Name: pentylenetetrazole-induced kindling mouse model
Uploaded: 2018-06-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model at JoVE.com

Bu eser kısmen JSP'ler KAKENHI grant numaraları 24700349, 24659093, 25293239, JP18H02536 ve 17 K 07086, MEXT KAKENHI grant numaraları AMED Grant numarası JP18ek0109311, 25110737 ve 23110525 ve SENSHIN Tıbbi Araştırma Vakfı ve Japonya ile desteklenmiştir Epilepsi Araştırma Vakfı.

Tüm deneysel prosedürler hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Tokyo Metropolitan tıbbi Bilim Enstitüsü tarafından kabul edildi. Doğum sonrası 8 - 16-hafta-yaşlı fareler tavsiye edilir. Doğuştan herhangi bir yük deneme için kabul edilebilir olduğunu. BALB/c ve Swiss albino farelerin PTZ için daha hassas ise C57BL/6 fareler PTZ için daha dayanıklıdır. C57BL/6 Bu çalışmada kullanılmıştır. Güvenlik Açığı için PTZ da fareyi yaş üzerinde bağlıdır. Küçük fareler için karşılaştırıldığında, büyük fareler PTZ35' e daha ateşe dayanıklı değildir. Bu yöntem için kullanılan hayvan sayısı değişebilir, ancak en az 6-10 hayvan her koşul için gereklidir.
1. PTZ hazırlanması
<ol><li>2 mg/mL PTZ steril %0,9 (w/v) NaCl geçiyoruz. PTZ kullanım gününde hazırlamak.</li>
</ol>2. enjeksiyon PTZ
<ol><li>Saat 9:00 ve 12:00 (Öğle) arasındaki tüm deneyler yapmak.</li>
	<li>Hayvanın vücut ağırlığı ölçmek.</li>
	<li>Hayvan bir gözlem odası habituation için yerleştirin.</li>
	<li>Habituation dönemde (3 dk), hayvan ve önceden belirlenmiş enjeksiyon doz vücut ağırlığına göre enjeksiyon için PTZ çözüm hacmi hesaplamak. Not: 35 mg/kg PTZ kullanılır, örneğin, PTZ 0.875 mg 25 gr ağırlığında bir fare için gereklidir (35 mg / kg x 0.025 kg 0,875 = mg). Bu nedenle, 2 mg/mL PTZ çözüm 437.5 μL enjekte (0,875 mg/2 mg / mL = 0.4375 mL). PTZ enjeksiyon doz fare genotip ve zorlanma bağlıdır. Vahşi tipli C57BL/6 fareler için 30-35 mg PTZ/kg vücut ağırlığı bir doz ilk deneme için önerilir. PTZ duyarlılık fare kullanılan zorlanma36üzerinde,37bağlıdır. Enjeksiyon dozu deneme amaçlı göre değişir.</li>
	<li>PTZ intraperitoneally 27'lik iğne için hayvanın karın sol veya sağ çeyreğine bağlı 1 mL şırınga ile enjekte. Orta hat enjekte kaçının.<ol>
<li>Aynı konumda tekrarlanan enjeksiyon kaçının.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PTZ Yönetim (Şekil 1A), sonra 30 dk için hayvan davranışlarını gözlemlemek ve sınıflandırmak ve aşağıda gösterildiği gibi anormal davranış puanı. Mümkünse, hayvanlar 24 h veya en az bir ek 6-10 h sonrası enjeksiyon için gözlem altında özellikle nöbet önem skor 3 ulaştığında veya yukarıda tut.<ol>
<li>Not herhangi bir hafif nöbetler veya 30-dak gözlem döneminin ötesinde hayvan davranış değişiklikleri. Bu gözlem süresi PTZ subconvulsive bir doz özellikle önemli ve tam etkisini epilepsi kronik sebepsiz yere ele geçirme vakaları nesil adresi olabilir uzun.</li>
		<li>Ayrıca, ölçü değişiklikleri olarak gözlenen her nöbet nöbet süresi nöbet süresi içinde ilgili nöbet önem. Ayrıca, ilk nöbet geçirdikten sonra PTZ enjeksiyon için gecikme süresi toplamak için başka bir önemli ölçüde olur. Nöbet sıklığını, süre ve gecikme süresi izleme herhangi bir sonrası nöbet Moleküler çalışmalar için önemlidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PTZ her geçen gün (Şekil 1A) enjekte. Enjeksiyonları deneme amaçta bağlıdır. Temsilcisi örnekler aşağıdaki gibidir:<ol>
<li>Hayvanlar, tamamen tutuşturulmuş bir kez bir hayvan nöbet puanı 5 (tonik-klonik nöbet) deneyimleri oluşturmak için enjeksiyon ek üç idareler içinde son. Bu durumda, nöbet puanı için üç ardışık idareleri artırmaz Eğer enjeksiyon dozu arttırmak. Her hayvan farklı sayı ve PTZ enjeksiyonları doz alabilirsiniz.</li>
		<li>Fix numarası ve PTZ enjeksiyon doz için PTZ Anti-epilepsi ilaçları ilişkin değerlendirmeler ve genetiği değiştirilmiş fare fenotip çalışmaları da dahil olmak üzere, güvenlik açığı değerlendirmek için her durumda. Bütün hayvanlar PTZ enjeksiyonları aynı sayıda vermek; Toplam 8-12 enjeksiyonları önerilir. Eğer bir hayvan ölürse, nöbet skor olarak 6 ile belirtilen.</li>
		<li>Enjeksiyon dozu yüksek nöbet korumak için gerekli belirlemek puan edinildi (4 veya 5) 10 veya daha fazla enjeksiyonları epileptik nöbetler oluşan histopatolojik değişiklikleri incelemek. Bu durumda, toplam enjeksiyon sayısı 25 dan 30'a mesafe. Nöbet puanı 5 ulaşırsa enjeksiyon dozu azalt. Nöbet puanı 3 veya daha düşük azalırsa, enjeksiyon dozu arttırmak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. nöbet puanı
