Bu makalenin IgA/FT/2017/007 Zlin Tomas Bata Üniversitesi proje desteği ile yazılmıştır.

Gönüllü çalışanlar ve bizim üniversite öğrencileri arasında istihdam. Seçme yöntemi göre yapılmıştır "Uluslararası etik kurallara için Biyomedikal Araştırma katılımı insan denekler. Tıbbi Bilimler, Geneva (2002) uluslararası kuruluşlar için Konsey." KH (şampuan, klimalar, vb) saç bakım ürünlerinde kullanılan ortak bir kozmetik madde olduğunu ve bu nedenle kurumsal inceleme kurulu onayı gerekli değildir.
1. işlem tavuk tüyleri KH içine
<ol><li>Bir tavuk çiftliği tavuk tüyleri toplamak.</li>
	<li>Herhangi bir çözünmeyen yabancı maddeleri ve kan kalıntıları taze su (soğuk) çalıştıran yeterli bir fazlalığı tavuk tüyleriyle üzerinden dışarı yıkamak. Tüyleri düz bir tabağa yerleştirin ve gecede 50 ° C'de Kuru Not: Protokol burada duraklatılmış.</li>
	<li>50 g kurutulmuş tüyler (orta-sert yumuşak örnek malzeme ve lifli malzemeler için uygun) bir kesim fabrikasında son bir inceliği 1.0 mm. alternatif olarak eziyet, öğütülmüş tüyler son inceliği daha yüksek, ancak fazla 3.0 mm olabilir. Not: Protokol burada duraklatılmış.</li>
	<li>
Tüyler Isıtınız Not: bir ticari lipolytic enzim kümes hayvanları tüy yağ alma en etkili ve ekonomik yöntemi kullanıyor.<ol>
<li>Sıcaklık kontrolü bir paslanmaz çelik 27-L kazan kapsayıcısında tüyleri ısıtılmış 40 ± 2 ° C'de bir ağırlık oranı 1:75 kadar su ile karıştırın. Lipolytic enzim ekleyin (etkinlik 100 KLU/g) 5 min için genel gider bir karıştırıcı ile içeriği bir doz 1.5-%2.0 (kuru tüyler için tartılır içinde ilgili) ve hafifçe karıştırın.</li>
		<li>Karışım pH 9.0 ± 0.2, lipolytic enzim maksimum etkinlik için % 1 %1 veya NaOH H3PO4 çözüm ekleyerek karşılık gelen değeri ayarlayın. Genel gider bir karıştırıcı ile 5 min için karışımı ilave edin ve sonra kontrol edin ve bir laboratuvar tezgah pH/mV ölçeri kullanmayı pH seviyesini yeniden ayarlayın.</li>
		<li>Yavaşça 40 ± 24 h için genel gider bir karıştırıcı ile karışımı heyecan 0.5 ° C. Alternatif olarak, 40 ± 0,5 ° C karisimin kuluçkaya ve kuluçka ilk 6 h sırasında içeriği 1 saat aralıklarla ilave edin.</li>
		<li>Karışımı ince bir elekten (100 µm boyutu) filtre ve taze su (soğuk) çalıştıran bir akışı degreased tüyleriyle yıkayın. Kurutma odası 50 ° C'de düz tabakta tüyler gecede kuru. Not: Protokol burada duraklatılmış.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tavuk tüy hidroliz ilk aşaması gerçekleştirin. Tüyleri bir ağırlık oranı 1:50 % 0,3 KOH su solüsyonu ile karıştırın ve 60 ± 0,5 ° C 24 h için genel gider bir karıştırıcı ile hafifçe karıştırın. İnkübasyon sonunda yaklaşık 11,0 için yaklaşık 12,5 kuluçka başında gelen karışımı pH azalır. Hidroliz ilk aşaması bittikten sonra proteolitik enzim en büyük etkinliği olan %10 H3PO4 (Bu durumda, bir seviyeye 9.0 ± 0.2) % 1 ekleyerek karşılık gelen düzey karışıma pH ayarlama NaOH.</li>
	<li>Tavuk tüy hidroliz ikinci aşamasında gerçekleştirin. % 5.0 (hidroliz ilk aşaması başında tartılır içinde tüyler miktarı kuru madde ile ilgili) bir doz proteolitik enzim karışıma ekleyin. Yavaşça 60 ± 0,5 ° C 8 h için genel gider bir karıştırıcı ile karıştırın ve sonra karışımı (aynı paslanmaz çelik 27-L kazan kap) kaynama noktası (100 ° C) için ısı ve enzim devre dışı bırakabilirsiniz için 10 dakika kaynatın.</li>
	<li>KH (1.6 adımda hazırlanan) çözüm düşük yoğunluklu filtre kağıt üzerinde bir Buchner huni hafif vakum-basınç ile üzerinden süzülerek undissolved kalan ayırmak; Alternatif olarak, bir santrifüj kullanın. Not: bir çözüm KH, depolanıyorsa, 5 ±, protokol burada birkaç gün için duraklatılmış 1 ° C.</li>
	<li>Plastik kova (26 cm çap x 26 cm yükseklik) küçük peptidler ve tuzları kaldırmak için 12 K MWCO membran kullanarak KH diyaliz. 400 mL KH çözeltisi diyaliz boru içine dökün ve diyaliz distile su oda sıcaklığında 80 h için 4 L karşı; distile su 18, 36 ve 60 h sonra değiştirin.</li>
	<li>KH diyaliz bir çözüm bir anti-yapışkan plaka (örneğin, silikon) üzerinde 1000 mm2 plaka alan, 40 ± 0,5 ° C için ince bir film üzerinde bir gecede, ince bir toz oluşturmak için eziyet ve bir desiccator içinde kapalı bir potada tutmak vakum kuru 500 mL oranında artığını. Not: KH toz kuru bir yerde saklanıyorsa protokol burada birkaç ay için duraklatılmış.</li>
</ol>2. hazırlayın KH ile kozmetik formülasyonlar
Not: OB sınamak için kullanılan bir ticari hidrofilik O/W krem üssü oldu ve aqua, parafin, parafin sıvı, cetearyl alkol, Laureth 4, sodyum hidroksit, karbomer, methylparaben ve propylparaben oluşan.
<ol><li>2, 4 ve %6 içeren formülasyonları hazırlamak KH (uygun olarak temel ağırlık merhem). KH toz miktarı bir polietilen gemi (7 cm çap x 10 cm yükseklik) tartmak ve OB formülasyonu toplam ağırlığını sağlar bir miktar itibariyle 50 gr eşittir ekleyin; Tablo 1' deki tarifi bakın.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Kozmetik formülasyon</td>
			<td colspan="3">Ağırlık merhem temel [g]</td>
			<td colspan="3">Keratin hidrolizat [g] ağırlığını</td>
			<td colspan="2">Toplam ağırlık [g]</td>
		</tr>
<tr>
<td>Merhem temel</td>
			<td colspan="3">50</td>
			<td colspan="3">0</td>
			<td colspan="2" rowspan="4">50</td>
		</tr>
<tr>
<td>Merhem temel + %2 KH</td>
			<td colspan="3">49</td>
			<td colspan="3">1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Merhem temel + %4 KH</td>
			<td colspan="3">48</td>
			<td colspan="3">2</td>
		</tr>
<tr>
<td>Merhem temel + %6 KH</td>
			<td colspan="3">47</td>
			<td colspan="3">3</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Ağırlık-in kozmetik formülasyonlar hazırlamak için merhem Bankası ve keratin hidrolizat miktarlarda.
<ol start="2"><li>134.16 x g, 10 min için 3 kanatlı laboratuvar blender ile karışımı homojenize ve mekanik bir havai karıştırıcı kullanarak karıştırın. 5 ± 1 ° C, hazırlanmış formülasyonları korumak ve onları 2 kullanılmadan önce s için oda sıcaklığında sıcak. Not: OB KH ile karışımı homojenizasyon bir dijital olmayan karıştırıcı ile de yapılabilir. Dijital olmayan karıştırıcı üzerinde ölçekler yaklaşık hızı (devir/dakika) ile de vardır. Nazik karıştırma Bu adım için en iyi çalışacaktır. Not: formülasyonları depolanmışsa, 5 ±, protokol burada 5 aya kadar duraklatılmış 1 ° C.</li>
</ol>3. cilt nem ölçme, TEWL ve pH tarafından KH özellikleri test
Not: tüm ölçümler 23 ± 2 ° C, klimalı oda ve bağıl nem % 56 ± 3 gerçekleştirin.
<ol><li>Yer 5 filtre kağıt şeritler (ölçüler 2 x 4 cm) fizyolojik çözüm içine (%0.90 NaCl) ve yaklaşık 1 dk çözüm için bırakın.</li>
	<li>Sağ önkol ve sol önkol iç tarafına üç iç tarafında iki şeritler uygulamak ve bunları düzeltmek için 4 h ile yapıştırıcı sıva. Bu adım cilt yağını ve deri sitesinde bireysel özellikleri ortadan kaldırmak olduğunu. 4 h sonra şeritler kaldırmak ve alanları ile kalıcı bir kalem demark, şekil 1bakınız.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56254/56254fig1.jpg"> Şekil 1: sol ve sağ üst ekstremite üzerindeki önkol test formülasyonları konumunu için yöntemi. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56254/56254fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol start="3"><li>0.1 mL şırınga kullanarak degreased önkol sitelerin her noktada test formülasyonları uygulamak ve tüm işaretli yüzey üzerine yayıldı. Sol önkol değil bir şey (Denetim 's) ilk sitesi uygulamak, geçerli OB ikinci siteye ve OB + %2 KH üçüncü. Geçerli OB + %4 KH ve OB + % 6 KH sağ kolu.</li>
	<li>Her örnek her site ve her aralığı (1, 2, 3, 4, 24 ve 48 s) ölçmek ve cilt nemlendirme ölçer sonda Cilt nemlendirici, Cilt TEWL TEWL metre prob ile 15 okuma ve cilt pH ölçer sonda cilt pH okuma 1 ile 5 okumalar alıp. Gönüllü test siteleri ve çevresindeki testi döneminde herhangi bir kozmetik ürün uygulamak izin vermez; Onlar kısa akşam yıkar akan su ile izin verilir. Not: Protokol burada duraklatılmış.</li>
	<li>Elde edilen veriler temel sayısal elektronik tablo yazılımı kullanarak tanımlayıcı istatistik özellikleri tarafından işlem. 5 hidrasyon değerlere, her örnek için ölçülen en düşük ve en yüksek değerleri yok saymak ve aritmetik ortalama ve standart sapma için sadece 3 okuma hesaplamak. 15 TEWL okumalar, her örnek için ölçülen ilk 5 görmezden ve aritmetik ortalama ve standart sapma için sadece 10 okuma hesaplamak.</li>
</ol>

