Generalitat Valenciana, PROMETEOII / 2014/063; Sağlık Bakanlığı, sosyal hizmetler ve eşitlik. Uyuşturucu, uyuşturucu bağımlılığı, 2014I007 araştırma projeleri Ulusal Plan için hükümet temsilcisi; Ekonomi Bakanlığı ve rekabet (MINECO), Sağlık Enstitüsü Carlos III, ağ bağımlılık bozuklukları (RTA) RD12 / 0028/0005 ve RD16 / 0017/0007 ve Avrupa Birliği, FEDER fonlar "una manera de hacer Europa" ve PSI2014-51847-R.

Ulusal, bölgesel ve yerel yasa ve yönetmeliklere, tarih için kullanılan hayvanların korunması yönergesi 2010/63/AB sayılı Avrupa Parlamentosu ve Konsey, 22 Eylül 2010 uygun olan tüm yordamları fareler ve bakımı ile ilgili uyulması Bilimsel amaçlı. Hayvan kullanımı ve bakımı Komitesi Valencia Üniversitesi mevcut protokolü onayladı.
1. malzeme ve klimalı yer tercihi için Kurulum:
<ol><li>Fareler 1-2 dk her test önce 3 gün idare. Kuyruk temelini kavramış. Vücut mümkünse desteklenmelidir. Bu ağrı ve acı bir hayvan işlerken en aza indirmek için ve stres gibi müdahale değişkenleri önlemek için yapılır. Not: 1 erkek fareler mevcut deneylerde 60 35-40 g ağırlığında gün eski (Genç Yetişkin) istihdam edildi. Uyuşturucu kaynaklı iade her iki cinsiyette farelerde gerçekleştirilebilir. Ancak, stres kaynaklı iade ile ilgili sosyal yenilgi paradigma tasarlanmıştır sadece erkek kemirgen, kadın yapmak Hayır ikamet farelerde agresif bir yanıt ikna etmek.</li>
	<li>İçin yer Klima, daha küçük bir merkezi gri alanı tarafından (13,8 uzun × 31,5 cm geniş × 34.5 yüksek) ayrılmış iki özdeş bölümler (30,7 cm uzun × 31,5 cm geniş × 34,5 cm yüksekliğinde) ile yapılan aynı kutuları kullanın. Not: Farklı kat doku ve duvar renkleri (siyah yerde düz bir zemin ve beyaz olan kaba bir yerde) bölmeleri var. Her bölmesi CPP kutusunun dört kızılötesi ışık ışınları ve altı merkezi yerde içerir. Bu bölmeler ve hayvan konumunu arasındaki geçişleri kayıt sağlar.</li>
	<li>Set up (kapalı ya da indirdi) Oda ışıkları her gün. Hayvanlar algılıyorsun değil ve deneyci (yaklaşık 40 kat seviyesinden 1 m ölçülen lux) için zayıflatılmış kırmızı ışıklar (önerilen) kullanın.</li>
	<li>15 dakika öncesi ve sonrası Klima için kaydetmek üzere program ayarlama (yazılım için Malzemeler tablo görmek) test (Şekil 2)</li>
	<li>Bütün deneyin için gerekli kokain çözüm hazırlamak. Kokain hidroklorid % 0,9 içinde erimesi NaCl (serum) 0.1 mL/10 g vücut ağırlığının birimindeki. Girdap karışımı ve günün sonunda 4 ° C'de mağazasında. Not: Kokain konsantrasyonları çalışmanın amacı bağlı olarak değişebilir. Amaç subthreshold dozda kokain kullanımının değerlendirecekse, 1 mg/kg konsantrasyon, önceki çalışmalar24,35içinde görüldüğü gibi denetim hayvanlarda etkisiz olduğu kullanılabilir. Etkili bir doz amacı ise, 6 mg/kg konsantrasyon etkilidir ama iade24teşvik değil, seçilmiş veya etkilidir ve iade tercih19indükler bir 25 mg/kg konsantrasyon olabilir.</li>
	<li>Hayvanlar kendi karanlık evre sırasında test etmek ve aynı kutusunu her hayvan için gün boyunca kullanın.</li>
	<li>Hayvan test oda içinde ev onların kafes her gün getirmek ve onları rahatsız 15dk için habituation dönemi olarak test ile ilgili tüm sesler için bekletin.</li>
</ol>2. test
<ol><li>Satın alma Not: Yer Klima, ilk spontan tercih açısından tarafsız yordamı üç aşamadan oluşmaktadır: ön Klima, Klima ve sonrası Klima (Şekil 1).<ol>
<li>
Öncesi Klima (Pre-C) (3 gün) (Şekil 2, Şekil 3, Şekil 4) Not: Burada, CPP kutusunda bölmeleri tarafsız değeri değerlendirilir. Her bölümünde harcanan zamanı ölçmek ve daha sonra aynı yerde sonrası Klima test harcanan ile karşılaştırın.<ol>
<li>Hayvanlar test odasına getir ve onları 15 dakikadır habituated bırakın.</li>
			<li>Giyotinler kafes kaldırılır kontrol edin.</li>
			<li>Bilgisayar ve program ayarlayın. Hayvan kimlikleri girip "Deneme" ve "Start" komutunu (Şekil 2) tuşuna basın.</li>
			<li>Fareyi yavaşça orta odası (gri bölme) yerleştirin ve minimum gürültü ile test odadan.</li>
			<li>Bütün hayvanlar ev onların kafes getir ve deneme sona erdiğinde verileri kaydetmek.</li>
			<li>Fareler her iki bölmeleri cihazları 15dk için erişmek izin (900 s) günde 3 gün üst üste.</li>
			<li>Günde 3, her bölümünde bir 900 s süre içinde harcanan zaman yazın ve sonraki safhaya (Şekil 3) bölmeleri tayini için kaydedin.</li>
			<li>Her grup bir bölümü (Örneğin, siyah) ve diğer yarısını da diğer bölme (Örneğin, beyaz) (Şekil 4) uyuşturucu veya araç almak için yarım hayvanlarda atayın. Not: Son dağıtım hayvan hayvanlar yarısı başlangıçta tercih edilen bölme ve tercih edilmeyen yuvası diğer yarısı için atanır emin olmalısınız. Buna ek olarak, hayvanların yarısı bir bölümü (örneğin, siyah bir) ve diğer yarısını da (Bu durumda, beyaz olanı) diğer ilaç aldı.</li>