<ol><li>Hayvan davranışlarını gözlemlemek ve puanları kaydedin.<ol>
<li>Sınıflandırmak ve epileptik davranışlarını izler38,39 (Şekil 1B) puan: 0: normal bir davranış, hiçbir anormallik. 1: immobilizasyon, karnına yalan. 2: baş başını sallayarak, yüz, forelimb veya hindlimb myoklonus. 3: sürekli tüm vücut myoklonus, Miyklonik gerizekalı, kuyruk kaskatı kaldırdı. 4: yetiştirme, tonik nöbet, yan tarafında düşme. 5: tonik-klonik nöbet, sırtını, acele ve atlama vahşi düşme. 6: ölüm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Racine puanı40, deneysel şartlarına bağlı olarak temel davranış ölçütünü değiştirin.</li>
</ol>4. sonrası nöbet Analizi
<ol><li>Immunohistopathological Analizi<ol>
<li>Perfüzyon fiksasyon<ol>
<li>Hazırlık<ol>
<li>%4 (w/v) paraformaldehyde (PFA) 0.1 M fosfat tampon (pH 7,4) geçiyoruz. Çözüm 1 M NaOH (yaklaşık 1 µL 50 mL PFA çözüm için 1 M NaOH) bir damla ilavesi ile yaklaşık 70 ° c ısı.</li>
				<li>Buz gibi 4 hazırlamak % PFA ve fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS).</li>
				<li>Peristaltik pompa, bir tüp ve iğne ile ayarlayın. Yaklaşık 20 mL su tüpünden kalıntı temizlemek için çalıştırın. O zaman, açık sonuna tüp buz gibi PBS yer.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Transcardial perfüzyon ve sabit beyin hazırlanması<ol>
<li>Fare ile % 50 isoflurane/50% Etanol küçük bir kavanoza derin anestezi.</li>
				<li>Fare onların ön ayakları ve hindlimbs iğneleyerek sırtüstü pozisyonda tutun.</li>
				<li>Karın ventral orta hat kesilmiş ve diyafram bulaşmasına neden.</li>
				<li>Diyafram kostal kenar boşluğu kesin. Sonra kaburga ve vücut yan her iki tarafında kesti. Xiphoid işlemi tarafından kilitleme forseps pinch ve göğüs kafesi çıkar. Bir iğne ile sabitleme veya forseps ile pinching tarafından xiphoid sürecinin yerini korumak. Kalp ortaya çıkarmak.</li>
				<li>İğne sol ventrikül yerleştirin ve makas kullanırken sağ atrium bir kesim yapmak. Bir iç duvarı delip geçebilir gibi iğne çok ileri kalp içine itmek için değil unutmayın.</li>
				<li>Buz gibi PBS sürekli bir akış (yaklaşık 15-20 mL/dk) kan yıkamak için iğne ile başlar.</li>
				<li>Kan vücuttan seçili olmadığında, tüp kabarcıklar ek olmadan %4 paraformaldehyde çözüm (yaklaşık 60 mL) taşıyın. O zaman, perfüzyon!</li>
				<li>Arka boyun ve omurga kesti ve baş cilt ve makas diseksiyon ile kafatası dorsal kısmı kapalı soyma.</li>
				<li>Göz yörüngeleri arasındaki premaxillary kemik kesme ve kafatası sırt kısmını tamamen kaldırmak.</li>
				<li>Arka taraftan beyin ve jugal kemik arasında bir boşluk oluşturmak ve trigeminal sinir ve optik hemisferlerine altında beyin kesti. Dikkatle beyin çıkarın ve % 4 içeren bir şişede yerleştirin PFA. 12-16 saat için 4 ° C'de beyin sonrası tamir et.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>Beyin dilim hazırlık<ol>
<li>Beyin cryoprotection için izin vermek için çözüm içine batar kadar sabit beyin % 20 sükroz/PBS için transfer.</li>
			<li>Gerekli dilim yönlendirme ve gerekli beyin parçası dayalı sabit beyin kesti.</li>
			<li>Cryomicrotome ayarlayın. Bıçak bulunduğu atayıp microtome sahne altında-20 ° c sıcaklıkta saklamanız</li>
			<li>Önceden kesilmiş beyin sahnesinde yerini ve % 20 sükroz/PBS ile beyin ceket. Sükroz/PBS çözüm yavaş yavaş beyin tamamen donmuş % 20 sükroz/PBS içinde gömülü olduğu kadar beyin sahne alanı'nda kapsayan dondurdu.</li>
			<li>Beyin (30 µm kalınlık) bıçak doku ile kaydırarak dilim. Dilimleri PBS aktarmak ve onları 4 ° C'de tutmak</li>
		</ol>
</li>
		<li>Floresan immünhistokimya<ol>
<li>Gerekli dilimleri %0,1 yıkama Triton X-100/PBS (PBST) 10 dk, 3 kat, oda sıcaklığında (RT) için.</li>
			<li>Onları PBST %2 keçi serum veya %5 Sığır serum albümin (BSA) için 1-2 h RT. ile kuluçka tarafından dilimleri engellemek</li>
			<li>Bir antikor çözüm 4 ° C'de 1-7 geceleme için birincil antikor PBST % 2 keçi serum veya %5 BSA ile uygun bir konsantrasyon ile dilimleri kuluçkaya</li>
			<li>Dilimleri 3 kez, RT. 10 dk içinde PBST yıkama</li>
			<li>Dilimleri ikincil antikor PBST içinde 1-2 h, RT, ışık korumalı için uygun konsantrasyonu ile ikincil antikor çözümde kuluçkaya.</li>
			<li>Dilimleri cam slaytlar üzerine monte ve montaj orta ve cam ile kaplayın.</li>
			<li>Floresans mikroskobu dilimlerle gözlemlemek.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Üç-odası testi<ol>
<li>Hazırlık<ol>