<ol>
	<li>United States Department of Agriculture - National Agricultural Statistics Services. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Poultry Slaughter, 2016 Summary. , (2016).</li><li>McGovern, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recycling+poultry+feathers:+more+bang+for+the+cluck.">Recycling poultry feathers: more bang for the cluck.</a> Environ.Health Perspect. 108 (8), A336-A339 (2000).</li><li>Gousterova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation+of+keratin+and+collagen+containing+wastes+by+newly+isolated+thermoactinomycetes+or+by+alkaline+hydrolysis.">Degradation of keratin and collagen containing wastes by newly isolated thermoactinomycetes or by alkaline hydrolysis.</a> Lett. Appl. Microbiol. 40 (5), 335-340 (2005).</li><li>Yamauchi, K., Yamauchi, A., Kusunoki, T., Khoda, A., Konishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+stable+aqueous+solution+of+keratins,+and+physiochemical+and+biodegradational+properties+of+films.">Preparation of stable aqueous solution of keratins, and physiochemical and biodegradational properties of films.</a> Biomed. Mater. Res. 31 (4), 439-444 (1996).</li><li>Schrooyen, P. M. M., Dijkstra, P. J., Oberthur, R. C., Bantjes, A., Feijen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partially+carboxymethylated+feather+keratins.+2.+Thermal+and+mechanical+properties+of+films.">Partially carboxymethylated feather keratins. 2. Thermal and mechanical properties of films.</a> J. Agric. Food Chem. 49 (1), 221-230 (2001).</li><li>Mark, H. F., Gaylord, N. G., Bikales, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Encyclopedia of Polymer Science Technology: vol. 8: Keratin to Modacrylic Fibers. , (1968).</li><li>Bertsch, A., Cello, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biotechnological+process+for+treatment+and+recycling+poultry+feathers+as+a+feed+ingredient.">A biotechnological process for treatment and recycling poultry feathers as a feed ingredient.</a> Bioresour. Technol. 96 (15), 1703-1708 (2005).</li><li>Grazziotin, A., Pimentel, F. A., de Jong, E. V., Brandelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+improvement+of+feather+protein+by+treatment+with+microbial+keratinase.">Nutritional improvement of feather protein by treatment with microbial keratinase.</a> Animal Feed Sci. Technol. 126 (1-2), 135-144 (2006).</li><li>Brandelli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+keratinases:+useful+enzymes+for+bioprocessing+agroindustrial+wastes+and+beyond.">Bacterial keratinases: useful enzymes for bioprocessing agroindustrial wastes and beyond.</a> Food Bioprocess Technol. 1 (2), 105-116 (2008).</li><li>Gusta, R., Ramnani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+keratinases+and+their+prospective+applications:+an+overview.">Microbial keratinases and their prospective applications: an overview.</a> Appl.Microbiol. Biotechnol. 70 (1), 21-33 (2006).</li><li>Vasileva-Tonkova, E., Gousterova, A., Neshev, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecologically+safe+method+for+improved+feather+wastes+biodegradation.">Ecologically safe method for improved feather wastes biodegradation.</a> International Biodeterior &amp; Biodegradation. 63 (8), 1008-1012 (2009).</li><li>Lod&#233;n, M., Barel, A. O., Paye, M., Maibach, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrating+Substance.">Hydrating Substance.</a> Handbook of Cosmetic Science and Technology. , 107-119 (2009).</li><li>Teglia, A., Secchi, G., Goddard, E. D., Gruber, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+9:+Proteins+in+Cosmetics.">Chapter 9: Proteins in Cosmetics.</a> Principles of Polymer Science and Technology in Cosmetics and Personal Care. , (1999).</li><li>Magdassi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+systems+in+cosmetics.">Delivery systems in cosmetics.</a> Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 123-124, 671-679 (1997).</li><li>Dahms, G., Jung, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+producing+a+protein+hydrolysate.">Method for producing a protein hydrolysate.</a> U.S. Patent. , (2014).</li><li>Pons, R., Carrera, I., Erra, P., Kunieda, G., Solans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+preparation+methods+for+highly+concentrated+water-in-oil+emulsions.">Novel preparation methods for highly concentrated water-in-oil emulsions.</a> Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 91 (3), 259-266 (1994).</li><li>Mokrejs, P., Hrncirik, J., Janacova, D., Svoboda, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+keratin+waste+of+meat+industry.">Processing of keratin waste of meat industry.</a> Asian J. Chem. 24 (4), 1489-1494 (2012).</li><li>Mokrejs, P., Svoboda, P., Hrncirik, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+poultry+feathers+into+keratin+hydrolysate+through+alkaline-enzymatic+hydrolysis.">Processing poultry feathers into keratin hydrolysate through alkaline-enzymatic hydrolysis.</a> Waste Manage. Res. 29 (3), 260-267 (2011).</li><li>Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Producing+keratin+hydrolysates+from+sheep+wool.">Producing keratin hydrolysates from sheep wool.</a> Orient. J. Chem. 27 (4), 1303-1309 (2011).</li><li>Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P., Vasek, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+technological+conditions+for+breakdown+of+waste+sheep+wool.">Modeling technological conditions for breakdown of waste sheep wool.</a> Rasayan J. Chem. 4 (4), 728-735 (2011).</li><li>Polaskova, J., Pavlackova, J., Vltavska, P., Mokrejs, P., Janis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moisturizing+effect+of+topical+cosmetic+products+applied+to+dry+skin.">Moisturizing effect of topical cosmetic products applied to dry skin.</a> J. Cosmet. Sci. 64 (5), 329-340 (2013).</li><li>Polaskova, J., Pavlackova, J., Egner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+vehicle+on+the+performance+of+active+moisturizing+substances.">Effect of vehicle on the performance of active moisturizing substances.</a> Skin Res. Technol. 21 (4), 403-412 (2015).</li><li>Verdier-S&#233;vrain, S., Bont&#233;, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+hydration:+a+review+on+its+molecular+mechanisms.">Skin hydration: a review on its molecular mechanisms.</a> J. Cosmet. Dermatol. 6 (2), 75-82 (2007).</li><li>Darlenski, R., Sassning, S., Tsankov, N., Fluhr, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+in+vivo+methods+for+investigation+of+the+skin+barrier+physical+properties.">Non-invasive in vivo methods for investigation of the skin barrier physical properties.</a> Eur. J. Pharm. Biopharm. 72 (2), 295-303 (2009).</li><li>Berardesca, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EEMCO+guidance+for+assessment+of+stratum+corneum+hydration:+electrical+methods.">EEMCO guidance for assessment of stratum corneum hydration: electrical methods.</a> Skin Res. Technol. 3 (2), 126-132 (1997).</li><li>Rogiers, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EEMCO+guidance+for+the+assessment+of+transepidermal+water+loss+in+cosmetic+sciences.">EEMCO guidance for the assessment of transepidermal water loss in cosmetic sciences.</a> Skin Pharmacol. Appl. Skin Physiol. 14 (2), 117-128 (2001).</li><li>Ali, S. M., Yosipovitch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+pH:+from+basic+science+to+basic+skin+care.">Skin pH: from basic science to basic skin care.</a> Acta Derm. Venereol. 93 (3), 261-267 (2013).</li><li>Agache, P., Humbert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Measuring the Skin. , (2004).</li><li>Council for International Organizations of Medical Sciences. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> International Ethical Guidelines for Biomedical Research Involving Human Subjects. , (2002).</li><li>Ruland, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transdermal+permeability+and+skin+accumulation+of+amino+acids.">Transdermal permeability and skin accumulation of amino acids.</a> Int. J. Pharm. 72 (2), 149-155 (1991).</li><li>Draelos, Z. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+moisturizers.">Therapeutic moisturizers.</a> Dermatol. Clin. 18 (4), 597-607 (2000).</li><li>Courage and Khazaka Electronic GmbH, Technical Charges. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Information and Operating Instructions for the Multi probe Adapter MPA and its Probe. , (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Enzimatik alkalin hidroliz avantajı KH gelecekteki uygulamalara göre değiştirilebilir olduğunu. Örneğin, saç bakım kozmetik uygulamaları, nerede bir ürünün hafifçe kahverengi bir renk bir engel değil hidroliz daha yüksek bir sıcaklık KH daha yüksek bir verim için önde gelen uygulanabilir. Buna ek olarak, uzun işlem süresi her iki teknolojik yordamının aşamalarını sırasında önemli ölçüde genel işlem etkiler verimliliği-KH verim yükselir %85.
Hidrasyon ölç?...