			<li>Grup içinde her iki bölmeleri yanı sıra gruplar (bir varyans analizi (ANOVA) ile test grup farklılıklar) arasında denge skorları. Yaklaşık rehberlik gibi değerler etrafında olması gerekir 360-370 s Pre-C testi (Şekil 4). Not: hiçbir önemli farklılıklar arasında uyuşturucu eşleştirilmiş ve araç eşleştirilmiş bölmeleri Pre-C test sırasında harcanan süre tespit edilmelidir.</li>
			<li>Bir güçlü isteksizlik veya herhangi bir bölümü için tercih sergi hayvanlar hariç. İsteksizlik yerde % 33 daha az zaman harcama olarak düşünün ve hayvan o yerde fazla % 67 toplam zaman harcanan zaman tercih düşünün.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
(4 gün) Merkezi Klima (Şekil 5)
		<ol>
<li>Hayvanlar tartmak ve bu ağırlık sırasında klima kokain doz için kullanın.</li>
			<li>Kokain ya da vücut ağırlık dayalı salin ile şırıngalar hazırlayın.</li>
			<li>Bir fare intraperitoneally bir kerede enjekte (IP) ve hemen yavaşça atanan siyah ya da beyaz yuvası onların kutusu içine yerleştirin.</li>
			<li>Hemen fareyi 30 dk (Şekil 5) uyuşturucu eşleştirilmiş yuvasının sınırlı önce 4 h bir zaman aralığından sonra uyuşturucu doz enjekte et.</li>
			<li>Bu yordamı her gün, gün 2 ve 4 gün 1 ve 3 ve serum fizyolojik kokain ile başlayan diğer.</li>
			<li>Doğumdan her iki durumda da iki bölmeleri ayıran Giyotin kapıyı kapatarak merkez alan ulaşılmaz yapım gerçekleştirilen onay. Not: Bu aşamada, PC programı ayarlamak için gerek yoktur.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Sonrası Klima (Post-C) (1 gün)
		<ol>
<li>Hayvanlar test odasına getir ve onları 15 dakikadır habituated bırakın.</li>
			<li>İki bölmeleri ayıran Giyotin kapı kaldırın.</li>
			<li>Bilgisayar ve program ayarlayın. Hayvan kimlik girin ve "start" komutunu tuşuna basın.</li>
			<li>Her yerde tedavi edilmezse fareler tarafından 900 s gözlem süresince harcanan süreyi kaydetmek.</li>
			<li>Deneme tamamlandığında tüm hayvanları geri ev onların kafes getir ve verileri kaydetmek.</li>
			<li>Uyuşturucu eşleştirilmiş bölümünde Post-C sırasında harcanan zamanı önemli ölçüde Pre-C testinde daha büyük ise ilaç yer tercih indüklenen düşünün. Tersi durumda, uyuşturucu eşleştirilmiş yuvası için bir isteksizlik göz önünde bulundurun.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Geçersiz kalma
	<ol>
<li>Uyuşturucu eşleştirilmiş yuvası için bir tercih geliştirilen tüm grupları/hayvanlar bir haftalık tükenme oturumda gerçekleştirin.</li>
		<li>15 dakika (öncesi ve sonrası-C testleri aynı) hayvan Aparatı (olmadan giyotinler) içinde yer (Şekil 1). Not: doz istihdam CPP yüksektir (25 mg/kg), haftada 1 nesli oturumu gerçekleştirin. Subthreshold bir doz kullanılan (1 mg/kg) ise, o zaman 2 yok olma oturum haftada (Örneğin Pazartesi ve Perşembe) gerçekleştirin.</li>
		<li>Ne zaman veri yok olma testinden Pre-C testi ile ilgili olarak farklılıklar görünmüyor ama Post-C testi ile ilgili olarak farklılıklar gösteriyorlar mı sönmüş tercih düşünün.</li>
		<li>Test 24 saat sonra yok onaylamak için yineleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>CPP iade
	<ol>
<li>
Astar kaynaklı iade
		<ol>
<li>Geçersiz kalma onaylamıştır sonra kokain 24 h bir astar doz etkilerini değerlendirmek. Not: Astar dozlarda hayvan sırasında klima aldı yarım önceki dozu vardır. İade testi aynı protokolü Pre-C ve Post-C testleri geçer, 15 dk önce test hayvanları olmayan bir ekip içinde kokain doz almak dışında yerleştirin. 23, tekrarlanan yok olma/iade oluştuktan sonra doz sırasını sonuçlarda bir rol oynamaya36elde değil gibi görünüyor, ancak iade inducing içinde uyuşturucu astar etkinliğini gelişmiş olabilir.</li>
			<li>Hayvan getirmek için başka bir odaya test odasından (sigara contingent yer) (Şekil 6).</li>
			<li>Onları kokain yarım önceki doz ile enjekte (hayvanlar ile 25 mg/kg kokain, astar doz şartına EğerÖrneğin, 12.5 mg/kg olurdu).</li>
			<li>Onları kendi vivaryum 15dk için geri getirmek.</li>
			<li>Onları test odasına alıp aparatı hayvanlarda (bölmeleri ayıran hemen Giyotin kapı) 15 dakikadır (aynı öncesi ve sonrası-C testleri) yerleştirin.</li>
			<li>Saniye uyuşturucu eşleştirilmiş kompartımanda iade tarafından uyuşturucu indüklenen tercihi derecesine bir ölçüsü olarak son nesli oturum ve iade testi sırasında harcanan zaman arasındaki farkı göz önünde bulundurun.</li>
