The work was supported in part by funding from Alberta Livestock and Meat Agency and Natural Science and Research Council Discovery grant to S. D. Proctor.

video ve yazıda hem anlatılan deney hayvanlarında Tüm işlemler Hayvan Bakım Kanada Konseyi tarafından belirlenen kurallar Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış ve takip edildi. 1. Cerrahi Anestezi ve Neonatal Domuzlar Cerrahi Hazırlık <ol><li> azaperone (0.3 mg / kg) ketamin hidroklorür (10 mg / kg), deksmedetomidin (15 ug / kg), bir ayrı Hol olarak, 25 kg ihtiva eden bir kas içi sedatif anestetik madde kokteyli ile boyun tabanına yakın domuz premedikasyon. Not: Geliştirilmiş intra-operatif ağrı kontrolü için önceden anestezik ilaç kokteyli buprenorfin (0,005-,02 mg / kg) ekleyin. </li><li> Bir yüz maskesi kullanılarak (500 ml-1000 ml / dk O 2 4-5 izofluran%) solunan izofluran inhalasyon gaz ile domuz uyutmak. Bir veteriner laringeal kapsamı (17-25 cm uzunluğunda düz bıçak) kullanarak ses telleri görselleştirmek ve vokal topikal% 10 lidokain spray uygulamakkordonlar. lidokain sprey vokal kord spazm ve havayolu tıkanıklığına olasılığını azaltmak için entübasyon 30-60 sn önce ses telleri temas etmesine izin. </li><li> Izofluran gaz ile anestezi ses tellerinin arasından bir kelepçeli endotrakeal tüpün (5,0-7,0 mm İç Çap (ID)) geçerek domuz entübe ve bakımını (/ 1,000-2,000 ml 0.5-2.0 izofluran% min O 2) ile bir kapalı ameliyat boyunca anestezi sistemi yeniden soluk devresi. çene sesi ile anestezi düzeyi ve hem pedal ve palpebral refleks tepkilerini nasıl değerlendiriyorsunuz. Süresi Doldu anestezik gaz uzaklaştırılmış ve cerrahi paketi dışında havalandırılır. </li><li> % 70 izopropil alkol durulama ardından% 2.0 klorheksidin cerrahi fırçalama çözeltisi ile kulağın dış yüzeyini temizleyin. Ameliyat sırasında, bir 20 G kateter intravenöz ile intravenöz sıvı (5-10 ml / kg / saat laktatlı Ringer çözeltisi) temin etmek üzere bir kulak daman kateter. Med dil mukozal yüzeyine bir pals oksimetresi elde edinical bant kalp hızı ve periferik kan oksijenlenme doygunluk (SpO2) izlemek için. </li><li> dorsal sırt üstü yatar pozisyonda anestezi domuz yerleştirin ve pubis ventral orta toraks kaudal ventral karın tıraş. İki% 2.0 Klorheksidin cerrahi önlük ve steril su yıkar alternatif bu bölgeyi temizleyin. </li><li> Cerrahi paketine anestezi domuz aktarın ve% 70 izopropil alkol durulama nihai cerrahi fırçalayın uygulamak, bu kurumasını bekleyin ve sonra hayvan asmak. </li><li> vücut ısısını izlemek için rektum içine bir rektal sıcaklık probu yaklaşık 2-4 cm yerleştirin. cerrahi işlem sırasında normal vücut sıcaklığına (38-40 ° C) muhafaza edilmesi için bir su sirkülasyon ısıtma pedi üzerinde domuz yerleştirin. </li><li> karın çevresinde örten kadran desen yerleştirilir dört havlu perdeler ile domuz örtün. karın yaklaşık 5 c lateral boyunca, xiphisternum karşısında ikinci asmak ilk örtüyü yerleştirinKarın orta hat m yanal. (Karşı tarafta olmasına rağmen), yaklaşık 5 cm karın orta hatta yanal karın lateral boyunca yerleştirilir ikinci perde gibi, pelvis ileal kret ve dördüncü drape genelinde üçüncü asmak yerleştirin. </li><li> altta yatan havlu perdeler üzerinde cerrahi sitesine erişim sağlayan bir yarık açılması ile, büyük bir tablo asmak yerleştirin ve domuz ve tüm cerrahi tabloyu kapsamaktadır. Nihai asmak büyük masa asmak üzerine yerleştirilen tek kullanımlık bir steri-drape olduğunu. </li></ol> Bağırsak Lenfatik Trunk 2. Abdominal Cerrahi ve Kateterizasyon <ol><li> Altta yatan karın kasları ortaya çıkarmak için bir neşter bıçağı ile 20 cm&#39;lik cilt kesi olun. parietal periton maruz mono-polar elektrokoter (20 Watt ayarı) ile karın kas katmanları İnsizyon. Karın iç organları ve lenfatik damar erişmek için Metzenbaum makas ile parietal periton bir 20 cm doğrusal segmenti açın. </li><li&gt; Ameliyat süresince açık karın boşluğuna tutmak için cerrahi kesi kafatası yönü de retractor yerleştirin. </li><li> tüm cerrahi işlem için sıcak (37 ° C) steril serum fizyolojik ile tüm dokuların nemlendirin. Yavaşça karın boşluğuna gelen kolon, çekum, ileum ve jejunum da dahil olmak üzere bağırsak büyük bir kesimi kaldırın ve üst karın, karaciğer ve lenf damarı erişmek için domuz soldan onu exteriorize. yavaşça bağırsak desteklemek için bir askı oluşturmak için ek havlu perdeler ile pozisyonunda batın bağırsak sabitleyin. </li><li> Lenfatik damar bulun, yaklaşık 4 cm sağ renal ven, 6 cm kuyruk-medial kaval ustabaşı ventral ve pankreas 22,36,37 yakın karaciğer sağ lobunda visseral yönü altında kranial-medial bırakır. Portal ven 36,37 sağ ventral kesimine bitişik bir saydam bir yapı olarak lenfatik damar belirlemek. </li><li> lenfatik vess ayırınEl nazikçe Q-tip uygulayıcılar ile bağlı doku uzak alay ile çevredeki fasya gelen. kabın yan taraflarından çevreleyen dokudan ayrılır