<li>En az 2 2-6 aylık 129/Sv fareler "yabancı fare." olmak aynı cinsiyetten konu fareler olarak hazırlamak İçinde belgili tanımlık kafes analiz önce tüm fareler alıştırmak. Her eğitim oturumu için kafeste fareyi getirin ve fareyi 15 dakika bırakın.</li>
			<li>Konu fare ile her habituation aşama önce tüm cihazları ve her iki kafesler %70 etanol ile yüzey silerek temizleyin.</li>
			<li>3-odası aparatı iki yan odaları boş kafesleri yerleştirebilir ve odalar arasında kapılar açabilirsiniz.</li>
			<li>Konu fare alıştırmak için merkezi odasında bir konu fare yerleştirin ve serbestçe aparatı fare her iki kafesleri araştırmış, artı, kafes korkulu olabilir bir ek 5 dk. konu hayvan yapmak kadar taşımak fareyi sağlar 20 dk için kafes araştırmak ve bu analiz için kullanılmamalıdır. Bu tür hayvanlar kafes önlemek ve nadir kafes yakın olur.</li>
			<li>Hayvan merkezi odasına hamle sonra kapıları kapatır ve serbestçe hareket merkezi odasında 5 min için fare bildirir. Bu dönemde, 129/Sv fareler birini kafese alıştırmak için bir kafes içinde koymak.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Sociality Analizi<ol>
<li>Hemen konu fare habituation süre sonra bu analizlerini.</li>
			<li>129/Sv fare içeren kafes yerleştirin, "yabancı 1 kafeste", yan odaları biri olarak adlandırdığı ve "nesne kafeste", diğer yan odası olarak adlandırılan boş kafese koyun.</li>
			<li>Kapıyı aç ve konu fare davranışınızı izleyebilir.</li>
			<li>Konu fare özgürce 10 dakikadır hareket ve aşağıdaki davranış parametreleri kaydetmek izin verir. Konu fare fare yabancı 1 kafes kaçınarak ve odaları biri köşesinde kalan gösterildiği gibi fare yabancı 1 kafeste Eğer korkuyorsa, hayvan analiz için kullanılmamalıdır. a) zaman her odası, yabancı 1 odası, nesne odası ve merkezi odası içinde geçirdi. b) zaman her kafes, yabancı 1 kafes ve nesne kafes soruşturma geçirdi. (Fare fare algılaması eğer belgili tanımlık kafes soruşturma veya toughing fare veya kafes sınıflandırılır) c) (isteğe bağlı) her odasına giriş sayısı d) toplam mesafe (isteğe bağlı) seyahat</li>
			<li>Merkezi odanın içine fare hareket sonra kapıları kapatın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Sosyal yenilik Analizi<ol>
<li>Hemen sociality analizden sonra bu analizlerini.</li>
			<li>Her iki kafesler %70 etanol ile silin.</li>
			<li>"Yabancı 2 kafes" ve odaların birinde yer yabancı 2 kafes olarak adlandırdığı kafesleri, başka bir 129/Sv fare yerleştirin. Yabancı 1 fare "yabancı 1 kafes" olarak adlandırılan diğer kafesin içine yerleştirin ve yabancı 1 kafes diğer odasında yerleştirin.</li>
			<li>Kapıyı aç ve konu fare davranışınızı izleyebilir.</li>
			<li>Konu fare özgürce 10 dakikadır taşımak izin ve sociality analiz için açıklanan aynı davranış parametrelerini ölçmek. Not: Yabancı 1 ve yabancı 2 fare rasgele seçilmelidir. Yabancı 1 Oda ve nesne odası yanı sıra yabancı 1 odası ve yabancı 2 odası rastgele tespit edilmelidir.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Bağlamsal korku ayrımcılık<ol>
<li>Merkezi Klima<ol>
<li>Her Klima duruşmadan önce deneysel cihazları % 70 etanol ile yüzey silerek temizleyin.</li>
			<li>Klima cihazları belirli koşullara sahip bir fare yerleştirin (aparatı şekli, duvar rengi, kat malzeme, koku, aydınlatma ve arka plan gürültü ses önceden saptanır). Örneğin, burada kullanılan klima cihazları bir kare aparatı ile şeffaf Pleksiglas duvarlar, bir metal ızgara zemin, bir etanol koku, 100 lux parlaklık ve 65 dB arka plan beyaz gürültü oldu.</li>
			<li>Ayak-şok 0.1-mA elektrik şokları 2 için takma ad-rasgele zamanlaması ile tarafından fare durumu s x 3 kez 5 dk boyunca.</li>
			<li>Fare Klima sonra eve kafes dönmek.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bellek değerlendirmesi<ol>
<li>Her değerlendirme önce deneysel cihazları % 70 etanol ile yüzey silerek temizleyin.</li>
			<li>Ertesi gün aşağıdaki Klima, fare şok koşulu olarak aynı Aparat içine koyun ve 5 dk boyunca donma süre ölçebilir.</li>
			<li>Daha sonra aynı gün içinde bir roman aparatı fareyi getirin ve bir dakika 5 değerlendirme sırasında donma süre ölçebilir. Bir üçgen aparatı beyaz Pleksiglas duvarlar, plaka kat, hiçbir koku, 30 lux parlaklık ve 70 dB Beyaz gürültü ile burada kullanılmıştır.</li>
			<li>Dondurma zaman aynı koşul ve Roman durumu arasında karşılaştırmak. Fareler bir normal bellek yeteneği ile roman durumda aynı durumda daha fazla buz tutar. Donma olduğunu hayvan fazla 2 için tanımlanmış hareketsizlik s.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>