			<li>Her zaman bu kadar doz azaltılarak etkisiz teyit yok olma-iade yordamı yineleyin. Not: Bir serum fizyolojik enjeksiyon denetim kapasitesine kokain astar (ve enjeksiyon kendisi, değil) kontrol etmek için kullanılabilir iade ikna etmek için.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Stres kaynaklı iade
		<ol>
<li>Geçersiz kalma onaylamıştır sonra stres kaynaklı geri alalım 24 h etkilerini değerlendirmek Not: İade testleri (15 dakika ücretsiz ambulation), Post-C agonistik bir sosyal yenilgisinden karşılaşmadan sonra (Şekil 6) hayvanlar 15dk test edilir dışında yürütülen aynıdır</li>
			<li>Hayvanlar CPP odadan başka bir odaya götür.</li>
			<li>Eşit yaş ve vücut ağırlığı plastik kafes (Şekil 6) eşleşen bir agresif rakip seks ile deneysel fareyi getirin. Not: Agonistik karşılaşma deneysel fareyi bir 10 min sınava bir nötr şeffaf plastik kafes (23x13.5x13cm) bir yenilgi sonuç ile oluşur. Agresif rakip hazırlamak için ilk yaş ve vücut ağırlığının deneysel fareler için 3 hafta maç farklı hayvan izole et. Tren onları mücadele deneyimi elde etmek ve agresif karaya ait davranış yüksek düzeyde sahip olmak için onları test etmek için. Agresif conspecifics elde etmek için fare gerekir en az 3 hafta boyunca izole ve sonra olarak saldırgan eğitimli ve saldırı davranışlar. Hayvanlar tarafsız bir ortamda, onları çiftler halinde bakacak şekilde eğitilmiştir. Onları rakibin 2 veya 3 kez ısır ve onları kafesten bir iki fare sunulması, gösterir önce Böylece saldırgan davranışlar karşılaşma deneyimi pekiştiriyor her zaman eğitim biten bırakacağız. Saldırganlık (tehdit ve saldırılara agresif conspecific) acı sonra deneysel fareler kaçınma/kaçmak ve savunması/uysal davranış mevcut olmalıdır. Ölçüt yenilgi, itaatkâr dik tarafından karakterize belirli bir duruş benimsemeye olduğunu, forepaws, upwardly açılı kafa, limp ve kulak (Şekil 6) geri çekildi. Burke ve ark.göre 2016, biz davetsiz misafir için itaatkâr sırtüstü duruşu görüntülerse sosyal karşılaşma daha önce sonlandırıldı düşünün > 8 s veya 13 saldırı ısırıkları meydana eğer. Başka bir seçenek önemli yaralanma riski olmadan ekran hayvanlar için hayvan içinde a kafes çevirme değil kadar her iki hayvan geçmek büyük bir delik ile hızı olabilir.  Saldırganlık hayvanlar tabi saldırgan davranışlar yönlendirmek için tespit edilemedi.  Bir hayvan bir yaralanma bir yara 1 cm çap ve/veya kas doğrudan maruz kalma ile ayakta tutan çalışma söz konusu değildir ve ötenazi.</li>
			<li>10 min agonistik karşılaşma sonra farelerin test odasına götür ve CPP aparatı hayvanlarda (bölmeleri ayıran hemen Giyotin kapı) 15 dakikadır (aynı öncesi ve sonrası-C testleri) yerleştirin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>3. istatistiksel analiz
Not: Ideal örnek boyutu 15 hayvan grubu başına en az olmalıdır.
<ol><li>Bir değişken, tedavi, arasında karışık bir ANOVA aracılığıyla Grup ilaç eşleştirilmiş kompartımanda geçirdim bu süre analiz (kontrol grubu, deney grubu, iki grup örneği Şekil 7 c) iki düzeyleri ve bir değişken-gün içinde 2 düzeyleri ile (Pre-C ve Post-C). Not: Kontrol grubunda hayvanlar ilaç almak ama hiçbir çevre manipülasyonlar yok. Öte yandan, deney grubu hayvanlar farklı çevresel koşullara maruz kalır. Uyuşturucu eşleştirilmiş kompartımanda duyarlılık herhangi bir önemli farklar ilaç varsa görmek için test öncesi-C saygı ile Post-C günü harcanan süre karşılaştırın.</li>
	<li>Buna ek olarak, ya önemli puanlarının kontrol etmek için Bonferroni post-hoc çözümlemesi.</li>
	<li>Student´s t-testleri aracılığıyla gelişmiş tercih deneme ama son anda, ders sırasında yok olma-iade prosedürü ile devam etmek için bunları analiz grupları yok olma ve iade değerleri ile ilgili verileri analiz bir ANOVA ile ile bir değişken içinde (gün) ile bağlı olarak her grup düzeyi sayısı. Not: ne zaman karşılaştırma sayısı arttı, şans eseri de bu önemli olacak sayısı arttı. Bu nedenle, yanlış-mutlak (tip 1 hataları) almamak için biz 'böylece test daha muhafazakar birden çok t-test için Bonferroni düzeltmesi olan yapım p-değeri doğru'. Ancak, iade sınava iade test ve son nesli test arasında karşılaştırma yapılmalıdır. Bu nedenle, düzeltme için gerek yoktur.</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Uyuşturucu bağımlılığı araştırma kilit noktası özlem azaltmak ve sonuç olarak, relapse için güvenlik açığı azaltmak tedaviler gelişmedir. CPP paradigma iade modeli sayesinde bir önceliktir gelecekteki araştırma nüks modüle farklı yordam ve çevresel faktörlerin etkisini incelemek mümkündür. CPP paradigma için çevresel faktörler son derece hassas bir test olarak dikkate alınacak bazı önemli noktalar vardır.
Değişiklikler ve sorun giderme: ?...