sonra, ince bir küt uçlu forseps teknenin altında bir &quot;tüneli&quot; açıklığı oluşturur. </li><li> ince forseps ile lenfatik altında üç 2-0 ipek sütür geçirin. , Tıkamak dilate ve lenf ile gemi doldurmak için ilk olarak en kaudal dikiş Arter. Kasıtlı lenfatik kateteri sabitlemek için nispeten uzun bu sütür (4 cm) uçlarını bırakın. diğer iki dikiş birbirinden 1,0 cm ayrılmış ve güvenli kaudal sütür kranial 1.0-1.5 cm yaklaşık olarak yerleştirin. damar içine kateter hızlı emniyete için izin vermek için bir &#39;tek gevşek bağ kravat&#39; bu iki sütür bırakın. Not: En kaudal lige sütür ve (iki kafatası sütür) orta sütür arasında bulunan lenfatik segment kateterizasyon için sitedir. SU ile ilgiliGerekirse Ture malzemesi, 2-0 polyglactin sütür 2-0 ipek dikişlerle yerine geçebilir. </li><li> iris makas ile damar içine küçük bir delik kesin ve ince künt forseps ile gemi dilate. kabına bir eğimli ucu ile özel kateter tüp (4.06 Dış Çap (OD) x 2.31 mm ID) yaklaşık 1.0-1.5 cm yerleştirin ve yerine kateteri sabitlemek için iki kranial sütürler kravat. Geminin kateteri sabitlemek için kaudal dikiş uzun dikiş uçlarını kullanın. </li><li> ılık serum fizyolojik ile bol miktarda batın bağırsak yıkayın ve yavaşça bağırsak doğru anatomik konumlandırılmasını sağlayan karın boşluğuna geri getirin. </li><li> (Paralumbar fossa 5-10 cm ventral) Sol orta kanadında kateter exteriorize. bir neşter ile bir cilt kesi yapmak ve kateterin eksteriorizasyon için bir açıklık oluşturmak için deri yüzeyine karın boşluğuna bir Noktalayıcıyı geçmektedir. Karın cav kateteri exteriorize büyük Kelly forseps kullanabilirtrokar deliğinden Sığ. </li><li> yuvarlak (konik) iğne ile 2-0 polyglactin dikiş basit sürekli dikiş deseni ile parietal periton kapatın. yuvarlak iğne 2-0 polyglactin sütür ile basit bir kesintiye dikiş deseni ile karın kas katmanları kapatın. </li><li> Bir kesim iğne 2-0 polyglactin sütür ile bir subkütiküler desen cilt kapatın. Bir çanta-string dikiş deseni ile deri ve kesme iğne 2-0 naylon sütür ile batın kateter sabitleyin. </li><li> hala yerleştirme kolaylığı ve kurtarma sırasında domuz stresi azaltmak için anestezi sırasında domuz üzerinde uzmanlaşmış bir ceket yerleştirin. </li></ol> 3. Post-cerrahi Kurtarma ve Lenf Koleksiyonu <ol><li> önce inhalasyon anestezi kesilmesi yaklaşık 10 dakika, hemen cerrahi sonrası analjezi sağlamak için kas içi bupenorphine (0.1 mg / kg) yönetmek. bupenorphine devam (0.1 mg / kg) 24-48 saat koruması için her 12 saatameliyat sonrası analjezi. </li><li> ameliyat sonrası komplikasyonlar için 7 gün boyunca her 8-12 saat domuz izleyin. </li><li> etilendiamin tetraasetik asit (EDTA) ile kaplanmış ve antibiyotikler ile takviye edilmiş 500 ml polipropilen yıkama şişeleri lenf, toplamak; penisilin (6000 IU), streptomisin (6 mg) ve amfoterisin B (3 mg), 7 günlük bir süre boyunca her 12 saat süredir. </li></ol> Lipoprotein ApoB48, Trigliserid, Kolesterol ve toplam Protein 4. Niceleme Lenf Toplanan <ol><li> 4 ° C&#39;de 5 dakika boyunca 1800 x g&#39;de lenf santrifüjleyin. Süpernatant toplayın ve trigliserid, kolesterol ve toplam proteinin miktar tayini için kullanın. </li><li> seyreltilmemiş bir numunesidir, örnek bir 1:20 seyreltilmiş damıtılmış su ve 1 seyreltilmiş bir son örneği: damıtılmış su ile 100, üç numune halinde süpernatant bölün. </li><li> Bir ticari olarak temin edilebilir kit ile, kolesterol seviyelerini ölçmek için seyreltilmemiş süpernatant kullanın. </li><li> 1:20 ve 1:10 kullanarak0 seyreltilmiş numuneler ticari olarak temin edilebilir kit sırasıyla bisinkoninik asit toplam protein tahlili ile, trigliserid ve toplam protein düzeylerini ölçmek için. </li></ol> Lenf 38 Toplanan Lipoprotein ApoB48 5. miktarının belirlenmesi, <ol><li> Uyarlanmış bağışıklık Western Blot yöntemiyle 38 ile lipoprotein ApoB48 konsantrasyonunu belirleyin. % 3-8 tris-asetat- sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile ayırın toplam lenf. </li><li> bir anti-keçi sekonder antikor ile birleştirmiş, sonra: Bir polivinil florür membran (0,45 mikron) ayrılmış proteinler aktarın ve ApoB (4.000 1) bir keçi poliklonal antikor ile kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> saflaştırılmış kemirgen ApoB48 protein standardı ile doğrusal dansitometrik karşılaştırma kullanılarak kemilüminesans ile lipoprotein ApoB48 niceliğini. </li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bağırsak lenf Toplama çeşitli deneysel hayvan modellerinde lipid 8-12 ve ilaç 13-15 metabolizması, kanser metastazı 16,17, hücre kaçakçılığı ve bağışıklık fonksiyonu 18-26 katılan mekanizmaları araştırmak için mükemmel bir yöntemdir. Nitekim, uzun bir süre boyunca ya periferik (afferent) ve merkezi (efferent ve büyük gövde damarlar) lenf büyük miktarlarda hasat yeteneği immün modülasyon ajanları 18-22 ile zorluklar aşağıdaki h?...

