Çalışma "Yatırımlar gelecek için" LABEX SIGNALIFE program sayesinde (başvuru ANR-11-LABX-0028-01) (Ulusal araştırma ajansı, ANR) Fransız hükümeti tarafından desteklenen ve K. hibe tarafından Derneği'nden D. W. pour la Recherche sur le kanser, Fondation de France ve kanser INSERM planı. D. B. ve A. V. Arkadaş grupları sırasıyla Fondation pour la Recherche Médicale ve Nice şehir aldı. Philips tarafından sağlanan echocardiograph ve dönüştürücü nazik idi. A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar-Karatepe, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini ve S. M. Wagner onların yetenekli teknik yardım için teşekkür ederiz.

ilgili Kurumsal ve Fransız hayvan refah yasaları, kuralları ve ilkeleri ile uyumlu burada açıklanan deneyler yapılmıştır. Fransız Etik Komitesi tarafından onaylanmış olan (Comité Institutionnel d &#39; ki Pour l &#39; hayvan de Laboratoire; sayı NCE/2012-106).
 1. Ekokardiyografi <ol><li>kullanarak uygun konumlandırma emin olmak için bir standart laboratuvar denge hafifçe kuyruğundan tutarak farenin vücut ağırlığını belirlemek.</li>
	<li>50 mg/kg Fentobarbital 25 , 26 mayi (IP) enjeksiyonu ile hayvan anestezi. 
	Not: aynı iletişim kuralını çalışma kullanılırsa, anestezi başka türlü kullanılabilir. Avantajları ve dezavantajları aşağıda tartışılacaktır.</li>
	<li>Fare geri kendi kafes ve bekleyin kadar tepkisiz yerine, sürekli nefes gösterir ve arka ayak refleks yok. Bu test etmek için bir ayak hafifçe sıkmak ve bacak hala geri çeker olup olmadığını gözlemlemek.</li>
	<li>Sol tarafındaki Toraks ve ticari bir kemirgen tıraş makinesi kullanarak sol koltuk altı tıraş. 
	Not: Ekokardiyografik ölçümdeki girişimi engellemek için iyi fare saç tamamen kaldırılması için adanmış bir kemirgen tıraş makinesi kullanımına izin verir. Onlar genellikle, o uyanır sonra hangi hayvan rahatsız kokulu gibi ticari saç kaldırma krem veya çözümleri, kaçınılmalıdır. Isı kaybı arttıkça önlemek aşırı tıraş.</li>
	<li>40-42 ° C-12 kafa ile bir sığ sol taraflı pozisyonda ayarla bir sıcak yastık üzerinde uyku hayvan koymak o &#39; saat ve 6 kuyruk o &#39; saat. Sol kol, sol ayak ve kuyruk bant ile düzeltmek.</li>
	<li>Uygula önceden Ekokardiyografi jel traş göğüs ve dönüştürücü başkanı üzerine ısındı.</li>
	<li>Dönüştürücü parasternal sağdan sola, Papiller kas düzeyde bir iki boyutlu (2D) parasternal uzun eksen görünümü elde etmek için boynun sağ tarafında yönlendiren yerleştirin. Dönüştürücü 90 ° papilary kas düzeyinde bir kısa-eksen görünümü elde etmek için saat yönünde çevir. Görüntü kalitesi veya kare hızını en üst düzeye çıkarmak için en az derinlik ayarı ve zoom kullanın. Tarama hızını maksimuma ayarlayın.
	Bu ayar, farklı yakınlaştırma ve derinlik ayar seçenekleri elde etmek için <ol><li>, makine ve yazılıma bağlı olarak kullanılabilir. Kayıt 2D güdümlü M-modu kısa-eksenindeki 27 görüntüleri. şekil 1A ve B 27 için başvurun. 
		Not: göğüs için aşırı basınç uygulamaktan kaçının bu bradikardiyi neden dikkatli ol.</li>
	</ol></li> <li>Kayıt en az 3 Serisi 3 kalp beat cine döngüler her hayvan için. 
	Not: Bu çalışmada kullanılan echocardiograph yazılım için basın &#34; edinme/Kaydet &#34; yalnızca bir kez düğme. Bu metodoloji echocardiograph bu yazılım ile özeldir. Diğer yazılım paketleri ile farklı makineleri kullanılabilir.</li>
	Başarılı kayıtları, silme Ekokardiyografi kapalı fare Toraks, Isıtma yastığını ve dönüştürücü jel sonra <li>. Bacaklarda ve kuyruk bandı çıkarın.</li>
	<li>Fare yukarı uyanır kadar gereksiz ışık pozlama ve ısı kaybına yol açmamak için doku ile kaplı Isıtma yastığını gözlem altında</li>
	<li>Hayvan geri onun kafes içinde yerine.</li>
	<li>Analiz parasternal kısa eksen görünümü sol ventrikül (LV) boyutu ve işlevi belirlemek için M-modu görüntüleri kaydetti. Sistol ve diastole (LVAWs ve LVAWd), LV iç son sistolik ve diyastolik uç çapı (LVIDs ve LVIDd) ve Sistol ve diastole (LVPWs ve LVPWd) kullanarak LV posterior duvar kalınlığı (LVPW) LV ön duvar kalınlığını ölçmek stok imge doku-kan arabirimde tanımlaması.</li>
	<li>Belirgin maksimal LV diyastolik boyutları anda diyastolik boyutlarını ölçün ve son sistolik boyutları en ön sistolik gezi LV posterior duvar saatinde LV. Dokunmatik ekran dokunun &#34; analiz &#34; simgesini ve sonra &#34; LVAWd &#34; simgesi. Sağ ventrikül boşluğuna ve diastole LV anterior duvarda arasında arayüz elektronik Kaliper çubuğuyla.</li>
	<li>LV ön duvar ve LV diyastolik ön duvar kalınlığı elde etmek için LV boşluğu arasında arayüz elektronik Kaliper çubuğuyla; yazılım doğrudan LV iç end-diastolik ölçüm için geçiş.</li>
	<li>LV kavite ve LV LV iç son diyastolik çap elde etmek için posterior duvar arasında arayüz Kaliper çubuğuyla; yazılım LV posterior duvar kalınlığı ölçümü için geçiş.</li>
	<li>LV posterior duvar ve LV diyastolik posterior duvar kalınlığı elde etmek için kalp zarını arasında arayüz Kaliper getirin. Dokunmatik ekran dokunun LV sistolik boyutları için &#34; LVAWs &#34; simgesi ve Sistol pozisyonda sağ ventrikül boşluğuna ve LV ön duvar arasında arayüz üzerinde elektronik Kaliper.</li>
	<li>Elektronik Kaliper LV ön duvar ve LV sistolik ön duvar kalınlığı elde etmek için LV boşluğu arasında arayüz üzerinde konumlandırın. LV iç son sistolik çapı ve LV sistolik posterior duvar kalınlığı için yukarıda açıklandığı gibi tekrarlayın. Ekokardiyografi Amerikan toplum tarafından kabul edilen öncü Kongre endocardial ve epicardial sınırları 13 , 27 izlemek için kullanın. 
	Not: Önceki ölçümleri kullanarak LV contractile işlev parametreleri otomatik olarak hesaplanır. LV (FS) kısaltılması kesirli FS (%) tanımlanan [(LVIDd-LVIDs)/LVIDd =] x 100. LV ejeksiyon fraksiyonu (EF) değiştirilmiş Teicholz formülüyle hesaplanır nerede EF (%) = [(LVIDd3-LVIDs3)/LVIDd 3] x 100 12. şekil 1A ve B başvurun.</li>
	<li>CD'ler veya USB bellek sopa verileri depolamak ve yedek kopyalarını.</li>
	<li>Alma, analiz ve uygun yazılımı kullanarak veri ihracat. 
	Not: Bu temel ölçü birimlerinin sonra deneme duraklatılmış. Nakavt hayvanlar ve vahşi-türü littermates arasında doğrudan bir karşılaştırma yapmak, histolojik analizler 6 ile devam edin. CRE-ERT2 için; füme balığı/füme balığı fare hatları, açıklanan 5 , 24 olarak ı.p. enjeksiyonla tamoxifen indüksiyon ile ertesi gün devam. Deneysel akut miyokard infarktüsü sol koroner arter 5 , 28 ligasyonu tarafından inducing takdirde doğrudan Ekokardiyografi ölçümleri sonra ameliyat yapılır zaman fareler anestezi altında bulunmaktadır. Aksi takdirde, anestezi iki tur arasında bir haftanın en az bir gecikme ameliyat sonrası ölümcül hızını sınırlamak için saklanması gerekebilir.</li>
</ol> 2. Histolojik değerlendirme için kalp örnekleri hazırlanması <ol><li>kurban hayvanlar tarafından servikal çıkığı. Onların beden ağırlık ölçmek. Göğüs ve karın bir % 70 alkol bez kullanarak dezenfekte.</li>
	<li>Enine bir kesi Cilt 1 cm distal göğüs kemiği için yapmak. Künt forseps kullanarak, baş yönde hareket Toraks cilt kaldırın. Göğüs kemiği hafifçe iyi Forseps ile tutun ve iyi makas künt sonuna ekleyerek diyafram açın.</li>