Klimalı yer tercih (CPP) paradigma çeşitli uyaranlara1,2tarafından indüklenen şartına ödül değerlendirme basit bir yol sunar ve genel olarak bağımlılık uyuşturucu3 şartına tatmin edici etkilerini incelemek için kullanılan . Bu Pavlovian Klima, bağımlılık davranışı4korumak için uyuşturucu ilişkili çevresel ipuçları motivasyon değerini değerlendirmek dayanır. Bu modelde, ikincil appetitive özellikleri (şartına tatmin edici etkileri) çevre ipuçları elde bir birincil reinforcer3ile eşleştirildiğinde. Örneğin, başlangıçta tarafsız bir yer (örneğin bir kompartımanda CPP kafes rengini) bir ilaç kötüye belirli etkileri ile bazı sırasında eşleştirilmiş iken başka bir bölme bir araç enjeksiyon ile ilişkili oturumları5, Klima. Eğer hayvan daha fazla zaman daha önce uyuşturucu ile ilişkili yerde Klima, takip, CPP3geliştirmiştir varsayılır. Hayvan birincil reinforcer olan uyuşturucuya bağlı çevre ipuçları için pozitif bir değer verdiğinde tercih kurulması sağlanır. Sonuç olarak, hayvan davranış ilaç arama yanıt-e doğru yanıt bu bağlamsal ipuçları6olarak gerçekleştirir. CPP modeli gösterilen belirli bir koşulu (sosyal yenilgiden daha önce acıÖrneğin,) hayvanlarda daha hassas ve duyarlı olan doz ilaç, subthreshold doz ödüllendirici özelliklerinin değerlendirilmesi izin verir. naif hayvanlar7etkili değil.
CPP modeli da yok olma/iade mevcut Protokolü amacı olan nüks3, çalışmaya bir hayvan modeli olarak değerlendirmek için kullanılmıştır. Üç farklı aşama vardır: satın alma, yok olma ve iade (Şekil 1). CPP iade modelde, hayvanlar, öncelikle bir uyuşturucu eşleştirilmiş bölme için CPP edinmeniz ve sonra birkaç nesli oturumları gerçekleştirin. Hayvan yaklaşım olmuştur şartına bir ödüllendirici uyarana davranış onun yanıt azaltır an (Örneğin, uyuşturucu) kaldırılmış olarak tükenme tanımlamak8. Böylece yavaş yavaş zayıflatılmış9edinsel tercihtir tükenme oturumları sırasında hayvanlar yokluğunda bölmeleri uyuşturucunun keşfedin. Extinction (uyuşturucu eşleştirilmiş kompartımanda harcanan süre progresif azalma) sırasında hayvan sergileyen davranış değişikliği nedeniyle önceki öğrenilen Yanıt ile rekabet yeni öğrenme süreçleri olabilir düşünmeye önemli bir konu olduğunu, veya konu3iç motivasyon durumuyla bir düşüş nedeniyle. Son olarak, bağlam ya da ilaç ipuçları aracılığıyla yer tercih ta modelimiz iade1olur.
İlişkili uyuşturucu bir astar enjeksiyon yönetme bağlamsal ipuçlarını yaklaşım ta kabul tercih getirebileceği. Uyuşturucu astar iade özlem indüklenen ve hayvanlar için ödül ile ilgili çevresel ipuçları aramaya motive uyuşturucu zevkli etkileri kalıcı bellek nedeniyle oluşur.
Yordamı (cerrahi gerektiren kendi kendine Yönetim aksine,) non-invaziv CPP iade modeli bazı avantajları nelerdir, ucuz ve basit. Buna ek olarak, bu model iyi ölçüt geçerliliği, iyi insanlar10,11relapse, re-uyuşturucu12,13 maruz gibi neden bir çekim gücü ile iade inducing, ne olacağı taklit vardır veya 14stres.
Extinction-iade model intravenöz kendi kendine idare gibi diğer teknikleri vardır. Burada, hayvan hayvan, compulsivity ve motivasyon14,15,16operant yanıt değerlendirilmesi izni uyuşturucu yapabilirsiniz bir kolu tuşuna basın. CPP büyük avantajı üzerinde kendi kendine yönetim yordamları CPP iade yaklaşımının yeniden ortaya çıkma oluşan uyuşturucu ile eşleştirilmiş bağlam uyaranlar teşvik motivasyonel değerini reaktivasyonu yansıtmak için kabul edilir olduğunu davranış bağlam17. Ayrıca, stres gibi uyuşturucu olmayan uyarıcılara da iade18,19tetikleyebilir. Örneğin, bir ayak şok veya kısıtlama stres sonra20bir kendi kendine Yönetim çalışma iade sıçanlarda eroin alımının üzerinde hiçbir etkisi nitelendirdi. Yazarlar bu gerilim farklı bir bağlamda kendi kendine Yönetim odası dışında test edildi çünkü başarısız oldu tartışıldı. Buna ek olarak, iade CPP modeli kullanırken vardı aynı stresler kullandıktan sonra bir açık yeniden kurulması morfin kaynaklı CPP ve CPP ve farklı zamanlarda farklı bir bağlamda uygulanır (0 ve 15 dakika sonra stres maruz kalma)18 .
Çeşitli çalışmalar literatürde farklı yollarını uyuşturucu ve stres kaynaklı iade göstermiştir. Bir yandan, iade uyuşturucu kaynaklı sıçanlar ve fareler morfin5,21,22,23, kokain24,25, amfetamin26kullanarak rapor edildi, 27, etanol28,29ve 3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA)30. Öte yandan, strese maruz kalma ilaç kötüye açığına belirleyici bir faktör olabilir. Stres uyuşturucu7,31,32 tatmin edici etkilerini artırmak için bilinmektedir ve iyi kurulmuş33,34nüks onların rolüdür. Örneğin, bir conspecific sosyal etkileşimleri yenilgi morfin ve kokain CPP18,19edilmekteyse. Buna ek olarak, sosyal yenilgi tekrarlanan maruz hayvanlar subthreshold dozda kokain ödüllendirici şartına etkileri daha savunmasız ve tercih çok düşük dozda kokain7ile yeniden.
Uygulama CPP iade modelinin hayvanlarda relapse için güvenlik açığı değerlendirmek için yararlı ve hassas bir şekilde ve insan relapse, gibi tehdit ana Tetikleyiciler farklı ince çevre manipülasyonlar değerlendirilmesi izin verir uyuşturucu veya stres indüklenen geri alalım.