Mezbahalarda, gıda sanayî ve bronzlaşma sanayi her yıl katı keratin yan ürünleri-yün, tüyler, kıllar, nallar, pençeleri, boynuzları ve benzeri büyük miktarda üretmek. Son istatistiksel verilere göre tavuk, hindi, ördek ve diğer kesilmiş kümes hayvanları ABD'de toplam canlı ağırlığını 62.5 milyar sterlin başına yıl1olduğunu; AB'de bu yılda yaklaşık 28.7 milyar pound. Tüyler toplam kümes hayvanları ağırlık ilâ % 8.5 yapmak göz önüne alındığında, ABD tek başına yıllık atık tüyler2yaklaşık 5.3 milyar £ üretir.
Keratin işleme zor hale disülfür köprü ile güçlü çapraz bağlı olduğundan yüksek kimyasal direnç sergileyen bir proteindir. Çözünür ürünleri alma çapraz bağlantıları fizyon ve muhtemelen peptid bağları3hidroliz taşıyan gerektirir. Bölünme disülfür köprü thiol anyon aşağıdaki desen4,5göre bir tepki ile devam edebilirsiniz:
Sbir- + -SbSc– ↔ – Sb- + -SbirSc-
Çok yüksek pH seviyesi ile hidroliz disülfür köprü de, desen6 uygun olarak görüntüleniyor
-SS- + OH- → – S- + -SOH
(PH yaklaşık 8) hafif koşullar altında bile sulfitolysis aşağıdaki kalıba uygun gerçekleşir:
-SS- + HSO3- →-SH + – SSO3-
Keratin aşağılayıcı, en ekonomik hafif reaksiyon koşulları tarafından işleme ve yüksek arıza verimliliği (yaklaşık % 90)7,8sırasında karakterizedir mikrobiyal dökümü yoludur. Keratinases toprak ve keratin atık9dan izole bazı bakteriler tarafından üretilmektedir. Mikrobiyal keratinases hidrolize katı ve güçlü çapraz bağlı keratin yapıların10 ve hazırlanan elde edilen KH çözünür proteinler arasında zengin esansiyel amino asitler içinde tespit kaybı ile11.
Kozmetik ürünleri (örneğin, emülsiyonlar, losyonlar ve jeller) bir protein dahil etmek için gereksinimleri gibi proteinler suda çözünür verilen sistemleri şeffaf ve peptidler yeniden o toplama nedeniyle kaçınılması emin olun hidrofobik etkileşimler. Bu nedenle, yaygın bir uygulama hidrolizatlarının proteinleri hidrolize kolajen, elastin ve keratin gibi uygulamaktır. Hidrolizatlarının kozmetik emülsiyonlar eklerken, adımlar hidrolizat ilk suda çözünmüş sağlamak için alınır. Bazı durumlarda, bu protein (veya hidrolizat) alkol veya diğer organik solventler12çözünür arzu edilir.
KH normalde şampuan, kremleri, losyonlar ve besleyici Serumlar saç, yanı sıra Maskaranın, tırnak cilası ve göz makyaj aracıları için bulunmamaktadır. Genellikle ilan KH etkileri saç düzleştirme koruyucu bir film oluşturan eklemek veya tırnak yapısı, artan plastisite ve görünüm tedavi oluşumu ürünleri tutarlılığını düzenleyen ve köpük13 oluşumu teşvik , 14. Ayrıca gösterilmiştir KH yüzey gerilimi azaltır, dolayısıyla takviyesi kozmetik kremler dengelemeye eklendi emülgatör miktarında azaltma kolaylaştırabilir. KH sınırlamak temizlik maddeleri (yüzey) tarafından tetiklenen tahriş etkileri cilt, göz ve saç, böylece temizlik maddeleri dokular (örneğin, dehidratasyon, Cilt, sertlik ve azalan bariyer fonksiyonu herhangi bir olası yan etkileri azaltmak cilt). Hidrolizatlarının yüksek arabelleğe alma yeteneğini de kozmetik pH stabilize etmek için istismar; peptidler kısa uzunlukta bir büyük tamponlama etkisi15,16var. KHs standart bileşenleri olarak saç ve tırnak kozmetik yanı sıra cilt bakım ürünlerinde kullanılan kurduk haline rağmen KH nemlendirici etkileri üzerinde çalışmalar çağdaş literatürde yer almaz.
Alkalin enzimatik teknoloji keratin yan ürünleri KH işlemek için geliştirilmiştir ve kozmetik katkı maddeleri17,18,19,20 , birkaç etkileri üzerinde sürecinde etkin test olduğunu , 21 , 22. iki aşamalı enzimatik alkalin hidroliz mikrobiyal proteaz tavuk tüyleri için kullanma avantajı hafif reaksiyon koşullarında yüksek verim elde ve KH kalitesini çok kuvvetli asit istihdam hidroliz aksine yüksektir ya da alkalik. İlk aşamada, tüyler kısmen keratin yapısını bozan ve tüyler şişer bir alkali ortamda daha yüksek bir sıcaklıkta inkübe; pH ayarladıktan sonra tüyleri hafif koşullar altında bir proteolitik enzim ile ikinci aşamada hidrolize. Diyaliz KH proteinler yüksek bir içeriğe sahiptir.
Burada açıklanan yöntemi amaçları bir KH enzimatik alkalin hidroliz ile içine tavuk tüyleri işleme ve O/W kozmetik emülsiyon için uygulanan KH nemlendirici özellikleri etkisini test. Nemlendirici özellikleri enstrümantal non-invaziv yöntemler vivo içindetarafından incelenmiştir. SC cilt nemlendirme ve bariyer fonksiyonu ölçmek için en sık kullanılan yöntemleri cilt (gürültülerinden ya da kapasite) elektrik özelliklerini ölçme içerir. Kızılötesi spektral hayal yöntemi (macera), Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi, optik Koherens tomografi veya geçici termal transfer23SC hidrasyon soruşturma için farklı yöntemler içerir. Bariyer fonksiyonu SC SC TEWL ilişkili olan ve havalandırılan Oda yöntemi, unventilated Oda yöntemi ve açık odası yöntemi24tarafından ölçülür.
Modeli formülasyonları özelliklerini üç tür sondalar MPA 5 Multi sonda adaptörü kullanarak belirler. İlki, korneometre CM 825, cildin yüzeyine elektrik kapasitesi içinde değişiklikleri değerlendiriliyor tarafından önlemler hidrasyon cilt; Ölçüm kapasitör kapasitans corneometric birimlerindeki cilt yüzeyinin değişiklikleri gösterir. Korneometre cilt nemlendirme25göreli bir değerlendirmesini sağlar. TEWL için ikinci sonda, tewameter TM 300, deriden su buharlaşma (içinde Fick'ın Difüzyon Kanunu dayalı bir açık odası enstrüman) yoğunluk gradient ölçmek için dolaylı olarak sensörler (sıcaklık ve bağıl nem) iki çift tarafından kullanılır bir tanımlanmış alana ve süre (g/m2/h) taşınmaları su miktarı gösteren. Bu yöntem cilt bariyer fonksiyonu26bile en ufak bir bozulma tespit edebilir. Cilt pH bariyer bir göstergesi ve SC27anti-mikrobiyal fonksiyonu var. Deri manto asitliği MPA 5 istasyonuna bağlı (üçüncü) bir cilt PH 905 sondası tarafından ölçüldü. Düz üzeri cam elektrot tam cilt teması için özel olarak tasarlanmış bu sonda oluşan bir voltmetre bağlı. Sistem yarı katı formları en sonda üstünde ölçülen çok ince tabaka çevreleyen hidrojen katyonlar etkinliği nedeniyle olası değişiklikler ölçer. Gerilim içinde değişiklikler pH28görüntülenir.
Biz üç bölüme ayrılmıştır deneyler mevcut: KH (1) hazırlık üzerinden tavuk tüy iki aşamalı enzimatik alkalin hidroliz ve onun arıtma tarafından (tuzları ve düşük molekül kesirler kaldırma), diyaliz tarafından (2) kozmetik hazırlanması 2, 4 ve %6 içeren formülasyonları KH ve (3) test KH özelliklerini ölçerek hidrasyon, TEWL, cilt ve cilt pH. Test 27.2 yıllık ortalama yaşı ile 10 kadın ve 10 erkek 26.2 yıllık ortalama yaşı ile gerçekleştirilmiştir. Gönüllü ve kendini sınama seçme yöntemi kullanan insan denekler29bio-tıbbi araştırma uluslararası etik ilkelere uygun olarak yapılan; tüm kişilerin çalışma odasında onların Onam dahil önce verdi. Başlandı test etmeden önce gönüllü kendi sağlık durumu hakkında bir soru formunu tamamlaması istendi. Herhangi bir kozmetik ürün test siteleri ve çevre bölgelerde 24 saat öncesinde ve sırasında test dönemi uygulamaktan kaçının taahhüt gönüllü; Ayrıca, onlar sadece akan su ile yıkar kısa akşam izin verilmiştir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material or chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIPEX 100T</td>