	<li>Göğüs kafesi her iki tarafta göğüs kemiği paralel kesti. Göğüs kemiği kafa yönünde taşır. Kalp göğüs bulun. İyi Forseps ile kalp damar gövde tutun ve iyi makas kullanarak aşağıda kesti.</li>
	<li>Sandığı aç ve toraks dışında tüm kalp tüketim, kalp ağırlık ölçmek ve bir kalp vücut ağırlığı oranı 4 , 5 , 6 , kurmak 23 , 29 , 30 .</li>
	<li>Düzeltme 2 mL % 10 tarafsız tampon formalin çözeltisi 15 mL tüpler kalbinde gecede, 4 ° C. 
	Dikkat: tehlike! Formalin çözümleri ile iş bir kimyasal duman mahallede yapılmalıdır; eldiven ve koruyucu gözlük. 
	Not: arabellek oluşturma formalin çözümler için farklı tedarikçiler ile değişir gibi çalışma boyunca aynı tedarikçi kullanın.</li>
	<li>Ertesi gün, kalpleri transvers düzlemde ortasında, kesilmiş ve parafin yerleştirme, kaset içine aktarmak otomatik bir gömme cihazı kullanarak patoloji laboratuarında yapıldığı.</li>
	<li>Gerçekleştirmek kesit.
	<ol><li>Bölüm parafin blok bir microtome ve onları 40 ° C suda banyo içeren distile su kayan nokta kullanarak 3 µm kalınlığında.</li>
		<li>Bölümleri slaytlar üzerine aktarın. Kuru gecede slaytlara 37 ° C kuluçka makinesine izin ve kullanım için hazır kadar 4 ° C'de depolayabilirsiniz. 
		Not: kullanıcı (Adım 3) boyama için hazır olması ne kadar protokol burada duraklatılmış.</li>
	</ol></li> <li>Deparaffinize ve suyla temasa doku slaytlar.
	<ol><li>Kavanoz cam ekler parafin eritmek 10 dk 55 ° C fırında ile boyama slaytları yerleştirin.</li>
		<li>Deparaffinize 200 ml Ksilen veya Ksilen yerine 5 min için iki değişiklik slaytları. 
		Dikkat: Son derece yanıcı ve zehirli! Kimyasal duman mahallede iş; eldiven ve koruyucu gözlük.</li>
		<li>200 mL % 100 alkol slaytları aktarın. 3 min için iki değişiklik yapmak ve bir kez 200 mL % 95 alkol 3 dakika süreyle aracılığıyla transfer 
		Dikkat: Son derece yanıcı! Ateşleme kaynaklarından uzak tutun; sigara içmek yasak.</li>
		<li>200 mL fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) 5 min için içinde iki defa durulayın ve adım 3, 4 veya 5'e geçin.</li>
	</ol></li></ol> 3. Hematoksilen ve Eozin boyama <ol><li>Slaytlar onların bölümlerde distile su ile durulama.</li>
	<li>8 dakika süreyle Hematoksilen Çözümle çekirdeklerin leke</li>
	<li>Musluk suyu 10 dakika süreyle çalışan durulama</li>
	<li>2 min. Eozin çözüm ile leke</li>
	<li>Dehydrate % 100 etanol (alkol) 2 min için üç kez. Ksilen veya Ksilen yerine 2 min için üç kez temizleyin. Montaj montaj Ksilen tabanlı ortamda.</li>
	<li>Fotoğraf slaytlar ve boyuna interventricular septum bölümlerini çekirdeğinde düzeyde cardiomyocyte çapı ölçmek. Bölüm ve kalp başına üç bölüm başına en az 100 hücre ölçmek.</li>
</ol> 4. WGA boyama <ol><li>Adım 2.7 tetramethylrhodamine (ya da diğer floresan boyalar) ile elde edilen slaytlar kuluçkaya-nemli bir oda oda sıcaklığında 60 dk için WGA (1: 100 PBS içinde) Birleşik.</li>
	<li>Yıkama üç kez PBS ile 5 dk her.</li>
	<li>Dağı ile floresan DAPI içeren ortam takma. Stok Analiz önce karanlıkta 4 ° C'de. 
	Dikkat: Göz koruması ve uyumlu kimyasal dayanıklı eldiven giymek.</li>
	<li>Fotoğraf slaytları.
	<ol><li>Kullanım Floresans epi-aydınlatma ve filtre ile donatılmış bir mikroskop DAPI ve tetramethylrhodamine (Tablo malzemeler için başvurmak) için ayarlar. Maksimum diyafram otomatik poz için parlaklığı ayarlayın.</li>
		<li>Edinme resimleri, mavi ve kırmızı kanalları için 400 x büyütme ayrı. Görüntüleri ImageJ içinde açın. Parlaklığı ayarlayın ve gerekirse kontrast (görüntü &#62; ayarla &#62; Parlaklık/Kontrast).</li>
		<li>Ayarla her görüntüyü 8 bitlik (görüntü &#62; türü &#62; 8-bit). DAPI ve WGA görüntüleri yerleşimi. Mavi kanal DAPI ve kırmızı kanalı için WGA için yeşil ve gri kanalları yok olarak ayarlayın (görüntü &#62; renk &#62; birleştirme kanalları) 31.</li>
	</ol></li> <li>Cardiomyocyte çapları interventricular septum enine bölümlerini çekirdeğinde düzeyde belirlemek.
	<ol><li>Tanımla ImageJ Albümdeki ölçeğini. Bu amaçla, (Örneğin, bir hemasitometre odası kalp bölümler aynı büyütmede; adım 4.4) bilinen boyutlardaki fotoğraf.</li>
		<li>Başından sonuna kadar bir çizgi çizmek için normal amortisman aracı kullanmak bilinen yapısı (Analyze &#62; ayarla ölçek). 
		Not: Olan uzaklığını piksel otomatik olarak görüntülenir; bilinen uzaklık ve uzunluk birimi girilmesi gerekir. Cardiomyocyte ölçümler çekirdek düzeyde devam.</li>
		<li>WGA-pozitif zar DAPI pozitif çekirdeği ile WGA-pozitif hücre zarının ters siteye düz bir çizgi çizmek (Analyze &#62; ölçü birimi). Sonuçları penceresinde uzunluğu değerleri anlamlı sayıda ondalık basamak bulunduğundan emin olun (Analyze &#62; ayarla ölçümleri &#62; ondalık basamak).</li>
		<li>Bölüm ve kalp başına üç bölüm başına en az 100 hücre ölçmek. Sonuçları Excel'e ver (tıklatın sonuçlarına &#62; dosyayı &#62; olarak kaydedin &#62; .csv) 6 , 31.</li>
	</ol></li></ol> 5. Pecam-1 Immunostaining <ol><li>antijen maskesini gerçekleştirmek.
	Bir düdüklü tencere <ol><li>ekleyin 1 600 mL sodyum sitrat arabelleğe (10 mM sodyum sitrat, %0.05 ara 20, pH 6.0). Ocağın üzerinde düdüklü tencere yerleştirin ve tam güç açın. Bu noktada düdüklü tencere kapağı güvenli olmayana; Sadece üst üzerinde bekletin. 
		Dikkat: Sıcak!</li>
		Sodyum sitrat arabellek kaynar bir kez <li>düdüklü tencere 2.5 adımından slaytları aktarın. Düdüklü tencere kapağı güvenli. En kısa zamanda tam basınç Ocak ulaşmıştır için 7 dakika bekleyin. 7 dk. geçen zaman, ocağın açmak ve boş bir lavaboda düdüklü tencere yerleştirin. Basınç yayın Vana etkinleştirmek ve soğuk su Ocak üzerinde çalıştırın. Bir kez de-basınçlı, kapağı açın ve soğuk su içine Ocak 5 dk. yer için slaytları 200 mL PBS çalıştırın. 
		Not: her ne kadar aşırı ısınma riski artar alternatif olarak, mikrodalga antijen maskesini, kullanılabilir gibi.</li>
	</ol></li> <li>Kullanımı % 0,3 hidrojen peroksit blok endojen peroksidaz aktivitesi 5 dakika süreyle metanol içinde durulama slaytlar için üç kez 2 min için PBS içinde her 200 mL. 
	Dikkat: Yanıcı ve toksik!</li>
	<li>15dk Serumda bir avidin bloğu (4 damla 1 ml) da içeren seyreltilmiş normal engelleme (% 5 normal keçi serum içinde PBS) slaytlarını kuluçkaya.</li>
	<li>Dikkatle sıvı bölümlerden dokunun ve onları kuluçkaya Pecam-1 antikor tavşan üzerinden, seyreltilmiş 1:50 % 2.5 normal keçi serum ve biotin blok mL başına 4 damla içeren PBS ile. Slaytları gecede nemli bir Odası 4'te kuluçkaya ° C.</li>
	<li>200 mL PBS slaytlar 5 min için üç kez yıkayın. Biotinylated keçi Anti-tavşan IgG antikor seyreltilmiş 1: 200, oda sıcaklığında 1 h için % 2.5 normal keçi serum içeren PBS içinde bölümlerle kuluçkaya. 200 mL PBS slaytlar 5 min için üç kez yıkayın.</li>
	<li>t kuluçkayao bölümleri için 20 dk (Reaktif A ve Reaktif B kombine 30 dakika önceki gerek kullanmak için) bir peroksidaz avidin/biotin tabanlı sistemi ile. 200 mL PBS slaytlar 5 min için üç kez yıkayın.</li>
