...

Dağınık şekilde kayıt sınırlı salınım oluşur içinde fareler davranmak

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Hipokampal Theta Bandında Tuning

Hipokampal teta salınımlarını fareler davranışlar içinde Optogenetic sürüklenme

Spontan Hipokampal Ağ Aktivitesini Araştırmak için Akut Fare Beyin Dilimlemeyi

Behaving Farelerinin Hipokampusunda Nöronal Aktiviteleri Görselleştirmek için Kraniyotomi Prosedürü

Fare Hipokampusu ve Prefrontal korteksinde ikili hücre dışı kayıtlar

Fare Hipokampusu ve Prefrontal korteksinde ikili hücre dışı kayıtlar

Fare Hipokampusu ve Prefrontal korteksinde ikili hücre dışı kayıtlar

Bir koku bulutunda gezinen farelerin hipokampusunda kalsiyum sinyallerini kaydeden miniskop

Bir koku bulutunda gezinen farelerin hipokampusunda kalsiyum sinyallerini kaydeden miniskop

Bir koku bulutunda gezinen farelerin hipokampusunda kalsiyum sinyallerini kaydeden miniskop