Yazarlar hiçbir çıkar çatışmaları bildirin.

Burada, epilepsi farmakolojik bir hayvan modeli kurulması için yaygın olarak erişilebilir bir protokol mevcut. Kimyasal çıra PTZ-aracılı uzun bir geçmişi vardır ve epilepsi41histopatoloji ve hücresel patoloji incelenmesi için genel kabul görmüş bir modeldir. Epilepsi kimyasal çıra modelinin daha önce Suzdak ve Jansen, 199542tarafından gözden geçirilmiş. PTZ, özellikle ile farmakolojik nöbet indüksiyon şiddetli nöbetler çağrıştıran bir kolay ...

Epilepsi tarafından tekrarlayan nöbetleri ile karakterize ve insanların yaklaşık % 1'i etkileyen kronik nörolojik bir hastalıktır. Epileptogenesis ve el koyma nesil Epilepsi hastalarında temel mekanizmaları tam olarak klinik çalışmalarda açıklık olamaz. Bu nedenle, uygun bir hayvan modeli epilepsi1çalışması için gereklidir.
Hayvan modelleriyle epilepsi epilepsi fizyolojisi araştırmak ve anti-epileptik ilaçlar2,3tanımlamak için kullanılmıştır. Bu modeller arasında farmakolojik nöbet indüksiyon epilepsi4patoloji incelenmesi için hayvan bir model oluşturmak için kullanılan yaygın bir yöntemdir. Bu ucuz ve basit bir yöntemdir. Elektrot-aracılı, çıra da yaygın olarak kullanılan bir yöntem ama bu yordamı daha yüksek maliyetlerdir ve Yöntem tekrarlayan nöbetlere5ikna etmek için cerrahi ve elektrik becerileri gerektirir.
Zamanlama ve ele geçirme vakalarının sayısı kolaylıkla kontrol farmakolojik indüksiyon de avantajlı çünkü. Spontan nöbetler sergi genetik fare modelleri de epilepsi çalışmada kullanılır. Ancak, ne zaman ve ne sıklıkta bu genetik modellerinde nöbetler ortaya tahmin etmek imkansız6olabilir. Bir izleme sistemi genetiği değiştirilmiş fare6epileptik davranışlarını gözlemlemek için gereklidir.
Kainic asit, pilokarpin ve pentylenetetrazole (PTZ) nöbet indükleyici ilaç7yaygın olarak kullanılmaktadır. Glutamat reseptörlerinin için bir agonist kainic asittir ve kolinerjik reseptörler pilokarpin etkinleştirir. PTZ olduğunu bir gamma aminobütirik asit (GABA)-reseptör antagonisti8. PTZ inhibitör sinapslarda, işlev artmış nöronal aktivite için önde gelen bastırır. Bu yönetmelik jeneralize nöbetler hayvanlar9' neden olur. Kainic asit ve pilokarpin tek bir enjeksiyon akut nöbetler, özellikle durum epileptikus (SE)10,11 tetikleyebilir ve kainic asit veya pilokarpin-aracılı SE kronik ve tekrarlayan spontan nöbetler12 teşvik , 13. electroencephalographic (EEG) kayıtları ve davranış analizi belirtilen tekrarlayan spontan nöbetler bir ay sonra bir tek enjeksiyon12,13gözlenir. PTZ kasılan bir doz tek bir enjeksiyon da akut kriz neden olmaktadır. Ancak, kronik spontan nöbetler PTZ tek bir enjeksiyon sonra teşvik etmek zordur. PTZ kronik İdaresi tekrarlayan nöbetleri14ikna etmek için gereklidir. Her iki yöntemde, tekrarlayan nöbetlere nesil bir patoloji daha insan epilepsi için benzer akut nöbetleri üretimi ikna etmek yapabiliyor. PTZ, söz konusu olduğunda her enjeksiyon nöbet uyandıran ve kademeli bir şekilde her enjeksiyon ile nöbet önem daha şiddetli olur. Son olarak, tek bir düşük doz PTZ enjeksiyon şiddetli tonik-klonik nöbet neden olmaktadır. Bu aşamada, her enjeksiyon şiddetli nöbetler çağrıştırır. Buna ek olarak, nöbet gecikme süresi ve süresi de enjeksiyonları boyunca değiştirir. Gecikme süresi tonik nöbet için sık sık15çıra ikinci aşamasında daha kısa olur. Ayrıca, nöbet tırmandığı bir uzun süreli nöbet süresi16tarafından eşlik ediyor. Nöbet önem düzenleyen moleküler mekanizması araştıran, gecikme süresi ve süre, anti-epileptik ilaçların17,18,19eleme için kullanışlıdır.