	<li>Erimesi 1 3.3 &#39;-diaminobenzidine (DAB) ve 1 üre hidrojen peroksit tablet 5 mL çift distile su. Yaklaşık 3 dk., renk geliştirme dikkatle izlenmesi için DAB çözüm bölümlerle kuluçkaya. Yavaşça 200 mL PBS slaytları yıkayarak renk reaksiyonu durdurmak. 
	Dikkat: Kanserojen; kimyasal dayanıklı eldiven giymek!</li>
	<li>Çekirdeği Hematoksilen ile 6 min için counterstain. 2 dk. Dehydrate 2 min için üç kez musluk suyu 200 mL % 100 alkol durulama. Üç kez 2 min için Ksilen veya Ksilen yerine içinde her 200 mL temizleyin. Montaj montaj Ksilen tabanlı ortamda.</li>
	<li>Slaytlar (en az on alanları, her kalp interventricular septum üzerinden 40 x büyütme) Fotoğraf ve serbestçe kullanılabilir ImageJ yazılım 31 kullanarak Pecam-1 alan yoğunluğunu ölçmek. Renk deconvolution 32 eklenti DAB ve Hematoksilen ve görüntü kontrastı ile aynı düzeye ayarlayın. 
	Not: kahverengi ve mor/mavi renk var zorluklar ile renk deconvolution neden olabilir, önemli spektral çakışma durumunda bir Hematoksilen çözüm açık, açık mavi nükleer boyama elde etmek için farklı markalar deneyebilirsiniz. Alternatif olarak, ayirt veya el ile kılcal damarlar sayma yerine olabilir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+engineering+of+animals:+ethical+issues,+including+welfare+concerns.">Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns.</a> Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).</li><li>Karl, T., Pabst, R., von H&#246;rsten, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+phenotyping+of+mice+in+pharmacological+and+toxicological+research.">Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological research.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (1), 69-83 (2003).</li><li>Phoon, C. K., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+Imaging+in+Mice.">Cardiovascular Imaging in Mice.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 6 (1), 15-38 (2016).</li><li>Wagner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisome+proliferator-activated+receptor+beta+stimulation+induces+rapid+cardiac+growth+and+angiogenesis+via+direct+activation+of+calcineurin.">Peroxisome proliferator-activated receptor beta stimulation induces rapid cardiac growth and angiogenesis via direct activation of calcineurin.</a> Cardiovasc Res. 83 (1), 61-71 (2009).</li><li>Wagner, K. D., Vukolic, A., Baudouy, D., Michiels, J. F., Wagner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+Conditional+Vascular-Specific+Overexpression+of+Peroxisome+Proliferator-Activated+Receptor+Beta/Delta+Leads+to+Rapid+Cardiac+Hypertrophy.">Inducible Conditional Vascular-Specific Overexpression of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Beta/Delta Leads to Rapid Cardiac Hypertrophy.</a> PPAR Res. 2016, 7631085 (2016).</li><li>Ghanbarian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dnmt2/Trdmt1+as+Mediator+of+RNA+Polymerase+II+Transcriptional+Activity+in+Cardiac+Growth.">Dnmt2/Trdmt1 as Mediator of RNA Polymerase II Transcriptional Activity in Cardiac Growth.</a> PLoS One. 11 (6), e0156953 (2016).</li><li>Meguro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclosporine+attenuates+pressure-overload+hypertrophy+in+mice+while+enhancing+susceptibility+to+decompensation+and+heart+failure.">Cyclosporine attenuates pressure-overload hypertrophy in mice while enhancing susceptibility to decompensation and heart failure.</a> Circ Res. 84 (6), 735-740 (1999).</li><li>de Ara&#250;jo, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+and+moderate+aerobic+training+before+allergic+asthma+induction+reduces+lung+inflammation+and+remodeling.">Regular and moderate aerobic training before allergic asthma induction reduces lung inflammation and remodeling.</a> Scand J Med Sci Sports. 26 (11), 1360-1372 (2016).</li><li>Benavides-Vallve, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+strategies+for+echocardiographic+evaluation+of+left+ventricular+function+in+a+mouse+model+of+long-term+myocardial+infarction.">New strategies for echocardiographic evaluation of left ventricular function in a mouse model of long-term myocardial infarction.</a> PLoS One. 7 (7), e41691 (2012).</li><li>Colazzo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+left+atrium+and+left+atrial+appendage+structure+and+function:+echocardiographic+and+morphologic+evaluation.">Murine left atrium and left atrial appendage structure and function: echocardiographic and morphologic evaluation.</a> PLoS One. 10 (4), e0125541 (2015).</li><li>Pachon, R. E., Scharf, B. A., Vatner, D. E., Vatner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+anesthetics+for+assessing+left+ventricular+systolic+function+by+echocardiography+in+mice.">Best anesthetics for assessing left ventricular systolic function by echocardiography in mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308 (12), H1525-H1529 (2015).</li><li>Gao, S., Ho, D., Vatner, D. E., Vatner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiography+in+Mice.">Echocardiography in Mice.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 1, 71-83 (2011).</li><li>Mor-Avi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+and+evolving+echocardiographic+techniques+for+the+quantitative+evaluation+of+cardiac+mechanics:+ASE/EAE+consensus+statement+on+methodology+and+indications+endorsed+by+the+Japanese+Society+of+Echocardiography.">Current and evolving echocardiographic techniques for the quantitative evaluation of cardiac mechanics: ASE/EAE consensus statement on methodology and indications endorsed by the Japanese Society of Echocardiography.</a> J Am Soc Echocardiogr. 24 (3), 277-313 (2011).</li><li>Collins, K. A., Korcarz, C. E., Lang, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+echocardiography+for+the+phenotypic+assessment+of+genetically+altered+mice.">Use of echocardiography for the phenotypic assessment of genetically altered mice.</a> Physiol Genomics. 13 (3), 227-239 (2003).</li><li>Rottman, J. N., Ni, G., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+evaluation+of+ventricular+function+in+mice.">Echocardiographic evaluation of ventricular function in mice.</a> Echocardiography. 24 (1), 83-89 (2007).</li><li>Hart, C. Y., Burnett, J. C., Redfield, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+avertin+versus+xylazine-ketamine+anesthesia+on+cardiac+function+in+normal+mice.">Effects of avertin versus xylazine-ketamine anesthesia on cardiac function in normal mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 281 (5), H1938-H1945 (2001).</li><li>Moran, C. M., Thomson, A. J., Rog-Zielinska, E., Gray, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+echocardiography+in+the+assessment+of+cardiac+physiology+and+disease+in+preclinical+models.">High-resolution echocardiography in the assessment of cardiac physiology and disease in preclinical models.</a> Exp Physiol. 98 (3), 629-644 (2013).