Lenf sistemi fizyolojisi ilgili yeterli bir alandır. Lenfatik kateterizasyon Klinik öncesi modeller farklı hayvan türleri 1-8 oluşur ve lipid 8-12 ve ilaç metabolizması 13-15, deneysel tedavi 17 kanser metastazı 16 katılan mekanizmaların araştırılması ilaç sanayi ve araştırma kurumları tarafından kullanılan ve bağışıklık fonksiyonu 18 -26. Bu çalışma, lipoprotein metabolizma bileşenlerini ölçmek için bir iç domuz modelinde bağırsak lenf gövde kateterizasyon kullanımını araştırıyor. Lipoprotein metabolizması üretimi ve salgılanması şilomikronlar bölgesinin ve ilişkili lipid ve toplam proteinin değişiklikler yer almaktadır. Yaygın olarak kullanılan kemirgen modellerinde ve insanlar arasında ve gibi lipid metabolizmasında önemli farklılıklar vardır Bunlar beni lipid incelemek için daha karşılaştırılabilir bilgiler verebilir bağırsak lenf toplamak için domuz modelleri kullanılarak, önemli hususlar vardırinsanlar 27-31 yılında tabolism. Çeşitli cerrahi teknikler büyük hayvan türlerinde bağırsak lenf toplamak için kullanılır: kranial omuz yaklaşımı (yani, göğüs kanal kateterizasyon) 5, lateral üst kanadını yaklaşımı 32-34 ve ventral orta hat veya paramediyan yaklaşım 22,35. Bu video ayrıntılı olarak bağırsak lenf gövde kateterizasyon için ventral orta hat cerrahi yaklaşım kullanılarak domuzlarda cerrahi prosedürü tanımlamaktadır. Dikkatli cerrahi teknik izin lenfatik kateterizasyon bu yöntem, uzun zaman süreleri boyunca büyük lenf miktarlarda ve kendisine hedef toplamak için. Bu teknik, çeşitli fizyolojik fonksiyonları inceleyerek birçok disiplinlerle uygulamalar sayısız açar. Uygulamalar içerir, ancak tüm vücut lipoprotein ve lipid metabolizması, immüno-tümör oluşumu ve metastaz, bağırsak fonksiyonu ve developm, bunlarla sınırlı değildirent ve bağırsak inflamatuvar hastalığın ilerlemesi.