Nöbetler sık PTZ tek sistemik yönetimi tarafından indüklenir ve 30 dk4,5içinde kurtarma çok hızlıdır. Böylece, ele geçirmelerin sayısı PTZ-çıra modelinde daha fazla kontrol edilebilir. Ancak, EEG izleme Genelleştirilmiş sivri PTZ-aracılı nöbet20sonra 12 saat kadar görülebilir belirtti. Bu nedenle, hayvanlar tercihen müşahede çıra mekanizmaları altında 24 saat sonra daha kesin çözümleme için Miyklonik veya tonik nöbet21 kalmalıdır.
Önce veya sonra PTZ enjeksiyon yönetim ethosuximide, valproat, phenobarbital, vigabatrin ve retigabine3gibi anti-epileptik ilaçların tırmandığı nöbet önem derecesi3,22azaltır, 23. Benzer şekilde, nakavt fareler eksikliği genler FGF-222625 ve neuritin, nöbet alevlenmesi, matriks metalloproteinaz-924gibi içinde ilgili birden çok PTZ enjeksiyonları sonra indirimli nöbet önem sergilemek gösterilmiştir. Epileptik nöbetler sonra bu yöntem ile mümkün Ayrıca, histopatolojik değişiklikler gözlemleyerek. Temporal lob epilepsi olan hastalarda tipik histolojik değişiklikler vardır yosunlu fiber çimlenme27,28, anormal granül nöron geçiş29, astrogliosis30, nöronal hücre gibi beyin Ölüm hipokampus31,32ve hipokampal skleroz33. Benzer değişiklikler epileptik modeli hayvanlarda gözlenir. Mevcut yöntemler arasında kimyasal çıra PTZ-aracılı bir hayvan modeli epilepsi üretmek için bir iyi, tekrarlanabilir ve ucuz yöntemdir. Pilokarpin-aracılı SE modelinde, nöbet kontrolü zordur ve birçok fareler ölmek ya da SE34geliştirmek başarısız. Buna ek olarak, mortalite ve nöbet önem PTZ modelinde daha fazla kontrol edilebilir. Ayrıca, PTZ kainic asit ucuzdur ve becerileri fare beyin cerrahisinde ilaç idaresi için gerekli değildir.

<table><tbody><tr><td>Pentylenetetrazole</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6500</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>MANAC</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Mouse</td><td>CLEA Japan</td><td></td><td>C57Bl/6NJcl, postnatal 8 week, male</td></tr><tr><td>Syringe (1mL)</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>Needle(27G x 3/4&quot;) (0.40 x 19 mm)</td><td>Terumo</td><td>NN-2719S</td><td></td></tr><tr><td>Weighing scale</td><td>Mettler</td><td>PE2000</td><td>This item is a discontinued product. Almost equivalent to FX-2000i with FXi-12-JA from A&amp;amp;D company.</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydroxide</td><td>nacalai tesque</td><td>31511-05</td><td></td></tr><tr><td>Peristatic pump</td><td>ATTO</td><td>SJ1211</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>nacalai tesque</td><td>30404-45</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Yamato</td><td>REM-700</td><td>This item is a discontinued product. Almost equivalent to REM-710</td></tr><tr><td>Microtome blade</td><td>Feather</td><td>S35</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>anti-synaptoporin antibody</td><td>Synaptic systems</td><td>102 002</td><td></td></tr><tr><td>anti-ZnT3 antibody</td><td>Synaptic systems</td><td>197 002</td><td></td></tr><tr><td>anti-doublecortin</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-8066</td><td>This item is a discontinued product. We did not test equivalent product (sc-271390).</td></tr><tr><td>Contextual fear discrimination test apparatus</td><td>O&#039;hara</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Three chamber test apparatus</td><td>Muromachi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pentylenetetrazole-induced kindling mouse model