</li><li>Fayssoil, A., Tournoux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+left+ventricular+function+in+mice+with+Doppler+echocardiography.">Analyzing left ventricular function in mice with Doppler echocardiography.</a> Heart Fail Rev. 18 (4), 511-516 (2013).</li><li>Schoensiegel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+echocardiography+in+conscious+mice:+training+and+primary+screens.">High throughput echocardiography in conscious mice: training and primary screens.</a> Ultraschall Med. 32, S124-S129 (2011).</li><li>Yariswamy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac-restricted+Overexpression+of+TRAF3+Interacting+Protein+2+(TRAF3IP2)+Results+in+Spontaneous+Development+of+Myocardial+Hypertrophy,+Fibrosis,+and+Dysfunction.">Cardiac-restricted Overexpression of TRAF3 Interacting Protein 2 (TRAF3IP2) Results in Spontaneous Development of Myocardial Hypertrophy, Fibrosis, and Dysfunction.</a> J Biol Chem. 291 (37), 19425-19436 (2016).</li><li>Jara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac-Specific+Disruption+of+GH+Receptor+Alters+Glucose+Homeostasis+While+Maintaining+Normal+Cardiac+Performance+in+Adult+Male+Mice.">Cardiac-Specific Disruption of GH Receptor Alters Glucose Homeostasis While Maintaining Normal Cardiac Performance in Adult Male Mice.</a> Endocrinology. 157 (5), 1929-1941 (2016).</li><li>Kerr, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+and+function+of+adult+vasculature+is+sustained+by+Akt/Jagged1+signalling+axis+in+endothelium.">Stability and function of adult vasculature is sustained by Akt/Jagged1 signalling axis in endothelium.</a> Nat Commun. 7, 10960 (2016).</li><li>Wagner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+vessel+development+requires+activation+of+the+TrkB+neurotrophin+receptor+by+the+Wilms'+tumor+transcription+factor+Wt1.">Coronary vessel development requires activation of the TrkB neurotrophin receptor by the Wilms' tumor transcription factor Wt1.</a> Genes Dev. 19 (21), 2631-2642 (2005).</li><li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Wilms'+tumour+suppressor+Wt1+is+a+major+regulator+of+tumour+angiogenesis+and+progression.">The Wilms' tumour suppressor Wt1 is a major regulator of tumour angiogenesis and progression.</a> Nat Commun. 5, 5852 (2014).</li><li>Yang, X. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+assessment+of+cardiac+function+in+conscious+and+anesthetized+mice.">Echocardiographic assessment of cardiac function in conscious and anesthetized mice.</a> Am J Physiol. 277 (5 Pt 2), H1967-H1974 (1999).</li><li>Rottman, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+changes+in+ventricular+function+assessed+echocardiographically+in+conscious+and+anesthetized+mice.">Temporal changes in ventricular function assessed echocardiographically in conscious and anesthetized mice.</a> J Am Soc Echocardiogr. 16 (11), 1150-1157 (2003).</li><li>Qui&#241;ones, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+quantification+of+Doppler+echocardiography:+a+report+from+the+Doppler+Quantification+Task+Force+of+the+Nomenclature+and+Standards+Committee+of+the+American+Society+of+Echocardiography.">Recommendations for quantification of Doppler echocardiography: a report from the Doppler Quantification Task Force of the Nomenclature and Standards Committee of the American Society of Echocardiography.</a> J Am Soc Echocardiogr. 15 (2), 167-184 (2002).</li><li>van Laake, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+cell+therapy+and+assessment+of+cardiac+function+using+magnetic+resonance+imaging+in+a+mouse+model+of+myocardial+infarction.">Monitoring of cell therapy and assessment of cardiac function using magnetic resonance imaging in a mouse model of myocardial infarction.</a> Nat Protoc. 2 (10), 2551-2567 (2007).</li><li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Wilms'+tumor+suppressor+Wt1+is+expressed+in+the+coronary+vasculature+after+myocardial+infarction.">The Wilms' tumor suppressor Wt1 is expressed in the coronary vasculature after myocardial infarction.</a> FASEB J. 16 (9), 1117-1119 (2002).</li><li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+induction+and+inheritance+of+epigenetic+cardiac+hypertrophy+in+the+mouse.">RNA induction and inheritance of epigenetic cardiac hypertrophy in the mouse.</a> Dev Cell. 14 (6), 962-969 (2008).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li><li>Ruifrok, A. C., Johnston, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+histochemical+staining+by+color+deconvolution.">Quantification of histochemical staining by color deconvolution.</a> Anal Quant Cytol Histol. 23 (4), 291-299 (2001).</li><li>Lazzeroni, D., Rimoldi, O., Camici, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Left+Ventricular+Hypertrophy+to+Dysfunction+and+Failure.">From Left Ventricular Hypertrophy to Dysfunction and Failure.</a> Circ J. 80 (3), 555-564 (2016).</li><li>Ismail, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistologic+labeling+of+murine+endothelium.">Immunohistologic labeling of murine endothelium.</a> Cardiovasc Pathol. 12 (2), 82-90 (2003).</li><li>Benton, R. L., Maddie, M. A., Minnillo, D. R., Hagg, T., Whittemore, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Griffonia+simplicifolia+isolectin+B4+identifies+a+specific+subpopulation+of+angiogenic+blood+vessels+following+contusive+spinal+cord+injury+in+the+adult+mouse.">Griffonia simplicifolia isolectin B4 identifies a specific subpopulation of angiogenic blood vessels following contusive spinal cord injury in the adult mouse.</a> J Comp Neurol. 507 (1), 1031-1052 (2008).</li><li>Ayoub, A. E., Salm, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+morphological+diversity+of+microglia+in+the+activated+hypothalamic+supraoptic+nucleus.">Increased morphological diversity of microglia in the activated hypothalamic supraoptic nucleus.</a> J Neurosci. 23 (21), 7759-7766 (2003).</li><li>Maddox, D. E., Shibata, S., Goldstein, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulated+macrophages+express+a+new+glycoprotein+receptor+reactive+with+Griffonia+simplicifolia+I-B4+isolectin.">Stimulated macrophages express a new glycoprotein receptor reactive with Griffonia simplicifolia I-B4 isolectin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 79 (1), 166-170 (1982).</li><li>dela Paz, N. G., D'Amore, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+versus+venous+endothelial+cells.">Arterial versus venous endothelial cells.</a> Cell Tissue Res. 335 (1), 5-16 (2009).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kardiyak yapısı ve fonksiyonu farelerde, Ekokardiyografi, kontrast-artırılmış MRI, CT mikro ve PET taraması gibi değerlendirmek için farklı yöntemler geliştirilmiştir. Maliyet-etkililik ve kolaylık nedeniyle Ekokardiyografi fareler11fonksiyonel analiz için en çok kullanılan tekniktir. Genel olarak, kalp ve nabız farelerde, dönüştürücü bir frekans ile yüksek frekans küçük boyutu nedeniyle &#62; 10 MHz kullanılmalıdır, her ne kadar başarılı ölçümleri 8 ya da 9 MH...