<table><tbody><tr><td>Miller laryngoscope blade</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm length</td></tr><tr><td>Surgivet advisor: Vital signs monitor</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Rectal temperature probe</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Mono-polar electrosurgery generator</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum scissors</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Tuffier retractor</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly forceps-curved (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Allis tissue forceps</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-eye (10.2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Forceps dressing-Adison (12.1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Needle Drivers</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Circulating water pump</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip applicators</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Catheterization&amp;nbsp; tubing (4.06 OD X 2.31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Micro-Renethane implantation tubing</td></tr><tr><td>2-0 silk suture</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Large animal jacket</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene wash bottles</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Amphotericin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Animal Health</td><td></td><td>Stresnil</td></tr><tr><td>Dexmedetomidine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Animal&amp;nbsp; Health</td><td>05260-5</td><td>IsoFlo</td></tr><tr><td>Ketamine hydrochloride</td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Bupenorphine hydrochloride</td><td>Champion Alstoe Animal Health</td><td></td><td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Endotracheal tube</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Lidocaine spray</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4 % Chlorhexidine surgical scrub</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluted: 2.0% solution</td></tr><tr><td>3M Surgical steri- drape</td><td>3M Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8 % tris acetate</td></tr><tr><td>Polyvinylidene fluoride membrane</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0.45 &amp;mu;m pore size</td></tr><tr><td>ApoB antibody&amp;nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>1:4000 dilution</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting Reagent</td><td>GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Triglyceride Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Total Cholesterol Kit</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Total Protein</td><td>&amp;nbsp;Pierce&amp;nbsp;</td><td>23225</td><td>Bicinchoninic Acid Assay</td></tr></tbody></table>

long-term catheterization of the intestinal lymph trunk and collection of lymph in neonatal pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

<html> Yenidoğan domuz bağırsak lenfatik gövde lenfatik kateterizasyon 7 günlük süre içinde yaklaşık 1 L merkezi lenf / 24 saat toplanmasını sağlar. Bu deneylerde elde lenf lipid metabolizması, yani toplam lenf protein, ApoB48 kolesterol, trigliserid, toplam protein ve kolesterol bileşenlerini ihtiva etmiştir. Tablo 1 vurgulamaktadır üç domuz toplanmış lenf örneklerinden bu lipit bileşenleri temsil miktarları. Özellikle, lenf akışı ve lipid bileşenleri in-line...