Pentylenetetrazole (PTZ) GABA-A reseptör antagonisti var. Subconvulsive bir doz sıralı enjeksiyon kimyasal kindling, bir epilepsi modeli geliştirilmesi için kullanılan, ancak PTZ mayi bir iğne içine bir hayvan, yüksek doz, akut, şiddetli bir nöbet neden olmaktadır. PTZ tek bir düşük doz enjeksiyon kasılma nöbetlerinden olmadan hafif nöbet neden olmaktadır. Ancak, PTZ tekrarlayan düşük doz enjeksiyonlari eşik kasılan nöbet uyandırmak için azaltın. Son olarak, sürekli düşük doz yönetimi PTZ şiddetli tonik-klonik nöbet neden olmaktadır. Bu yöntem basit ve yerde tekrarlayan nöbetlere içerir kronik bir hastalık olarak tanımlanır epilepsi Patofizyoloji araştırmak için geçerli değildir. Bu kimyasal kindling Protokolü hayvanlarda tekrarlayan nöbetlere neden olur. Bu yöntemle, güvenlik açığı PTZ-aracılı nöbetler veya tırmandığı epileptik nöbetlerin derecesini tahmin edilmiştir. Bu avantajları anti-epileptik ilaçlar ve epilepsi ile ilgili genleri süzmek için bu yöntemin kullanılması yol açmıştır. Buna ek olarak, bu yöntem epileptik hastaların beyinlerinde gözlenen histolojik değişiklikler da kimyasal tutuşturulmuş hayvanların beyinlerinde görünür çünkü nöronal hasar sonra epileptik nöbetler araştırmak için kullanılmıştır. Böylece, bu protokole uygun epilepsi hayvan modelleri üretmek için yararlıdır.

PTZ tekrarlanan enjeksiyon nöbet şiddetinde artışa neden olmaktadır. Altı C57BL/6 fareler PTZ ile tedavi edildi ve başka bir 6 fareler bir kontrol grubu olarak serum ile tedavi edildi. PTZ verilendozun 35 mg/kg ve 10 enjeksiyonu uygulandı. Hiçbir nöbetler veya anormal davranışlar serum enjeksiyonları (Şekil 2) tarafından uyarılmış, ancak nöbet puanı PTZ enjeksiyonları ile yavaş yavaş arttı. Bonferroni testi ile takip ANOVA PTZ tedavi g...

Watch this Scientific Journal Video about Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model at JoVE.com

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Bu iletişim kuralı ile pentylenetetrazole kimyasal çıra yöntemi açıklar ve epilepsi bir fare modeli sağlar. Bu iletişim kuralı, farelerde epileptik nöbetler sonra nöbet indüksiyon ve Escherichia türleri için güvenlik açığı araştırmak için de kullanılabilir.

Pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modeli

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

pentylenetetrazole-induced-kindling-mouse-model

Universidad de Cartagena UDEC

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Pharmacotherapy of the Epilepsies

SCIENTISTS IN ACTION

32.8K Görüntüleme.  Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science. Bu iletişim kuralı ile pentylenetetrazole kimyasal çıra yöntemi açıklar ve epilepsi bir fare modeli sağlar. Bu iletişim kuralı, farelerde epileptik nöbetler sonra nöbet indüksiyon ve Escherichia türleri için güvenlik açığı araştırmak için de kullanılabilir.

Video: Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Long-term Potentiation of Perforant Pathway-dentate Gyrus Synapse in Freely Behaving Mice

Studies of long-term potentiation of synaptic efficacy, an activity-dependent synaptic phenomenon having properties that make it attractive as a potential cellular mechanism underlying learning and information storage, have long been used to elucidate the physiology of various neuronal circuits in the hippocampus, amygdala, and other limbic and cortical structures. With this in mind, transgenic mouse models of neurological diseases represent useful platforms to conduct long-term&#160;potentiation (LTP) studies to develop a greater understanding of the role of genes in normal and abnormal synaptic communication in neuronal networks involved in learning, emotion and information processing. This article describes methodologies for reliably inducing LTP in the freely behaving mouse. These methodologies can be used in studies of transgenic and knockout freely&#160;behaving mouse models of neurodegenerative diseases.

Transgenic and knockout mouse models of neurological diseases are useful for studying the role of genes in normal and abnormal neurophysiology. This article describes methodologies which can be used to study long-term potentiation, a cellular mechanism which may underlie learning and memory, in transgenic and knockout freely&#160;behaving mouse models of neuropathology.

Serbestçe Fareler davranmak içinde delici yol-kıvrımlarının Synapse Uzun vadeli Potentiation

Studies of long-term potentiation of synaptic efficacy, an activity-dependent synaptic phenomenon having properties that make it attractive as a potential ...