			<td>Novozymes</td>
			<td>LJP30020</td>
			<td>Lipex - enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 100 KLU/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Savinase Ultra 16L</td>
			<td>Novozymes</td>
			<td>PXN40001</td>
			<td>Savinase - enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 16 KNPU-S/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide, KOH</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>302510289</td>
			<td>Potassium hydroxide, KOH, 97,0 %, Mr 56,11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphoric acid solution, H3PO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W290017</td>
			<td>Phosphoric acid solution, H3PO4, 85 wt. % concentration in water, Mr 98,00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride physiological solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>52455</td>
			<td>Tablets of BioUltra NaCl physiological solution; 1 tablet in 1000 mL of water yields 0.9 % NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide, NaOH</td>
			<td>Penta s.r.o.</td>
			<td>40216</td>
			<td>Sodium hydroxide, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AmiFarm (Cremor base-A)</td>
			<td>Fagron</td>
			<td>608425</td>
			<td>Hydrophilic oil in water (O/W) cream base; the composition: aqua, paraffin, paraffin liquid, cetearyl alkohol, Laureth 4, sodium hydroxide, carbomer, methylparaben, propylparaben.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IKA EUROSTAR POWER control-visc stirrers</td>
			<td>IKA-labortechnik</td>
			<td>Z404020</td>
			<td>Digital laboratory stirrer, for tasks up to the high viscosity range, 230V, 1/cs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IKA Propeller stirrer, 3-bladed</td>
			<td>IKA-labortechnik</td>
			<td>R 1381</td>
			<td>Propeller stirrer, 3-bladed, stirrer &#216;: 45 mm, shaft &#216;: 8 mm, shaft length: 350 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing closures</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z371017-10EA</td>
			<td>Dialysis tubing closures, red, size 110 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis tubing cellulose membrane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9402-100FT</td>
			<td>Dialysis tubing cellulose membrane, average flat width 76 mm (3.0 in.)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DOMO Pot with stailess, LCD</td>
			<td>DOMO Elektronic</td>
			<td>DO42325PC</td>
			<td>Preserving boiler stainless steel, 2000 W, 27-L container (diameter 37 cm, height 30 cm), temperature control 30-100 &#176; C, operation LCD display</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hettich zentrifugen Universal 32</td>
			<td>Gemini bv</td>
			<td>2770 GS1R</td>
			<td>Mid bench centrifuge, speed 18000 rpm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LT 3 shaking device</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>6470.0002</td>
			<td>Orbital shaking device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KERN 440-47N</td>
			<td>Kern</td>
			<td>440-47N</td>
			<td>Laboratory balance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KERN 770</td>
			<td>Kern</td>
			<td>770 -N</td>
			<td>Laboratory analytical balance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VENTICELL 222 - Komfort</td>
			<td>BMT, MMM Group</td>
			<td>C 131749</td>
			<td>Drying oven, temperature control 30-100 &#176; C, air circulation control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacucell 55 - EVO</td>
			<td>BMT, MMM Group</td>
			<td>B 050328</td>
			<td>Vacuum drying oven, temperature control 30-100 &#176; C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PULVERISETTE 19</td>
			<td>Fritsch</td>
			<td>19.1030.00</td>
			<td>Universal cutting mill, rotor with V-cutting edges and fixed knives</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi Probe Adapter System MPA 5</td>
			<td>Courage &#38; Kazaka Electronic</td>
			<td>10225237</td>
			<td>MPA 5 Station - equipment for measurement hydratation, TEWL and pH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin pH-meter PH 905 probe</td>
			<td>Courage &#38; Kazaka Electronic</td>
			<td></td>
			<td>Probe to specifically measure the pH on the skin surface or the scalp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneometer CM 825 probe</td>
			<td>Courage &#38; Kazaka Electronic</td>
			<td></td>
			<td>Probe to determine the hydration level of the skin surface (Stratum corneum).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tewameter TM 300</td>
			<td>Courage &#38; Kazaka Electronic</td>
			<td></td>
			<td>Probe for the assessment of the transepidermal water loss (TEWL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph RZR 2020</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td>13-225-007-03-1</td>
			<td>Overhead stirrer, mechanical speed setting and stepless transmission; speed range 40-2000 rpm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidolph mechanical stirrer BR 10</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td>Z336688-1EA</td>
			<td>Blade impeller crossed stirrer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fagor FS 12</td>
			<td>Fagor</td>
			<td>BTT-138</td>
			<td>Laboratory refrigerator with freezer space</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WTW bench pH/mV meter</td>
			<td>WTW</td>
			<td>Z313165</td>
			<td>High-performance bench pH and pH/conductivity meters for routine and high precision laboratory measurements in research or quality control laboratories</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Container</td>
			<td>RPC Superfos</td>
			<td></td>
			<td>13-L plastic bucket, diameter 26 cm, height 26 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office 2010</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C+K software</td>
			<td colspan="2">Courage and Khazaka Electronic GmbH</td>
			<td>MPA 5 station operating software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of keratin hydrolysate from chicken feathers and its application in cosmetics