<table><tbody><tr><td>MONPRE 2Z software</td><td>CIBERTEC S.A., Spain</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Identical Plexiglas boxes with two equal sized compartments separated by a grey central area.</td><td>CIBERTEC S.A., Spain</td><td>N/A</td><td>The compartments have different colored walls (black vs white) and distinct floor textures (fine grid in the black compartment and wide grid in the white one). All boxes are equipped with four infrared light beams in each compartment of the box and six in the central area which allow the recording of the position of the animal and its crossings from one compartment to the other.</td></tr><tr><td>Cocaine hydrochloride</td><td>Laboratorios Alcaliber S.A., Madrid, Spain</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Animals: mice of the OF1 outbred strain</td><td>Charles River, Barcelona Spain</td><td>N/A</td><td>Male mice who arrive to the laboratory on PND 42 and on PND 60 perform the CPP test. These animals are specially indicated for social defeat and aggression models.</td></tr><tr><td>Standard Diet- Teklad Global Diet 2014</td><td>Supplied by Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Spain)</td><td></td><td>13 kcal % fat, 67 kcal % carbohydrates and 20% kcal protein; 2.9 kcal/g</td></tr><tr><td>High fat diet TD.06415</td><td></td><td></td><td>45 kcal % fat, 36 kcal % carbohydrates and 19% kcal protein; 4.6 kcal/g</td></tr></tbody></table>

