Name: murine experimental model of original tumor development and peritoneal metastasis via orthotopic inoculation with ovarian carcinoma cells
Uploaded: 2016-12-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells at JoVE.com

Yazarlar yararlı tartışmalar ve teknik yardım için Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı üyeleri ve Kanser Biyoloji teşekkür ederiz. Bu çalışma Bilim Teşvik (JSPS) için Japan Society tarafından desteklenen Hibe-in-Aid Bilimsel Araştırma (15K15604 H. Kajiyama için).

Tedavi protokolü Nagoya Üniversitesi tarafından kabul edilen hayvan deney için kuralları takip eder. Hücre süspansiyonları hazırlanması 1. <ol><li> İnsan yumurtalık berrak hücreli karsinoma hücre hattı. <ol><li> (100 birim / ml streptomisin: 0.1 mg / ml penisilin),% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve penisilin / streptomisin ile RPMI-1640 ortamı içinde ES-2 hücreleri 12 koruyun. % 5 CO2 nemlendirilmiş inkübatör içinde 37 ° C &#39;de kültür hücreleri. </li><li> % 0.05 tripsin /% 0.02 EDTA çözeltisi (tripsin / EDTA) logaritmik büyüme fazında hücreler toplanır. <ol><li> (- 25 cm 2 başına 4 ml, 2 + Ca 2 + / Mg olmadan PBS 3), sonra bir kez PBS ile yıkama hücreleri, hücre kültürü geminin eski ortamı çıkarın. </li><li> Daha sonra, 25 cm tripsin / EDTA 2 &#39;ye 1 ml. tripsin / EDTA ile hücre mono tabakasının karşılamak için hücre kültür kabı döndürerek. kaldırma ve tripsin / EDTA atıldıktan sonra, hücre dönüş3 inkübatör kültür gemi - hücreleri 5 dakika kadar veya ayrılır. </li><li> Bir mikroskop altında hücreleri incelemek hücreler, hücre kültürü damar ve yüzen yüzeyinden ayrılır sağlamak. </li><li> Tripsin (25 cm2 başına 5 mi) inaktive ve hücrelerin yeniden askıya almak için büyüme ortamı içeren taze serum ekleyin. 15 ml konik tüp yeniden askıya hücreleri aktarın. </li><li> 5 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüjleyin. 4 ° C&#39;de ya da oda sıcaklığında santrifüjleme ya da gerçekleştirir. Dikkatle süpernatant kaldırmak ve (25 cm 2 başına 5 ml) büyüme ortamı ile hücreleri askıya yeniden. </li></ol></li><li> (Tripan mavi eksklüzyonu ile, örneğin,) hücre sayımı, daha sonra 2 x 10 8 hücre / ml bir yoğunlukta büyüme ortamında yeniden askıya. buz üzerinde asılı hücreleri koyun. </li></ol></li><li> Çözülme dondurulmuş hücre dışı matris (ECM) bir buz banyosu içinde hidrojel alikotları tabanlı. </li><li> 1 (nihai hücre c: 1 bir oranda ECM bazlı hidrojel alikotları hücre süspansiyonu ekleyinbağlı yoğunlaşma: 1 x 10 5 hücre / orta-ECM tabanlı hidrojel ul) ve iyice karıştırın. kullanılana kadar bir buz banyosu içinde hazırlanan hücre süspansiyonları yerleştirin. </li></ol> Hücre süspansiyonları, 2. Ortotopik aşılama NOT: özel bir paketi gerektirmez Cerrahi. Cerrahi ayrı ve en az aktiviteye sahip odasının bir bölgesinde bir laboratuar sıra üzerine gerçekleştirilebilir. Bir laminar kapağı da kullanılabilir. Steril cerrahi aletler kullanılmalıdır ve makas cilt kesi yapmak için kullanılmamalıdır. <ol><li> Bu ortotopik aşılama modeli için yaş 8 haftalık dişi çıplak farelerin (BALB / c nu / nu) kullanın. </li><li> (-% 4 2) İlk olarak, izofluran