Keratin hidrolizatlarının (KHs) saç kozmetik kurulan standart bileşenleridir. KH nemlendirici etkileri anlamak için cilt bakım kozmetik avantajlıdır. Protokolün hedefleri vardır: tavuk tüyleri KH tarafından enzimatik alkalin hidroliz işlemek ve diyaliz tarafından arındırmak (1) için ve (2) Cilt nemlendirme artırır KH bir merhem Bankası (OB) ekleme ve azalan tarafından cilt bariyer fonksiyonu iyileştirir sınamak için transepidermal su kaybı (TEWL). Enzimatik alkalin hidroliz sırasında tüyler daha yüksek bir sıcaklıkta alkalin ortamında ve sonra proteolitik enzim ile hidrolize hafif koşullarda ilk inkübe. KH çözüm diyaliz, vakum kurutulmuş ve ince bir toz için öğütülür. Kozmetik formülasyonlar, içeren 2 su emülsiyon (O/W) içinde yağdan oluşan 4 ve 6 kilo % KH (OB ağırlığına göre) hazırlanır. KH nemlendirici özelliği üzerinde 10 erkek yapıldığını ve 1, 2, 3, 4, 24 ve 48 h. test formülasyonları zaman aralıklarıyla 10 kadın degreased volar önkol sitelerde yayılır. Stratum korneum (SC) Cilt nemlendirme kapasitans en dünya çapında kullanılan ve basit yöntemlerden biridir derinin ölçülerek değerlendirilir. TEWL deriden süre başı bir tanımlanmış alana taşınan su miktarını ölçme üzerinde temel alır. Her iki yöntem tamamen non-invaziv vardır. KH bir mükemmel tıkayıcı için yapar; OB içine KH ek bağlı olarak, TEWL % 30 azalma uygulama sonrası hakkında getiriyor. Bu su için SC epidermis alt katmanlardan bağlar gibi KH bir nemlendirici da çalışmasını; optimum KH Ayrıca OB, yukarı hidrasyon erkek ve % %22 19 artış artış kadınlarda ortaya çıkar.