Watch this Scientific Journal Video about Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs at JoVE.com

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Yenidoğan Domuzların Lenf Bağırsak Lenf Trunk ve Koleksiyonu Uzun Vadeli Kateterizasyon

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

long-term-catheterization-intestinal-lymph-trunk-collection-lymph

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

8.9K Görüntüleme.  University of Alberta. We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Video: Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a surveillance system for potentially harmful antigens, optimizing mucosal immunity and adaptive immune responses1. Lymph is formed from interstitial fluid that enters blind-ended initial lymphatics, and then is transported against a pressure gradient in larger collecting lymphatics. Each collecting lymphatic is made up of a series of segments called lymphangions, separated by bicuspid valves that prevent backflow. Each lymphangion possesses a contractile cycle that propels lymph against a pressure gradient toward the central circulation2. This phasic contractile pattern is analogous to the cardiac cycle, with systolic and diastolic phases, and with a lower contraction frequency4. In addition, lymphatic smooth muscle generates tone and displays myogenic constriction and dilation in response to increases and decreases in luminal pressure, respectively5. A hybrid of molecular mechanisms that support both the phasic and tonic contractility of lymphatics are thus proposed.
Contraction of smooth muscle is generally regulated by the cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]i) plus sensitivity to Ca2+, of the contractile elements in response to changes in the environment surrounding the cell6. [Ca2+]i is determined by the combination of the movement of Ca2+ through plasma membrane ligand or voltage gated Ca2+ channels and the release and uptake of Ca2+ from internal stores. Cytosolic Ca2+ binds to calmodulin and activates enzymes such as myosin light chain (MLC) kinase (MLCK), which in turn phosphorylates MLC leading to actin-myosin-mediated contraction8. However, the sensitivity of this pathway to Ca2+ can be regulated by the MLC phosphatase (MLCP)9. MLCP activity is regulated by Rho kinase (ROCK) and the myosin phosphatase inhibitor protein CPI-17.
Here, we present a method to evaluate changes in [Ca2+]i over time in isolated, perfused lymphatics in order to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction. Using isolated rat mesenteric collecting lymphatics we studied stretch-induced changes in [Ca2+]i and contractile activity. The isolated lymphatic model offers the advantage that pressure, flow, and the chemical composition of the bath solution can be tightly controlled. [Ca2+]i was determined by loading lymphatics with the ratiometric, Ca2+-binding dye Fura-2. These studies will provide a new approach to the broader problem of studying the different molecular mechanisms that regulate phasic contractions versus tonic constriction in lymphatic smooth muscle.

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

We introduce an approach to evaluate the cytosolic Ca2+ concentration in isolated lymphatics to study Ca2+-dependent and Ca2+-sensitizing mechanisms of lymphatic smooth muscle contraction.

Sitosolik Ca ölçümü 2 + İzole Kontraktil Lenfatikler

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the outside world. As such, the intestine plays a pivotal role in immunosurveillance and protection from enteric pathogens. Investigating intestinal physiology and immunology commonly employs 'intestinal loops' as an experimental model. The majority of these loop models are non-recovery surgical procedures that study short-term (&lt;24 hr) changes in the intestine (1-3). We previously created a recovery intestinal loop model to specifically measure long-term (&lt;6 mo) immunological changes in the intestine of sheep following exposure to vaccines, adjuvants, and viruses (4). This procedure localized treatments to a specific 'loop', allowing us to sample this area of the intestine. A significant drawback of this method is the single window of opportunity to administer treatments (i.e. at the time of surgery). Furthermore, samples of both the intestinal mucosa and luminal contents can only be taken at the termination of the project. Other salient limitations of the above model are that the surgical manipulation and requisite post-operative measures (e.g. administration of antibiotics and analgesics) can directly affect the treatment itself and/or alter immune function, thereby confounding results. Therefore, we modified our intestinal loop model by inserting long-term catheters into the loops. Sheep recover fully from the procedure, and are unaffected by the exteriorized catheters. Notably, the establishment of catheters in loops allows us to introduce multiple treatments over an extended interval, following recovery from surgery and clearance of drugs administered during surgery and the post-operative period.

We describe a novel surgical method for catheterizing 'intestinal loops' within the ileum of sheep. Once animals have recovered from surgery and have cleared antibiotics and analgesics, multiple treatments can be deposited directly in loops via the catheters.