reinstatement of drug-seeking in mice using the conditioned place preference paradigm

Mevcut Protokolü şartına yer tercih (CPP) nüks içinde uyuşturucu bağımlılığı bir model olarak açıklar. Bu modelde, hayvanlar ilk şartına yer tercih bir uyuşturucu eşleştirilmiş bölme olarak elde etmek için eğitilmiştir ve sonrası Klima test sonra kurulan tercih söndürmek için birkaç seans gerçekleştirirler. CPP uyuşturucu çevre ile ilgili ipuçlarını şartına tatmin edici etkileri değerlendirilmesi izin verir. Sonra extinguished CPP sağlam bir astar doz ilaç sigara ekip yönetimi tarafından ve stresli uyarıcılara maruz iade. Her iki yöntem burada açıklanmaktadır. Hayvan davranış yanıt reinitiates zaman şartına ödül iade yer almış kabul edilir.
Non-invaziv, ucuz ve basit iyi geçerlilik ölçütleri ile bu iletişim kuralı başlıca avantajları şunlardır. Ayrıca, stres veya nüks ilaç davranışları arayan modüle diyet gibi farklı çevresel manipülasyonlar çalışma sağlar. Hayvanların operant yanıt dahil gibi bir sınırlama motivasyon ve ilacın birincil güçlendirici etkileri keşfetmek için araştırmacı hedefliyor verirseniz, o kendi kendine yönetim yordamları ile tamamlanmaktadır ise.

İlk olarak, astar ve stres indüklenen iade temsilcisi sonuçlarını yetişkin OF1 erkek fare kullanarak Şekil 7 ' de gösterilen.
Şekil 7a-b saatini temsil eden veri ön içinde uyuşturucu eşleştirilmiş compartment(s) geçirdi ve Post-C testi tekrarlanan ölçüler ANOVA ile konular içinde değişken yaşam (Pre-C ve Post-C karşılaştırma) ...

Watch this Scientific Journal Video about Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm at JoVE.com

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Bu iletişim kuralı şartına yer tercih (CPP) nüks bir model olarak açıklar. Bu yordam nüks ölçümü çevre ipuçları uyuşturucu ilişkili etkisi özlem olarak göz önünde bulundurarak laboratuvar hayvanlarda izin verir ve çekimser bağımlıları nüks Şu anda uyuşturucu bağımlılığı tedavi programları odak noktasıdır.

Uyuşturucu arayan farelerde şartına yer tercih paradigması kullanarak iade

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

reinstatement-drug-seeking-mice-using-conditioned-place-preference

Universidad de Cartagena UDEC

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Behavior

Unit 1

Pharmacotherapy of Depression and Anxiety Disorders

SCIENTISTS IN ACTION

11.4K Görüntüleme.  Universitat de València. Bu iletişim kuralı şartına yer tercih (CPP) nüks bir model olarak açıklar. Bu yordam nüks ölçümü çevre ipuçları uyuşturucu ilişkili etkisi özlem olarak göz önünde bulundurarak laboratuvar hayvanlarda izin verir ve çekimser bağımlıları nüks Şu anda uyuşturucu bağımlılığı tedavi programları odak noktasıdır.