ile inhalasyon kullanarak fare uyutmak. Firma ayak tutam üzerine çekilmesi eksikliği doğrulayarak anestezi derinliğini kontrol edin. Fare uyuşturulduktan sonra, gerekli kurumasını önlemek için gözlere bir mülayim steril oftalmik merhem uygulayın. </li><li> Bir operat üzerinde anestezi fare yerleştirinaşağı sahne göbek tarafı ing. Cerrahi parkı alkol ve iyot bazlı veya klorheksidin bazlı fırçalayın hem birkaç kez dezenfekte edin. </li><li> dikey sağ kaburga kemer ve femur arasında omurga yakınında ~ 2 cm kesi olun. insizyon bölgesinde yaklaşık steril bir cerrahi örtü kullanın. açılış korumak için kelepçeler ile kazıma cilt yüzeyleri düzeltmek. Not: Retraktörler yerine kelepçeler de kullanılabilir. </li><li> Sonraki, karın boşluğu açmak için ilk kesi altında parietal periton ikinci bir kesi (yaklaşık 1 cm) yapmak. çizi karın yüzeyleri kelepçe. Karın boşluğunda yumurtalık kaldırmak için bir kelepçe ile ipsilateral yumurtalık ve fallop tüpü çevreleyen yağ dokusu klibi. Dikkatle gazlı bez yumurtalık ve fallop tüpü yerleştirin. Sonra, mikroskop altında fare göbek tarafı aşağıya bakacak şekilde yerleştirin. </li><li> hemen enjeksiyon öncesi (1/2 cc 29 G) bir insülin şırınga hücre süspansiyonu yerleştirin. Özenle hazırlanmış hücre süspansiyonu (enjekte 1- Yumurtalık içine 2 ul). Birkaç saniye için ECM bazlı hidrojel jelleşmesini sağlamak için yumurtalık içinde iğnesinin tespit edilmesi. jelleşme sonra, enjekte edilen tümör hücreleri, yumurtalığın içinde kalır. </li><li> Dikkatle vücuda yumurtalık döner. steril tıbbi ipek ile ikinci kesi dikin ve sonra yara klipleri ile cilt mühür. </li><li> Cerrahiden sonra, farenin, ilk 24 saatlik bir süre için bir analjezik (örn, meloksikam, kas içinden (İM) ya da deri altından (sc), 0.2 mg / kg) uygulanır. </li></ol> 3. Post-cerrahi tedavisi <ol><li> sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar fare sıcak tutmak için sıcak bir paketi ile temiz kağıt üzerinde ayrı bir kafes içinde her fare yerleştirin. Sonra, yetiştirilmesi ve izlenmesi için kafeslerine hayvanları dönün. Cerrahi tedavi sonrası 7 gün - 3 günlük fareler izleyin. </li><li> Ameliyat sonrası farelerin izlenmesi <ol><li> ağrı belirtileri durumunda, analge idareSICS günlük olarak (örneğin, meloksikam, İM, veya SC, 0.2 mg / kg). </li><li> Fareler enfeksiyon (örneğin, kızarıklık, şişlik, akıntı) belirtileri varsa, bir anti-enfektif reaktif (örn, penisilin, im, 100.000 IU / kg) ile günlük enjeksiyon yönetmek. </li></ol></li><li> ameliyat sonrası tedavi sonrası 14 gün - cilt kapatma malzemelerdir 10 çıkarın. </li></ol> Tümörlerin ve Metastazlarının 4. Analizi NOT: Tümör enjekte over 2 oluşacaktır - aşılamadan sonra 3 hafta. <ol><li> Karbon dioksit fareler kurban, ve daha sonra analiz için numune 14,16-20 (örneğin, tümörler, metastazlar, organları) 13-15 toplar. Not: bir in vivo görüntüleme sistemi, mevcut ise ışıldaması (örneğin, lusiferaz) ya da floresan proteini (örneğin GFP) üretimi enzimler taşıyan hücrelerin Bu protokol kullanılabilir. Bu modifiye protokol için yararlı bilgiler sağlayacaktırprimer tümörden kanser hücrelerinin yayılmasını dinamiği. </li></ol>