Ruminantlarda Bağırsak Döngüler kateterizasyonu

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Biyoloji

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine via a series of lymphatic vessels and nodes that converge at the superior mesenteric lymph duct. Cannulation of the mesenteric lymph duct thus enables the collection of mesenteric lymph flowing from the intestine. Mesenteric lymph consists of a cellular fraction of immune cells (99% lymphocytes), aqueous fraction (fluid, peptides and proteins such as cytokines and gut hormones) and lipoprotein fraction (lipids, lipophilic molecules and apo-proteins). The mesenteric lymph duct cannulation model can therefore be used to measure the concentration and rate of transport of a range of factors from the intestine via the lymphatic system. Changes to these factors in response to different challenges (e.g., diets, antigens, drugs) and in disease (e.g., inflammatory bowel disease, HIV, diabetes) can also be determined. An area of expanding interest is the role of lymphatic transport in the absorption of orally administered lipophilic drugs and prodrugs that associate with intestinal lipid absorption pathways. Here we describe, in detail, a mesenteric lymph duct cannulated rat model which enables evaluation of the rate and extent of lipid and drug transport via the lymphatic system for several hours following intestinal delivery. The method is easily adaptable to the measurement of other parameters in lymph. We provide detailed descriptions of the difficulties that may be encountered when establishing this complex surgical method, as well as representative data from failed and successful experiments to provide instruction on how to confirm experimental success and interpret the data obtained.

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

Mezenterik Lenf Kanal Kanüllü Rat Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Ulaştırma Değerlendirilmesine Uygulaması

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Microscopic Observation of Lymphocyte Dynamics in Rat Peyer's Patches

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important phenomenon in the gut immunity. The stroma of secondary lymphoid organs, such as Peyer&#8217;s patches (PPs) or mesenteric lymph nodes, are where na&#239;ve lymphocytes sense antigens. Na&#239;ve lymphocytes circulate through the bloodstream to reach high endothelial venules, the portal of entry into PPs. Some immunomodulators are estimated to influence lymphocyte migration, but the precise evaluation of microcirculation dynamics is very difficult, and establishing a method to observe lymphocyte migration in vivo can contribute to the clarification of the precise mechanisms. We refined the method of collecting lymphocytes from the lymph duct and observing the detailed dynamics of gut-tropic lymphocytes in rat PPs. We chose confocal laser scanning microscopy to observe rat PPs in vivo and recorded it using time-lapse photography. We can now obtain clear images that can contribute to the analysis of lymphocyte dynamics.

Here, we describe a precise method for collecting thoracic duct lymphocytes and observing the migration of gut-tropic lymphocytes in rat Peyer&#8217;s patches for 3 hours using time-lapse photography. This technique can clarify how the dynamics of lymphocytes are affected under inflammatory conditions.

Sıçan Peyer Yamalarında Lenfosit Dinamiği Mikroskobik Gözlemi

Na&#239;ve lymphocytes recirculate from the blood to the lymphoid tissues under physiological condition and it is commonly recognized as an important ...

Tıp

Intubation, Central Venous Catheter, and Arterial Line Placement in Swine for Translational Research in Abdominal Transplantation Surgery

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries does not solely rely on the research team's surgical skills; perioperative care and management procedures, like intubation, central venous line, and arterial line placement, are necessary and of the utmost importance for favorable experiment results. As it is uncommon for research teams to have anesthesiologists or any other staff other than the surgical team, the surgical team involved in translational research must acquire and/or develop the skills to perform the perioperative care. The purpose of this paper is to show the techniques of intubation, central venous catheter, and arterial line placement used and perfected at the Toronto Organ Preservation Laboratory over the last 10 years, to be used as a reference for future researchers joining either this team or any other lab performing translational research protocols in swine and/or abdominal transplantation.

<meta charset="utf8"></head><body>Abdominal transplantasyon cerrahisinde translasyonel araştırmalar için domuzlarda entübasyon, santral venöz kateter ve arteriyel hat yerleştirilmesi

To obtain the best possible results, surgeons performing translational research experiments should be proficient at intubation and vascular line placement. This paper describes the techniques used by the Toronto Organ Preservation Laboratory to perform these procedures.

Abdominal transplantasyon cerrahisinde translasyonel araştırmalar için domuzlarda entübasyon, santral venöz kateter ve arteriyel hat yerleştirilmesi

Translational surgical research models in swine are crucial for developing safe preclinical protocols. However, the success of the experimental surgeries ...