Video: Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

Cre Recombinase Kokain Klima yeri tercihi Hedef Genlerin Rolü Eğitim için ifade Viral Vektörler stereotaksik Mikroenjeksiyon

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Davranış

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

Eroin kanaatkâr Sıçanlarda Aradığınız üzerinde uzun süreli Gıda Kısıtlanması Etkisi Eğitim Bir Prosedürü

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats 

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

Laboratuar Farelerinde Aradığınız Kokain Footshock Bağlı Yürürlüğe Girmesi incelenmesi için Usulü

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Nörobilim

Operant Sensation Seeking in the Mouse

Operant methods are powerful behavioral tools for the study of motivated behavior. These 'self-administration' methods have been used extensively in drug addiction research due to their high construct validity. Operant studies provide researchers a tool for preclinical investigation of several aspects of the addiction process. For example, mechanisms of acute reinforcement (both drug and non-drug) can be tested using pharmacological or genetic tools to determine the ability of a molecular target to influence self-administration behavior1-6. Additionally, drug or food seeking behaviors can be studied in the absence of the primary reinforcer, and the ability of pharmacological compounds to disrupt this process is a preclinical model for discovery of molecular targets and compounds that may be useful for the treatment of addiction3,7-9. One problem with performing intravenous drug self-administration studies in the mouse is the technical difficulty of maintaining catheter patency. Attrition rates in these experiments are high and can reach 40% or higher10-15. Another general problem with drug self-administration is discerning which pharmacologically-induced effects of the reinforcer produce specific behaviors. For example, measurement of the reinforcing and neurological effects of psychostimulants can be confounded by their psychomotor effects. Operant methods using food reinforcement can avoid these pitfalls, although their utility in studying drug addiction is limited by the fact that some manipulations that alter drug self-administration have a minimal impact on food self-administration. For example, mesolimbic dopamine lesion or knockout of the D1 dopamine receptor reduce cocaine self-administration without having a significant impact on food self-administration 12,16. 
Sensory stimuli have been described for their ability to support operant responding as primary reinforcers (i.e. not conditioned reinforcers)17-22. Auditory and visual stimuli are self-administered by several species18,21,23, although surprisingly little is known about the neural mechanisms underlying this reinforcement. The operant sensation seeking (OSS) model is a robust model for obtaining sensory self-administration in the mouse, allowing the study of neural mechanisms important in sensory reinforcement24. An additional advantage of OSS is the ability to screen mutant mice for differences in operant behavior that may be relevant to addiction. We have reported that dopamine D1 receptor knockout mice, previously shown to be deficient in psychostimulant self-administration, also fail to acquire OSS24. This is a unique finding in that these mice are capable of learning an operant task when food is used as a reinforcer. While operant studies using food reinforcement can be useful in the study of general motivated behavior and the mechanisms underlying food reinforcement, as mentioned above, these studies are limited in their application to studying molecular mechanisms of drug addiction. Thus, there may be similar neural substrates mediating sensory and psychostimulant reinforcement that are distinct from food reinforcement, which would make OSS a particularly attractive model for the study of drug addiction processes. The degree of overlap between other molecular targets of OSS and drug reinforcers is unclear, but is a topic that we are currently pursuing. While some aspects of addiction such as resistance to extinction may be observed with OSS, we have found that escalation 25 is not observed in this model24. Interestingly, escalation of intake and some other aspects of addiction are observed with self-administration of sucrose26. Thus, when non-drug operant procedures are desired to study addiction-related processes, food or sensory reinforcers can be chosen to best fit the particular question being asked. 
In conclusion, both food self-administration and OSS in the mouse have the advantage of not requiring an intravenous catheter, which allows a higher throughput means to study the effects of pharmacological or genetic manipulation of neural targets involved in motivation. While operant testing using food as a reinforcer is particularly useful in the study of the regulation of food intake, OSS is particularly apt for studying reinforcement mechanisms of sensory stimuli and may have broad applicability to novelty seeking and addiction.

In this protocol we describe a method of operant learning using sensory stimuli as a reinforcer in the mouse. It requires no prior training or food restriction, and it allows the study of motivated behavior without the use of a pharmacological or natural reinforcer such as food.

Fare Aradığınız Edimsel Sensation

Operant methods are powerful behavioral tools for the study of motivated behavior.  These 'self-administration' methods have been used extensively in drug ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Kokain kaynaklı Davranış HASSASİYET ve Fare koşullu yer tercihi Değerlendirilmesi

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

Sıçanlarda Sakkaroz Craving Kuluçka değerlendirilmesi için Genel Bir Yöntem

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Kuluçka özlem sıçanlarda ölçmek için bir şartına yer tercih Protokolü

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

A Procedure to Study Stress-Induced Relapse of Heroin Seeking after Punishment-Imposed Abstinence