<ol>
	<li>Jemal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics.">Global cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 61 (2), 69-90 (2011).</li><li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+clinical+outcome+of+patients+with+recurrent+epithelial+ovarian+carcinoma:+is+it+the+same+for+each+histological+type.">Long-term clinical outcome of patients with recurrent epithelial ovarian carcinoma: is it the same for each histological type.</a> Int J Gynecol Cancer. 22 (3), 394-399 (2012).</li><li>Kikkawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+treatment+of+epithelial+ovarian+cancer.">Advances in treatment of epithelial ovarian cancer.</a> Nagoya J Med Sci. 68 (1-2), 19-26 (2006).</li><li>Yoshikawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinicopathologic+features+of+epithelial+ovarian+carcinoma+in+younger+vs.+older+patients:+analysis+in+Japanese+women.">Clinicopathologic features of epithelial ovarian carcinoma in younger vs. older patients: analysis in Japanese women.</a> J Gynecol Oncol. 25 (2), 118-123 (2014).</li><li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+SDF-1alpha/CXCR4+axis+in+the+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma.">Involvement of SDF-1alpha/CXCR4 axis in the enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Int J Cancer. 122 (1), 91-99 (2008).</li><li>Terauchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Possible+involvement+of+TWIST+in+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma.">Possible involvement of TWIST in enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Clin Exp Metastasis. 24 (5), 329-339 (2007).</li><li>Bronstein, L., Zechner, C., Koeppl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bayesian+inference+of+reaction+kinetics+from+single-cell+recordings+across+a+heterogeneous+cell+population.">Bayesian inference of reaction kinetics from single-cell recordings across a heterogeneous cell population.</a> Methods. 85, 22-35 (2015).</li><li>Guo, W., Zhang, S., Liu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+novel+orthotopic+model+of+breast+cancer+metastasis+to+the+lung.">Establishment of a novel orthotopic model of breast cancer metastasis to the lung.</a> Oncol Rep. 33 (6), 2992-2998 (2015).</li><li>Lewis-Tuffin, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Src+family+kinases+differentially+influence+glioma+growth+and+motility.">Src family kinases differentially influence glioma growth and motility.</a> Mol Oncol. , (2015).</li><li>Saar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+tumorgrafts+in+nude+mice:+A+new+method+to+study+human+prostate+cancer.">Orthotopic tumorgrafts in nude mice: A new method to study human prostate cancer.</a> Prostate. 75 (14), 1526-1537 (2015).</li><li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-29c+suppresses+pancreatic+cancer+liver+metastasis+in+an+orthotopic+implantation+model+in+nude+mice+and+affects+survival+in+pancreatic+cancer+patients.">miR-29c suppresses pancreatic cancer liver metastasis in an orthotopic implantation model in nude mice and affects survival in pancreatic cancer patients.</a> Carcinogenesis. 36 (6), 676-684 (2015).</li><li>Lau, D. H., Lewis, A. D., Ehsan, M. N., Sikic, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifactorial+mechanisms+associated+with+broad+cross-resistance+of+ovarian+carcinoma+cells+selected+by+cyanomorpholino+doxorubicin.">Multifactorial mechanisms associated with broad cross-resistance of ovarian carcinoma cells selected by cyanomorpholino doxorubicin.</a> Cancer Res. 51 (19), 5181-5187 (1991).</li><li>Bao, L., Matsumura, Y., Baban, D., Sun, Y., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inoculation+site+and+Matrigel+on+growth+and+metastasis+of+human+breast+cancer+cells.">Effects of inoculation site and Matrigel on growth and metastasis of human breast cancer cells.</a> Br J Cancer. 70 (2), 228-232 (1994).</li><li>Huang, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiological+investigation+on+major+depressive+disorder+in+the+most+heavily+damaged+areas+from+Wenchuan+earthquake+in+2008.">Epidemiological investigation on major depressive disorder in the most heavily damaged areas from Wenchuan earthquake in 2008.</a> Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 31 (2), 167-170 (2010).</li><li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+of+neonatal+respiratory+failure+related+to+socioeconomic+factors+in+Hebei+province+of+China.">Mortality of neonatal respiratory failure related to socioeconomic factors in Hebei province of China.</a> Neonatology. 100 (1), 14-22 (2011).</li><li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+levels+of+FGF-21+are+increased+in+coronary+heart+disease+patients+and+are+independently+associated+with+adverse+lipid+profile.">Serum levels of FGF-21 are increased in coronary heart disease patients and are independently associated with adverse lipid profile.</a> PLoS One. 5 (12), e15534 (2010).</li><li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumbar+interspinous+non-fusion+techniques:+comparison+between+Coflex+and+Wallis.">Lumbar interspinous non-fusion techniques: comparison between Coflex and Wallis.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 30 (11), 2455-2458 (2010).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wave+intensity+analysis+of+carotid+artery:+a+noninvasive+technique+for+assessing+hemodynamic+changes+of+hyperthyroid+patients.">Wave intensity analysis of carotid artery: a noninvasive technique for assessing hemodynamic changes of hyperthyroid patients.</a> J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 30 (5), 672-677 (2010).</li><li>Song, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+transcriptional+profiling+and+preliminary+study+on+heterosis+mechanism+of+super-hybrid+rice.">Comparative transcriptional profiling and preliminary study on heterosis mechanism of super-hybrid rice.</a> Mol Plant. 3 (6), 1012-1025 (2010).</li><li>Wan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+analysis+of+variation+of+Han+female+adolescent+bone+development+in+Henan+and+Zhejiang+province.">The analysis of variation of Han female adolescent bone development in Henan and Zhejiang province.</a> Fa Yi Xue Za Zhi. 26 (2), 97-99 (2010).</li><li>Wang, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation-emission+fluorescence+characterization+study+of+the+three+phenolic+compounds.">Excitation-emission fluorescence characterization study of the three phenolic compounds.</a> Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi. 30 (5), 1271-1274 (2010).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Hayvan modelleri, kanser hücrelerine karşı tümör gelişimi, ilerlemesi, metastaz ve ilaç etkinliğinin mekanizmalarını analiz için esastır. insan yumurtalık kanseri hücreleri olan farelere, aynı zamanda bir hayvan modeli olarak kullanılmıştır. Burada, ortotopik yerinde yumurtalık tümörü hücre uygulama için daha az invaziv bir prosedür açıklanmaktadır. dorsal zayıf bir retroperitoneal yaklaşımla yumurtalık içine bu prosedür, aşılama kullanan diğer sık ​​kullanılan tekniklere gör...