Genetiği değiştirilmiş fare modelleri, büyük bir çeşitlilik vardır ve farmakolojik çalışmalar farelerde yüksek1,2sayısıdır. Ekokardiyografi ve MRI kardiyak fonksiyon ve Morfoloji bu fare modelleri3fenotipik karakterizasyonu için yaygın olarak kullanılan yaklaşımlar vardır. Amacı sunulan protokolü, kardiyak fonksiyon ve Morfoloji yetişkin farelerde analiz etmektir. Ekokardiyografi, histolojik, birleştirir ve immunohistokimyasal ölçümleri. Ekokardiyografik inceleme fareler4,5,6,7,8,9,10,11'yaygın olarak kullanılır, 12. Pachon vd. 205 çalışmalar kan dolaşımı, Kan dolaşımı araştırma, Amerikan Journal Fizyoloji - kalp ve dolaşım fizyolojisive Kardiyovasküler araştırma 2.012 ve 2015 ki arasında yayınlanan 11 tespit Ekokardiyografik inceleme hayvanlarda kullanılan.
Ekokardiyografi kalp fenotipleri genetiği değiştirilmiş fare5,6,13,14,15,16, tanımlamak için kullanılır 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , kronik aşırı kaynaklı hipertrofisi, miyokardiyal iskemi ve kardiyomiyopati modelleri (12incelendi) farelerde kardiyak fonksiyon analiz olarak 22, de. Geliştirilmiş Ekokardiyografi cihazları bırakmak için standart ölçü birimi (LV) sol ventrikül sistolik ve diyastolik boyutların, doku Doppler görüntüleme, miyokardiyal kontrast echography ve LV bölgesel fonksiyon ve koroner rezerv değerlendirilmesi 12. ideal olarak, Ekokardiyografik inceleme bilinçli farelerde contractile işlev, otonomik refleks kontrolü, anestezi olumsuz etkilerini önlemek için gerçekleştirilmesi ve kalp hızı11. Bununla birlikte, bu yaklaşım hayvanları eğitmek için gereksinimin tarafından sınırlıdır; vücut ısısı istikrarlı tutmak zorlukları; hareket eserler; stres; çok yüksek kardiyak Frekanslar; ve özellikle çok sayıda hayvan soruşturma altında iseniz deneme, gerçekleştirmek en az iki müfettişler gereksinimi. İlginçtir, bir çalışmada eğitimli ve eğitimsiz hayvanlar19Ekokardiyografik parametreler yok farklılıkları bildirdi. Ekokardiyografik ölçümlere imzalat farelerde gerçekleştiriyoruz. Farklı anestezi protokoller aşağıda ele alınacaktır.
Her ne kadar standart çözünürlük Ekokardiyografi (&#62; 10 MHz) olduğunu ölçü LV sistolik ve diyastolik boyutlar ve kardiyak fonksiyon yetişkin farelerde yeterli, belgili tanımlık yöntem açıklamasını temel yapısal olayları sınırlıdır. Böylece, biz vivo ölçümleri ile histolojik birleştirmek ve immunohistological analizler, örneğin, cardiomyocyte çap ve gemi yoğunluğunu ölçmek için. Nükleer silahların yayılmasına karşı belirlenmesi, sınav apoptosis, enfarktüsü boyut ölçüleri, fibrozis ve belirli işaret ifade, belirlenmesi gibi diğer histolojik ve immunohistological araştırmalar da aynı tür üzerinde gerçekleştirilebilir doku işlenen ama bu protokol konusu değildir. Vivo Ekokardiyografik inceleme histolojik analizler ile kombinasyonu temel yapısal değişiklikler ilgili ek bilgiler sağlar. Ek bir adım olarak, bu ölçümler moleküler ve ultra yapısal İncelemeler ile tamamlayabilirsiniz. Histolojik analizler sadece Ekokardiyografik inceleme tamamlamak ama Ekokardiyografi çözünürlük yeterli olmadığında da vazgeçilmez olmak. Bu özellikle modelleri genetiği değiştirilmiş farelerin embriyonik öldürücü23,24olan durumdur.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Wheat germ agglutinin (WGA) conjugated tetramethylrhodamine</td>
			<td>Life Technologies, Molecular Probes</td>
			<td>W849</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody</td>
			<td>Vectorlabs</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avidin/Biotin Blocking Kit</td>
			<td>Vectorlabs</td>
			<td>SP-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Standard)</td>
			<td>Vectorlabs</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Vectorlabs</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SIGMAFAST 3,3&#39;-Diaminobenzidine tablets</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Pecam-1 (CD31) antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab28364</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound transmission gel, Gel Aquasonic 100</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear ultrasound probe, L15-7io</td>
			<td>Philips Healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Echocardiograph, IE33 xMATRIX</td>
			<td>Philips Healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope, Leica DMi8</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Filterset DAPI</td>
			<td>Leica</td>
			<td>11525304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filterset TxR</td>
			<td>Leica</td>
			<td>11525310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera, SPOT RT3 Color Slider</td>
			<td>Spot Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging Software, SPOT 5.2 Advanced and Basic Software</td>
			<td>Spot Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14028-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14501-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel blades</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11650-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent shaver</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>34-0243</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cassettes for paraffin embedding</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4155F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>neutral buffered Formalin</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>8727</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>8733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffine TEK III</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>automated embedding apparatus, Tissue-Tek VIP</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>6032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraffin-embedding station Tissue-Tek TEC 5</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>5229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome blades,Accu-Edge S35</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscopy slides, Tissue-Tek</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>9533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cover slips, Tissue-Tek</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>9582</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium Tissue-Tek</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>slide boxes</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>3958</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosine solution</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>8703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxyline solution</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>8711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microtome, RM2125RT</td>
			<td>Leica</td>
			<td>720-1880 (VWR)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bath, Leica HI1210</td>
			<td>Leica</td>
			<td>720-0113(VWR)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>ACRO444220050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>734-0451</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>staining glass dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MARI4220004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>staining jars</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MARI4200005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Binder</td>
			<td>9010-0012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB and urea hydrogen peroxide tablets, SIGMAFAST 3,3&#8242;-Diaminobenzidine tablets</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (10X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