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with drug-taking. This model has been implemented in experiments using different types of substances of abuse such as methamphetamine, cocaine, and alcohol. However, punishment-induced abstinence in heroin-trained animals has not been demonstrated. Furthermore, acute stress is a key trigger for relapse in humans and animal models. It was previously demonstrated that acute food deprivation robustly induced reinstatement of extinguished cocaine and heroin seeking. The procedure described here can be used to assess the effects of acute stress exposure on heroin seeking after punishment-imposed abstinence. A total of 8 rats were implanted with chronic intravenous (i.v.) catheters and trained to self-administer heroin (0.1 mg/kg/infusion) for 18 days under a seek-take chained schedule. Completing the seek link gave access to the take lever, which was paired with a heroin infusion. The seek lever was programmed with a variable interval 60 schedule of reinforcement (VI60), and the take lever was programmed with a fixed-ratio 1 reinforcement schedule (FR1). Following self-administration training, a mild foot shock was delivered on 30% of the completed seek links instead of the extension of the take lever. Footshock intensity was increased by 0.1 mA per daily session from 0.2 mA to 1.0 mA. Heroin-seeking tests were performed after 24 h of food deprivation (FD) or sated conditions. Rats under acute food deprivation condition robustly increased heroin seeking after punishment-imposed abstinence.

A procedure that demonstrates a robust acute food deprivation-induced relapse to heroin seeking after punishment-imposed abstinence is described. A punishment-imposed abstinence model was successfully implemented using the seek and take chain schedule for heroin self-administration. Heroin-seeking tests are then performed following 24 h of food-deprivation stress.

Ceza Uygulanan Yoksunluktan Sonra Eroinin Strese Bağlı Nüksetmesini İncelemek İçin Bir Prosedür

The punishment-imposed abstinence procedure models the self-imposed abstinence that humans initiate due to the adverse consequences associated with ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue reactivity, the sensitivity to cues previously linked with the drug-taking experience, plays a prominent role in human craving during abstinence. Cue reactivity can be assessed as the attentional orientation toward drug-associated cues that is measurable as appetitive approach behavior in both preclinical and human studies. Herein describes an assessment of cue reactivity in rats trained to self-administer cocaine. Cocaine self-administration is paired with the presentation of discrete cues that act as conditioned reinforcers (i.e., house light, stimulus light, infusion pump sounds). Following a period of abstinence, lever presses in the cocaine self-administration context accompanied by the discrete cues previously paired with cocaine infusion are measured as cue reactivity. This model is useful to explore neurobiological mechanisms underlying cue reactivity processes as well as to assess pharmacotherapies to suppress cue reactivity and therefore, modify relapse vulnerability. Advantages of the model include its translational relevance, and its face and predictive validities.&#160;The primary limitation of the model is that the cue reactivity task can only be performed infrequently and must only be used in short duration (e.g., 1 hour), otherwise rats will begin to extinguish the pairing of the discrete cues with the cocaine stimulus. The model is extendable to any positively reinforcing stimulus paired with discrete cues; though particularly applicable to drugs of abuse, this model may hold future applications in fields such as obesity, where palatable food rewards can act as positively reinforcing stimuli.

Cue reactivity is conceptualized as sensitivity to cues linked with drug-taking experiences that contribute to craving and relapse in abstinent humans. Cue reactivity is modeled in rats by measuring attentional orientation toward drug-associated cues that results in appetitive approach behavior in a cue reactivity test following self-administration and forced abstinence.

Cue reaktivite kokain kullanımı bozukluğu bir sıçan modelinde ölçmek için bir protokol

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

Using Optogenetics to Reverse Neuroplasticity and Inhibit Cocaine Seeking in Rats

This protocol demonstrates the steps needed to use optogenetic tools to reverse cocaine-induced plasticity at thalamo-amygdala circuits to reduce subsequent cocaine seeking behaviors in the rat. In our research, we had found that when rats self-administer intravenous cocaine paired with an audiovisual cue, synapses formed at inputs from the medial geniculate nucleus of the thalamus (MGN) onto principal neurons of the lateral amygdala (LA) become stronger as the cue-cocaine association is learned. We hypothesized that reversal of the cocaine-induced plasticity at these synapses would reduce cue-motivated cocaine seeking behavior. In order to accomplish this type of neuromodulation in vivo, we wanted to induce synaptic long-term depression (LTD), which decreases the strength of MGN-LA synapses. To this end, we used optogenetics, which allows neuromodulation of brain circuits using light. The excitatory opsin oChiEF was expressed on presynaptic MGN terminals in the LA by infusing an AAV containing oChiEF into the MGN. Optical fibers were then implanted in the LA and 473 nm laser light was pulsed at a frequency of 1 Hz for 15 minutes to induce LTD and reverse cocaine induced plasticity. This manipulation produces a long-lasting reduction in the ability of cues associated with cocaine to induce drug seeking actions.

The methods described here outline a procedure used to optogenetically reverse cocaine-induced plasticity in a behaviorally-relevant circuit in rats. Sustained low-frequency optical stimulation of thalamo-amygdala synapses induces long-term depression (LTD). In vivo optogenetically-induced LTD in cocaine-experienced rats resulted in the subsequent attenuation of cue-motivated drug seeking.