Epitelyal over kanseri (EOC) jinekolojik maligniteler 1 arasında kansere bağlı ölüm oranı en yüksek oluşturmaktadır. EOC öncelikle nedeniyle geç semptomatoloji, kötü prognoz ile ilişkilidir ve genellikle birden çok intraperitoneal saçınımlı ve uzak metastaz 2-4 ile ilişkilidir. Periton yaygınlaştırma çok adımlı bir işlemdir. İlk olarak, tümör hücrelerinin birincil lezyonlarla ayırmak ve karın boşluğuna göç ederler. Tümör hücrelerinin periton mesothelium eklemek, onlar Mesothelium 5,6 ile dokuları işgal etmeye başlar. Daha iyi tümör biyolojisi (örneğin, kanser ilerleme ve terapötik yanıt) anlamak için, fare modelleri bilgi hazinesi sağlar. İnsan kanser hücreleri bir ksenograft yaygın insan kanser hücreleri, intraperitonal, intravenöz ve ortotopikal, deri altından aşılanır olan fare modellerinde kullanılmaktadır. Bir orthotopically g bir hayvan modelirafted tümör daha verimli ve doğru bir şekilde heterotopically aşılanmış tümörlü bir hayvan modeli ile karşılaştırıldığında insanlarda tümör ortamı yansıtan sonuçlar üretebilir. Bu nedenle, birçok insan tümörleri için, ortotopik transplantasyon modelleri 7-11 kurulmuştur. Burada, ventral aşılamadan oranla invazivliğini sınırlı dorsal kanadını, bir retroperitoneal yaklaşımla insan EOC hücrelerinin ortotopik aşılama açıklar. Bu teknik EOC yararlı bilgiler, periton yayılması özellikle mekanizmasının çeşitli sağlayabilir.