Domuzlarda Uzun Süreli Vasküler Erişim için Hickman Kateteri

Hickman Catheter Use for Long-Term Vascular Access in a Preclinical Swine Model

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood monitoring and reliable intravenous fluid and drug administration. Specifically, the tunneled multi-lumen Hickman catheter (HC) is commonly used in swine models due to its lower extrication and complication rates. Despite fewer complications relative to other CVCs, HC-related morbidity presents a significant challenge, as it can significantly delay or otherwise negatively impact ongoing studies. The proper insertion and maintenance of HCs is paramount in preventing these complications, but there is no consensus on best practices. The purpose of this protocol is to comprehensively describe an approach for the insertion and maintenance of a tunneled HC in swine that mitigates HC-related complications and morbidity. The use of these techniques in &gt;100 swine has resulted in complication-free patent lines up to 8 months and no catheter-related mortality or infection of the ventral surgical site. This protocol offers a method to optimize the lifespan of the HC and guidance for approaching issues during use.

Yazar Spotlight: Klinik Öncesi Domuz Modelinde Uzun Süreli Vasküler Erişim için Hickman Kateter Kullanımı  

A reliable and reproducible approach for the insertion and maintenance of a tunneled Hickman catheter for long-term vascular access in swine is described. Placement of a central venous catheter allows for convenient daily sampling of whole blood from awake animals and intravenous administration of medication and fluids.

Klinik Öncesi Domuz Modelinde Uzun Süreli Vasküler Erişim için Hickman Kateter Kullanımı

Central venous catheters (CVCs) are invaluable devices in large animal research as they facilitate a wide range of medical applications, including blood ...

Surgical Technique for Lumbar Spinal Catheter Insertion in Pigs Enabling Continuous Access to the Thecal Sac in a Terminal Setup

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine and human central nervous systems (CNS). However, accessing the cerebrospinal fluid (CSF) in larger pig breeds by conventional lumbar puncture techniques can be challenging due to an oblique orientation of the spinal spinous processes and a limited interlaminar space. Accordingly, an open surgical procedure for inserting a lumbar spinal catheter for continuous CSF sampling at the L4/L5 level in pigs is thoroughly described in this work. After positioning the pig and identifying the anatomical landmarks, a dorsal midline surgical incision is made to expose the spinous processes. By advancing the introducer needle, the spinal catheter is inserted inside the thecal sac of the spinal canal while leaving the bone structures of the spine intact. This method allows continuous infusion into or sampling from the porcine thecal sac with minimal bleeding or CSF leakage. The procedure is simple, time-efficient, and reproducible across different experimental setups, offering significant potential for various pre-clinical studies, including pharmacokinetic research, surgical training, and spinal cord injury models.

We present a technique for inserting a lumbar spinal catheter at the L4-L5 level in a 3-month-old Danish Landrace pig as part of a terminal research protocol, enabling continuous infusion or CSF sampling from the thecal sac.

Domuzlarda lomber spinal kateter yerleştirilmesi için cerrahi teknik, bir terminal kurulumunda tekal keseye sürekli erişim sağlar

Pigs are increasingly used as a large animal model for pharmacologic CNS research due to the anatomical and physiological similarities between the porcine ...

Yenidoğan Domuzların Lenf Bağırsak Lenf Trunk ve Koleksiyonu Uzun Vadeli Kateterizasyon

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Sitosolik Ca ölçümü^{2 +} İzole Kontraktil Lenfatikler

Ruminantlarda Bağırsak Döngüler kateterizasyonu

Mezenterik Lenf Kanal Kanüllü Rat Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Ulaştırma Değerlendirilmesine Uygulaması

Sıçan Peyer Yamalarında Lenfosit Dinamiği Mikroskobik Gözlemi

Abdominal transplantasyon cerrahisinde translasyonel araştırmalar için domuzlarda entübasyon, santral venöz kateter ve arteriyel hat yerleştirilmesi

Abdominal transplantasyon cerrahisinde translasyonel araştırmalar için domuzlarda entübasyon, santral venöz kateter ve arteriyel hat yerleştirilmesi

Klinik Öncesi Domuz Modelinde Uzun Süreli Vasküler Erişim için Hickman Kateter Kullanımı

Klinik Öncesi Domuz Modelinde Uzun Süreli Vasküler Erişim için Hickman Kateter Kullanımı

Klinik Öncesi Domuz Modelinde Uzun Süreli Vasküler Erişim için Hickman Kateter Kullanımı

Domuzlarda lomber spinal kateter yerleştirilmesi için cerrahi teknik, bir terminal kurulumunda tekal keseye sürekli erişim sağlar