Burada sunulan prosedüre göre hazırlanan KH (bkz: Şekil 2) sarı renkli, yüksek protein içeriği ile suda kolayca çözünür (inorganik katı temsil < %2.0); KH %1.0 çözüm pH 5.3 olduğunu ve gereksinimlerini yerine getirir kozmetik-grade hidrolizatlarının. KH verim 50 g ham madde üzerinden yaklaşık % 30'dur. KH moleküler Ağırlık dağılımı SDS-PAGE tarafından tespit edildi ve şekil 3' te gösterilen.
<...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics at JoVE.com

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Keratin hidrolizat tavuk tüyleri ve kozmetik kendi uygulamasında hazırlanması

Protokol tarafından enzimatik alkalin hidroliz keratin hidrolizat tavuk tüyleri üzerinden hazırlamak için ve keratin hidrolizat içine bir kozmetik merhem temel cilt bariyer fonksiyonunu artırır ekleme olup olmadığını sınamak için hedeftir (hidrasyon heightening ve «««azalan) transepidermal su kaybı. Erkek ve kadın üzerinde testler yapılır gönüllüler.

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

preparation-keratin-hydrolysate-from-chicken-feathers-its-application

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biochemistry

19.3K Görüntüleme.  Tomas Bata University in Zlín. Protokol tarafından enzimatik alkalin hidroliz keratin hidrolizat tavuk tüyleri üzerinden hazırlamak için ve keratin hidrolizat içine bir kozmetik merhem temel cilt bariyer fonksiyonunu artırır ekleme olup olmadığını sınamak için hedeftir (hidrasyon heightening ve «««azalan) transepidermal su kaybı. Erkek ve kadın üzerinde testler yapılır gönüllüler.

Video: Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

Preparation and Delivery of Protein Microcrystals in Lipidic Cubic Phase for Serial Femtosecond Crystallography

Membrane proteins (MPs) are essential components of cellular membranes and primary drug targets. Rational drug design relies on precise structural information, typically obtained by crystallography; however MPs are difficult to crystallize. Recent progress in MP structural determination has benefited greatly from the development of lipidic cubic phase (LCP) crystallization methods, which typically yield well-diffracting, but often small crystals that suffer from radiation damage during traditional crystallographic data collection at synchrotron sources. The development of new-generation X-ray free-electron laser (XFEL) sources that produce extremely bright femtosecond pulses has enabled room temperature data collection from microcrystals with no or negligible radiation damage. Our recent efforts in combining LCP technology with serial femtosecond crystallography (LCP-SFX) have resulted in high-resolution structures of several human G protein-coupled receptors, which represent a notoriously difficult target for structure determination. In the LCP-SFX technique, LCP is recruited as a matrix for both growth and delivery of MP microcrystals to the intersection of the injector stream with an XFEL beam for crystallographic data collection. It has been demonstrated that LCP-SFX can substantially improve the diffraction resolution when only sub-10 &#181;m crystals are available, or when the use of smaller crystals at room temperature can overcome various problems associated with larger cryocooled crystals, such as accumulation of defects, high mosaicity and cryocooling artifacts. Future advancements in X-ray sources and detector technologies should make serial crystallography highly attractive and practicable for implementation not only at XFELs, but also at more accessible synchrotron beamlines. Here we present detailed visual protocols for the preparation, characterization and delivery of microcrystals in LCP for serial crystallography experiments. These protocols include methods for conducting crystallization experiments in syringes, detecting and characterizing the crystal samples, optimizing crystal density, loading microcrystal laden LCP into the injector device and delivering the sample to the beam for data collection.

We describe procedures for the preparation and delivery of membrane protein microcrystals in lipidic cubic phase for serial crystallography at X-ray free-electron lasers and synchrotron sources. These protocols can also be applied for incorporation and delivery of soluble protein microcrystals, leading to substantially reduced sample consumption compared to liquid injection.

Hazırlık ve Seri Femtosecond Kristalografi için lipidik Cubic Faz Protein mikro kristallerinin teslimi

Membrane proteins (MPs) are essential components of cellular membranes and primary drug targets. Rational drug design relies on precise structural ...

Biyokimya

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical probe that targets the enzyme&#39;s active sites. A reporter tag introduced into the probe allows for the detection of the labeled enzyme by in-gel fluorescence scanning, protein blot, fluorescence microscopy, or liquid chromatography-mass spectrometry. Here, we describe the preparation and use of the compound ARN14686, a click chemistry activity-based probe (CC-ABP) that selectively recognizes the enzyme N-acylethanolamine acid amidase (NAAA). NAAA is a cysteine hydrolase that promotes inflammation by deactivating endogenous peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-alpha agonists such as palmitoylethanolamide (PEA) and oleoylethanolamide (OEA). NAAA is synthesized as an inactive full-length proenzyme, which is activated by autoproteolysis in the acidic pH of the lysosome. Localization studies have shown that NAAA is predominantly expressed in macrophages and other monocyte-derived cells, as well as in B-lymphocytes. We provide examples of how ARN14686 can be used to detect and quantify active NAAA ex vivo in rodent tissues by protein blot and fluorescence microscopy.