<table><tbody><tr><td>Matrigel matrix&amp;nbsp;</td><td>BD</td><td>354234</td><td>ECM-based hydrogel</td></tr><tr><td>Insulin syringe</td><td>TERUMO</td><td>SS-05M2913</td><td>1/2 cc, 29 G x 1/2&quot;</td></tr><tr><td>Suturing needle with suture</td><td></td><td></td><td>11 mm, 3/8, Nylon6-0</td></tr><tr><td>Reflex 7 mm Wound Clip Applier</td><td>CellPoint Scientific</td><td>204-1000</td><td></td></tr><tr><td>&amp;nbsp;Reflex 7 mm wound clips</td><td>CellPoint Scientific</td><td>203-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

murine experimental model of original tumor development and peritoneal metastasis via orthotopic inoculation with ovarian carcinoma cells

o periton yayılmasını gösterir çünkü Epitelyal over kanseri (EOC) kötü prognoz ile ilişkilidir. prognozu iyileştirmek için, periton yayılmasını kontrol etmek önemlidir. Tümör hücreleri primer lezyonlardan ayırmak ve mesothelium eklemek nasıl Ancak, hala belirsizdir. Uygun bir hayvan modelinin kurulması in vivo periton yayılım mekanizmasının bir anlayış kazanmak için gereklidir. Bu çalışmada, biz periton ve uzak organlara da dahil olmak üzere metastaz gelişimine fare yumurtalık yüzeyine EOC hücrelerinin lokal enjeksiyon işlemi tanıtmak. yaş 8 haftalık dişi çıplak fareler (BALB / c nu / nu) kullanılmıştır. Bir görüş mikroskobik alan altında, EOC hücreleri dorsal zayıf bir retroperitoneal yaklaşımla fare yumurtalıkların enjekte edildi (orta-ekstrasellüler matriks (ECM) 1 x 10 5 hücre / ul hidrojel / tek taraflı yumurtalık / fare tabanlı). Önerilen bu yöntem le olanfare için ss invaziv prosedür ve yumurtalık zarar en aza indirir. Burada, EOC özgün ve metastatik tümör oluşumu gelişiminde metodolojik adımları açıklar.

<html> Altı çıplak fareler bu protokol açıklandığı gibi onların yumurtalıklar, insan berrak hücreli karsinom hücre hattı ES-2 ile aşılanmış vardı. Şekil 1A&#39;da gösterildiği gibi, 2 hafta sonra, 6 farelerinin 5 ES-2 hücreleri ile aşılandı yumurtalık tümör vardı, ama (bir kontrol olarak kullanılmıştır) aşılaması olmayan karşı yumurtalık tümör yoktu. Bunun yanında, 5 farelerin 2 asit ile birden periton disseminations göstermişti...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells at JoVE.com

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

over kanseri periton yayılması çok adımlı süreci açıklamak için, mevcut çalışma bu tümör hücreleri ile ortotopik aşılamadan yoluyla orijinal tümör gelişimi ve periton metastazı bir fare deneysel modeli sunar.

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

murine-experimental-model-original-tumor-development-peritoneal

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

10.4K Görüntüleme.  Bell Research Center for Reproductive Health and Cancer.  over kanseri periton yayılması çok adımlı süreci açıklamak için, mevcut çalışma bu tümör hücreleri ile ortotopik aşılamadan yoluyla orijinal tümör gelişimi ve periton metastazı bir fare deneysel modeli sunar. 

Video: Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

An Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer using Human Stroma to Promote Metastasis