Davranış

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms (ECoGs) and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little research to reveal the possible mechanisms behind these effects. To investigate the effect of acupuncture on epilepsy and sleep, several issues need to be addressed. The first is to identify the acupoints, which correspond between humans, rats, and mice. Furthermore, the depth of insertion of the acupuncture needle, the degree of needle twist in manual needle acupuncture, and the stimulation parameters for electroacupuncture (EA) need to be determined. To evaluate the effects of acupuncture on epilepsy and sleep, a feasible model of epilepsy in rodents is required. We administer pilocarpine into the left central nucleus of the amygdala (CeA) to simulate focal temporal lobe epilepsy (TLE) in rats. Intraperitoneal (IP) injection of pilocarpine induces generalized epilepsy and status epilepticus (SE) in rats. Five IP injections of pentylenetetrazol (PTZ) with a one-day interval between each injection successfully induces spontaneous generalized epilepsy in mice. Recordings of electrocorticograms (ECoGs), electromyograms (EMGs), brain temperature, and locomotor activity are used for sleep analysis in rats, while ECoGs, EMGs, and locomotor activity are employed for sleep analysis in mice. ECoG electrodes are implanted into the frontal, parietal, and contralateral occipital cortices, and a thermistor is implanted above the cerebral cortex by stereotactic surgery. EMG electrodes are implanted into the neck muscles, and an infrared detector determines locomotor activity. The criteria for categorizing vigilance stages, including wakefulness, rapid eye movement (REM) sleep, and non-REM (NREM) sleep are based on information from ECoGs, EMGs, brain temperature, and locomotor activity. Detailed classification criteria are stated in the text.

Manipulation of Epileptiform Electrocorticograms ECoGs and Sleep in Rats and Mice by Acupuncture

This paper demonstrates the performance of acupuncture, epilepsy models, and the analysis of sleep in rodents. The acupuncture procedure and the identification of acupoints are described. Pilocarpine or pentylenetetrazol (PTZ) is used to induce epilepsy. Electrocorticogram (ECoG), electromyogram (EMG), brain temperature, and locomotor activity recordings are employed for sleep analysis.

Akupunktur ile Sıçan ve Farelerde Epileptiform Electrocorticograms (ECoGs) Manipülasyon ve Uyku

Ancient Chinese literature has documented that acupuncture possesses efficient therapeutic effects on epilepsy and insomnia. There is, however, little ...

Inducing Post-Traumatic Epilepsy in a Mouse Model of Repetitive Diffuse Traumatic Brain Injury

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of acquired epilepsy. TBI can result in a focal or diffuse brain injury. Focal injury is a result of direct mechanical forces, sometimes penetrating through the cranium, creating a direct lesion in the brain tissue. These are visible during brain imaging as areas with contusion, laceration, and hemorrhage. Focal lesions induce neuronal death and glial scar formation and are present in 20%&minus;25% of all people who incur a TBI. However, in the majority of TBI cases, injury is caused by acceleration-deceleration forces and subsequent tissue shearing, resulting in nonfocal, diffuse damage. A subpopulation of TBI patients continues to develop post-traumatic epilepsy (PTE) after a latency period of months or years. Currently, it is impossible to predict which patients will develop PTE, and seizures in PTE patients are challenging to control, necessitating further research. Until recently, the field was limited to only two animal/rodent models with validated spontaneous post-traumatic seizures, both presenting with large focal lesions with massive tissue loss in the cortex and sometimes subcortical structures. In contrast to these approaches, it was determined that diffuse TBI induced using a modified weight drop model is sufficient to initiate development of spontaneous convulsive and non-convulsive seizures, even in the absence of focal lesions or tissue loss. Similar to human patients with acquired post-traumatic epilepsy, this model presents with a latency period after injury before seizure onset. In this protocol, the community will be provided with a new model of post-traumatic epilepsy, detailing how to induce diffuse non-lesional TBI followed by continuous long-term video-electroencephalographic animal monitoring over the course of several months. This protocol will detail animal handling, the weight drop procedure, the electrode placement for two acquisition systems, and the frequent challenges encountered during each of the steps of surgery, postoperative monitoring, and data acquisition.

This systematic protocol describes a new animal model of post-traumatic epilepsy after repetitive mild traumatic brain injury. The first part details steps for traumatic brain injury induction using a modified weight drop model. The second part provides instructions on the surgical approach for single- and multi-channel electroencephalographic data acquisition systems.

Tekrarlayan Diffüz Travmatik Beyin Hasarının Fare Modelinde Travma Sonrası Epilepsi Nin İndüklemesi

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of acquired epilepsy. TBI can result in a focal or diffuse brain injury. Focal injury is a result of ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique VGAT-Cre mice were used in developing spontaneous recurring seizures (SRS) after kindling and a likely mechanism - insertion of Cre into the VGAT gene - disrupted its expression and reduced GABAergic tone. The present study extends these observations to a larger cohort of mice, focusing on key issues such as how long the SRS continues after kindling and the effect of the animal's sex and age. This report describes the protocols for the following key steps: making headsets with hippocampal depth electrodes for electrical stimulation and for reading the electroencephalogram; surgery to affix the headset securely on the mouse's skull so that it does not fall off; and key details of the electrical kindling protocol such as duration of the pulse, frequency of train, duration of train, and amount of current injected. The kindling protocol is robust in that it reliably leads to epilepsy in most VGAT-Cre mice, providing a new model to test for novel antiepileptogenic drugs.

This report describes the methods to generate a model of temporal lobe epilepsy based on the electrical kindling of transgenic VGAT-Cre mice. Kindled VGAT-Cre mice may be useful in determining what causes epilepsy and for screening novel therapies.

Temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan VGAT-Cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Nörobilim

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few studies have described the experimental protocol in detail. This paper illustrates the whole process of amygdala electrical kindling epilepsy model making, with the introduction of a method of bipolar electrode fabrication. This electrode can both stimulate and record, reducing brain injury caused by implanting separate electrodes for stimulation and recording. For long-term electroencephalogram (EEG) recording purposes, slip rings were used to eliminate the record interruption caused by cable tangles and falling off.
After periodic stimulation (60 Hz, 1 s every 15 min) of the basolateral amygdala (AP: 1.67 mm, L: 2.7 mm, V: 4.9 mm) for 19.83 &plusmn; 5.742 times, full kindling was observed in six mice (defined as induction of three continuous grade V episodes classified by Racine's scale). An intracranial EEG was recorded throughout the entire kindling process, and an epileptic discharge in the amygdala lasting 20-70 s was observed after kindling. Therefore, this is a robust protocol for modeling epilepsy originating from the amygdala, and the method is suitable for revealing the role of the amygdala in temporal lobe epilepsy. This research contributes to future studies on the mechanisms of mesial temporal lobe epilepsy and novel antiepileptogenic drugs.

The amygdala plays a key role in temporal lobe epilepsy, which originates in and propagates from this structure. This article provides a detailed description of the fabrication of deep brain electrodes with both recording and stimulating functions. It introduces a model of medial temporal lobe epilepsy originating from the amygdala.

Amigdala'nın Elektriksel Çırası ile Temporal Lob Epilepsi Fare Modeli Oluşturmak için Bipolar Elektrot Kullanma

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Handling-Induced Seizures in a Mouse Model

Source: Batot, G., et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/63673">A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler&#39;s Murine Encephalomyelitis Virus.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2022).
This video demonstrates the induction of handling-induced seizures in a mouse infected with Theiler&#39;s Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV). The infected mouse, which has hyperexcitable neurons, is exposed to external physical stimuli. This exposure causes stress, leading to abnormal electrical activity in the neurons, which results in seizures.

Source: Batot, G., et al. A Model for Epilepsy of Infectious Etiology using Theiler&#39;s Murine Encephalomyelitis Virus.&#160;J. Vis. Exp. (2022).
This ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuropathology

Epilepsy and Seizure Disorders

Triggering and Monitoring Heat-Induced Seizures in a Transgenic Mouse Model

Source: Das, A., et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/62846">A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy.</a> J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the procedure to induce heat-induced seizures in a transgenic mouse with epilepsy-related gene mutations by gradually increasing body temperature in a controlled chamber. This protocol is used to study seizure mechanisms and potential therapies for epilepsy.

Source: Das, A., et al. A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy. J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the ...

Establishing a Pentylenetetrazole-Induced Epileptic Seizure Model in Mice

Source: Shimada, T., et al. <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/56573">Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model.</a> J. Vis. Exp. (2018).
This video demonstrates the process of inducing epilepsy in mice using pentylenetetrazole (PTZ) injections, a GABA-A receptor antagonist. Repeated intraperitoneal administration of PTZ progressively lowers the seizure threshold by inhibiting chloride ion influx, disrupting inhibitory neurotransmission, and leading to hyperexcitability in neurons that trigger seizures. This process results in kindling and the development of spontaneous seizures, mimicking chronic epilepsy.

Source: Shimada, T., et al. Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model. J. Vis. Exp. (2018).
This video demonstrates the process of inducing epilepsy ...

Systemic Pilocarpine Treatment: Mouse Model of Temporal Lobe Epilepsy

Source: Kim, J. E. and Cho, K. O. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/56831/the-pilocarpine-model-temporal-lobe-epilepsy-eeg-monitoring-using">The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice</a>. J. Vis. Exp. (2018).
This video presents the procedure for inducing status epilepticus (SE) in mice by systemic administration of pilocarpine to model temporal lobe epilepsy.

Sistemik Pilokarpin Tedavisi: Temporal Lob Epilepsisinin Fare Modeli

Source: Kim, J. E. and Cho, K. O. The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice. J. Vis. Exp. ...

Biyoloji

Kemirgen Modelleri

Yetişkin

Technique to Induce Post-Traumatic Seizures in a Mouse Model via a Weight Drop Traumatic Injury

Source: Shandra, O. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/60360">Inducing Post-Traumatic Epilepsy in a Mouse Model of Repetitive Diffuse Traumatic Brain Injury.</a> J. Vis. Exp. (2020)