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Here, we describe the preparation and use of an activity-based probe (ARN14686, undec-10-ynyl-N-[(3S)-2-oxoazetidin-3-yl]carbamate) that allows for the detection and quantification of the active form of the proinflammatory enzyme N-acylethanolamine acid amidase (NAAA), both in vitro and ex vivo.

Hazırlama ve<em&gt; İn Vivo</em&gt; Bir Faaliyet tabanlı Sondası kullanılması için<em&gt; K</em&gt; -acylethanolamine Asit aminidaz

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

Preparation of Giant Vesicles Encapsulating Microspheres by Centrifugation of a Water-in-oil Emulsion

The constructive biology and the synthetic biology approach to creating artificial life involve the bottom-up assembly of biological or nonbiological materials. Such approaches have received considerable attention in research on the boundary between living and nonliving matter and have been used to construct artificial cells over the past two decades. In particular, Giant Vesicles (GVs) have often been used as artificial cell membranes. In this paper, we describe the preparation of GVs encapsulating highly packed microspheres as a model of cells containing highly condensed biomolecules. The GVs were prepared by means of a simple water-in-oil emulsion centrifugation method. Specifically, a homogenizer was used to emulsify an aqueous solution containing the materials to be encapsulated and an oil containing dissolved phospholipids, and the resulting emulsion was layered carefully on the surface of another aqueous solution. The layered system was then centrifuged to generate the GVs. This powerful method was used to encapsulate materials ranging from small molecules to microspheres.

Giant vesicles containing highly packed micrometer-sized components are useful cell models. The water-in-oil emulsion centrifugation method is a simple, powerful tool for the preparation of giant vesicles with encapsulated materials.

bir su-içinde-yağ emülsiyonu santrifüj Dev veziküller Kapsüllenen Mikrokürelerin hazırlanması

The constructive biology and the synthetic biology approach to creating artificial life involve the bottom-up assembly of biological or nonbiological ...

Sample Preparation for Mass Spectrometry-based Identification of RNA-binding Regions

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most cases, the action of noncoding RNAs is mediated by proteins whose functions are in turn regulated by these interactions with noncoding RNAs. Consistent with this, a growing number of proteins involved in nuclear functions have been reported to bind RNA and in a few cases the RNA-binding regions of these proteins have been mapped, often through laborious, candidate-based methods.
Here, we report a detailed protocol to perform a high-throughput, proteome-wide unbiased identification of RNA-binding proteins and their RNA-binding regions. The methodology relies on the incorporation of a photoreactive uridine analog in the cellular RNA, followed by UV-mediated protein-RNA crosslinking, and mass spectrometry analyses to reveal RNA-crosslinked peptides within the proteome. Although we describe the procedure for mouse embryonic stem cells, the protocol should be easily adapted to a variety of cultured cells.

We describe a protocol to identify RNA-binding proteins and map their RNA-binding regions in live cells using UV-mediated photocrosslinking and mass spectrometry.

Kütle spektrometresi tabanlı kimlik RNA-bağlama bölgelerinin için numune hazırlama

Noncoding RNAs play important roles in several nuclear processes, including regulating gene expression, chromatin structure, and DNA repair. In most ...

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from the oxidation of reduced compounds such as nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and flavin adenine dinucleotide (FADH2). The complete annotation of the Arabidopsis thaliana genome has established it as the most widely used plant model system, and thus the need to purify mitochondria from a variety of organs (leaf, root, or flower) is necessary to fully utilize the tools that are now available for Arabidopsis to study mitochondrial biology. Mitochondria are isolated by homogenization of the tissue using a variety of approaches, followed by a series of differential centrifugation steps producing a crude mitochondrial pellet that is further purified using continuous colloidal density gradient centrifugation. The colloidal density material is subsequently removed by multiple centrifugation steps. Starting from 100 g of fresh leaf tissue, 2 - 3 mg of mitochondria can be routinely obtained. Respiratory experiments on these mitochondria display typical rates of 100 - 250 nmol O2 min-1 mg total mitochondrial protein-1 (NADH-dependent rate) with the ability to use various substrates and inhibitors to determine which substrates are being oxidized and the capacity of the alternative and cytochrome terminal oxidases. This protocol describes an isolation method of mitochondria from Arabidopsis thaliana leaves using continuous colloidal density gradients and an efficient respiratory measurements of purified plant mitochondria.

Isolation and Respiratory Measurements of Mitochondria from Arabidopsis thaliana

As mitochondria are only a small percentage of the plant cell, they need to be purified for a range of studies. Mitochondria can be isolated from a variety of plant organs by homogenization, followed by differential and density gradient centrifugation to obtain a highly purified mitochondrial fraction.

Yalıtım ve solunum ölçümleri mitokondri Arabidopsis thaliana üzerinden

Mitochondria are essential organelles involved in numerous metabolic pathways in plants, most notably the production of adenosine triphosphate (ATP) from ...

Genetic Incorporation of Biosynthesized L-dihydroxyphenylalanine (DOPA) and Its Application to Protein Conjugation

L-dihydroxyphenylalanine (DOPA) is an amino acid found in the biosynthesis of catecholamines in animals and plants. Because of its particular biochemical properties, the amino acid has multiple uses in biochemical applications. This report describes a protocol for the genetic incorporation of biosynthesized DOPA and its application to protein conjugation. DOPA is biosynthesized by a tyrosine phenol-lyase (TPL) from catechol, pyruvate, and ammonia, and the amino acid is directly incorporated into proteins by the genetic incorporation method using an evolved aminoacyl-tRNA and aminoacyl-tRNA synthetase pair. This direct incorporation system efficiently incorporates DOPA with little incorporation of other natural amino acids and with better protein yield than the previous genetic incorporation system for DOPA. Protein conjugation with DOPA-containing proteins is efficient and site-specific and shows its usefulness for various applications. This protocol provides protein scientists with detailed procedures for the efficient biosynthesis of mutant proteins containing DOPA at desired sites and their conjugation for industrial and pharmaceutical applications.

Genetic Incorporation of Biosynthesized L-dihydroxyphenylalanine DOPA and Its Application to Protein Conjugation

Here, we present a protocol for the genetic incorporation of L-dihydroxyphenylalanine biosynthesized from simple starting materials and its application to protein conjugation.