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant transgenic mouse models of ovarian cancer exist, these mice are expensive and take a long time to develop tumors. Intraperitoneal injection xenograft models lack human stroma and do not accurately model ovarian cancer metastasis. Even patient derived xenografts (PDX) do not fully recapitulate the human stromal microenvironment as serial PDX passages demonstrate significant loss of human stroma. The ability to easily model human ovarian cancer within a physiologically relevant stromal microenvironment is an unmet need. Here, the protocol presents an orthotopic ovarian cancer mouse model using human ovarian cancer cells combined with patient-derived carcinoma-associated mesenchymal stem cells (CA-MSCs). CA-MSCs are stromal progenitor cells, which drive the formation of the stromal microenvironment and support ovarian cancer growth and metastasis. This model develops early and diffuses metastasis mimicking clinical presentation. In this model, luciferase expressing ovarian cancer cells are mixed in a 1:1 ratio with CA-MSCs and injected into the ovarian bursa of NSG mice. Tumor growth and metastasis are followed serially over time using bioluminescence imaging. The resulting tumors grow aggressively and form abdominal metastases by 14 days post injection. Mice experienced significant decreases in body weight as a marker of systemic illness and increased disease burden. By day 30 post injection, mice met endpoint criteria of &gt;10% body weight loss and necropsy confirmed intra-abdominal metastasis in 100% of mice and 60%-80% lung and parenchymal liver metastasis. Collectively, orthotopic engraftment of ovarian cancer cells and stroma cells generates tumors that closely mimic the early and diffuse metastatic behavior of human ovarian cancer. Furthermore, this model provides a tool to study the role of ovarian cancer cell: stroma cell interactions in metastatic progression.

Orthotopic engraftment of ovarian cancer cells mixed with human stromal cells provides a mouse model that exhibits rapid, diffuse metastatic behavior that is characteristic of human ovarian cancer. This model also allows for the study of tumor cell and stromal cell interactions, as well as their role in tumor progression and metastasis.

Ovarian cancer is characterized by early, diffuse metastasis with 70% of women having metastatic disease at the time of diagnosis. While elegant ...

Kanser Araştırmaları

Intratibial Osteosarcoma Cell Injection to Generate Orthotopic Osteosarcoma and Lung Metastasis Mouse Models

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival rate of osteosarcoma patients with pulmonary metastasis is less than 30%.Therefore, the utilization of mouse models mimicking the osteosarcoma development in humans is of great significance for understanding the fundamental mechanism of osteosarcoma carcinogenesis and pulmonary metastasis to develop novel therapeutics. Here, detailed procedures are reported to generate the primary osteosarcoma and pulmonary metastasis mouse models via&#160;intratibia injection of osteosarcoma cells. Combined with the bioluminescence or X-ray live imaging system, these living mouse models are utilized to monitor and quantify osteosarcoma growth and metastasis. To establish this model, a basement membrane matrix containing osteosarcoma cells was loaded in a micro-volume syringe and injected into one tibia of each athymic mouse after being anesthetized. The mice were sacrificed when the primary osteosarcoma reached the size limitation in the IACUC-approved protocol. The legs bearing osteosarcoma and the lungs with metastasis lesions were separated. These models are characterized by a short incubation period, rapid growth, severe lesions, and sensitivity in monitoring the development of primary and pulmonary metastatic lesions. Therefore, these are ideal models for exploring the functions and mechanisms of specific factors in osteosarcoma carcinogenesis and pulmonary metastasis, the tumor microenvironment, and evaluating the therapeutic efficacy in vivo.

The present protocol describes intratibia osteosarcoma cell injection to generate mouse models bearing orthotopic osteosarcoma and pulmonary metastasis lesions.

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of care consisting of surgical debulking and combination chemotherapy consisting of platinum and taxane compounds, almost 90% of patients recur within a few years. In these patients the development of chemoresistant disease limits the efficacy of currently available chemotherapy agents and therefore contributes to the high mortality. To discover novel therapy options that can target recurrent disease, appropriate animal models that closely mimic the clinical profile of patients with recurrent ovarian cancer are required. The challenge in monitoring intra-peritoneal (i.p.) disease limits the use of i.p. models and thus most xenografts are established subcutaneously. We have developed a sensitive optical imaging platform that allows the detection and anatomical location of i.p. tumor mass. The platform includes the use of optical reporters that extend from the visible light range to near infrared, which in combination with 2-dimensional X-ray co-registration can provide anatomical location of molecular signals. Detection is significantly improved by the use of a rotation system that drives the animal to multiple angular positions for 360 degree imaging, allowing the identification of tumors that are not visible in single orientation. This platform provides a unique model to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention or treatment of recurrent ovarian cancer.

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Tıp

Over Kanseri-Omentum Etkileşimi için 3 Boyutlu Ex Vivo Model Oluşturulması

An Ex Vivo Model of Ovarian Cancer Peritoneal Metastasis Using Human Omentum

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian cancer cells as well as immune modulatory signals that allow tumor tolerance. However, we have limited models that closely mimic the interaction between ovarian cancer cells and adipose-rich tissues. To further understand the cellular and molecular mechanisms by which the omentum provides a pro-tumoral microenvironment, we developed a unique 3D ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. Using human omentum, we are able to grow ovarian cancer cells within this adipose-rich microenvironment and monitor the factors responsible for tumor growth and immune regulation. In addition to providing a platform for the study of this adipose-rich tumor microenvironment, the model provides an excellent platform for the development and evaluation of novel therapeutic approaches to target metastatic cancer cells in this niche. The proposed model is easy to generate, inexpensive, and applicable to translational investigations.

Yazar Spotlight: Kanser-Adipoz Mikroçevre Etkileşimini Araştırmak için Gelişmiş Ex Vivo Model 

This protocol describes the establishment of a three-dimensional (3D) ex vivo model of cancer cell-omentum interaction. The model provides a platform for elucidating pro-tumor mechanisms within the adipose niche and for testing novel therapies.

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

Ovarian cancer is the deadliest gynecologic malignancy. The omentum plays a key role in providing a supportive microenvironment to metastatic ovarian ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Biyoloji

Quantitation of Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metastasis

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States. Mortality is due to diagnosis of 75% of women with late stage disease, when metastasis is already present. EOC is characterized by diffuse and widely disseminated intra-peritoneal metastasis. Cells shed from the primary tumor anchor in the mesothelium that lines the peritoneal cavity as well as in the omentum, resulting in multi-focal metastasis, often in the presence of peritoneal ascites. Efforts in our laboratory are directed at a more detailed understanding of factors that regulate EOC metastatic success. However, quantifying metastatic tumor burden represents a significant technical challenge due to the large number, small size and broad distribution of lesions throughout the peritoneum. Herein we describe a method for analysis of EOC metastasis using cells labeled with red fluorescent protein (RFP) coupled with in vivo multispectral imaging. Following intra-peritoneal injection of RFP-labelled tumor cells, mice are imaged weekly until time of sacrifice. At this time, the peritoneal cavity is surgically exposed and organs are imaged in situ. Dissected organs are then placed on a labeled transparent template and imaged ex vivo. Removal of tissue auto-fluorescence during image processing using multispectral unmixing enables accurate quantitation of relative tumor burden. This method has utility in a variety of applications including therapeutic studies to evaluate compounds that may inhibit metastasis and thereby improve overall survival.

Ovarian cancer metastasis is characterized by numerous diffuse intra-peritoneal lesions, such that accurate visual quantitation of tumor burden is challenging. Herein we describe a method for in situ and ex vivo quantitation of metastatic tumor burden using red fluorescent protein (RFP)-labeled tumor cells and optical imaging.

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu

Epithelial ovarian cancer (EOC) is the leading cause of death from gynecologic malignancy in the United States.  Mortality is due to diagnosis of 75% of ...

Intraperitoneal Injection of Cells: A Method of Delivering Cancer Cells into the Peritoneal Adipose Tissue of Murine Model

Source: Krishnan, V. et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/t/52721">Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose.</a> J. Vis. Exp. (2015)
In this video, we perform an intraperitoneal injection of ovarian cancer cell suspension in a mouse model to study the colonization of ovarian cancer cells in peritoneal adipose tissues and their subsequent metastasis.&#160;

Hücrelerin İntraperitoneal Enjeksiyonu: Murin Modelinin Peritoneal Yağ Dokusuna Kanser Hücrelerinin Verilmesi İçin Bir Yöntem

Source: Krishnan, V. et al. Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose. J. Vis. Exp. 
...

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo Tümör Görüntüleme ve İzleme

An Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer using Human Stroma to Promote Metastasis

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

İçi periton Yumurtalık Kanseri Metastaz kantitasyonu

Hücrelerin İntraperitoneal Enjeksiyonu: Murin Modelinin Peritoneal Yağ Dokusuna Kanser Hücrelerinin Verilmesi İçin Bir Yöntem