echocardiographic and histological examination of cardiac morphology in the mouse

Genetiği değiştirilmiş fare modelleri artan sayıda son yıllarda kullanılabilir hale gelmiştir. Ayrıca, farmakolojik çalışmalar farelerde gerçekleştirilen sayısı yüksektir. Bu fare modelleri fenotipik karakterizasyonu de kardiyak fonksiyon ve Morfoloji incelenmesi gerekir. Ekokardiyografi ve manyetik rezonans görüntüleme (MRG) kardiyak fonksiyon ve Morfoloji farelerde karakterize etmek için yaygın olarak kullanılan yaklaşımlar vardır. Küçük kemirgen kullanımda ve pahalı bir özel alanı gerektirir için Ekokardiyografik ve MRI donanımları uzman. Bu iletişim kuralı bir 15 MHz insan vasküler sonda ile klinik bir Ekokardiyografik sistemiyle farelerde kardiyak ölçüleri açıklar. Ölçümler imzalat yetişkin fareler üzerinde gerçekleştirilir. En az üç görüntü sıralarını kaydedilir ve her hayvan için M-modu parasternal kısa eksenli görünümünde analiz. Daha sonra kardiyak histolojik inceleme yapılır ve cardiomyocyte çapları Hematoksilen üzerinde belirlenir-Eozin - ya da buğday tohumu agglutinin (WGA)-parafin kesitler lekeli. Gemi kararlı morphometrically Pecam-1 immunostaining sonra yoğunluğudur. Protokol farmakolojik çalışmalar başarıyla uygulanan ve farklı genetik hayvan modelleri temel koşullar altında hem de deneysel akut miyokard infarktüsü sol ön inen koroner arter (kalıcı ligasyonu tarafından sonra oldu ÇOCUK). Bizim deneyim, Ekokardiyografik inceleme imzalat hayvanlara sınırlıdır ve en az ağırlığında yetişkin farelerde uygulanabilirdir 25 gr.

Şekil 1' de, genetiği değiştirilmiş farelerde kardiyak fenotipleri tanımlamak için Ekokardiyografi kullanışlılığı temsilcisi Ekokardiyografik kayıtları gösterir. Bir fare ile normal kardiyak fonksiyon (şekil 1A) ve dilate sol ventrikül ve azaltılmış LV fonksiyonu (şekil 1B) bir hayvanla arasındaki fark kolayca tespit edilebilir. Resim 2 (<strong cl...

Watch this Scientific Journal Video about Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse at JoVE.com

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

Ekokardiyografik inceleme farelerde sık sık kullanılır. Bu amaç için pahalı yüksek çözünürlüklü ultrason cihazları geliştirilmiştir. Bu iletişim kuralı histolojik xarakteristikaları analizler ile kardiyak Morfoloji belirlemek için birlikte uygun fiyatlı bir Ekokardiyografik yordamı açıklar.

Kardiyak Morfoloji Ekokardiyografik ve histolojik muayene fare

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

echocardiographic-histological-examination-cardiac-morphology

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

21.2K Görüntüleme.  CNRS, INSERM, iBV. Ekokardiyografik inceleme farelerde sık sık kullanılır. Bu amaç için pahalı yüksek çözünürlüklü ultrason cihazları geliştirilmiştir. Bu iletişim kuralı histolojik xarakteristikaları analizler ile kardiyak Morfoloji belirlemek için birlikte uygun fiyatlı bir Ekokardiyografik yordamı açıklar.

Video: Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery (SALLI) MRI in Rats

Small animal magnetic resonance imaging is an important tool to study cardiac function and changes in myocardial tissue. The high heart rates of small animals (200 to 600 beats/min) have previously limited the role of CMR imaging. Small animal Look-Locker inversion recovery (SALLI) is a T1 mapping sequence for small animals to overcome this problem 1. T1 maps provide quantitative information about tissue alterations and contrast agent kinetics. It is also possible to detect diffuse myocardial processes such as interstitial fibrosis or edema 1-6. Furthermore, from a single set of image data, it is possible to examine heart function and myocardial scarring by generating cine and inversion recovery-prepared late gadolinium enhancement-type MR images 1.
	The presented video shows step-by-step the procedures to perform small animal CMR imaging. Here it is presented with a healthy Sprague-Dawley rat, however naturally it can be extended to different cardiac small animal models.

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery SALLI MRI in Rats

Contrast enhanced cardiac magnetic resonance (CMR) imaging allows comprehensive in vivo assessment of the heart in small animal models of cardiovascular disease. Here we detail the procedures to perform CMR imaging, reconstruction and analysis using Small Animal Lock-Locker Inversion Recovery (SALLI) in rats.

Küçük Hayvan Bak-soyunma Ters Kurtarma (SALLI) Sıçanlarda MRI kullanarak Kalp Fonksiyonu ve Miyokard Morfoloji Değerlendirilmesi

Small animal magnetic resonance  imaging is an important tool to study cardiac function and changes in myocardial  tissue. The high heart rates of small ...

Tıp

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

Fare Aortocaval Fistül Teknik Yönleri

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Echocardiographic Assessment of the Right Heart in Mice

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential therapies. Given the expense and time involved in creating animal models of disease, it is critical that researchers have tools to accurately assess phenotypic expression of disease. Right ventricular dysfunction is the major manifestation of pulmonary hypertension. Echocardiography is the mainstay of the noninvasive assessment of right ventricular function in rodent models and has the advantage of clear translation to humans in whom the same tool is used. Published echocardiography protocols in murine models of PAH are lacking.
In this article, we describe a protocol for assessing RV and pulmonary vascular function in a mouse model of PAH with a dominant negative BMPRII mutation; however, this protocol is applicable to any diseases affecting the pulmonary vasculature or right heart. We provide a detailed description of animal preparation, image acquisition and hemodynamic calculation of stroke volume, cardiac output and an estimate of pulmonary artery pressure.

This article provides a protocol for the echocardiographic assessment of right ventricular size and pulmonary hypertension in mice. Applications include phenotype determination and serial assessment in transgenic and toxin-induced mouse models of cardiomyopathy and pulmonary vascular disease.

Farelerde Sağ Kalp Ekokardiyografik Değerlendirilmesi

Transgenic and toxic models of pulmonary arterial hypertension (PAH) are widely used to study the pathophysiology of PAH and to investigate potential ...

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

During bacteremia Streptococcus pneumoniae can translocate across the vascular endothelium into the myocardium and form discrete bacteria-filled microscopic lesions (microlesions) that are remarkable due to the absence of infiltrating immune cells. Due to their release of cardiotoxic products, S. pneumoniae within microlesions are thought to contribute to the heart failure that is frequently observed during fulminate invasive pneumococcal disease in adults. Herein is demonstrated a protocol for experimental mouse infection that leads to reproducible cardiac microlesion formation within 30 hr. Instruction is provided on microlesion identification in hematoxylin &#38; eosin stained heart sections and the morphological distinctions between early and late microlesions are highlighted. Instruction is provided on a protocol for verification of S. pneumoniae within microlesions using antibodies against pneumococcal capsular polysaccharide and immunofluorescent microscopy. Last, a protocol for antibiotic intervention that rescues infected mice and for the detection and assessment of scar formation in the hearts of convalescent mice is provided. Together, these protocols will facilitate the investigation of the molecular mechanisms underlying pneumococcal cardiac invasion, cardiomyocyte death, cardiac remodeling as a result of exposure to S. pneumoniae, and the immune response to the pneumococci in the heart.

Visualization of Streptococcus pneumoniae within Cardiac Microlesions and Subsequent Cardiac Remodeling

Streptococcus pneumoniae forms discrete non-purulent microscopic lesions in the heart. Outlined is the protocol for a murine model of cardiac microlesion formation. Instruction is provided on microlesion visualization using microscopy, discrimination between early and late microlesions, and methods to detect cardiac remodeling in hearts of convalescent animals.

Görselleştirme<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Kalp Microlesions ve sonraki Kardiyak Tadilat içinde

During bacteremia Streptococcus pneumoniae can translocate across the vascular endothelium into the myocardium and form discrete bacteria-filled ...

Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of neuromuscular disorders. However, in order to do so, proper care needs to be taken when excising and preserving tissues to achieve optimal staining. One method of tissue preservation involves fixing tissues in formaldehyde and then embedding them with paraffin wax. This method preserves morphology well and allows for long-term storage at RT but is cumbersome and requires handling of toxic chemicals. Further, formaldehyde fixation results in antigen cross-linking, which necessitates antigen retrieval protocols for effective immunostaining. On the contrary, frozen sectioning does not require fixation and thus retains biological antigen conformation. This method also provides a distinct advantage in quick turn around time, making it especially useful in situations needing quick histological evaluation like intraoperative surgical biopsies. Here we describe the most effective method of preparing muscle biopsies for visualization with different histological and immunological stains.

Here we demonstrate the most efficient methods for freezing, embedding, cryosectioning, and staining of muscle biopsies to avoid freezing artifacts.

Histolojik Analiz kas cryosections Hazırlanmasında Yapılması ve Yapılmaması Gerekenler

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of ...

Assessment of Cardiac Morphological and Functional Changes in Mouse Model of Transverse Aortic Constriction by Echocardiographic Imaging

Transverse aortic constriction (TAC) in mice has been used as a valuable model to study mechanisms of cardiac hypertrophy and heart failure1. A reliable noninvasive method is essential to assess real-time cardiac morphological and functional changes in animal models of heart disease. Transthoracic echocardiography represents an important tool for noninvasive assessment of cardiac structure and function2. Here we used a high-resolution ultrasound imaging system to monitor myocardial remodeling and heart failure progression over time in a mouse model of TAC. B-mode, M-mode, and Doppler imaging were used to precisely assess cardiac hypertrophy, ventricular dilatation, and functional deterioration in mice following TAC. Color and pulse wave (PW) Doppler imaging was used to noninvasively measure pressure gradient across the aortic constriction created by TAC and to assess transmitral blood flow in mice. Thus transthoracic echocardiographic imaging provides comprehensive noninvasive measurements of cardiac dimensions and function in mouse models of heart disease.

The goal of this protocol is to noninvasively assess cardiac structural and functional changes in a mouse model of heart disease created by transverse aortic constriction, using B- and M-mode echocardiography and color/pulse wave Doppler imaging.

Ekokardiyografik Imaging tarafından Enine Aort Konstrüksiyon Mouse Modeli Kardiyak Morfolojik Değerlendirilmesi ve Fonksiyonel Değişiklikler

Transverse aortic constriction (TAC) in mice has been used as a valuable model to study mechanisms of cardiac hypertrophy and heart failure1. A reliable ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

Fare pankreas diseksiyon histolojik analiz ve metabolik profil oluşturma

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Cardiac Magnetic Resonance Imaging at 7 Tesla

CMR at an ultra-high field (magnetic field strength B0&#160;&#8805; 7 Tesla) benefits from the signal-to-noise ratio (SNR) advantage inherent at higher magnetic field strengths and potentially provides improved signal contrast and spatial resolution. While promising results have been achieved, ultra-high field CMR is challenging due to energy deposition constraints and physical phenomena such as transmission field non-uniformities and magnetic field inhomogeneities. In addition, the magneto-hydrodynamic effect renders the synchronization of the data acquisition with the cardiac motion difficult. The challenges are currently addressed by explorations into novel magnetic resonance technology. If all impediments can be overcome, ultra-high field CMR may generate new opportunities for functional CMR, myocardial tissue characterization, microstructure imaging or metabolic imaging. Recognizing this potential, we show that multi-channel radio frequency (RF) coil technology tailored for CMR at 7 Tesla together with higher order B0 shimming and a backup signal for cardiac triggering facilitates high fidelity functional CMR. With the proposed setup, cardiac chamber quantification can be accomplished in examination times similar to those achieved at lower field strengths. To share this experience and to support the dissemination of this expertise, this work describes our setup and protocol tailored for functional CMR at 7 Tesla.

The sensitivity gain inherent to ultrahigh field magnetic resonance holds promise for high spatial resolution imaging of the heart. Here, we describe a protocol customized for functional cardiovascular magnetic resonance (CMR) at 7 Tesla using an advanced multi-channel radio-frequency coil, magnetic field shimming and a triggering concept.

7 Tesla, kardiyak manyetik rezonans görüntüleme

CMR at an ultra-high field (magnetic field strength B0&#160;&#8805; 7 Tesla) benefits from the signal-to-noise ratio (SNR) advantage inherent at higher ...

Echocardiographic Measurement of Right Ventricular Diastolic Parameters in Mouse

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV diastolic function is rarely quantified in experimental studies. This might be due to technical difficulties in the visualization of the RV in the apical four-chamber view in rodents. Here we describe two positions facilitating the visualization of the apical four-chamber view in mice to assess the RV diastolic function.
The apical four-chamber view is enabled by tilting the mouse fixation platform to the left and caudally (LeCa) or to the right and cranially (RiCr). Both positions provide images of comparable quality. The results of the RV diastolic function obtained from two positions are not significantly different. Both positions are comparably easy to perform. This protocol can be incorporated into published protocols and enables detailed investigations of the RV function.

Here we describe and compare two positions for obtaining the apical four-chamber view in mice. These positions enable the quantification of the right ventricular function, provide comparable results, and can be used interchangeably.

Fareyle sağ ventriküler diyastolik parametrelerin ekokardiyografik ölçümü

Diastolic dysfunction is a prominent feature of right ventricular (RV) remodeling associated with conditions of pressure overload. However, the RV ...

Transthoracic Echocardiographic Examination in the Rabbit Model

Large animal models such as the rabbit are valuable for translational preclinical research. Rabbits have a similar cardiac electrophysiology compared to that of humans and that of other large animal models such as dogs and pigs. However, the rabbit model has the additional advantage of lower maintenance costs compared to other large animal models. The longitudinal evaluation of cardiac function using echocardiography, when appropriately implemented, is a useful methodology for preclinical assessment of novel therapies for heart failure with reduced ejection fraction (e.g. cardiac regeneration). The correct use of this non-invasive tool requires the implementation of a standardized examination protocol following international guidelines. Here we describe, step by step, a detailed protocol supervised by veterinary cardiologists for performing echocardiography in the rabbit model, and demonstrate how to correctly obtain the different echocardiographic views and imaging planes, as well as the different imaging modes available in a clinical echocardiography system routinely used in human and veterinary patients.

Here we describe, step by step, a detailed protocol for performing echocardiography in the rabbit model. We show how to correctly obtain the different echocardiographic views and imaging planes, as well as the different imaging modes available in a clinical echocardiography system routinely used in human and veterinary patients.

Tavşan modelinde transtortik ekokardiyografi sınavı

Large animal models such as the rabbit are valuable for translational preclinical research. Rabbits have a similar cardiac electrophysiology compared to ...