Genetik birleşmesiyle uzarlar L-dihydroxyphenylalanine (basıncın) ve uygulama için Protein konjugasyon

L-dihydroxyphenylalanine (DOPA) is an amino acid found in the biosynthesis of catecholamines in animals and plants. Because of its particular biochemical ...

Isolation of Lipoprotein Particles from Chicken Egg Yolk for the Study of Bacterial Pathogen Fatty Acid Incorporation into Membrane Phospholipids

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the majority of exogenous fatty acids are present within host lipoprotein particles. Uncertainty remains as to the reservoirs of host fatty acids and the mechanisms by which bacteria extract fatty acids from the lipoprotein particles. In this work, we describe protocols for enrichment of low-density lipoprotein (LDL) particles from chicken egg yolk and determining whether LDLs serve as fatty acid reservoirs for S. aureus. This method exploits unbiased lipidomic analysis and chicken LDLs, an effective and economical model for the exploration of interactions between LDLs and bacteria. The analysis of S. aureus integration of exogenous fatty acids from LDLs is performed using high-resolution/accurate mass spectrometry and tandem mass spectrometry, enabling the characterization of the fatty acid composition of the bacterial membrane and unbiased identification of novel combinations of fatty acids that arise in bacterial membrane lipids upon exposure to LDLs. These advanced mass spectrometry techniques offer an unparalleled perspective of fatty acid incorporation by revealing the specific exogenous fatty acids incorporated into the phospholipids. The methods outlined here are adaptable to the study of other bacterial pathogens and alternative sources of complex fatty acids.

This method provides a framework for studying incorporation of exogenous fatty acids from complex host sources into bacterial membranes, particularly Staphylococcus aureus. To achieve this, protocols for the enrichment of lipoprotein particles from chicken egg yolk and subsequent fatty acid profiling of bacterial phospholipids utilizing mass spectrometry are described.

Membran fosfolipidler içine bakteriyel patojen yağ asidi kuruluş çalışması için tavuk yumurtası sarısı lipoprotein parçacıklarının yalıtım

Staphylococcus aureus and other Gram-positive pathogens incorporate fatty acids from the environment into membrane phospholipids. During infection, the ...

Application of Biolayer Interferometry (BLI) for Studying Protein-Protein Interactions in Transcription

A transcription factor&#160;(TF) is a protein that regulates gene expression by interacting with the RNA polymerase, another TF, and/or template DNA. GrgA is a novel transcription activator found specifically in the obligate intracellular bacterial pathogen Chlamydia. Protein pulldown assays using affinity beads have revealed that GrgA binds two &#963; factors, namely &#963;66 and &#963;28, which recognize different sets of promoters for genes whose products are differentially required at developmental stages. We have used BLI to confirm and further characterize the interactions. BLI demonstrates several advantages over pulldown: 1) It reveals real-time association and dissociation between binding partners, 2) It generates quantitative kinetic parameters, and 3) It can detect bindings that pulldown assays often fail to detect. These characteristics have enabled us to deduce the physiological roles of GrgA in gene expression regulation in Chlamydia, and possible detailed interaction mechanisms. We envision that this relatively affordable technology can be extremely useful for studying transcription and other biological processes.

Application of Biolayer Interferometry BLI for Studying Protein-Protein Interactions in Transcription

Interactions of transcription factors (TFs) with the RNA polymerase are usually studied using pulldown assays. We apply a Biolayer Interferometry (BLI) technology to characterize the interaction of GrgA with the chlamydial RNA polymerase. Compared to pulldown assays, BLI detects real-time association and dissociation, offers higher sensitivity, and is highly quantitative.

Transkripsiyon protein-protein etkileşimlerini Incelemek için Biolayer Interferometri (BLı) uygulaması

A transcription factor&#160;(TF) is a protein that regulates gene expression by interacting with the RNA polymerase, another TF, and/or template DNA. GrgA ...

Preparation of High-Quality Fermented Fish Product

This protocol provides a method for preparation of industrialized fermented fish product with sturgeon (Aquilaria sinensis) meat product. The procedures were: (1) pretreatment of farmed sturgeon including decapitation, evisceration, skinning-off, cleaning and cutting; (2) marinating fish cubes in 6-12% (w/v) salt solution (1:1, fish cube mass to solution volume); (3) drying fish cubes to a water content of 50-60% by hot air (40-60 &#176;C) or by vacuum; (4) fermentation involving inoculating fish cubes with 0.4-1.6% (w/w) S. cerevisiae in flavor solution to fish cubes and fermenting at 25-35 &#176;C for 6-10 h; (5) sealing fish cubes in vacuum packages with marinating and fermenting solutions; (6) sterilizing at 115-121 &#176;C for 10-20 min. The sturgeon meat product prepared by this method has delicious taste which is mellow and thick, has various types and large amounts of volatile flavor compounds such as alcohols and esters which could mask musty and unpleasant odor from fish, has moderate salt content but good texture properties such as high springiness, gumminess and chewiness, and has bright russet color and attractive appearance. This new technique could also be applied in the processing of other fish to provide convenient fish snack foods which could be stored at room temperature. It is appropriate for both marine and freshwater fish.

The goal of the protocol is to provide an industrialized fish fermentation technique based on inoculation of Saccharomyces cerevisiae.

Yüksek Kaliteli Fermente Balık Ürününün Hazırlanması

This protocol provides a method for preparation of industrialized fermented fish product with sturgeon (Aquilaria sinensis) meat product. The procedures ...

JUMPn: A Streamlined Application for Protein Co-Expression Clustering and Network Analysis in Proteomics

With recent advances in mass spectrometry-based proteomics technologies, deep profiling of hundreds of proteomes has become increasingly feasible. However, deriving biological insights from such valuable datasets is challenging. Here we introduce a systems biology-based software JUMPn, and its associated protocol to organize the proteome into protein co-expression clusters across samples and protein-protein interaction (PPI) networks connected by modules (e.g., protein complexes). Using the R/Shiny platform, the JUMPn software streamlines the analysis of co-expression clustering, pathway enrichment, and PPI module detection, with integrated data visualization and a user-friendly interface. The main steps of the protocol include installation of the JUMPn software, the definition of differentially expressed proteins or the (dys)regulated proteome, determination of meaningful co-expression clusters and PPI modules, and result visualization. While the protocol is demonstrated using an isobaric labeling-based proteome profile, JUMPn is generally applicable to a wide range of quantitative datasets (e.g., label-free proteomics). The JUMPn software and protocol thus provide a powerful tool to facilitate biological interpretation in quantitative proteomics.

We present a systems biology tool JUMPn to perform and visualize network analysis for quantitative proteomics data, with a detailed protocol including data pre-processing, co-expression clustering, pathway enrichment, and protein-protein interaction network analysis.

Keratin hidrolizat tavuk tüyleri ve kozmetik kendi uygulamasında hazırlanması

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler